×
30.05.2020
№220.018.2271

ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть

Авторы

Правообладатели

№ охранного документа
0002722179
Дата охранного документа
28.05.2020
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии и эндокринологии, и касается лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией. Для этого вводят соединения – ингибиторы бромодомена BET. Это обеспечивает эффективное лечение гиперинсулинемии, в частности, связанной с инсулиномой, за счет снижения экспрессии генов, необходимых для функционирования бета-клеток. 6 н. и 16 з.п. ф-лы, 9 пр., 16 ил.
Реферат Свернуть Развернуть

РОДСТВЕННАЯ (РОДСТВЕННЫЕ) ЗАЯВКА (ЗАЯВКИ)

[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет предварительных заявок на патент США №61/946682, поданной 28 февраля 2014 г., №62/019777, поданной 1 июля 2014 г., и №62/054620, поданной 24 сентября 2014 г. Все идеи вышеуказанной (вышеуказанных) заявки (заявок) включены в данный документ посредством ссылки.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0002] Гиперинсулинемия характеризуется уровнями циркулирующего в крови инсулина, которые превышают ожидаемые уровни инсулина относительно уровня глюкозы. Гиперинсулинемия является результатом неконтролируемой секреции инсулина бета-клетками поджелудочной железы, несмотря на низкие уровни глюкозы в крови. Гиперинсулинемия ассоциирована с рядом состояний, таких как инсулинома, врожденный гиперинсулинизм, синдром поликистоза яичников (PCOS), синдром Беквита-Видемана, и может возникать у пациентов после операции желудочного шунтирования. В результате гиперинсулинемии пациенты страдают от неконтролируемой гипогликемии, которая вызывает опасные симптомы, включая головную боль, головокружение, вялость, диплопию, расфокусированное зрение, потерю сознания, и в случаях тяжелой гипогликемии - эпилептический припадок, кому и необратимое неврологическое повреждение.

[0003] Например, инсулиномы являются редкими опухолями поджелудочной железы, происходящими из продуцирующих инсулин бета-клеток поджелудочной железы. В отличие от бета-клеток, которые секретируют инсулин в ответ на повышение уровней глюкозы в крови, секреция инсулина инсулиномами не регулируется надлежащим образом глюкозой, и инсулиномы продолжают секретировать инсулин, вызывая падение уровней глюкозы ниже нормальных уровней. В результате пациенты страдают от неконтролируемой гипогликемии, являющейся причиной вышеперечисленных симптомов.

[0004] В настоящее время наиболее эффективный метод лечения инсулином включает хирургическое вмешательство или применение лекарственных препаратов, таких как диазоксид и соматостатин, которые можно использовать для снижения уровней инсулина у пациентов. Доступные способы лечения других состояний, ассоциированных с гиперинсулинемией, аналогично ограничены. Соответственно, эффективные виды терапии ограничены.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0005] Как описано ниже, в настоящем изобретении представлены способы лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией.

[0006] Первый вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, представленного структурной формулой I:

или его фармацевтически приемлемой соли, где:

X представляет собой N или CR3;

R3 выбран из группы, состоящей из H, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C10)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C10)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

RB представляет собой H, -(C1-C4)алкил, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил или -COO-R4, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH и -NR5R6;

кольцо A представляет собой -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил;

каждый RA независимо представляет собой Н, -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C10)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями; или любые два RA вместе с атомами, с которыми каждый из них связан, образуют конденсированную арильную или гетероарильную группу;

R представляет собой -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил, при этом каждый из них необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 0-3, и L представляет собой H, -C(O)O-R9, -CO-N(R9R10), -NR9R10, -N(R10)C(O)OR9 или -N(R10)C(O)R9;

R2 представляет собой Н, D, галоген или -(C1-C4)алкил;

каждый из R4, R5 и R6 независимо выбран из группы, состоящей из H, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C7)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

R9 выбран из группы, состоящей из H, -(C1-C6)алкила, -(C0-C6)алкилен-циклоалкила, -(C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, -(C0-C6)алкилен-арила, -(C0-C6)алкилен-гетероарила и -N=CR11R12, где каждый -(C1-C6)алкил и -(C0-C6)алкилен- необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями, и каждый -циклоалкил, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

R10 выбран из группы, состоящей из H, -(C1-C6)алкила, -(C0-C6)алкилен-циклоалкила, -(C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, -(C0-C6)алкилен-арила и -(C0-C6)алкилен-гетероарила, где каждый -(C1-C6)алкил и -(C0-C6)алкилен- необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями, и каждый -циклоалкил, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

R9 и R10, взятые вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют 4-10-членное кольцо;

R11 представляет собой H, -(C1-C4)алкил или -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил необязательно и независимо замещен 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -OH;

R12 представляет собой H, -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-С7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C7)гетероарил, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями; и

m равняется 0, 1, 2 или 3.

[0007] В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[0008] В другом варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[0009] Вышеизложенное будет очевидно из следующего более конкретного описания иллюстративных вариантов осуществления настоящего изобретения, как проиллюстрировано в прилагаемых графических материалах, на которых одинаковые ссылочные позиции относятся к одинаковым частям во всех различных видах. Графические материалы не обязательно выполнены в масштабе, вместе с тем акцент сделан на иллюстрирование вариантов осуществления настоящего изобретения.

[0010] Фиг. 1 представляет собой график, демонстрирующий жизнеспособность клеток линии клеток инсулиномы крысы, RIN-14B, при обработке различными концентрациями (S)-JQ1 или паклитаксела.

[0011] Фиг. 2 представляет собой график, демонстрирующий жизнеспособность клеток линии клеток инсулиномы крысы, RIN-m5F, при обработке различными концентрациями (S)-JQ1 или паклитаксела.

[0012] Фиг. 3 представляет собой график, демонстрирующий жизнеспособность клеток линии клеток инсулиномы крысы, RIN-m, при обработке различными концентрациями (S)-JQ1 или паклитаксела.

[0013] Фиг. 4 представляет собой график, демонстрирующий жизнеспособность клеток линии клеток инсулиномы крысы, RIN-5F, при обработке различными концентрациями (S)-JQ1 или паклитаксела.

[0014] Фиг. 5 представляет собой график, демонстрирующий жизнеспособность клеток линии клеток инсулиномы крысы, RIN-5F, при обработке различными концентрациями (S)-JQ1 или паклитаксела.

[0015] Фиг. 6 представляет собой график, демонстрирующий секрецию инсулина с течением времени клетками инсулиномы крысы, RIN-m5F, при обработке различными концентрациями (S)-JQ1 или (S)-JQ35.

[0016] Фиг. 7 представляет собой график, демонстрирующий эффект ингибиторов бромодомена BET, (S)-JQ1 или (S)-JQ35, на экспрессию генов в клетках RIN-m5F при применении Actb в качестве внутреннего контроля.

[0017] Фиг. 8 представляет собой график, демонстрирующий эффект ингибиторов бромодомена BET, (S)-JQ1 или (S)-JQ35, на экспрессию генов в клетках RIN-m5F при применении Gapdh в качестве внутреннего контроля.

[0018] Фиг. 9 представляет собой график, демонстрирующий эффект ингибиторов бромодомена BET, (S)-JQ1 или (S)-JQ35, на экспрессию генов в клетках RIN-m5F при применении 18sRNA в качестве внутреннего контроля.

[0019] Фиг. 10 представляет собой график, демонстрирующий эффект ингибиторов бромодомена BET, (S)-JQ1 или (S)-JQ35, на экспрессию генов в клетках RIN-m при применении Actb в качестве внутреннего контроля.

[0020] Фиг. 11 представляет собой график, демонстрирующий эффект ингибиторов бромодомена BET, (S)-JQ1 или (S)-JQ35, на экспрессию генов в клетках RIN-m при применении Gapdh в качестве внутреннего контроля.

[0021] Фиг. 12 представляет собой график, демонстрирующий эффект ингибиторов бромодомена BET, (S)-JQ1 или (S)-JQ35, на экспрессию генов в клетках RIN-m при применении 18sRNA в качестве внутреннего контроля.

[0022] Фиг. 13 представляет собой график, демонстрирующий связывание Brd4 в промоторном участке с генами инсулина (Ins2) и c-Myc (Myc) и с отрицательным контролем, нетранскрибируемым участком Untr17, как определено посредством qPCR.

[0023] На фиг. 14A и 14B продемонстрировано связывание Brd4 и H3K27ac по всему геному в клетках RIN-m5F, определенное посредством иммунопреципитации хроматина с последующим массовым параллельным секвенированием (ChIP-Seq). Brd4 связывает промоторы и энхансеры онкогенов (фиг. 14А) и генов инсулинового пути (фиг. 14B) в клетках инсулиномы.

[0024] Фиг. 15 представляет собой график, демонстрирующий сигналы Brd4, определенные посредством ChIP-Seq в каждом связанном участке, распределенные по общему количеству фрагментов.

[0025] На фиг. 16 продемонстрированы изменения экспрессии иллюстративных генов после обработки посредством JQ1 клеток RIN-m5F, как определено посредством секвенирования (данные RNA-Seq) и анализ библиотеки. Стрелки обозначают сайт инициации транскрипции для каждого гена; более жирные линии в моделях генов представляют собой экзоны.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Определения

[0026] "Алкил" означает необязательно замещенный насыщенный алифатический одновалентный углеводородный радикал с разветвленной или прямой цепью, содержащий определенное число атомов углерода. Таким образом, "(C1-C6) алкил" означает радикал, содержащий 1-6 атомов углерода в линейном или разветвленном расположении. "(C1-C6)алкил" включает метил, этил, пропил, изопропил (или изопропил), бутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, гексил и подобные.

[0027] "Алкилен" означает необязательно замещенный насыщенный алифатический двухвалентный углеводородный радикал с разветвленной или прямой цепью, содержащий определенное число атомов углерода. Таким образом, "(C1-C6)алкилен" означает двухвалентный насыщенный алифатический радикал, содержащий 1-6 атомов углерода в линейном расположении, например, -[(CH2)n]-, при этом n представляет собой целое число от 1 до 6, "(C1-C6)алкилен" включает метилен, этилен, пропилен, бутилен, пентилен и гексилен. В качестве альтернативы, "(C1-C6)алкилен" означает двухвалентный насыщенный радикал, содержащий 1-6 атомов углерода в разветвленном расположении, например: -[(CH2CH2CH2CH2CH(CH3)]-, -[(CH2CH2CH2CH2C(CH3)2]-, -[(CH2C(CH3)2CH(CH3))]- и подобные. Определенный разветвленный C3-алкилен представляет собой , и конкретный С4-алкилен представляет собой .

[0028] Каждый алкил или алкилен в структурных формулах (I-IX) может быть необязательно и независимо замещен одним или несколькими заместителями.

[0029] "Арил" или "ароматический" означает ароматическую моноциклическую или полициклическую (например, бициклическую или трициклическую) содержащую углерод кольцевую систему. В одном варианте осуществления "арил" представляет собой 6-12-членную моноциклическую или бициклическую систему. Арильные системы включают без ограничения фенил, нафталенил, флуоренил, инденил, азуленил и антраценил.

[0030] "Циклоалкил" означает насыщенное алифатическое циклическое углеводородное кольцо. "Циклоалкил" включает 3-12-членные насыщенные алифатические циклические углеводородные кольца. Таким образом, "(C3-C7)циклоалкил" означает углеводородный радикал с 3-7-членным насыщенным алифатическим циклическим углеводородным кольцом. (C3-C7)циклоалкил включает без ограничения циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил.

[0031] Циклоалкильный фрагмент может быть моноциклическим, конденсированным бициклическим, соединенным мостиковой связью бициклическим, спиро-бициклическим или полициклическим. Например, моноциклический (C3-C8)циклоалкил означает радикал, содержащий от 3 до 8 атомов углерода, расположенных в моноциклическом кольце. Моноциклический (C3-C8)циклоалкил включает без ограничения циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и циклооктан.

[0032] Моноциклические кольцевые системы имеют структуру с одним кольцом. Они включают насыщенные или ненасыщенные алифатические циклические углеводородные кольца (например, циклоалкил, циклоалкенил или циклоалкинил) или ароматические углеводородные кольца (например, арил), содержащие определенное число атомов углерода. Моноциклическая кольцевая система может необязательно содержать 1-5 гетероатомов в кольцевой структуре, при этом каждый гетероатом независимо выбран из группы, состоящей из O, N и S (например, гетероциклоалкил, гетероциклоалкенил, гетероциклоалкинил или гетероарил). Если гетероатом представляет собой N, он может быть необязательно замещен алкилом, циклоалкилом, алкилен-циклоалкилом, гетероциклоалкилом, алкилен-гетероциклоалкилом, арилом, алкилен-арилом, гетероарилом, алкилен-гетероарилом, каждый из которых может быть необязательно замещен одним или несколькими из галогена, =O, гидрокси, алкокси, галогеналкила, алкила и т.д. Если гетероатом представляет собой S, он необязательно может быть моно- или диоксигенированным (т.е. -S(O)- или -S(O)2-). Примеры моноциклической кольцевой системы включают без ограничения циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктан, азетидин, пирролидин, пиперидин, пиперазин, азепан, гексагидропиримидин, тетрагидрофуран, тетрагидропиран, оксепан, тетрагидротиофен, тетрагидротиопиран, изоксазолидин, 1,3-диоксолан, 1,3-дитиолан, 1,3-диоксан, 1,4-диоксан, 1,3-дитиа, 1,4-дитиан, морфолин, тиоморфолин, тиоморфолин-1,1-диоксид, тетрагидро-2H-1,2-тиазин, тетрагидро-2Н-1,2-тиазин-1,1-диоксид и изотиазолидин-1,1-диоксид, тетрагидротиофен-1-оксид, тетрагидротиофен-1,1-диоксид, тиоморфолин-1-оксид, тиоморфолин-1,1-диоксид, тетрагидро-2Н-1,2-тиазин-1,1-диоксид и изотиазолидин-1,1-диоксид, пирролидин-2-он, пиперидин-2-он, пиперазин-2-он и морфолин-2-он.

[0033] Бициклические кольцевые системы содержат два кольца, которые содержат по меньшей мере один общий кольцевой атом. Бициклические кольцевые системы включают конденсированные, соединенные мостиковой связью и спиро-кольцевые системы. Оба из двух колец могут быть алифатическими (например, циклоалкил, циклоалкен, циклоалкин или гетероциклоалкил), оба могут быть ароматическими {например, арил или гетероарил) или представлять собой их комбинацию. Бициклические кольцевые системы могут необязательно содержать 1-5 гетероатомов в кольцевой структуре, при этом каждый гетероатом независимо выбран из группы, состоящей из O, N и S. Если гетероатом представляет собой N, он может быть замещен Н, ал килом, циклоалкилом, алкилен-циклоалкилом, гетероциклоалкилом, алкилен-гетероциклоалкилом, арилом, алкилен-арилом, гетероарилом, алкилен-гетероарилом, каждый из которых может быть необязательно замещен одним или несколькими из галогена, =O, гидрокси, алкокси, галогеналкила, алкила, и т.д. Если гетероатом представляет собой S, он необязательно может быть моно- или диоксигенированным (т.е. -S(O)- или -S(O)2-).

[0034] Конденсированная бициклическая кольцевая система содержит два кольца, которые одержат два смежных общих кольцевых атома. Оба из двух колец могут быть алифатическими (например, циклоалкил, циклоалкен, циклоалкин или гетероциклоалкил), оба могут быть ароматическими (например, арил или гетероарил) или представлять собой их комбинацию. Например, первое кольцо может представлять собой циклоалкил или гетероциклоалкил, и второе кольцо может представлять собой циклоалкил, циклоалкен, циклоалкин, арил, гетероарил или гетероциклоалкил. Например, второе кольцо может представлять собой (C3-C6)циклоалкил, такой как циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил. В качестве альтернативы, второе кольцо может представлять собой арильное кольцо (например, фенил). Примеры конденсированных бициклических кольцевых систем включают без ограничения 6,7,8,9-тетрагидро-5H-бензо[7]аннулен, 2,3-дигидро-1Н-инден, октагидро-1Н-инден, тетрагидронафталин, декагидронафталин, индолин, изоиндолин, 2,3-дигидро-1Н-бензо[d]имидазол, 2,3-дигидробензо[d]оксазол, 2,3-дигидробензо[d]тиазол, октагидробензо[d]оксазол, октагидро-1H-бензо[d]имидазол, октагидробензо[d]тиазол, октагидроциклопента[c]пиррол, 3-азабицикло[3.1.0]гексан, 3-азабицикло[3.2.0]гептан, 5,6,7,8-тетрагидрохинолин и 5,6,7,8-тетрагидроизохинолин, и 2,3,4,5-тетрагидробензо[b]оксепин.

[0035] Спиро-бициклическая кольцевая система содержит два кольца, которые содержат лишь один общий кольцевой атом. Оба из двух колец могут быть алифатическими (например, циклоалкил, циклоалкен, циклоалкин или гетероциклоалкил), оба могут быть ароматическими (например, арил или гетероарил) или представлять собой их комбинацию. Например, первое кольцо может представлять собой циклоалкил или гетероциклоалкил, и второе кольцо может представлять собой циклоалкил, циклоалкен, циклоалкин, арил, гетероарил или гетероциклоалкил. Примеры спиро-бициклических кольцевых систем включают без ограничения спиро[2.2]пентан, спиро[2.3]гексан, спиро[3.3]гептан, спиро[2.4]гептан, спиро[3.4]октан, спиро[2.5]октан, азаспиро[4.4]нонан, 7-азаспиро[4.4]нонан, азаспиро[4.5]декан, 8-азаспиро[4.5]декан, азаспиро[5.5]ундекан, 3-азаспиро[5.5]ундекан и 3,9-диазаспиро[5.5]ундекан.

[0036] Соединенная мостиковой связью бициклическая кольцевая система содержит два кольца, которые содержат три или более смежных общих кольцевых атома. Оба из двух колец могут быть алифатическими (например, циклоалкил, циклоалкен, циклоалкин или гетероциклоалкил), оба могут быть ароматическими (например, арил или гетероарил) или представлять собой их комбинацию. Например, первое кольцо может представлять собой циклоалкил или гетероциклоалкил, и другое кольцо представляет собой циклоалкил, циклоалкен, циклоалкин, арил, гетероарил или гетероциклоалкил. Примеры соединенной мостиковой связью бициклической кольцевой системы включают без ограничения бицикло[1.1.0]бутан, бицикло[1.2.0]пентан, бицикло[2.2.0]гексан, бицикло[3.2.0]гептан, бицикло[3.3.0]октан, бицикло[4.2.0]октан, бицикло[2.2.1]гептан, бицикло[2.2.2]октан, бицикло[3.2.1]октан, бицикло[3.2.2]нонан, бицикло[3.3.1]нонан, бицикло[3.3.2] декан бицикло[3.3.3]ундекан, азабицикло[3.3.1]нонан, 3-азабицикло[3.3.1]нонан, азабицикло[3.2.1]октан, 3-азабицикло[3.2.1]октан, 6-азабицикло[3.2.1]октан и азабицикло[2.2.2]октан, 2-азабицикло[2.2.2]октан и 2-оксабицикло [2.2.2] октан.

[0037] Полициклические кольцевые системы содержат более двух колец (например, три кольца, образующие трициклическую кольцевую систему) и смежные кольца содержат по меньшей мере один общий кольцевой атом. Полициклические кольцевые системы включают конденсированные, соединенные мостиковой связью и спиро-кольцо системы. Конденсированная полициклическая кольцевая система содержит по меньшей мере два кольца, которые содержат два смежных общих кольцевых атома. Спиро-полициклическая кольцевая система содержит по меньшей мере два кольца, которые содержат лишь один общий кольцевой атом. Соединенная мостиковой связью полициклическая кольцевая система содержит по меньшей мере два кольца, которые содержат три или более смежных общих кольцевых атома. Примеры полициклических кольцевых систем включают без ограничения трицикло[3.3.1.03,7]нонан (норадамантан), трицикло[3.3.1.13,7]декан (адамантан) и 2,3-дигидро-1Н-фенален.

[0038] "Циклоалкен" означает алифатическое циклическое углеводородное кольцо, содержащее одну или несколько двойных связей в кольце. "Циклоалкен" включает 3-12-членные ненасыщенные алифатические циклические углеводородные кольца. Таким образом, "(C3-C7)циклоалкен" означает углеводородный радикал с 3-7-членным ненасыщенным алифатическим циклическим углеводородным кольцом. (C3-C7)циклоалкен включает без ограничения циклопропенил, циклобутенил, циклопентенил, циклогексенил и циклогептенил.

[0039] Циклоалкеновый фрагмент может быть моноциклическим, конденсированным бициклическим, соединенным мостиковой связью бициклическим, спиро-бициклическим или полициклическим. Например, моноциклический (C3-C8)циклоалкен означает радикал, содержащий от 3 до 8 атомов углерода, расположенных в моноциклическом кольце. Моноциклический (C3-C8)циклоалкен включает без ограничения циклопропенил, циклобутенил, циклопентенил, циклогексенил и циклогептенил.

[0040] "Циклоалкин" означает алифатическое циклическое углеводородное кольцо, содержащее одну или несколько тройных связей в кольце. "Циклоалкин" включает 3-12-членные ненасыщенные алифатические циклические углеводородные кольца. Таким образом, "(C3-C7)циклоалкин" означает углеводородный радикал с 3-7-членным ненасыщенным алифатическим циклическим углеводородным кольцом. (C3-C7)циклоалкин включает без ограничения циклопропинил, циклобутинил, циклопентинил, циклогексинил и циклогептинил.

[0041] Циклоалкиновый фрагмент может быть моноциклическим, конденсированным бициклическим, соединенным мостиковой связью бициклическим, спиро-бициклическим или полициклическим. Например, моноциклический (C3-C8)циклоалкин означает радикал, содержащий от 3 до 8 атомов углерода, расположенных в моноциклическом кольце. Моноциклический (C3-C8)циклоалкин включает без ограничения циклопропинил, циклобутинил, циклопентинил, циклогексинил и циклогептинил.

[0042] "Гетеро" относится к замене по меньшей мере одного члена, представляющего собой атом углерода, в кольцевой системе по меньшей мере одним гетероатомом, выбранным из N, S и O. "Гетеро" также относится к замене по меньшей мере одного члена, представляющего собой атом углерода, в ациклической системе. Гетеро-кольцевая система или гетеро-ациклическая система может содержать 1, 2, 3, 4 или 5 членов, представляющих собой атомы углерода, замененных гетероатомом.

[0043] "Гетероциклоалкил" означает циклическое 4-12-членное насыщенное алифатическое кольцо, содержащее 1, 2, 3, 4 или 5 гетероатомов, независимо выбранных из N, O или S. Если один гетероатом представляет собой S, он необязательно может быть моно- или диоксигенированным (т.е. -S(O)- или -S(O)2-). Если один гетероатом представляет собой N, он необязательно может быть замещен алкилом, циклоалкилом, алкилен-циклоалкилом, гетероциклоалкилом, алкилен-гетероциклоалкилом, арилом, алкилен-арилом, гетероарилом, алкилен-гетероарилом, каждый из которых необязательно может быть замещен одним или несколькими из галогена, =O, гидрокси, алкокси, галогеналкила, алкила и т.д.

[0044] Гетероциклоалкильный фрагмент может быть моноциклическим, конденсированным бициклическим, соединенным мостиковой связью бициклическим, спиро-бициклическим или полициклическим. Например, моноциклический (C3-C8)гетероциклоалкил означает 3-8-членное насыщенное алифатическое кольцо, содержащее 1, 2, 3, 4 или 5 гетероатомов, независимо выбранных из N, О или S, расположенных в моноциклическом кольце. Примеры моноциклических гетероциклоалкилов включают без ограничения азетидин, пирролидин, пиперидин, пиперазин, азепан, гексагидропиримидин, тетрагидрофуран, тетрагидропиран, морфолин, тиоморфолин, тиоморфолин-1,1-диоксид, тетрагидро-2Н-1,2-тиазин, тетрагидро-2Н-1,2-тиазин-1,1-диоксид, изотиазолидин, изотиазолидин-1,1-диоксид.

[0045] "Гетероарил" или "гетероароматическое кольцо" означает 5-12-членный одновалентный гетероароматический моноциклический или бициклический кольцевой радикал. Гетероарил содержит 1,2, 3, 4 или 5 гетероатомов, независимо выбранных из N, О и S. Гетероарилы включают без ограничения фуран, оксазол, тиофен, 1,2,3-триазол, 1,2,4-триазин, 1,2,4-триазол, 1,2,5-тиадиазол-1,1-диоксид, 1,2,5-тиадиазол-1-оксид, 1,2,5-тиадиазол, 1,3,4-оксадиазол, 1,3,4-тиадиазол, 1,3,5-триазин, имидазол, изотиазол, изоксазол, пиразол, пиридазин, пиридин, пиридин-N-оксид, пиразин, пиримидин, пиррол, тетразол и тиазол. Бициклические гетероарильные кольца включают без ограничения бицикло[4.4.0]- и бицикло[4.3.0]-конденсированные кольцевые системы, такие как индолизин, индол, изоиндол, индазол, бензимидазол, бензотиазол, пурин, хинолин, изохинолин, циннолин, фталазин, хиназолин, хиноксалин, бензофуран, 1,8-нафтиридин и птеридин.

[0046] В конкретном варианте осуществления каждый циклоалкил, циклоалкен, циклоалкин, циклогетероциклоалкил, арил и гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями. Иллюстративные заместители включают без ограничения галоген, -(C1-C4)алкил, -OH, =O, -О-(C1-C4)алкил, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил, галоген-замещенный-(C1-C4)алкил, галоген-замещенный-O-(C1-C4)алкил и -C(O)-(C1-C4)алкил.

[0047] "Галоген", как применяется в данном документе, относится к фтору, хлору, брому или йоду.

[0048] "Алкокси" означает алкильный радикал, присоединенный с помощью связывающего атома, представляющего собой кислород. "(C1-C6)алкокси" включает метокси, этокси, пропокси, бутокси, пентокси и гексокси.

[0049] Галогеналкил и галогенциклоалкил включают моно-, поли- и пергалоген-замещенную алкильную или циклоалкильную группы, где каждый галоген независимо выбран из фтора, хлора и брома.

[0050] "Галоген" и "галогено" в данном документе применяются взаимозаменяемо, и каждый относится к фтору, хлору, брому или йоду.

[0051] "Фтор" означает -F.

[0052] Как применяется в данном документе, фтор-замещенный (C1-C4)алкил означает (C1-C4)алкил, замещенный одной или несколькими группами -F. Примеры фтор-замещенного-(C1-C4)алкила включают без ограничения -CF3, -CH2CF3, -CH2CF2H, -CH2CH2F и -CH2CH2CF3.

[0053] "Фрагмент боковой цепи аминокислоты, встречающейся в природе" относится к любому фрагменту боковой цепи аминокислоты, присутствующему в природной аминокислоте. Значения и альтернативные значения для переменных

[0054] Настоящее изобретение относится к способу лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, представленного формулами (I-IX) или его фармацевтически приемлемой соли. В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному. В определенном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

[0055] Значения и альтернативные значения для переменных в формулах (I-IX) или для их энантиомера, диастереомера, таутомера или фармацевтически приемлемой соли и для каждого из вариантов осуществления, описанных в данном документе, приведены в следующих абзацах. Следует понимать, что настоящее изобретение охватывает все комбинации заместителей-переменных (т.е. R1, R2, R3 и т.д.), определенных в данном документе.

[0056] X представляет собой N или CR3;

[0057] R3 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C10)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C10)гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из -F, -Cl, -Br, -OH, =O, -S(O)-, -S(O)2-, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила).

[0058] В качестве альтернативы, R3 выбран из группы, состоящей из H и -(C1-C4)алкила. Кроме того, R3 выбран из группы, состоящей из H, метила, этила, пропила, бутила, втор-бутила и трет-бутила. В частности, R3 представляет собой H или метил.

[0059] RB представляет собой Н, -(C1-C4)алкил, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил или -COO-R4, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH и -NR5R6.

[0060] В качестве альтернативы, RB представляет собой H, -(C1-C4)алкил или -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил, где каждый из них необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, и -NR5R6.

[0061] Кроме того, RB представляет собой Н, метил, этил, пропил, бутил, втор-бутил, трет-бутил, -COOH, -COOMe, -COOEt, -COOCH2OC(O)СН3, трифторметил, -CF2-CF3, метоксиметил, метоксиэтил, метоксипропил, этоксиметил, этоксиэтил, метокситрифторметил, -CH2-O-CF2-CF3, гидроксиметил, гидроксиэтил, -CH2-NH2, -(CH2)2-NH2, -CH2-NHCH3 или -(CH2)2-NHCH3. В другом варианте RB представляет собой H, метил, этил, трифторметил, метоксиметил, этоксиметил, гидроксиметил, гидроксиэтил, -CH2-NH2 или -(CH2)2-NH2.

[0062] В частности, RB представляет собой Н, метил, этил, трифторметил, метоксиметил, этоксиметил, гидроксиметил или -CH2-NH2. В качестве альтернативы, RB представляет собой H.

[0063] Кольцо A представляет собой -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил. В качестве альтернативы, кольцо A представляет собой тиофуранил, фенил, нафтил, бифенил, тетрагидронафтил, инданил, пиридил, фуранил, индолил, пиримидинил, пиридизинил, пиразинил, имидазолил, оксазолил, тиенил, тиазолил, триазолил, изоксазолил, хинолинил, пирролил, пиразолил или 5,6,7,8-тетрагидроизохинолинил.

[0064] В качестве альтернативы, кольцо A представляет собой 5- или 6-членный арил или гетероарил. Кольцо A представляет собой тиофуранил, фенил, пиридил, фуранил, индолил, пиримидинил, пиридизинил, пиразинил, имидазолил, оксазолил, тиенил, тиазолил, триазолил, изоксазолил, пирролил или пиразолил. Кроме того, кольцо A представляет собой фенил или тиенил. В частности, кольцо A представляет собой тиенил.

[0065] Каждый RA независимо представляет собой H, -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C10)гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из -F, -Cl, -Br, -OH, =O, -S(O)-, -S(O)2-, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(С1-С4)алкила, галоген-замещенного-O-(С1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила); или любые два RA вместе с атомами, с которыми каждый из них связан, образуют конденсированную арильную или гетероарильную группу.

[0066] В качестве альтернативы, каждый RA независимо представляет собой H или -(C1-C4)алкил. Каждый RA независимо представляет собой H, метил, этил, пропил, бутил, втор-бутил или трет-бутил. В частности, каждый RA независимо представляет собой Н или метил.

[0067] В качестве альтернативы, любые два RA вместе с атомами, с которыми каждый из них связан, образуют конденсированную арильную или гетероарильную группу. Кроме того, любые два RA вместе с атомами, с которыми каждый из них связан, образуют конденсированный арил.

[0068] R представляет собой -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-С7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил, при этом каждый из них необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-С4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-С4)алкила, -C(O)-(C1-С4)алкила, -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила), -S(О)o-(C1-C4)алкила, -NR7R8 и CN.

[0069] В качестве альтернативы, R представляет собой -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил, при этом каждый из них необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила, -С(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила), -S(O)o-(C1-C4)алкила, -NR7R8 и CN.

[0070] R представляет собой фенил или пиридинил, при этом каждый из них необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-С4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила, -С(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила), -S(O)o-(C1-C4)алкила, -NR7R8 и CN.

[0071] Кроме того, R представляет собой фенил или пиридинил, при этом каждый из них необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, метила, этила, пропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, -СООН, -COOMe, -COOEt, -COOCH2OC(O)CH3, трифторметила, -CF2-CF3, метоксиметила, метоксиэтила, метоксипропила, этоксиметила, этоксиэтила, метокситрифторметила, -CH2 -О-CF2-CF3, гидроксиметила, гидроксиэтила, -CH2-NH2, -(CH2)2-NH2, -CH2 -NHCH3, -(CH2)2-NHCH3 и CN. В качестве альтернативы, R представляет собой фенил или пиридинил, при этом каждый из них необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -OH.

[0072] R представляет собой фенил, необязательно замещенный 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -OH. В качестве альтернативы, R представляет собой фенил, необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -OH. Кроме того, R представляет собой фенил, необязательно замещенный заместителем, независимо выбранным из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -OH. В частности, R представляет собой пара-Cl-фенил, орто-Cl-фенил, мета-Cl-фенил, пара-F-фенил, орто-F-фенил, мета-F-фенил или пиридинил.

[0073] R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 0-3, и L представляет собой Н, -C(O)O-R9, -CO-N(R9R10), -NR9R10, -N(R10)C(O)OR9 или -N(R10)C(O)R9.

[0074] В качестве альтернативы, R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 0-3, и L представляет собой -C(O)O-R9. R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 1-3, и L представляет собой -C(O)O-R9. Кроме того, R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 1-2, и L представляет собой -C(O)O-R9. В качестве альтернативы, R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 1, и L представляет собой -C(O)O-R9.

[0075] Кроме того, R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 0-3, и L представляет собой -CO-N(R9R10). R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 1-3, и L представляет собой -CO-N(R9R10). R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 1-2, и L представляет собой -CO-N(R9R10). В качестве альтернативы, R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 1, и L представляет собой -CO-N(R9R10).

[0076] В другом варианте R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 0-3, и L представляет собой -NR9R10. R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 1-3, и L представляет собой -NR9R10. Кроме того, R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 1-2, и L представляет собой -NR9R10. В качестве альтернативы, R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 1, и L представляет собой -NR9R10.

[0077] R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 0-3, и L представляет собой -N(R10)C(O)OR9. В качестве альтернативы, R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 1-3, и L представляет собой -N(R10)C(O)OR9. Кроме того, R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 1-2, и L представляет собой -N(R10)C(O)OR9. В качестве альтернативы, R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 1, и L представляет собой -N(R10)C(O)OR9.

[0078] Кроме того, R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 0-3, и L представляет собой -N(R10)C(O)R9. В качестве альтернативы, R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 1-3, и L представляет собой -N(R10)C(O)R9. Кроме того, R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 1-2, и L представляет собой -N(R10)C(O)R9. В качестве альтернативы, R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 1, и L представляет собой -N(R10)C(O)R9.

[0079] В качестве альтернативы, R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 0-3, и L представляет собой H. R1 представляет собой метил, этил, пропил, изопропил. В частности, R1 представляет собой метил.

[0080] R2 представляет собой Н, D, галоген, или -(C1-C4)алкил. В качестве альтернативы, R2 представляет собой Н или -(C1-C4)алкил. Кроме того, R2 представляет собой H, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, втор-бутил или трет-бутил. В частности, R2 представляет собой Н или метил.

[0081] R4 выбран из группы, состоящей из H, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C7)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-С4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -С(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила).

[0082] В качестве альтернативы, R4 выбран из группы, состоящей из Н и -(C1-C4)алкила, где каждый -(C1-C4)алкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила).

[0083] R4 выбран из группы, состоящей из Н и -(C1-C4)алкила, где каждый -(C1-C4)алкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -OH. В другом варианте R4 выбран из группы, состоящей из Н, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, трифторметила, -CF2-CF3, гидроксиметила и гидроксиэтила. В качестве альтернативы, R4 выбран из группы, состоящей из Н, метила, этила, трет-бутила и трифторметила.

[0084] R5 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C7)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(С1-С4)алкила, галоген-замещенного-O-(С1-С4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила).

[0085] В качестве альтернативы, R5 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила и -(C3-C8)циклоалкила, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C3-C8)циклоалкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-С4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила).

[0086] Кроме того, R5 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила и -(C3-C8)циклоалкила, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C3-C8)циклоалкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -OH, -O-(C1-C4)алкила и галоген-замещенного-(C1-C4)алкила. В другом варианте R5 выбран из группы, состоящей из Н, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, трет-бутила, метокси, гидроксила, циклобутила, циклопентила и циклогексила.

[0087] R6 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-С7)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-С7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила).

[0088] В качестве альтернативы, R6 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила и -(C3-C8)циклоалкила, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C3-C8)циклоалкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-С4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила).

[0089] Кроме того, R6 выбран из группы, состоящей из H, -(C1-C4)алкила и -(C3-C8)циклоалкила, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C3-C8)циклоалкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -OH, -O-(C1-C4)алкила и галоген-замещенного-(C1-C4)алкила. В другом варианте R6 выбран из группы, состоящей из H, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, трет-бутила, метокси, гидроксила, циклобутила, циклопентила и циклогексила.

[0090] R7 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C7)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-С7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила).

[0091] В качестве альтернативы, R7 выбран из группы, состоящей из H, -(C1-C4)алкила и -(C3-C8)циклоалкила, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C3-C8)циклоалкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила).

[0092] Кроме того, R7 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила и -(C3-C8)циклоалкила, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C3-C8)циклоалкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -OH, -O-(C1-C4)алкила и галоген-замещенного-(C1-C4)алкила. В другом варианте R7 выбран из группы, состоящей из H, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, трет-бутила, метокси, гидроксила, циклобутила, циклопентила и циклогексила.

[0093] R8 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C7)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(С1-С4)алкила, галоген-замещенного-O-(С1-С4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила).

[0094] В качестве альтернативы, R8 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила и -(C3-C8)циклоалкила, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C3-C8)циклоалкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -C(O)-(фтор-замещенного-(С1-C4)алкила).

[0095] Кроме того, R8 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила и -(C3-C8)циклоалкила, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C3-C8)циклоалкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -OH, -O-(C1-C4)алкила и галоген-замещенного-(C1-C4)алкила. В другом варианте R8 выбран из группы, состоящей из Н, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, трет-бутила, метокси, гидроксила, циклобутила, циклопентила и циклогексила.

[0096] R9 выбран из группы, состоящей из H, -(C1-C6)алкила, -(C0-C6)алкилен-циклоалкила, -(C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, -(C0-C6)алкилен-арила, -(C0-C6)алкилен-гетероарила и -N=CR11R12, где каждый -(C1-C6)алкил, -(C0-C6)алкилен-, -циклоалкил, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, =O, -В(ОН)2, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила, -С(О)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила), -S(O)p-(C1-C4)алкила, -NR13R14 и CN.

[0097] В качестве альтернативы, R9 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C6)алкила, -(C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, -(C0-C6)алкилен-арила и -(C0-C6)алкилен-гетероарила, где каждый -(C1-C6)алкил, -(C0-C6)алкилен-, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, =O, -В(OH)2, -(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, -С(О)-(C1-C4)алкила и -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила). Кроме того, R9 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C1-C3)алкилен-гетероциклоалкила, -(C1-C3)алкилен-арила и -(C1-C3)алкилен-гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C1-C3)алкилен-, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, =O, -B(OH)2, -(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -С(О)-(фтор-замещенного-(С1-C4)алкила).

[0098] Кроме того, R9 выбран из группы, состоящей из Н, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила и трифторметила. В качестве альтернативы, R9 выбран из группы, состоящей из -(C1-C3)алкилен-морфолина, -(C1-C3)алкилен-пиперазина, -(C1-C3)алкилен-фенила, -(C1-C3)алкилен-пиридила, -(C1-C3)алкилен-имидазолила, -(C1-C3)алкилен-азетидина, -(C1-C3)алкилен-фуранила, -(C1-C3)алкилен-пиразинила, -(C1-C3)алкилен-оксазолила, -(C1-C3)алкилен-тиенила, -(C1-C3)алкилен-тиазолила, -(C1-C3)алкилен-триазолила и -(C1-C3)алкилен-изоксазолила, где каждый -(C1-C3)алкилен-, -морфолин, -пиперазин, -фенил, -пиридил и -имидазолил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, ОН, =O, -B(ОН)2, -(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и галоген-замещенного-(C1-C4)алкила.

[0099] В другом варианте R9 выбран из группы, состоящей из -(C1-C3)алкилен-морфолина, -(C1-C3)алкилен-пиперазина, -(C1-C3)алкилен-фенила, -(C1-C3)алкилен-пиридила и -(C1-C3)алкилен-имидазолила, где каждый -(C1-C3)алкилен-, -морфолин, -пиперазин, -фенил, -пиридил и -имидазолил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, ОН, =O, -B(OH)2, -(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и галоген-замещенного-(C1-C4)алкила. Кроме того, R9 выбран из группы, состоящей из -(C1-C3)алкилен-морфолина, -(C1-C3)алкилен-пиперазина, -(C1-C3)алкилен-фенила, -(C1-C3)алкилен-пиридила и -(C1-C3)алкилен-имидазолила, где каждый -(C1-C3)алкилен-, -морфолин, -пиперазин, -фенил, -пиридил и -имидазолил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -В(ОН)2 и -(C1-C4)алкила.

[00100] В качестве альтернативы, R9 представляет собой -N=CR11R12.

[00101] R10 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C6)алкила, -(C0-C6)алкилен-циклоалкила, -(C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, -(C0-C6)алкилен-арила и -(C0-C6)алкилен-гетероарила, где каждый -(C1-C6)алкил, -(C0-C6)алкилен-, -циклоалкил, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, =O, -B(OH)2, (C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила, -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила), -S(O)q-(C1-C4)алкила, -NR15R16 и CN.

[00102] В качестве альтернативы, R10 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C6)алкила и -(C1-C6)алкилен-гетероциклоалкила, где каждый -(C1-C6)алкил, -(C1-C6)алкилен- и -гетероциклоалкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, =O, -В(ОН)2, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(С1-С4)алкила, галоген-замещенного-O-(С1-С4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила, -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила), -S(O)q-(C1-C4)алкила, -NR15R16 и CN.

[00103] Кроме того, R10 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C6)алкила и -(C1-C3)алкилен-гетероциклоалкила, где каждый -(C1-C6)алкил, -(C1-C6)алкилен- и -гетероциклоалкил необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, =O, -B(OH)2, -(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила). Кроме того, в качестве альтернативы, R10 выбран из группы, состоящей из Н, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила, трифторметила, -(C1-C3)алкилен-морфолина, -(C1-C3)алкилен-пиперазина, -(C1-C3)алкилен-фенила, -(C1-C3)алкилен-пиридила и -(C1-C3)алкилен-имидазолила, где каждый -(C1-C3)алкилен-, -морфолин, -пиперазин, -фенил, -пиридил и -имидазолил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -В(ОН)2 и -(C1-C4)алкила.

[00104] R9 и R10, взятые вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют 4-10-членное кольцо. В качестве альтернативы, R9 и R10, взятые вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют 4-6-членное кольцо. Кроме того, R9 и R10, взятые вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют циклоалкил или гетероциклоалкил с 4-6-членным кольцом.

[00105] R11 представляет собой Н, -(C1-C4)алкил или -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -OH. В качестве альтернативы, R11 представляет собой Н или -(C1-C4)алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -OH. Кроме того, R11 представляет собой Н, метил, этил, пропил, бутил или трифторметил. В частности, R11 представляет собой Н или метил.

[00106] R12 представляет собой Н, -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-С7)гетероарил, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, =O, -B(ОН)2, (C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила, -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила), -S(O)r-(C1-C4)алкила, -S(O)2-Na и CN.

[00107] В качестве альтернативы, R12 представляет собой H, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C7)гетероарил, где каждый -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, =O, -B(OH)2, (C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(С1-С4)алкила, -C(O)-(C1-С4)алкила, -C(O)-(фтор-замещенного-(С1-С4)алкила), -S(O)r(С1-С4)алкила, - S(O)2-Na и CN. Кроме того, R12 представляет собой Н, -(C6-C10)арил или -(C5-C7)гетероарил, где каждый -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, =O, -В(OH)2, (C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-С4)алкила, -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила), -S(O)r-(C1-C4)алкила, -S(O)2-Na и CN.

[00108] В другом варианте R12 представляет собой Н, тиофуранил, фенил, нафтил, бифенил, тетрагидронафтил, инданил, пиридил, имидазолил, фуранил, индолил, пиримидинил, пиридизинил, пиразинил, имидазолил, оксазолил, тиенил, тиазолил, триазолил, изоксазолил, хинолинил, пирролил, пиразолил или 5,6,7,8-тетрагидроизохинолинил, при этом каждый из них необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, =O, -В(ОН)2, (C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -S(O)r-(C1-C4)алкила, -S(O)2-Na и CN. В качестве альтернативы, R12 представляет собой Н, фенил, имидазолил, фуранил или индолил, при этом каждый фенил, имидазолил, фуранил или индолил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -OH, метила, - S(O)2-Na или -B(ОН)2.

[00109] R13 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C7)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила).

[00110] В качестве альтернативы, R13 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила и -(C3-C8)циклоалкила, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C3-C8)циклоалкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила).

[00111] Кроме того, R13 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила и -(C3-C8)циклоалкила, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C3-C8)циклоалкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -OH, -O-(C1-C4)алкила и галоген-замещенного-(C1-C4)алкила. В другом варианте R13 выбран из группы, состоящей из Н, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, трет-бутила, метокси, гидроксила, циклобутила, циклопентила и циклогексила.

[00112] R14 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C7)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила).

[00113] В качестве альтернативы, R14 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила и -(C3-C8)циклоалкила, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C3-C8)циклоалкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила).

[00114] Кроме того, R14 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила и -(C3-C8)циклоалкила, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C3-C8)циклоалкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -OH, -O-(C1-C4)алкила и галоген-замещенного-(C1-C4)алкила. В другом варианте R14 выбран из группы, состоящей из Н, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, трет-бутила, метокси, гидроксила, циклобутила, циклопентила и циклогексила.

[00115] R15 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C7)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила).

[00116] В качестве альтернативы, R15 выбран из группы, состоящей из H, -(C1-C4)алкила и -(C3-C8)циклоалкила, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C3-C8)циклоалкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила).

[00117] Кроме того, R15 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила и -(C3-C8)циклоалкила, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C3-C8)циклоалкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -OH, -O-(C1-C4)алкила и галоген-замещенного-(C1-C4)алкила. В другом варианте R15 выбран из группы, состоящей из Н, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, трет-бутила, метокси, гидроксила, циклобутила, циклопентила и циклогексила.

[00118] R16 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C7)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(С1-С4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила).

[00119] В качестве альтернативы, R16 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила и -(C3-C8)циклоалкила, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C3-C8)циклоалкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -G1, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила и -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила).

[00120] Кроме того, R16 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила и -(C3-C8)циклоалкила, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C3-C8)циклоалкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -OH, -O-(C1-C4)алкила и галоген-замещенного-(C1-C4)алкила. В другом варианте R16 выбран из группы, состоящей из Н, метила, этила, пропила, изопропила, бутила, трет-бутила, метокси, гидроксила, циклобутила, циклопентила и циклогексила.

[00121] RC выбран из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -(C1-C4)алкила, -O-(C1-С4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила, -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила), -S(O)o-(C1-C4)алкила, -NR7R8 и CN.

[00122] В качестве альтернативы RC выбран из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH и -O-(C1-C4)алкила. В другом варианте RC выбран из группы, состоящей из F, -О, -Br, -OH, метокси и этокси.

[00123] m равняется 0, 1, 2 или 3. В качестве альтернативы, m равняется 1 или 2.

[00124] o равняется 1 или 2.

[00125] p равняется 1 или 2.

[00126] q равняется 1 или 2.

[00127] r равняется 1 или 2.

[00128] Первый вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, представленного структурной формулой I.

или его фармацевтически приемлемой соли, где:

[00129] X представляет собой N или CR3;

[00130] R3 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C10)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C10)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00131] RB представляет собой Н, -(C1-C4)алкил, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил или -COO-R4, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH и -NR5R6;

[00132] кольцо A представляет собой -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил;

[00133] каждый RA независимо представляет собой H, -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C10)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями; или любые два RA вместе с атомами, с которыми каждый из них связан, образуют конденсированную арильную или гетероарильную группу;

[00134] R представляет собой -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил, при этом каждый из них необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00135] R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 0-3, и L представляет собой Н, -C(O)O-R9, -CO-N(R9R10), -NR9R10, -N(R10)C(O)OR9 или -N(R10)C(O)R9;

[00136] R2 представляет собой Н, D, галоген или -(C1-C4)алкил;

[00137] каждый из R4, R5 и R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C7)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00138] R9 выбран из группы, состоящей из H, -(C1-C6)алкила, -(C0-C6)алкилен-циклоалкила, -(C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, -(C0-C6)алкилен-арила, -(C0-C6)алкилен-гетероарила и -N=CR11R12, где каждый -(C1-C6)алкил и -(C0-C6)алкилен- необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями, и каждый -циклоалкил, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00139] R10 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C6)алкила, (C0-C6)алкилен-циклоалкила, (C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, (C0-C6)алкилен-арила и (C0-C6)алкилен-гетероарила, где каждый -(C1-C6)алкил и (C0-C6)алкилен- необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями, и каждый -циклоалкил, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00140] R9 и R10, взятые вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют 4-10-членное кольцо;

[00141] R11 представляет собой Н, -(C1-C4)алкил или -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил необязательно и независимо замещен 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -OH;

[00142] R12 представляет собой Н, -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C7)гетероарил, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями; и

[00143] m равняется 0, 1, 2 или 3.

[00144] В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[00145] В определенном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

[00146] В первом аспекте первого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления X представляет собой N.

[00147] Во втором аспекте первого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления RB представляет собой Н или -(C1-C4)алкил.

[00148] В третьем аспекте первого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления кольцо A представляет собой 5- или 6-членный арил или гетероарил.

[00149] В четвертом аспекте первого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления кольцо A представляет собой фенил или тиенил.

[00150] В пятом аспекте первого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления R представляет собой -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил, необязательно замещенные 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl и -Br.

[00151] В пятом аспекте первого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления L представляет собой Н, -COO-R9 или -CO-N(R9R10).

[00152] В шестом аспекте первого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления каждый R9 независимо выбран из группы, состоящей из -(C1-C6)алкила, (C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, (C0-C6)алкилен-арила и (C0-C6)алкилен-гетероарила, и каждый -(C1-C6)алкил, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -(C1-Cб)алкила.

[00153] В седьмом аспекте первого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления каждый R10 независимо выбран из группы, состоящей из Н и -(C1-C6)алкила.

[00154] В восьмом аспекте первого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления R2 выбран из группы, состоящей из Н и метила.

[00155] В девятом аспекте первого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления RA независимо представляет собой Н или -(C1-C4)алкил, или любые два RA вместе с атомами, к которым каждый из них присоединен, могут образовывать конденсированный арил.

[00156] В десятом аспекте первого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления m равняется 2, и по меньшей мере один RA представляет собой метил.

[00157] В одиннадцатом аспекте первого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления m равняется 2, и каждый RA представляет собой метил.

[00158] Во втором варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, представленного структурной формулой II:

или его фармацевтически приемлемой соли, где:

[00159] X представляет собой N или CR3;

[00160] R3 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C10)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C10)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00161] RB представляет собой Н, -(C1-C4)алкил, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил или -COO-R4, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH и -NR5R6;

[00162] каждый RA независимо представляет собой Н, -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C10)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями; или любые два RA вместе с атомами, с которыми каждый из них связан, образуют конденсированную арильную или гетероарильную группу;

[00163] R представляет собой -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил, при этом каждый из них необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00164] L представляет собой Н, -C(O)O-R9, -CO-N(R9R10), -NR9R10, -N(R10)C(O)OR9 или -N(R10)C(O)R9;

[00165] каждый из R4, R5 и R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C7)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00166] R9 выбран из группы, состоящей из H, -(C1-C6)алкила, (C0-C6)алкилен-циклоалкила, (C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, (C0-C6)алкилен-арила, (C0-C6)алкилен-гетероарила и -N=CR11R12, где каждый -(C1-C6)алкил и (C0-C6)алкилен- необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями, и каждый -циклоалкил, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00167] R10 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C6)алкила, (C0-C6)алкилен-циклоалкила, (C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, (C0-C6)алкилен-арила и (C0-C6)алкилен-гетероарила, где каждый -(C1-C6)алкил и (C0-C6)алкилен- необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями, и каждый -циклоалкил, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00168] R9 и R10, взятые вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют 4-10-членное кольцо;

[00169] R11 представляет собой Н, -(C1-C4)алкил или -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил необязательно замещен 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -OH;

[00170] R12 представляет собой Н, -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C7)гетероарил, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями; и

[00171] m равняется 0, 1,2 или 3.

[00172] В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[00173] В определенном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

[00174] В первом аспекте второго варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления X представляет собой N.

[00175] Во втором аспекте второго варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления RB выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, и каждый -(C1-C4)алкил и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -OH.

[00176] В третьем аспекте второго варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления RB представляет собой метил, этил, гидроксиметил, метоксиметил или трифторметил.

[00177] В четвертом аспекте второго варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления R представляет собой -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил, необязательно замещенные заместителем, выбранным из группы, состоящей из -F, -Cl и -Br.

[00178] В пятом аспекте второго варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления R представляет собой фенил или пиридил, необязательно замещенные заместителем, выбранным из группы, состоящей из -F, -Cl и -Br.

[00179] В шестом аспекте второго варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления R представляет собой пара-Cl-фенил, орто-Cl-фенил, мета-Cl-фенил, пара-F-фенил, орто-F-фенил, мета-F-фенил или пиридинил.

[00180] В седьмом аспекте второго варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления L представляет собой -CO-N(R9R10), R9 представляет собой (C0-C6)алкилен-гетероциклоалкил, (C0-C6)алкилен-арил или (C0-C6)алкилен-гетероарил, при этом каждый -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 (C1-C4)алкилами, и R10 представляет собой Н или -(C1-C6)алкил.

[00181] В восьмом аспекте второго варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления L представляет собой -COO-R9, и R9 независимо выбран из группы, состоящей из -(C1-C6)алкила, (C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, (C0-C6)алкилен-арила и (C0-C6)алкилен-гетероарила, где каждый -(C1-C6)алкил, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -(C1-C6)алкила.

[00182] В девятом аспекте второго варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления L представляет собой -COO-R9, и R9 выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила и трифторметила.

[00183] В десятом аспекте второго варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления каждый RA независимо представляет собой Н или -(C1-C4)алкил, или любые два RA вместе с атомами, к которым каждый из них присоединен, могут образовывать конденсированный арил.

[00184] В одиннадцатом аспекте второго варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления m равняется 2, и по меньшей мере один вариант RA представляет собой метил.

[00185] В двенадцатом аспекте второго варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления m равняется 2, и каждый RA представляет собой метил.

[00186] В третьем варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, представленного структурной формулой III:

или его фармацевтически приемлемой соли, где:

[00187] X представляет собой N или CR3;

[00188] R3 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C10)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C10)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00189] RB представляет собой Н, -(C1-C4)алкил, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил или -COO-R4, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH и -NR5R6;

[00190] кольцо A представляет собой -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил;

[00191] каждый RA независимо представляет собой Н, -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C10)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями; или любые два RA вместе с атомами, с которыми каждый из них связан, образуют конденсированную арильную или гетероарильную группу;

[00192] R представляет собой -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил, при этом каждый из них необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00193] каждый из R4, R5 и R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C7)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00194] R9 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C6)алкила, (C0-C6)алкилен-циклоалкила, (C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, (C0-C6)алкилен-арила и (C0-C6)алкилен-гетероарила, где каждый -(C1-C6)алкил и (C0-C6)алкилен- необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями, и каждый -циклоалкил, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями; и

[00195] m равняется 0, 1, 2 или 3.

[00196] В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному. [00197] В определенном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

[00198] В первом аспекте третьего варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления X представляет собой N.

[00199] Во втором аспекте третьего варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления RB выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, и каждый -(C1-C4)алкил и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -OH.

[00200] В третьем аспекте третьего варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления RB представляет собой метил, этил, гидроксиметил, метоксиметил или трифторметил.

[00201] В четвертом аспекте третьего варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления кольцо A представляет собой 5- или 6-членный арил или гетероарил.

[00202] В пятом аспекте третьего варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления кольцо A представляет собой тиофуранил, фенил, нафтил, бифенил, тетрагидронафтил, инданил, пиридил, фуранил, индолил, пиримидинил, пиридизинил, пиразинил, имидазолил, оксазолил, тиенил, тиазолил, триазолил, изоксазолил, хинолинил, пирролил, пиразолил или 5,6,7,8-тетрагидроизохинолинил.

[00203] В шестом аспекте третьего варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления кольцо A представляет собой фенил или тиенил.

[00204] В седьмом аспекте третьего варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления R представляет собой -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил, необязательно замещенные заместителем, выбранным из группы, состоящей из -F, -Cl и -Br.

[00205] В восьмом аспекте третьего варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления R представляет собой фенил или пиридил, необязательно замещенные 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl и -Br.

[00206] В девятом аспекте третьего варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления R представляет собой пара-Cl-фенил, орто-Cl-фенил, мета-Cl-фенил, пара-F-фенил, орто-F-фенил, мета-F-фенил или пиридинил.

[00207] В десятом аспекте третьего варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления каждый RA независимо представляет собой Н или -(C1-C4)алкил, или любые два RA вместе с атомами, к которым каждый из них присоединен, могут образовывать конденсированный арил.

[00208] В одиннадцатом аспекте третьего варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления m равняется 2, и по меньшей мере один вариант RA представляет собой метил.

[00209] В двенадцатом аспекте третьего варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления m равняется 2, и каждый RA представляет собой метил.

[00210] В тринадцатом аспекте третьего варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления R9 независимо выбран из группы, состоящей из -(C1-C6)алкила, (C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, (C0-C6)алкилен-арила и (C0-C6)алкилен-гетероарила, и каждый -(C1-C6)алкил, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -(C1-C6)алкила.

[00211] В четырнадцатом аспекте третьего варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления R9 выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила и трифторметила.

[00212] В четвертом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, представленного структурной формулой IV:

или его фармацевтически приемлемой соли, где:

[00213] X представляет собой N или CR3;

[00214] R3 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C10)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C10)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00215] RB представляет собой Н, -(C1-C4)алкил, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил или -COO-R4, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH и -NR5R6;

[00216] кольцо A представляет собой арил или гетероарил;

[00217] каждый RA независимо представляет собой Н, -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C10)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями; или любые два RA вместе с атомами, с которыми каждый из них связан, образуют конденсированную арильную или гетероарильную группу;

[00218] R представляет собой -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил, при этом каждый из них необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00219] каждый из R4, R5 и R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C7)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00220] R9 выбран из группы, состоящей из H, -(C1-C6)алкила, (C0-C6)алкилен-циклоалкила, (C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, (C0-C6)алкилен-арила, (C0-C6)алкилен-гетероарила и -N=CR11R12, где каждый -(C1-C6)алкил и (C0-C6)алкилен- необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями, и каждый -циклоалкил, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00221] R10 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C6)алкила, (C0-C6)алкилен-циклоалкила, (C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, -(C0-C6)алкилен-арила и (C0-C6)алкилен-гетероарила, где каждый -(C1-C6)алкил и (C0-C6)алкилен- необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями, и каждый -циклоалкил, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00222] R9 и R10, взятые вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют 4-10-членное кольцо;

[00223] R11 представляет собой Н, -(C1-C4)алкил или -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил необязательно замещен 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -OH;

[00224] R12 представляет собой Н, -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C7)гетероарил, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями; и

[00225] m равняется 0, 1, 2 или 3.

[00226] В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[00227] В определенном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

[00228] В первом аспекте четвертого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления X представляет собой N.

[00229] Во втором аспекте четвертого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления RB выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, и каждый -(C1-C4)алкил и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -OH.

[00230] В третьем аспекте четвертого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления RB представляет собой метил, этил, гидроксиметил, метоксиметил или трифторметил.

[00231] В четвертом аспекте четвертого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления кольцо A представляет собой 5- или 6-членный арил или гетероарил.

[00232] В пятом аспекте четвертого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления кольцо A представляет собой тиофуранил, фенил, нафтил, бифенил, тетрагидронафтил, инданил, пиридил, фуранил, индолил, пиримидинил, пиридизинил, пиразинил, имидазолил, оксазолил, тиенил, тиазолил, триазолил, изоксазолил, хинолинил, пирролил, пиразолил или 5,6,7,8-тетрагидроизохинолинил.

[00233] В шестом аспекте четвертого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления кольцо A представляет собой фенил или тиенил.

[00234] В седьмом аспекте четвертого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления R представляет собой -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил, необязательно замещенные 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl и -Br.

[00235] В восьмом аспекте четвертого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления R представляет собой фенил или пиридил, необязательно замещенные 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl и -Br.

[00236] В девятом аспекте четвертого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления R представляет собой пара-Cl-фенил, орто-Cl-фенил, мета-Cl-фенил, пара-F-фенил, орто-F-фенил, meta-F-фенил или пиридинил.

[00237] В десятом аспекте четвертого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления каждый RA независимо представляет собой Н или -(C1-C4)алкил, или любые два RA вместе с атомами, к которым каждый из них присоединен, могут образовывать конденсированный арил.

[00238] В одиннадцатом аспекте четвертого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления m равняется 2, и по меньшей мере один вариант RA представляет собой метил.

[00239] В двенадцатом аспекте четвертого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления m равняется 2, и каждый RA представляет собой метил.

[00240] В тринадцатом аспекте четвертого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления R9 независимо выбран из группы, состоящей из -(C1-C6)алкила, (C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, (C0-C6)алкилен-арила и (C0-C6)алкилен-гетероарила, и каждый -(C1-C6)алкил, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -(C1-C6)алкила.

[00241] В четырнадцатом аспекте четвертого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления R10 выбран из группы, состоящей из Н и -(C1-C6)алкила, необязательно замещенного 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F и -O-(C1-C6)алкила.

[00242] В пятнадцатом аспекте четвертого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления R9 представляет собой N=CR11R12, R11 представляет собой Н или -(C1-C4)алкил, и R12 представляет собой -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C7)гетероарил, необязательно замещенные 1-4 заместителями, независимо выбранными из -(C1-C4)алкила, -F, -Cl, -SO2Na или -B(OH)2.

[00243] В пятом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, представленного структурной формулой V:

или его фармацевтически приемлемой соли, где:

[00244] X представляет собой N или CR3;

[00245] R3 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C10)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C10)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00246] RB представляет собой Н, -(C1-C4)алкил, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил или -COO-R4, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH и -NR5R6;

[00247] кольцо A представляет собой -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил;

[00248] каждый RA независимо представляет собой Н, -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C10)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями; или любые два RA вместе с атомами, с которыми каждый из них связан, образуют конденсированную арильную или гетероарильную группу;

[00249] R1 представляет собой -(CH2)n-L, в котором n равняется 0-3, и L представляет собой Н, -C(O)O-R9, -CO-N(R9R10), -NR9R10, -N(R10)C(O)OR9 или -N(R10)C(O)R9;

[00250] R2 представляет собой Н, D, галоген или -(C1-C4)алкил;

[00251] каждый из R4, R5 и R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C7)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00252] R9 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C6)алкила, (C0-C6)алкилен-циклоалкила, (C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, (C0-C6)алкилен-арила, (C0-C6)алкилен-гетероарила и -N=CR11R12, где каждый -(C0-C6)алкил и (C0-C6)алкилен- необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями, и каждый -циклоалкил, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00253] R10 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C6)алкила, (C0-C6)алкилен-циклоалкила, (C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, (C0-C6)алкилен-арила и (C0-C6)алкилен-гетероарила, где каждый -(C1-C6)алкил и (C0-C6)алкилен- необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями, и каждый -циклоалкил, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00254] R9 и R10, взятые вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют 4-10-членное кольцо;

[00255] R11 представляет собой Н, -(C1-C4)алкил или -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил необязательно и независимо замещен 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -OH;

[00256] R12 представляет собой Н, -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C7)гетероарил, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями; и

[00257] m равняется 0, 1, 2 или 3.

[00258] В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[00259] В определенном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

[00260] В первом аспекте пятого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления X представляет собой N.

[00261] Во втором аспекте пятого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления RB выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, и каждый -(C1-C4)алкил и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -OH.

[00262] В третьем аспекте пятого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления RB представляет собой метил, этил, гидроксиметил, метоксиметил или трифторметил.

[00263] В четвертом аспекте пятого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления кольцо A представляет собой 5- или 6-членный арил или гетероарил.

[00264] В пятом аспекте пятого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления кольцо A представляет собой тиофуранил, фенил, нафтил, бифенил, тетрагидронафтил, инданил, пиридил, фуранил, индолил, пиримидинил, пиридизинил, пиразинил, имидазолил, оксазолил, тиенил, тиазолил, триазолил, изоксазолил, хинолинил, пирролил, пиразолил или 5,6,7,8-тетрагидроизохинолинил.

[00265] В шестом аспекте пятого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления кольцо A представляет собой фенил или тиенил.

[00266] В седьмом аспекте пятого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления RA независимо представляет собой Н или -(C1-C4)алкил, или любые два RA вместе с атомами, к которым каждый из них присоединен, могут образовывать конденсированный арил.

[00267] В восьмом аспекте пятого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления m равняется 2, и по меньшей мере один вариант RA представляет собой метил.

[00268] В девятом аспекте пятого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления m равняется 2, и каждый RA представляет собой метил.

[00269] В десятом аспекте пятого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления L представляет собой -CO-N(R9R10), R9 представляет собой (C0-C6)алкилен-гетероциклоалкил, (C0-C6)алкилен-арил или (C0-C6)алкилен-гетероарил, необязательно и независимо замещенные 1-4 (C1-C4)алкилами, и R10 представляет собой Н или -(C1-C6)алкил.

[00270] В одиннадцатом аспекте пятого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления L представляет собой -COO-R9, и R9 независимо выбран из группы, состоящей из -(C1-C6)алкила, (C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, (C0-C6)алкилен-арила и (C0-C6)алкилен-гетероарила, и каждый -(C1-C6)алкил, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -(C1-C6)алкила.

[00271] В двенадцатом аспекте пятого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления L представляет собой -COO-R9, и R9 выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила и трифторметила.

[00272] В тринадцатом аспекте пятого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления R2 представляет собой Н или -(C1-C4)алкил.

[00273] В шестом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, представленного структурной формулой VI:

или его фармацевтически приемлемой соли, где:

[00274] X представляет собой N или CR3;

[00275] R3 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C10)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C10)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00276] RB представляет собой Н, -(C1-C4)алкил, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил или -COO-R4, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH и -NR5R6;

[00277] каждый RA независимо представляет собой Н, -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C10)гетероарил, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C10)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями; или любые два RA вместе с атомами, с которыми каждый из них связан, образуют конденсированную арильную или гетероарильную группу;

[00278] L представляет собой Н, -C(O)O-R9, -CO-N(R9R10), -NR9R10, -N(R10)C(O)OR9 или -N(R10)C(O)R9;

[00279] RC выбран из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH, -O-(C1-C4)алкила, -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-(C1-C4)алкила, галоген-замещенного-O-(C1-C4)алкила, -C(O)-(C1-C4)алкила, -C(O)-(фтор-замещенного-(C1-C4)алкила), -S(O)o-(C1-C4)алкила, -NR7R8 и CN;

[00280] каждый из R4, R5, R6, R7 и R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила, -(C3-C8)циклоалкила, -(C5-C7)гетероциклоалкила, -(C6-C10)арила и -(C5-C7)гетероарила, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00281] R9 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C6)алкила, (C0-C6)алкилен-циклоалкила, (C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, (C0-C6)алкилен-арила, (C0-C6)алкилен-гетероарила и -N=CR11R12, где каждый -(C1-C6)алкил и (C0-C6)алкилен- необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями, и каждый -циклоалкил, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00282] R10 выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C6)алкила, (C0-C6)алкилен-циклоалкила, (C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, (C0-C6)алкилен-арила и (C0-C6)алкилен-гетероарила, где каждый -(C1-C6)алкил и (C0-C6)алкилен- необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями, и каждый -циклоалкил, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00283] R9 и R10, взятые вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют 4-10-членное кольцо;

[00284] R11 представляет собой Н, -(C1-C4)алкил или -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил, где каждый -(C1-C4)алкил и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил необязательно и независимо замещен 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -OH;

[00285] R12 представляет собой Н, -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил или -(C5-C7)гетероарил, где каждый -(C1-C4)алкил, -(C3-C8)циклоалкил, -(C5-C7)гетероциклоалкил, -(C6-C10)арил и -(C5-C7)гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 заместителями;

[00286] m равняется 0, 1, 2 или 3; и

[00287] o равняется 1 или 2.

[00288] В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[00289] В определенном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

[00290] В первом аспекте шестого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления X представляет собой N.

[00291] Во втором аспекте шестого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления RB выбран из группы, состоящей из Н, -(C1-C4)алкила и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкила, и каждый -(C1-C4)алкил и -(C1-C4)алкилен-O-(C1-C4)алкил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -OH.

[00292] В третьем аспекте шестого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления RB представляет собой метил, этил, гидроксиметил, метоксиметил или трифторметил.

[00293] В четвертом аспекте шестого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления каждый RA независимо представляет собой Н или -(C1-C4)алкил, или любые два RA вместе с атомами, к которым каждый из них присоединен, могут образовывать конденсированный арил.

[00294] В пятом аспекте шестого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления m равняется 1 или 2, и по меньшей мере один вариант RA представляет собой метил.

[00295] В шестом аспекте шестого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления m равняется 2, и каждый RA представляет собой метил.

[00296] В седьмом аспекте шестого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления L представляет собой -CO-N(R9R10), R9 представляет собой (C0-C6)алкилен-гетероциклоалкил, (C0-C6)алкилен-арил или (C0-C6)алкилен-гетероарил, и каждый -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно и независимо замещен 1-4 (C1-C4)алкилами, и R10 представляет собой Н или -(C1-C6)алкил.

[00297] В восьмом аспекте шестого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления L представляет собой -COO-R9, и R9 независимо выбран из группы, состоящей из -(C1-C6)алкила, (C0-C6)алкилен-гетероциклоалкила, -(C0-C6)алкилен-арила и (C0-C6)алкилен-гетероарила, и каждый -(C1-C6)алкил, -гетероциклоалкил, -арил и -гетероарил необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br и -(C1-C6)алкила.

[00298] В девятом аспекте шестого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления L представляет собой -COO-R9, и R9 выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, изопропила, бутила, втор-бутила, трет-бутила и трифторметила.

[00299] В десятом аспекте шестого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления RC выбран из группы, состоящей из -F, -Cl, -Br, -OH и -O-(C1-C4)алкила.

[00300] В седьмом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, представленного в настоящем изобретении, в котором предлагают способ лечения инсулиномы или врожденного гиперинсулинизма (CHI) у субъекта, нуждающегося в этом, с применением соединения, представленного следующей структурной формулой:

или его фармацевтически приемлемой соли.

[00301] В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[00302] В определенном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

[00303] В первом аспекте седьмого варианта осуществления или его конкретного или определенного варианта осуществления, соединение представлено следующей структурной формулой:

или его фармацевтически приемлемой солью.

[00304] В восьмом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, представленного любой из следующих структурных формул:

или его фармацевтически приемлемой соли.

[00305] В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[00306] В определенном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

[00307] В девятом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, представленного любой из следующих структурных формул:

или

или его фармацевтически приемлемой соли.

[00308] В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[00309] В определенном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

[00310] В десятом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией {например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, представленного любой из следующих структурных формул:

или

или его фармацевтически приемлемой соли..

[00311] В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[00312] В определенном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

[00313] В одиннадцатом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, представленного любой из следующих структурных формул:

или его фармацевтически приемлемой соли.

[00314] В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[00315] В определенном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

[00316] В двенадцатом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, представленного любой из следующих структурных формул:

или его фармацевтически приемлемой соли.

[00317] В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[00318] В определенном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

[00319] В тринадцатом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, представленного любой из следующих структурных формул:

или

,

или его фармацевтически приемлемой соли.

[00320] В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[00321] В определенном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

[00322] В четырнадцатом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, представленного любой из следующих структурных формул:

или

или его фармацевтически приемлемой соли.

[00323] В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[00324] В определенном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

[00325] В пятнадцатом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, представленного структурой:

или его фармацевтически приемлемой соли.

[00326] В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[00327] В определенном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

[00328] В шестнадцатом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, представленного структурой:

или его фармацевтически приемлемой соли.

[00329] В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[00330] В определенном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

[00331] В семнадцатом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, представленного структурой:

или его фармацевтически приемлемой соли.

[00332] В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[00333] В определенном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

[00334] В восемнадцатом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, представленного структурной формулой (VI), (VII) или (VIII):

в которых R, R1, и R2, и RB имеют такое же значение, что и в формуле (I); Y представляет собой O, N, S или CR3, в котором R3 имеет такое же значение, что и в формуле (I); n равняется 0 или 1; и кольцо, выделенное пунктирной линией в формуле (VIII), обозначает ароматическое или неароматическое кольцо; или его фармацевтически приемлемой соли.

[00335] В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[00336] В определенном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

[00337] В девятнадцатом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, представленного структурой:

[00338]

или его фармацевтически приемлемой соли.

[00339] В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[00340] В определенном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

[00341] В некоторых вариантах осуществления соединение для применения в способах по настоящему изобретению представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из

и

или его фармацевтически приемлемой соли.

[00342] В конкретном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[00343] В определенном варианте осуществления состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой врожденный гиперинсулинизм.

Способы получения соединений по настоящему изобретению

[00344] Соединения, применяемые в способах по настоящему изобретению, можно получать посредством ряда способов. Например, в химических примерах, представленных в данном документе ниже, приведены схемы синтеза для получения соединения JQ1 (в виде рацемата) и энантиомеров (+)-JQ1 и (-)-JQ1 (см. схемы S1 и S2 в примерах). Ряд соединений формул (I)-(IX) можно получать посредством аналогичных способов посредством замены соответствующих исходных материалов.

[00345] Например, начиная с JQ1, можно получать аналогичный амин, как показано на схеме 1 ниже.

[00346] Как показано на схеме 1, гидролиз трет-бутилового эфира JQ1 обеспечивает получение карбоновой кислоты, которую обрабатывают дифенилфосфорилазидом (DPPA) и подвергают условиям перегруппировки Курциуса с получением Cbz-защищенного амина. Cbz-защищенный амин затем подвергают снятию защиты с получением амина. Последующая обработка аминной группы (например, посредством восстановительного аминирования) обеспечивает получение вторичных аминов, которые можно дополнительно алкилировать с получением третичных аминов.

[00347] Соединения, применяемые в способах по настоящему изобретению, например, формул I-IX, в которых ядро конденсированного кольца модифицировано (например, посредством замещения кольца A в формуле I на другое арильное или гетероарильное кольцо) могут быть получены посредством применения аминодиарилкетонов, имеющих соответствующую функциональную группу (например, вместо аминодиарилкетона S2 на схеме ), с получением новых соединений, имеющих ряд ядер конденсированных колец и/или арильных групп с различными заместителями. Аминодиарилкетоны являются коммерчески доступными или могут быть получены посредством ряда способов, некоторые из которых известны из уровня техники.

[00348] На схеме 2 приведены дополнительные иллюстративные схемы синтеза для получения дополнительных соединений по настоящему изобретению.

[00349] Как показано на схеме 2, конденсированный бициклический предшественник (см. схему синтеза данного соединения) можно обрабатывать диметиламинометиленбромидом (DAM-Br) с получением DAM-защищенного промежуточного соединения, показанного на схеме 2. Реакция DAM-защищенного промежуточного соединения с гидразином обеспечивает получение трициклического конденсированного ядра. Заместитель Rx можно варьировать посредством выбора подходящего гидразина.

[00350] Дополнительные примеры соединений, применяемых в способах по настоящему изобретению (которые можно получать посредством способов, описанных в данном документе), включают следующие.

Амиды

[00351] Амиды можно получать из карбоновой кислоты или сложного эфира. Амидирование карбоновой кислоты с помощью соответствующего амина с применением стандартных условий амидирования (например, условие сочетания) обеспечивает получение амидного продукта. В некоторых вариантах осуществления образовавшийся амидный продукт представляет собой амид, замещенный гетероциклом, соединенным посредством двухуглеродного "линкера". Иллюстративные амидные структуры включают:

[00352] В других вариантах осуществления образовавшийся амидный продукт представляет собой амид, замещенный гетероциклом, соединенным посредством трехуглеродного "линкера". В некоторых вариантах осуществления образовавшийся амидный продукт представляет собой амид, замещенный гетероциклом, соединенным посредством одноуглеродного "линкера".

[00353] "Обратные амиды":

Вторичные амины:

Бороновые кислоты:

[00354] Другой аспект настоящего изобретения представляет собой способ снижения роста, пролиферации и выживаемости клетки инсулиномы, причем способ включает приведение в контакт клетки с соединением, раскрытым в данном документе, или его фармацевтически приемлемой солью. В одном варианте осуществления способ снижения роста, пролиферации и выживаемости клетки инсулиномы дополнительно включает выбор соединения для связывания с бромодоменом семейства BET. В другом варианте осуществления член семейства BET представляет собой BRD2, BRD3, BRD4 или BRDT.

[00355] Другой аспект настоящего изобретения представляет собой способ индуцирования клеточной смерти клетки инсулиномы, причем способ включает приведение в контакт клетки с соединением, раскрытым в данном документе, или его фармацевтически приемлемой солью. В одном варианте осуществления способ индуцирования клеточной смерти клетки инсулиномы дополнительно включает выбор соединения для связывания с бромодоменом семейства BET. В другом варианте осуществления член семейства BET представляет собой BRD2, BRD3, BRD4 или BRDT.

[00356] В одном варианте осуществления субъект представляет собой млекопитающее. В другом варианте осуществления субъектом является человек.

[00357] Другой аспект настоящего изобретения представляет собой способ лечения инсулиномы у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает введение эффективного количества соединения, раскрытого в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, при этом указанное соединение способно связывать бромодомен семейства BET и нарушать взаимодействие бромодомена с хроматином, обеспечивая, таким образом, лечение рака.

[00358] "Инсулинома" представляет собой редкую опухоль поджелудочной железы, которая происходит из бета-клеток и которая секретирует инсулин. Секреция инсулина в инсулиномах не регулируется глюкозой и опухоли будут продолжать секретировать инсулин и вызывать падение уровней глюкозы ниже нормальных. В настоящее время наиболее эффективный метод лечения включает хирургическое удаление опухоли, если это возможно. Лекарственные препараты, такие как диазоксид и соматостатин, также можно применять для снижения уровней инсулина у пациентов, которые не являются кандидатами на хирургическое вмешательство или которые имеют неоперабельные по иным причинам опухоли, или в отношении пациентов, имеющих другие гиперинсулинемические нарушения. Соответственно, эффективные виды терапии ограничены.

[00359] "Врожденный гиперинсулинизм (CHI)" представляет собой ненадлежащую секрецию инсулина бета-клетками поджелудочной железы, вызванную различными генетическими нарушениями. А именно, CHI включает группу различных генетических нарушений с общим наблюдением рецидивирующих приступов гиперинсулинемических гипокликемий из-за ненадлежащей секреции инсулина бета-клетками поджелудочной железы. Генетические нарушения могут быть вызваны мутациями в генах, которые регулируют высвобождение инсулина, или в других генах, вовлеченных в регуляцию глюкозы.

[00360] Прежние названия CHI не являются устаревшими: идиопатическая гипогликемия в младенческом возрасте, гиперплазия панкреатических островков, персистирующая гиперинсулинемическая гипогликемия в младенческом возрасте, PHHI. Текущее лечение CHI включает введение глюкагона, аналогов соматостатина, диазоксида и субтотальную панкреатэктомию. Глюкагон не является подходящим в качестве длительного лечения, а аналоги соматостатина и диазоксид связаны с тяжелыми побочными эффектами.

[00361] "Фармацевтически приемлемый носитель" и "фармацевтически приемлемый разбавитель" означают не обладающие терапевтическим эффектом компоненты, которые характеризуются достаточной степенью чистоты и качества для применения в составе композиции по настоящем изобретению, которые при соответствующем введении животному или человеку, как правило, не вызывают нежелательной реакции и которые применяют в качестве среды-носителя для активного вещества (т.е. соединения по настоящему изобретению).

[00362] Также предусмотрено лечение состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, фармацевтически приемлемыми солями соединений по настоящему изобретению. Термин "фармацевтически приемлемая соль" также относится к соли, полученной из соединения, раскрытого в данном документе, или любого другого соединения, определенного в данном документе, имеющего основную функциональную группу, такую как амино-функциональная группа, и фармацевтически приемлемой неорганической или органической кислоты. Например, кислую соль соединения по настоящему изобретению, содержащую аминную или другую основную группу, можно получить посредством обеспечения реакции соединения с подходящей органической или неорганической кислотой с образованием в результате фармацевтически приемлемых анионных солевых форм. Примеры анионных солей включают следующие соли: ацетат, бензолсульфонат, бензоат, бикарбонат, битартрат, бромид, эдетат кальция, камсилат, карбонат, хлорид, цитрат, дигидрохлорид, эдетат, эдизилат, эстолат, эзилат, фумарат, глицептат, глюконат, глутамат, гликоллиларсанилат, гексилрезорцинат, гидробромид, гидрохлорид, гидроксинафтоат, иодид, изетионат, лактат, лактобионат, малат, малеат, манделат, мезилат, метилсульфат, мукат, напсилат, нитрат, памоат, пантотенат, фосфат/дифосфат, полигалактуронат, салицилат, стеарат, субацетат, сукцинат, сульфат, таннат, тартрат, теоклат, тозилат и триэтиодид.

[00363] Термин "фармацевтически приемлемая соль" также относится к соли, полученной из соединения, раскрытого в данном документе, или какого-либо другого соединения, определенного в данном документе, имеющего кислотную функциональную группу, такую как функциональная группа, представляющая собой карбоновую кислоту, и фармацевтически приемлемого неорганического или органического основания.

[00364] Соли соединений, применяемые в способах по настоящему изобретению, содержащие карбоновую кислоту или другую кислотную функциональную группу, можно получать посредством осуществления реакции с подходящим основанием. Такую фармацевтически приемлемую соль можно получать с помощью основания, которое обеспечивает фармацевтически приемлемый катион, что включает соли щелочных металлов (в особенности натрия и калия), соли щелочноземельных металлов (в особенности кальция и магния), соли алюминия и соли аммония, а также соли, полученные из физиологически приемлемых органических оснований, таких как триметиламин, триэтиламин, морфолин, пиридин, пиперидин, пиколин, дициклогексиламин, N,N'-дибензилэтилендиамин, 2-гидроксиэтиламин, бис-(2-гидроксиэтил)амин, три-(2-гидроксиэтил)амин, прокаин, дибензилпиперидин, дегидроабиетиламин, N,N'-бисдегадроабиетиламин, глюкамин, N-метилглюкамин, коллидин, хинин, хинолин, и основных аминокислот, таких как лизин и аргинин.

[00365] Настоящее изобретение также включает лечение состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), у субъекта, нуждающегося в этом, с помощью различных изомеров и их смесей. Некоторые соединения для лечения инсулином или врожденного гиперинсулинизма по настоящему изобретению могут существовать в различных стереоизомерных формах. Стереоизомеры представляют собой соединения, которые отличаются лишь по их пространственному расположению. Энантиомеры представляют собой пары стереоизомеров, зеркальные отображения которых не совпадают при наложении, чаще всего потому что они содержат асимметрично замещенный атом углерода, который выполняет функцию хирального центра. "Энантиомеры" означает одну из пар молекул, которые являются зеркальными отображениями друг друга и не совпадают при наложении. Диастереомеры являются стереоизомерами, которые не связаны в качестве зеркальных отображений, чаще всего потому что они содержат два или более асимметрично замещенных атома углерода. "R" и "S" представляют собой конфигурацию заместителей вокруг одного или нескольких хиральных атомов углерода. Если хиральный центр не определен как R или S, то присутствует либо чистый энантиомер, либо смесь обеих конфигураций.

[00366] "Рацемат" или "рацемическая смесь" означает соединение в эквимолярных количествах двух энантиомеров, при этом такие смеси не проявляют оптическую активность (т.е. они не вращают плоскость поляризованного света).

[00367] Соединения, применяемые в способах по настоящему изобретению, можно получать в виде отдельных изомеров либо посредством изомер-специфичного синтеза, либо посредством выделения из изомерной смеси. Традиционные методики разделения включают образование соли свободного основания каждого изомера изомерной пары с применением оптически активной кислоты (с последующей фракционной кристаллизацией и восстановлением свободного основания), образование соли кислой формы каждого изомера изомерной пары с применением оптически активного амина (с последующей фракционной кристаллизацией и восстановлением свободной кислоты), образование сложного эфира или амида каждого из изомеров изомерной пары с применением оптически чистой кислоты, амина или спирта (с последующим хроматографическим разделением и удалением хирального вспомогательного средства) или разделение изомерной смеси либо исходного материала, либо конечного продукта с применением различных хорошо известных хроматографических способов.

[00368] Когда стереохимия раскрытого соединения упоминается или изображается посредством структуры, упоминаемый или изображаемый стереоизомер является чистым по меньшей мере на 60%, 70%, 80%, 90%, 99% или на 99,9% по весу относительно других стереоизомеров. Когда отдельный энантиомер упоминается или изображается посредством структуры, изображаемый или упоминаемый энантиомер является оптически чистым по меньшей мере на 60%, 70%, 80%, 90%, 99% или на 99,9% по весу. Процент оптической чистоты по весу представляет собой соотношение веса энантиомера, который присутствует, деленное на общий вес энантиомера, который присутствует, и вес его оптического изомера.

[00369] Применяемый в данном документе термин "таутомеры" относится к изомерам органических молекул, которые легко взаимопревращаются посредством таутомеризации, при которой атом водорода или протон переносятся в реакции, сопровождаемой в некоторых случаях сменой одинарной связи и смежной двойной связи.

[00370] Применяемый в данном документе термин "субъект" относится к животным, таким как млекопитающие, включая без ограничения приматов (например, людей), коров, овец, коз, лошадей, свиней, собак, котов, кроликов, морских свинок, крыс, мышей или другие виды жвачных животных, овец, лошадей, собак, кошек, грызунов или мышей.

[00371] Термины "лечить" и "лечение" применяют взаимозаменяемо и включают как терапевтическое лечение, так и профилактическое лечение (снижение вероятности развития). Оба термина означают уменьшение, подавление, ослабление, убавление, угнетение или стабилизацию развития или прогрессирования состояния, например заболевания или нарушения, определенных в данном документе. Например, гиперинсулинемия характеризуется уровнями циркулирующего в крови инсулина, которые превышают ожидаемые уровни инсулина относительно уровня глюкозы. Гиперинсулинемия является результатом неконтролируемой секреции инсулина бета-клетками поджелудочной железы, несмотря на низкие уровни глюкозы в крови. Гиперинсулинемия ассоциирована с рядом состояний, таких как инсулинома, врожденный гиперинсулинизм, синдром поликистоза яичников (PCOS), синдром Беквита-Видемана, и может возникать у пациентов после операции желудочного шунтирования. Лечение заболеваний или нарушений, ассоциированных с гиперинсулинемией, может включать ослабление тяжести заболевания или нарушения или улучшение симптомов, ассоциированных с заболеванием или нарушением.

[00372] В конкретном варианте осуществления лечение по меньшей мере включает снижение секреции инсулина. В более конкретном варианте осуществления лечение по меньшей мере включает снижение секреции инсулина до уровней в крови, которые не превышают ожидаемые уровни инсулина относительно уровня глюкозы. В случае инсулином лечение включает снижение объема опухоли инсулиномы, снижение секреции инсулина или их комбинацию. Как и в случае любого состояния возможность лечить более одного аспекта (например, снижать уровни инсулина и снижать объем опухоли) состояния с помощью одного лекарственного средства обеспечивает преимущества перед необходимостью во множестве средств.

[00373] "Состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией" означает состояние, при котором уровни инсулина, циркулирующего в крови, превышают ожидаемые уровни инсулина относительно уровня глюкозы. Состояния, ассоциированные с гиперинсулинемией, являются результатом неконтролируемой секреции инсулина бета-клетками поджелудочной железы, несмотря на низкие уровни глюкозы в крови. Состояния, ассоциированные с гиперинсулинемией, включают без ограничения инсулиному, врожденный гиперинсулинизм, синдром поликистоза яичников (PCOS), синдром Беквита-Видемана и могут возникать у пациентов после операции желудочного шунтирования.

[00374] Применяемый в данном документе термин "эффективное количество" относится к количеству, при введении которого в надлежащем режиме дозирования достаточно для лечения (терапевтического или профилактического) целевого состояния, в данном случае - состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования). Например, эффективное количество является достаточным для снижения или ослабления тяжести, длительности или прогрессирования нарушения, подвергаемого лечению, предотвращения развития нарушения, подвергаемого лечению, инициирования ремиссии нарушения, подвергаемого лечению, или для повышения или улучшения профилактического(профилактических) или терапевтического(терапевтических) эффекта(эффектов) другой терапии. Например, если нарушение, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному, эффективное количество может представлять собой количество, которое снижает объем опухоли инсулиномы, снижает секрецию инсулина или обеспечивает комбинацию вышеперечисленного.

[00375] Эффективное количество может составлять от приблизительно 0,001 мг/кг/сутки до приблизительно 1000 мг/кг/сутки. В одном варианте осуществления эффективное количество соединения по настоящему изобретению составляет от приблизительно 0,001 мг/кг/сутки до приблизительно 100 мг/кг/сутки. В другом варианте осуществления эффективное количество соединения по настоящему изобретению составляет от приблизительно 0,01 мг/кг/сутки до приблизительно 50 мг/кг/сутки. В еще одном варианте осуществления эффективное количество соединения по настоящему изобретению составляет от приблизительно 0,01 мг/кг/сутки до приблизительно 25 мг/кг/сутки. В еще одном варианте осуществления эффективное количество соединения по настоящему изобретению составляет от приблизительно 0,02 мг/кг/сутки до приблизительно 10 мг/кг/сутки. В еще одном варианте осуществления эффективное количество соединения по настоящему изобретению составляет от приблизительно 0,03 мг/кг/сутки до приблизительно 6 мг/кг/сутки, например от приблизительно 0,03 мг/кг/сутки до приблизительно 3 мг/кг/сутки. Режим введения

[00376] Композиции, применяемые в способах по настоящему изобретению, включают офтальмологический, пероральный, назальный, трансдермальный, местный с окклюзией или без окклюзии, внутривенный (как болюсный, так и инфузионный), ингаляционный и инъекционный (внутрибрюшинный, подкожно, внутримышечно, внутриопухолевый или парентеральный) составы. В конкретном варианте осуществления композиции предназначены для внутривенного или перорального введения. Композиция может находиться в единице дозирования, такой как таблетка, пилюля, капсула, порошок, гранула, липосома, ионообменная смола, стерильный офтальмологический раствор или офтальмологическое устройство доставки (такое как контактная линза и подобные, облегчающие немедленное высвобождение, рассчитанное по времени высвобождение или пролонгированное высвобождение), раствор или суспензия для парентерального введения, дозируемый аэрозольный или жидкий спрей, драже, ампула, автоинъекторное устройство или суппозиторий; для введения через глаза, перорально, интраназально, сублингвально, парентерально или ректально или посредством ингаляции или инсуффляции.

[00377] Композиции, применяемые в способах по настоящему изобретению, подходящие для орального введения, включают твердые формы, такие как пилюли, таблетки, капсуловидные таблетки, капсулы (каждое включает составы для немедленного высвобождения, рассчитанного по времени высвобождения и пролонгированного высвобождения), гранулы и порошки; и жидкие формы, такие как растворы, сиропы, эликсиры, эмульсии и суспензии. Формы, пригодные для офтальмологического введения, включают стерильные растворы или офтальмологические устройства доставки. Формы, пригодные для парентерального введения включают стерильные растворы, эмульсии и суспензии.

[00378] Композиции, применяемые в способах по настоящему изобретению, можно вводить в форме, подходящей для еженедельного или ежемесячного введения. Например, нерастворимая соль активного соединения может быть адаптирована для обеспечения депо-препарата для внутримышечной инъекции (например, деканоатной соли) или для обеспечения раствора для глазного введения.

[00379] Лекарственная форма, содержащая композицию, применяемую в способах по настоящему изобретению, содержит эффективное количество активного ингредиента, необходимое для обеспечения терапевтического эффекта. Композиция может содержать от приблизительно 5000 мг до приблизительно 0,01 мг соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли и может быть составлена в любой форме, подходящей для выбранного режима введения. В одном варианте осуществления композиция содержит от приблизительно 5000 мг до приблизительно 0,01 мг соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли. В другом варианте осуществления композиция содержит от приблизительно 1000 мг до приблизительно 0,01 мг соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли. В еще одном варианте осуществления композиция содержит от приблизительно 100 мг до приблизительно 0,01 мг соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли. Композицию можно вводить от приблизительно 1 до приблизительно 5 раз в сутки. Можно применять ежесуточное введение или периодическое введение доз.

[00380] Для перорального введения композиция предпочтительно находится в форме таблетки или капсулы, содержащих ее (например, 1000-0,5 миллиграмма активного соединения). Дозы будут варьироваться в зависимости от факторов, связанных с конкретным пациентом, подвергаемым лечению (например, возраст, вес, режим питания и время введения), тяжести состояния, подвергаемого лечению, применяемого соединения, режима введения и концентрации препарата.

[00381] Пероральная композиция предпочтительно составлена в виде однородной композиции, при этом активный ингредиент диспергирован равномерно по всей смеси, которая может быть легко разделена на единицы дозирования, содержащие равные количества соединения по настоящему изобретению. Предпочтительно композиции получают посредством смешивания соединения по настоящему изобретению (или его фармацевтически приемлемой соли) с одним или несколькими необязательно присутствующими фармацевтическими носителями (такими как крахмал, сахар, разбавитель, гранулирующее средство, смазывающее средство, придающее скольжение средство, связующее средство и средство, улучшающее распадаемость), одним или несколькими необязательно присутствующими инертными фармацевтическими наполнителями (такими как вода, гликоли, масла, спирты, ароматизаторы, консерванты, красители и сироп), одним или несколькими необязательно присутствующими традиционными ингредиентами для изготовления таблеток (такими как кукурузный крахмал, лактоза, сахароза, сорбит, тальк, стеариновая кислота, магния стеарат, дикальция фосфат и какая-либо из ряда смол) и необязательным разбавителем (таким как вода).

[00382] Связующие средства включают крахмал, желатин, натуральные сахара (например, глюкозу и бета-лактозу), сахаристые вещества из кукурузы и натуральные и синтетические смолы (например, аравийскую камедь и трагакант). Средства, улучшающее распадаемость, включают крахмал, метилцеллюлозу, агар и бентонит.

[00383] Таблетки и капсулы представляют собой предпочтительную форму пероральной единицы дозирования. Таблетки могут быть подслащенными или покрытыми пленкой посредством стандартных методик. Таблетки могут также быть покрыты или иным образом составлены с обеспечением пролонгированного, терапевтического эффекта с контролируемым высвобождением. Лекарственная форма может содержать внутренний дозировочный и внешний дозировочный компонент, при этом внешний компонент находится в форме оболочки поверх внутреннего компонента. Два компонента могут быть дополнительно разделены посредством слоя, который противодействует распадаемости в желудке (такого как энтеросолюбильный слой) и позволяет внутреннему компоненту проходить неповрежденным в двенадцатиперстную кишку, или посредством слоя, который замедляет или пролонгирует высвобождение. Можно применять ряд энтеросолюбильных слоев и неэнтеросолюбильных слоев или материалов покрытия (таких как полимерные кислоты, шеллачные смолы, ацетиловый спирт и ацетат целлюлозы или их комбинации).

[00384] Соединения, применяемые в способах по настоящему изобретению, также можно вводить в виде композиции с медленным высвобождением, при этом композиция включает соединение по настоящему изобретению и биоразлагаемый носитель с медленным высвобождением (например, полимерный носитель) или фармацевтически приемлемый небиоразлагаемый носитель с медленным высвобождением (например, ионообменный носитель).

[00385] Биоразлагаемый и небиоразлагаемый носители с медленным высвобождением хорошо известны из уровня техники. Биоразлагаемые носители применяют для образования частиц или матриц, которые удерживают активное(активные) средство(средства) и которые медленно разлагаются/растворяются в подходящей окружающей среде (например, водной, кислотной, основной и подобной) с высвобождением средства. Такие частицы разлагаются/растворяются в биологических жидкостях с высвобождением в них активного(активных) соединения(соединений). Частицы предпочтительно представляют собой наночастицы или наноэмульсии (например, в диапазоне от приблизительно 1 до 500 нм в диаметре, предпочтительно приблизительно 50-200 нм в диаметре и наиболее предпочтительно приблизительно 100 нм в диаметре). В способе получения композиции с медленным высвобождением носитель с медленным высвобождением и соединение по настоящему изобретению сначала растворяют или диспергируют в органическом растворителе. Полученную смесь добавляют в водный раствор, содержащий необязательное(необязательные) поверхностно-активное средство(поверхностно-активные средства), с получением эмульсии. Органической растворитель затем выпаривают из эмульсии с получением коллоидной суспензии частиц, содержащей носитель с медленным высвобождением и соединение по настоящему изобретению.

[00386] Соединение, раскрытое в данном документе и применяемое в способах по настоящему изобретению, может быть включено в состав для введения перорально или посредством инъекции в жидкой форме, такой как водные растворы, соответственно ароматизированные сиропы, водные или масляные суспензии, ароматизированные эмульсии с пищевыми маслами, такими как хлопковое масло, кунжутное масло, кокосовое масло или арахисовое масло и подобные, или в эликсирах или аналогичных фармацевтических средах-носителях. Подходящие диспергирующие или суспендирующие средства для водных суспензий включают синтетические и натуральные смолы, такие как трагакант, аравийская камедь, альгинат, декстран, натрия карбоксиметилцеллюлозу, метилцеллюлозу, поливинилпирролидон и желатин. Жидкие формы в соответственно ароматизированных суспендирующих или диспергирующих средствах могут также включать синтетические и натуральные смолы. Для парентерального введения желательными являются стерильные суспензии и растворы. Если внутривенное введение является желательным, применяют изотонические препараты, которые, как правило, содержат подходящие консерванты. В одном варианте осуществления соединение или его фармацевтически приемлемую соль вводят перорально. В другом варианте осуществления соединение или его фармацевтически приемлемую соль вводят внутривенно. Соединения, применяемые в способах, можно вводить парентерально посредством инъекции. Состав для парентерального введения может состоять из активного ингредиента, растворенного в соответствующем инертном жидком носителе или смешанного с соответствующим инертным жидким носителем. Приемлемые жидкие носители обычно содержат растворители на водной основе и другие необязательные ингредиенты для способствования растворяемости или консервированию. Такие растворители на водной основе включают стерильную воду, раствор Рингера или изотонический водный солевой раствор. Другие необязательные ингредиенты включают растительные масла (такие как арахисовое масло, хлопковое масло и кунжутное масло) и органические растворители (такие как солкеталь, глицерин и формил). В качестве растворителя или суспендирующего средства можно применять стерильное нелетучее масло. Состав для парентерального введения получают посредством растворения или суспендирования активного ингредиента в жидком носителе, в результате чего конечная единица дозирования может содержать от приблизительно 0,005 до приблизительно 99% по весу активного ингредиента. Другие добавки включают консерванты, средства, обеспечивающие изотоничность, солюбилизаторы, стабилизаторы и средства, снижающие болевые ощущения. Также можно получать инъекционные суспензии, в случае которых можно применять соответствующие жидкие носители, суспендирующие средства и подобные.

[00387] Соединения, применяемые в способах по настоящему изобретению, можно вводить интраназально с применением подходящей интраназальной среды-носителя.

[00388] В другом варианте осуществления соединения, применяемые в способах по настоящему изобретению, можно вводить непосредственно в легкие посредством ингаляции.

[00389] Соединения, применяемые в способах по настоящему изобретению, также можно вводить местно или с повышенной эффективностью с применением подходящей для местного применения трансдермальной среды-носителя или трансдермального пластыря.

[00390] Для офтальмологического введения композиция предпочтительно находится в форме композиции для глазного применения. Композиции для глазного применения предпочтительно составлены в виде составов, представляющих собой глазные капли, и ими наполнены соответствующие емкости для способствования введению в глаз, например, капельница, оснащенная подходящей пипеткой. Предпочтительно композиции являются стерильными и представляют собой композиции на водной основе, полученные с применением очищенной воды. В дополнение к соединению по настоящему изобретению композиция для глазного применения может содержать одно или несколько из следующего: а) поверхностно-активное средство, такое как сложный эфир полиоксиэтилена и жирных кислот; b) загустители, такие как целлюлоза, производные целлюлозы, карбоксивиниловые полимеры, поливиниловые полимеры и поливинилпирролидоны, как правило, в концентрации в диапазоне от приблизительно 0,05 до приблизительно 5,0% (вес/об.); с) (в качестве альтернативы хранению или в дополнение к хранению композиции в емкости, содержащей азот и необязательно включающей поглотитель свободного кислорода, такой как Fe) антиоксидант, такой как бутилированный гидроксианизол, аскорбиновая кислота, натрия тиосульфат или бутилированный гидрокситолуол, в концентрации от приблизительно 0,00005 до приблизительно 0,1% (вес/об.); d) этанол в концентрации от приблизительно 0,01 до 0,5% (вес/об.); и е) другие наполнители, такие как изотоническое средство, буфер, консервант и/или средство, регулирующее pH. pH композиции для глазного применения желательно находится в диапазоне 4-8.

Комбинированная терапия

[00391] В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению также включают лечение состояния, ассоциированного с гиперинсулинемией (например, инсулиномы, врожденного гиперинсулинизма, синдрома поликистоза яичников (PCOS), синдрома Беквита-Видемана и состояния у пациентов после операции желудочного шунтирования), с применением соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, отдельно или в комбинации с одним или несколькими терапевтическими средствами или его фармацевтически приемлемой солью. Одно или несколько терапевтических средств могут представлять собой, например, любое средство, которое способно лечить инсулиномы. В качестве альтернативы одно или несколько терапевтических средств могут представлять собой любое средство для лечения рака, известное из уровня техники, любое средство, которое представляет собой средство, ингибирующее секрецию инсулина, или любое средство, благоприятно воздействующее на пациента при введении в комбинации с соединением по настоящему изобретению. Примеры терапевтических средств, известных из уровня техники для лечения рака и подходящих для применения в комбинации с соединениями по настоящему изобретению, включают без ограничения ингибиторы CdK4/6 (например, PD0332992(палбоциклиб)), 5-фторурацил, 6-меркаптопурин, капецитабин, кладрибин, клофарабин, цитарабин, флоксуридин, флударабин, гемцитабин, гидроксимочевину, метотрексат, пеметрексед, пентостатин, тиогуанин, даунорубицин, доксорубицин, эпирубицин, идарубицин, актиномицин-D, блеомицин, митомицин-C, топотекан, иринотекан, этопозид, тенипозид, митоксантрон, паклитаксел, доцетаксел, иксабепилон, винбластин, винкристин, винорелбин, эстрамустин, преднизон, метилпреднизолон, дексаметазон, мехлорэтамин, хлорамбуцил, циклофосфамид, ифосфамид, мелфалан, стрептозоцин, кармустин, ломустин, бусульфан, дакарбазин, темозоломид, тиотепу и алтретамин. Примеры средств, ингибирующих секрецию инсулина, включают без ограничения диазоксид, соматостатин, октреотид и нифедипин. В частности, одно или несколько терапевтических средств не уменьшают эффекты терапии, эффекты первичного введения.

[00392] В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению также включают лечение врожденного гиперинсулинизма с применением соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, отдельно или в комбинации с одним или несколькими терапевтическими средствами или его фармацевтически приемлемой солью. Одно или несколько терапевтических средств могут представлять собой любое средство, которое способно лечить врожденный гиперинсулинизм. В качестве альтернативы одно или несколько терапевтических средств могут представлять собой любое средство, известное из уровня техники, которое представляет собой средство, ингибирующее секрецию инсулина, или любое средство, благоприятно воздействующее на пациента при введении в комбинации с соединением по настоящему изобретению. Примеры средств, ингибирующих секрецию инсулина, включают без ограничения диазоксид, соматостатин, октреотид и нифедипин. В частности, одно или несколько терапевтических средств не уменьшают эффекты терапии, эффекты первичного введения.

[00393] В одном варианте осуществления комбинированная терапия включает применение соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли и терапевтического средства, известного из уровня техники, или его фармацевтически приемлемой соли для лечения рака, и нарушение, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[00394] В другом варианте осуществления комбинированная терапия включает применение соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли и средства, ингибирующего секрецию инсулина, или его фармацевтически приемлемой соли.

[00395] В еще одном варианте осуществления комбинированная терапия включает применение соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, терапевтического средства для лечения рака, известного из уровня техники, или его фармацевтически приемлемой соли и средства, ингибирующего секрецию инсулина, или его фармацевтически приемлемой соли, и состояние, ассоциированное с гиперинсулинемией, представляет собой инсулиному.

[00396] В другом варианте осуществления комбинированная терапия включает применение соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли и средства, которое способно лечить врожденный гиперинсулинизм, или его фармацевтически приемлемой соли.

[00397] В дополнительном варианте осуществления комбинированная терапия включает применение соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, средства, которое способно лечить врожденный гиперинсулинизм, или его фармацевтически приемлемой соли и средства, ингибирующего секрецию инсулина, или его фармацевтически приемлемой соли.

[00398] Формулировки "в комбинации с" или "комбинированная терапия" относятся к совместному введению первого количества соединения, способного к лечению нарушения, ассоциированного с гиперинсулинемией, или его фармацевтически приемлемой соли и второго количества по меньшей мере одного терапевтического средства или его фармацевтически приемлемой соли, при этом первое и второе количества вместе включают терапевтически эффективное количество для лечения нарушения, ассоциированного с гиперинсулинемией. Комбинированная терапия охватывает введение первого и второго количеств соединений при совместном введении, по сути, одновременным образом, как например, в виде одной фармацевтической композиции, например капсулы или таблетки, имеющих постоянное соотношение первого и второго количеств, или во множестве отдельных капсул или таблеток для каждого из них. Кроме того, такое совместное введение также охватывает применение каждого соединения последовательным образом в любом порядке. Если совместное введение включает раздельное введение первого количества соединения, способного к лечению нарушения, ассоциированного с гиперинсулинемией, или его фармацевтически приемлемой соли и второго количества по меньшей мере одного терапевтического средства или его фармацевтически приемлемой соли, соединения вводят в достаточной степени близко по времени для обеспечения желательного терапевтического эффекта. Например, период времени между каждым введением, который может привести в результате к желательному терапевтическому эффекту, может составлять от минут до часов и может быть определен с учетом свойств каждого соединения, таких как эффективность, растворимость, биодоступность, период полувыведения из плазмы и кинетический профиль. Например, соединение, способное к лечению нарушений, ассоциированных с гиперинсулинемией, или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере одно терапевтическое средство или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить в любом порядке по прошествии приблизительно 24 часов одно после другого, по прошествии приблизительно 16 часов одно после другого, по прошествии приблизительно 8 часов одно после другого, по прошествии приблизительно 4 часов одно после другого, по прошествии приблизительно 1 часа одно после другого или по прошествии приблизительно 30 минут одно после другого.

ПРИМЕР

[00399] Следующие сокращения применяют по всей заявке.
[00400] Ас ацетил
[00401] AcOH уксусная кислота
[00402] Actb актин (бета)
[00403] AIBN 2,2'-азобис(2-метилпропионитрил)
[00404] aq водный
[00405] Asp аспарагиновая кислота
[00406] BET бромодомен и экстратерминальный домен
[00407] BRDT бромодомен-содержащий тестисспецифический белок
[00408] BRD2 бромодомен-содержащий белок 2

[00409] BRD3 бромодомен-содержащий белок 3
[00410] Brd4 бромодомен-содержащий белок 4
[00411] Bn бензил
[00412] Boc трет-бутоксикарбонил
[00413] BSA альбумин бычьей сыворотки
[00414] Bu бутил
[00415] Cdk4 циклин-зависимая киназа 4
[00416] Cdk6 циклин-зависимая киназа 6
[00417] DIEA N,N-диизопропилэтиламин
[00418] DMF N,N-диметилформамид
[00419] DMSO диметилсульфоксид
[00420] EDC N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимид
[00421] ESI ионизация методом электрораспыления
[00422] Et этил
[00423] EtOAc этил ацетат
[00424] EtOH этанол
[00425] Fmoc флуоренилметилоксикарбонил
[00426] Gapdh глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа
[00427] Gck глюкокиназа
[00428] HCTU (2-(6-хлор-1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметиламиния гексафторфосфат
[00429] His гистидин
[00430] HPLC высокоэффективная жидкостная хроматография
[00431] HRMS масс-спектрометрия высокого разрешения
[00432] i изо
[00433] IC50 концентрация полумаксимального ингибирования роста
[00434] Igf2 инсулиноподобный фактор роста 2
[00435] Ins1 инсулин 1
[00436] Ins2 инсулин 2
[00437] MeOH метанол
[00438] Me метил

[00439] MS масс-спектрометрия
[00440] MW молекулярная масса
[00441] Myc c-Myc
[00442] Mycn n-Myc
[00443] ЯМР спектрометрия ядерного магнитного резонанса
[00444] PBS фосфатно-солевой буферный раствор
[00445] Ph фенил
[00446] PEG полиэтиленгликоль
[00447] Pr пропил
[00448] PyBOP (бензотриазол-1-илоксил)трипирролидинофосфоний
[00449] RT обратная транскрипция
[00450] qPCR количественная полимеразная цепная реакция
[00451] s вторичный
[00452] S сера
[00453] t третичный
[00454] THF тетрагидрофуран
[00455] TLC тонкослойная хроматография
[00456] qPCR количественная полимеразная цепная реакция
[00457] 18sRNA 18s рибосомальная РНК

I. ХИМИЧЕСКИЕ ПРИМЕРЫ - СИНТЕЗ И СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ

[00458] Соединения по настоящему изобретению можно синтезировать посредством способов, описанных в данном документе, и/или в соответствии со способами, известными специалисту в данной области, принимая во внимание описание в данном документе.

Оборудование

[00459] Спектры протонного и углерод-13 ядерного магнитного резонанса (1H ЯМР и 13C ЯМР) регистрировали с помощью спектрометра Varian 600INOVA с датчиком для обратного детектирования в лаборатории East Quad NMR Гарвардской медицинской школы. Значения химического сдвига регистрировали в частях на миллион на δ-шкале и соответственно рассматривали исходя из остаточного протия в растворителе для ЯМР, (CHCl3: δ 7,24) для 1H ЯМР, и значений резонанса углерода для растворителя, (CDCl3: δ 77,2) для 13C ЯМР. Данные регистрировали в следующем виде: химический сдвиг, мультиплетность (s = синглет, d = дуплет, t = триплет, q = квартет, m = мультиплет, br = широкий) и значение(значения) постоянной взаимодействия в герцах, интегральная интенсивность. Масс-спектры высокого разрешения (HRMS) регистрировали на спектрометре Bruker APEX 4.7 Tesler FTMS с применением источника ионов при электрораспылении (ESI) в Лаборатории измерительных приборов Химического факультета Массачусетского технологического института. Промежуточные соединения и конечный продукт очищали с помощью системы CombiFlash RF (Teledyne Isco). Органические растворы концентрировали с помощью роторных испарителей R-205. Значения степени чистоты энантиомеров проверяли с помощью сверхкритической флюидной хроматографии Berger (SFC) и колонки AS-H. Препаративную очистку энантиомеров осуществляли с помощью жидкостной хроматографии высокого давления Agilent и колонки OD-H (Институт Броуда при Гарварде и MIT).

Схема S1. Синтез рацемического ингибитора бромодомена (±)-JQ1

Пример 1

(2-Амино-4,5-диметилтиофен-3-ил)(4-хлорфенил)метанон (S2)

[00460] Соединение JQ1 получали в соответствии со схемой, показанной выше.

[00461] К раствору 4-хлорбензоилацетонитрила S1 (1,24 г, 6,9 ммоль, 1 эквив.), 2-бутанона (0,62 мл, 6,9 ммоль, 1,00 эквив.) и морфолина (0,60 мл, 6,9 ммоль, 1,00 эквив.) в этаноле (20 мл, 0,35 М) при 23°C в виде твердого вещества добавляли серу (220 мг, 6,9 ммоль, 1,00 эквив.). Затем смесь нагревали до 70°C. Через 12 часов реакционную смесь охлаждали до 23°C и выливали в солевой раствор (100 мл). Водный слой экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (система Combiflash RF, 40 граммов силикагеля, градиент 0-100% этилацетат-гексаны) с получением соединения S2 (1,28 г, 70%) в виде твердого вещества желтого цвета.

(S)-трет-бутил-3-({[(9H-флуорен-9-ил)метокси]карбонил}амино)-4-{[3-(4-хлорбензоил)-4,5-диметилтиофен-2-ил]амино}-4-оксобутаноат (S3)

[00462] К раствору β-трет-бутилового эфира 9-флуоренилметоксикарбонил-аспарагиновой кислоты [Fmoc-Asp(Ot-Bu)-OH] (864 мг, 2,1 ммоль, 2,10 эквив.) в N,N-диметилформамиде (1,5 мл, 1,0 М) последовательно добавляли (2-(6-хлор-1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметиламиния гексафторфосфат (HCTU) (827 мг, 2,0 ммоль, 2,00 эквив.) и N,N-диизопропилэтиламин (0,72 мл, 4,0 ммоль, 4,00 эквив.). Затем смесь перемешивали при 23°C в течение 5 мин., затем добавляли соединение S2 (266 мг, 1,0 ммоль, 1 эквив.) в виде твердого вещества. Реакционную смесь перемешивали при 23°C. Через 16 часов добавляли этилацетат (20 мл) и солевой раствор (20 мл). Два слоя разделяли и водный слой экстрагировали этилацетатом (2×20 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (30 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (Combiflash RF, 40 граммов силикагеля, градиент 0-100% этилацетат-гексаны) с получением соединения S3 (625 мг, 90%) в виде масла коричневого цвета.

(S)-трет-бутил-3-амино-4-((3-(4-хлорбензоил)-4,5-диметилтиофен-2-ил)амино)-4-оксобутаноат (S4)

[00463] Соединение S3 (560 мг, 0,85 ммоль, 1 эквив.) растворяли в 20% растворе пиперидина в DMF (4,0 мл, 0,22 М) при 23°C. Через 30 мин. к реакционной смеси добавляли этилацетат (20 мл) и солевой раствор (20 мл). Два слоя разделяли и водный слой экстрагировали этилацетатом (2×20 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (3×25 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (система Combiflash RF, 24 грамма силикагеля, градиент 0-100% этилацетат-гексаны) с получением свободного амина S4 (370 мг, 90%) в виде твердого вещества желтого цвета. Энантиомерную чистоту доводили до 75% (определено с помощью сверхкритической флюидной хроматографии Berge (SFC) с применением колонки AS-H).

(S)-трет-бутил-2-(5-(4-хлорфенил)-6,7-диметил-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-тиено[2,3-е][1.4]диазепин-3-ил)ацетат (S5)

[00464] Аминокетон (S4) (280 мг, 0,63 ммоль) растворяли в 10% этанольном растворе уксусной кислоты (21 мл, 0,03 М). Реакционную смесь нагревали до 85°C. Через 30 минут при пониженном давлении удаляли все растворители. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (система Combiflash RF, 12 граммов силикагеля, градиент 0-100% этилацетат-гексаны) с получением соединения S5 (241 мг, 95%) в виде твердого вещества белого цвета. Энантиомерная чистота соединения S5 составляла 67% (определено с помощью сверхкритической флюидной хроматографии Berger (SFC) с применением колонки AS-H).

Трет-бутил-2-(5-(4-хлорфенил)-6,7-диметил-2-тиоксо-2,3-дигидро-1Н-тиено[2,3-е][1.4]диазепин-3-ил)ацетат (S6)

[00465] К раствору соединения S5 (210 мг, 0,5 ммоль, 1 эквив.) в диглиме (1,25 мл, 0,4 М) последовательно добавляли пентасульфид фосфора (222 мг, 1,0 ммоль, 2,00 эквив.) и бикарбонат натрия (168 мг, 2,0 ммоль, 4,00 эквив.). Реакционную смесь нагревали до 90°C. Через 16 ч. добавляли солевой раствор (20 мл) и этилацетат (35 мл). Два слоя разделяли и водный слой экстрагировали этилацетатом (3×30 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (2×15 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (система Combiflash RF, 24 грамма силикагеля, градиент 0-100% этилацетат-гексаны) с получением соединения S6 (141 мг, 65%) в виде твердого вещества коричневого цвета и восстанавливали соединение S5 (73 мг, 34%).

Трет-бутил-2-(4-(4-хлорфенил)-2,3,9-триметил-6H-тиено[3,2-ƒ][1,2,4]триазоло[4,3-а][1,4]диазепин-6-ил)ацетат [(±)JQ1]

[00466] К раствору соединения S6 (158 мг, 0,36 ммоль, 1 эквив.) в THF (2,6 мл, 0,14 М) при 0°C добавляли гидразин (0,015 мл, 0,45 ммоль, 1,25 эквив.). Реакционную смесь нагревали до 23°C и перемешивали при 23°C в течение 1 ч. Все растворители удаляли при пониженном давлении. Полученное гидразиновое промежуточное соединение применяли непосредственно без очистки. Гидразиновое промежуточное соединение затем растворяли в смеси 2:3 триметилортоацетата и толуола (6 мл, 0,06 М). Реакционную смесь нагревали до 120°C. Через 2 ч. все растворители удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (система Combiflash, 4 г силикагеля, градиент 0-100% этилацетат-гексаны) с получением соединения JQ1 (140 мг, 85% в 2 стадии) в виде твердого вещества белого цвета. Посредством условий реакции дополнительно эпимеризовали стереогенный центр с получением в результате рацемата JQ1 (определено с помощью сверхкритической флюидной хроматографии Berger (SFC) с помощью колонки AS-H).

Схема S2. Синтез энантиомерно-обогащенного соединения (+)-JQ1

(S)-трет-бутил-3-({[(9Н-флуорен-9-ил)метокси]карбонил}амино)-4-{[3-(4-хлорбензоил)-4,5-диметилтиофен-2-ил]амино}-4-оксобутаноат (S3)

[00467] К раствору β-трет-бутилового эфира 9-флуоренилметоксикарбониласпарагиновой кислоты [Fmoc-Asp(Ot-Bu)-OH] (411 мг, 1,00 ммоль, 1,0 эквив.) в N,N-диметилформамиде (1,0 мл, 1,0 М) последовательно добавляли (бензотриазол-1-илоксил)трипирролидинофосфоний (PyBOP) (494 мг, 0,95 ммоль, 0,95 эквив.), N,N-диизопропилэтиламин (0,50 мл, 2,8 ммоль, 2,75 эквив.). Затем смесь перемешивали при 23°C в течение 5 мин., затем добавляли соединение S2 (266 мг, 1,0 ммоль, 1 эквив.) в виде твердого вещества. Реакционную смесь перемешивали при 23°C. Через 4 ч. добавляли этилацетат (20 мл) и солевой раствор (20 мл). Два слоя разделяли и водный слой экстрагировали этилацетатом (2×20 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (система Combiflash RF, 40 граммов силикагеля, градиент 0-100% этилацетат-гексаны) с получением соединения S3 (452 мг, 72%) в виде масла коричневого цвета.

(S)-трет-бутил-3-амино-4-((3-(4-хлорбензот)-4,5-диметилтиофен-2-ил)амино)-4-оксобутаноат (S4)

[00468] Соединение S3 (310 мг, 0,47 ммоль, 1 эквив.) растворяли в 20% растворе пиперидина в DMF (2,2 мл, 0,22 М) при 23°C. Через 30 мин. к реакционной смеси добавляли этилацетат (20 мл) и солевой раствор (20 мл). Два слоя разделяли и водный слой экстрагировали этилацетатом (2×20 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (3×25 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (система Combiflash RF, 24 грамма силикагеля, градиент 0-100% этилацетат-гексан) с получением свободного амина S4 (184 мг, 90%) в виде твердого вещества желтого цвета. Энантиомерная чистота S4 составляла 91% (проверено с помощью сверхкритической флюидной хроматографии Berger (SFC) с применением колонки AS-H).

(S)-трет-бутил-2-(5-(4-хлорфенил)-6,7-диметил-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-тиено[2,3-е][1,4]диазепин-3-ил)ацетат (S5)

[00469] Аминокетон (S4) (184 мг, 0,42 ммоль) растворяли в толуоле (10 мл, 0,04 М). Добавляли силикагель (300 мг) и реакционную смесь нагревали до 90°C. Через 3 ч. реакционную смесь охлаждали до 23°C. Силикагель отфильтровывали и промывали этилацетатом. Объединенные фильтраты концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (система Combiflash RF, 12 граммов силикагеля, градиент 0-100% этилацетат-гексаны) с получением соединения S5 (168 мг, 95%) в виде твердого вещества белого цвета. Энантиомерная чистота соединения S5 составляла 90% (определено с помощью сверхкритической флюидной хроматографии Berger (SFC) с применением колонки AS-H).

(S)-трет-бутил-2-(4-(4-хлорфенил)-2,3,9-триметил-6Н-тиено[3,2-ƒ][1,2,4]триазоло-[4,3-а][1,4]диазепин-6-ил)ацетат [(+)JQ1]

[00470] К раствору соединения S5 (114 мг, 0,27 ммоль, 1 эквив.) в THF (1,8 мл, 0,15 М) при -78°C добавляли трет-бутоксид калия (1,0 М раствор в THF, 0,3 мл, 0,30 ммоль, 1,10 эквив.). Реакционную смесь нагревали до -10°C и перемешивали при 23°C в течение 30 мин. Реакционную смесь охлаждали до -78°C. В реакционную смесь добавляли диэтилхлорфосфат (0,047 мл, 0,32 ммоль, 1,20 эквив.). Полученную в результате смесь нагревали до -10°C в течение 45 мин. К реакционной смеси добавляли уксусный гидразид (30 мг, 0,40 ммоль, 1,50 эквив.). Реакционную смесь перемешивали при 23°C. Через 1 ч. к реакционной смеси добавляли 1-бутанол (2,25 мл), реакционную смесь нагревали до 90°C. Через 1 ч. все растворители удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (система Combiflash, 4 г силикагеля, градиент 0-100% этилацетат-гексаны) с получением соединения (+)-JQ1 (114 мг, 92%) в виде твердого вещества белого цвета с энантиомерной чистотой 90% (определено с помощью сверхкритической флюидной хроматографии Berger (SFC) с применением колонки AS-H, 85% гексаны-метанол, 210 нм, tR (R-энантиомер) = 1,59 мин., tR (S-энантиомер) = 3,67 мин.). Продукт дополнительно очищали с помощью хиральной препаративной HPLC (жидкостной хроматографии высокого давления Agilent с применением колонки OD-H) с получением 5-энантиомера с энантиомерным избытком более 99%.

[00471] 1H ЯМР (600 МГц, CDCl3, 25°C) δ 7,39 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 7,31 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 4,54 (t, J=6,6 МГц, 1Н), 3,54-3,52 (m, 2Н), 2,66 (s, 3H), 2,39 (s, 3H), 1,67 (s, 3H), 1,48 (s, 9Н).

[00472] 13C ЯМР (150 МГц, CDCl3, 25°C) δ 171,0, 163,8, 155,7, 150,0, 136,9, 131,1, 130,9, 130,6, 130,3, 128,9, 81,2, 54,1, 38,1, 28,4, 14,6, 13,5, 12,1.

[00473] HRMS(ESI) рассчитанный для C21H24CIN2O3S [M+H]+: 457,1460, обнаруженный 457,1451 масса/заряд.

[00474] TLC (EtOAc), Rƒ: 0,32 (UV)

[00475] [α]22D=+75 (c 0,5, CHCl3)

[00476] Соединение (-)-JQ1 синтезировали аналогично, применяя в качестве исходного материала Fmoc-D-Asp(Ot-Bu)-OH, и дополнительно очищали с помощью хиральной препаративной HPLC (жидкостной хроматографии высокого давления Agilent с применением колонки OD-H) с получением R-энантиомера с энантиомерным избытком более 99%. [α]22D=-72 (c 0,5, CHCl3).

Синтез дополнительных соединений

[00477] Дополнительные соединения по настоящему изобретению получали как проиллюстрировано на схеме S3.

Схема S3. Синтез гидразиновых производных

[00478] Как показано на схеме S3 трет-бутиловый эфир соединения (+)-JQ1 (1) расщепляли с получением свободной кислоты (2), которую вводили в реакцию сочетания с гидразином с получением гидразида (3). Реакция с 4-гидроксибензальдегидом обеспечивала получение гидразона (4).

[00479] Как гидразид (3), так и гидразон (4) демонстрировали активность по меньшей мере в одном биологическом анализе.

[00480] В таблице A ниже приведены дополнительные соединения, полученные для применения в способах по настоящему изобретению.

Спектральные данные для каждого соединения были сопоставимыми с заданной структурой.

II. БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ

Пример 2. Результаты анализа связывания

[00481] Результаты анализа связывания показаны ниже в таблице В.

[00482] Активность связывания соединений-прототипов с сайтом 1 BRD4 определяли посредством альфа-анализа с 12-точечной кривой зависимости доза-эффект. Соединение (S)-JQ1 (JQS) применяли в качестве положительного контроля. (R)-JQ1 (JQ-R) применяли в качестве отрицательного контроля. Соединения (S)-JQ6, (S)-JQ8, (S)-JQ13, (S)-JQ33 и (S)-JQ35 проявляли превосходную активность связывания. Результаты активности связывания всех соединений-прототипов с сайтом 2 BRD4 также определяли посредством альфа-анализа с 12-точечной кривой зависимости доза-эффект. Соединения (S)-JQ6, (S)-JQ8, (S)-JQ13, (S)-JQ33 и (S)-JQ35 проявляли превосходную активность связывания.

[00483] Активность соединений-прототипов исследовали в клеточном анализе с помощью линии клеток 797 (полученной от пациента) для определения эффектов ингибирования BRD4 на рост в BRD4-NUT-зависимых линиях клеток. Клетки инкубировали с соединениями и проверяли в отношении пролиферации через 72 часа. Подбор кривой рассчитывали посредством логистической регрессии. Все соединения-прототипы исследовали в клеточных анализах с помощью линии клеток 10326, которую непосредственно получали от пациента, для определения эффектов ингибирования BRD4 на рост в BRD4-NUT-зависимых линиях клеток. Клетки инкубировали с соединениями и проверяли в отношении пролиферации через 72 часа. Подбор кривой рассчитывали посредством логистической регрессии.

Пример 3. Анализ клеток инсулиномы крысы

[00484] Анализ Cell Titer-Glo применяли для испытания чувствительности четырех линий клеток инсулиномы крысы (RIN), RIN-14B, RIN-m5F, RIN-m и RIN-5, к соединению (S)-JQ1 (таблица 1). Паклитаксел применяли в качестве положительного контроля.

[00485] Клетки высевали при концентрации 5000 клеток на лунку в 96-луночный планшет для микрокультуры в общем объеме 100 мкл/лунка и инкубировали в течение 24 часов. В каждую лунку добавляли 100 мкл 2Х испытуемых соединений ((S)-JQ1 или паклитаксела), последовательно разбавленных 1:4. Испытуемые концентрации для (S)-JQ1 составляли 20 мкМ, 5 мкМ, 1,25 мкМ, 0,313 мкМ, 0,0781 мкМ, 0,0195 мкМ, 0,00488 мкМ, 0,00122 мкМ, 0,000305 мкМ и 0,0000763 мкМ. Испытуемые концентрации для паклитаксела составляли 10 мкМ, 2,5 мкМ, 0,625 мкМ, 0,156 мкМ, 0,0391 мкМ, 0,00977 мкМ, 0,00244 мкМ, 0,000610 мкМ, 0,000153 мкМ и 0,0000381 мкМ. Повторы данных для RIN-5F получали, когда испытуемые концентрации для паклитаксела составляли 1 мкМ, 0,25 мкМ, 0,0625 мкМ, 0,0156 мкМ, 0,00391 мкМ, 0,000977 мкМ, 0,000244 мкМ, 0,0000610 мкМ, 0,0000153 мкМ и 0,00000381 мкМ. В общей сложности через 168-192 часа культивирования 100 мкл среды удаляли из каждой лунки и в каждую лунку добавляли 50 мкл Cell Titer-Glo (Promega №G7571). Планшет встряхивали в течение 2 минут и обеспечивали уравновешивание в течение 10 минут. Люминесценцию измеряли на считывающем устройстве для микропланшетов GENios от Tecan. Процент ингибирования жизнеспособности клеток рассчитывали относительно необработанных контрольных лунок. Все испытания осуществляли в трех повторностях или в четырех повторностях при каждом уровне концентрации. Значения IC50 рассчитывали с применением программы подбора кривой Prism 6.00 с помощью логистического уравнения с четырьмя параметрами.

РЕЗУЛЬТАТЫ

[00486] Все линии клеток были чувствительными к (S)-JQ1 со значениями IC50 до 100 нМ. Более высокие концентрации (S)-JQ1 снижали жизнеспособность клеток практически до 0%, указывая на то, что (S)-JQ1 обладает цитотоксическим эффектом (фиг. 1-5). Данные результаты показали, что ингибиторы бромодомена BET являются высоко эффективными в снижении жизнеспособности линий клеток инсулиномы.

Пример 4. Клеточный анализ секреции инсулина инсулиномой крысы

[00487] Анализ ELISA применяли для измерения эффекта (S)-JQ1 и (S)-JQ35 на количество инсулина, секретируемого линией клеток инсулиномы крысы (RIN) RIN-m5F. DMSO применяли в качестве контроля, представляющего собой среду-носитель.

[00488] Клетки высевали при концентрации 300000 клеток на лунку в 12-луночный культуральный планшет в общем объеме 1 мл/лунка и инкубировали в течение 24 часов. Через 24 часа инкубирования удаляли среду и добавляли 1 мл среды для роста с испытуемыми соединениями (DMSO (контроль), (S)-JQ1 или (S)-JQ35) при конечной концентрации 100 нМ или 500 нМ. Через 24,48 или 72 часа обработки количество инсулина, секретируемого в культуральную среду с клетками, измеряли посредством анализа ELISA (Crystal Chemical, № по кат. 90060). Число жизнеспособных клеток определяли в конце каждого момента времени посредством способа на "исключение красителя" с применением трипанового синего. Рассчитывали количество инсулина, секретируемого клеткой.

[00489] Ингибиторы бромодомена BET снижали количество инсулина, секретируемого из линии клеток инсулиномы крысы RIN-m5F. Результаты показали, что с течением времени обработанные контролем клетки секретируют инсулин в среду для культивирования клеток. Однако по прошествии момента времени 72 часа клетки, обработанные ингибитором бромодомена BET, не секретировали почти столько же инсулина как обработанные DMSO клетки. В этот момент времени также выявили дозозависимый эффект, при этом обработки при концентрации 500 нМ характеризовались большим эффектом на секрецию инсулина, чем обработки при концентрации 100 нМ. Результаты показаны графически на фиг. 6. Эти данные подкрепляют применение ингибиторов бромодомена BET для лечения нарушений, ассоциированных с гиперинсулинемией (например, инсулиномы и врожденного гиперинсулинизма), посредством снижения продуцирования инсулина.

Пример 5. Анализ экспрессии генов с помощи qPCR в линиях клеток инсулиномы крысы

[00490] Для дополнительного исследования чувствительности линий клеток инсулиномы к ингибиторам бромодомена BET проводили анализ экспрессии генов с помощью количественной ПЦР (qPCR) для измерения уровней экспрессии Myc, Mycn, Cdk4, Cdk6, Ins1, Ins2, Gck, Igf2 и Brd4 в линиях клеток инсулиномы крысы, в клетках RIN-m5F и RIN-m. DMSO применяли в качестве контроля.

Клеточная культура и лечение лекарственными средствами

[00491] Клетки RIN-m5F или RIN-m культивировали в RPMI с 10% FBS. Клетки высевали при концентрации 2000000 клеток/лунка в 6-луночном планшете (приблизительно 4×105 клеток/см2) в общем объеме 2 мл/лунка. Через 24 часа инкубирования в увлажненном инкубаторе при 37°C с 5% CO2 и 95% воздуха, среду заменяли 2-3 мл свежей среды, содержащей 0,1% DMSO, (S)-JQ1 (500 нМ) или (S)-JQ35 (500 нМ) и инкубировали в течение 24 часов. Среду удаляли и клетки промывали дважды 2 мл холодного PBS (IX). Клетки солюбилизировали в 250 мкл Qiazol на лунку до общего объема 2 мл и пропускали через иглу с калибром 23 и шприц для разрушения комков клеток. Лизат хранили при -80°C или в жидком азоте.

Выделение РНК и образование cDNA

[00492] Клеточный лизат размораживали на льду и 500 мкл переносили в пробирку с заблокированной фазой (phase lock tube). Добавляли 100 мкл хлороформа и пробирки энергично встряхивали в течение 15 секунд и инкубировали в течение 2-3 минут при комнатной температуре. Образцы центрифугировали в течение 13 минут при 10000 × g при 2-8°C. Надосадочную жидкость удаляли, добавляли 600 мкл этанола и пробирки перемешивали. В колонку добавляли образцы (мини-набор miRNeasy от Qiagen, кат. 217004) и центрифугировали в течение 4 минут при 6000 об./мин. В колонку добавляли 600 мкл буфера RWT (мини-набор miRNeasy от Qiagen, кат. 217004) и центрифугировали в течение 4 минут при 6000 об./мин. ДНК расщепляли на колонке в течение 15 минут при комнатной температуре ДНКазой I (ДНКаза-набор без РНКазы, Qiagen, кат. 79254). В колонку добавляли 600 мкл буфера RWT и центрифугировали в течение 4 минут при 6000 об./мин. В колонку добавляли 700 мкл буфера RPE (мини-набор miRNeasy от Qiagen, кат. 217004) и центрифугировали в течение 4 минут при 6000 об./мин. В колонку добавляли 100 мкл воды, не содержащей РНКазу, инкубировали в течение 1 минуты и элюировали РНК посредством центрифугирования при 6000 об./мин. в течение 4 минут. Данную стадию элюирования повторяли с 50 мкл воды, не содержащей РНКазу, и оба элюата объединяли. Подсчитывали концентрации РНК и РНК хранили при -80°C.

[00493] cDNA получали из 1000 нг РНК с помощью набора Life Tech-RT (кат. 4304134). Подготавливали реакционную смесь RT-cDNA, содержащую 10 мкл 10× RT-буфера, 22 мкл 25 мМ хлорида магния (MgCl2), 20 мкл 10 мМ смеси Deoxy NTP, 5,5 мкл случайного гексамера, 2 мкл ингибитора РНКазы, 2,5 мкл Multiscribe RT (50 единиц/мкл), 18 мкл воды и 20 мкл (1000 нг) РНК (50 нг/мкл) (общий объем 100 мкл).

[00494] Пробирки оставляли при 25°C в течение 10 минут, затем 48°C в течение 30 минут, затем 95°C в течение 5 минут и хранили при 4°C в течение неопределенного периода времени.

Количественная ПЦР (qPCR)

[00495] Количественную ПЦР (qPCR) проводили с помощью зондов Taqman (Applied Biosystems) для Ins 1, Ins 2, Myc, Mycn, Ifg2, Gck, Cdk6, Cdk4, Brd4 (Actb, Gadph и 18sRNA в качестве контролен) на установке для проведения ПЦР в реальном времени QuantStudio (Life Technologies). Для каждой реакции qPCR подготавливали реакционную смесь, содержащую 1 мкл 20х зонда Taqman, 10 мкл 2х концентрированной смеси Taqman (Life Technologies), 5 мкл воды, не содержащей РНКазу, 4 мкл матрицы cDNA (общий объем 20 мкл).

[00496] Все реакции qPCR проводили в двух повторностях. Результаты анализировали с применением способа дельта СТ. Actb, Gapdh или 18sRNA применяли для внутренних контролен. Рассчитывали процент экспрессии для каждого гена после обработки (S)-JQ1 или (S)-JQ35 относительно обработки DMSO-контролем (фиг. 7-12). Дублирующие пробы усреднялись и рассчитывали среднеквадратическое отклонение.

РЕЗУЛЬТАТЫ

[00497] Анализ экспрессии генов проводили для линий клеток инсулиномы крысы в отношении генов пролиферации клеток (Myc и Mycn), генов клеточного цикла (Cdk4 и Cdk6) и генов инсулинового пути (Ins1, Ins2, Gck и Igf2) для определения эффекта обработки ингибитором бромодомена BET. Данные для обоих испытуемых ингибиторов ((S)-JQ1 и (S)-JQ35) и линий клеток были сопоставимы (фиг. 7-12). В целом в зависимости от применяемого внутреннего контроля (Actb, Gapdh или 18sRNA) семь из девяти испытуемых генов характеризовались сниженными уровнями экспрессии относительно клеток, обработанных DMSO-контролем. В большинстве случаев наибольшее снижение экспрессии после обработки ингибитором BET происходило для Gck, затем для Cdk6, Igf2 и Mycn. Ins1, Ins2 и Myc характеризовались более умеренным снижением экспрессии. За немногими исключениями, ингибирование BET значительно не влияло на экспрессию Cdk4 или Brd4, указывая на то, что не наблюдалось полного снижения уровня продуктов транскрипции. Более того, изменения в экспрессии, которые наблюдались, нельзя объяснить измененными уровнями Brd4. Отмечали некоторое варьирование результатов в зависимости от применяемого внутреннего контроля.

[00498] В целом данные соответствуют ингибированию бромодомена BET, приводящему в результате к снижению уровней экспрессии Myc, Mycn, Cdk6, Ins1, Ins2, Gck и Igf2. Эти данные подкрепляют применение ингибиторов бромодомена BET для лечения инсулином посредством потенциального ингибирования экспрессии генов пролиферации клеток, регуляторов клеточного цикла и компонентов инсулинового пути. Эти данные также подкрепляют применение ингибиторов бромодомена BET для лечения нарушений, ассоциированных с гиперинсулинемией (например, инсулином и врожденного гиперинсулинизма), посредством снижения уровней экспрессии генов, связанных с продуцированием инсулина.

Пример 6. Анализ ген-специфичной иммунопреципитации хроматина (ChIP)

[00499] Анализ ген-специфичной иммунопреципитации хроматина (ChIP) осуществляли в отношении клеток RIN-m5F для определения того, регулирует ли Brd4 непосредственно ген инсулина (Ins2) и онкоген c-Myc (Myc). Нетранскрибируемый участок 17 (Untr 17) применяли в качестве отрицательного контроля.

[00500] Примерно 10-20 миллионов клеток RIN-m5F фиксировали 1% формальдегидом в течение 15 минут и блокировали 0,125 М глицином. Хроматин выделяли посредством добавления лизирующего буфера с последующим разрушением с помощью гомогенизатора Даунса. Лизаты подвергали воздействию ультразвука и ДНК разрезали до средней длины, составляющей 300-500 пар оснований. Геномную ДНК (входящую) получали посредством обработки аликвот хроматина РНКазой, протеиназой K и нагреванием для разрушения поперечных связей с последующей преципитацией с помощью этанола. Осадок ресуспендировали и полученную ДНК измеряли количественно на спектрофотометре NanoDrop. Экстраполяция до первоначального объема хроматина обеспечила количественное определение общего выхода хроматина.

[00501] Аликвоту хроматина (30 мкг) предварительно очищали с помощью агарозных шариков с белком A (Invitrogen). Области геномной ДНК, представляющие интерес, выделяли с применением 4 мкг антитела к BRD4 (Bethyl Laboratories, № по кат. А301-985А100, серия № A301-985А100-1) или ацетилированного лизина 27 гистона H3 (H3K27Ac) (Active Motif, № по кат. 39133, серия №7). Комплексы промывали, элюировали из шариков с помощью буфера SDS и подвергали обработке с помощью РНКазы и протеиназы K. Поперечные связи восстанавливали посредством инкубирования в течение ночи при 65°C и ChIP ДНК очищали посредством фенол-хлороформной экстракции и преципитации с помощью этанола.

[00502] Реакции количественной ПЦР (qPCR) осуществляли в трех повторностях в отношении специфичных геномных областей (промоторной области Ins2, промоторной области Myc или нетранскрибируемой области отрицательного контроля) с применением SYBR Green Supermix (Bio-Rad). Полученные сигналы подвергали нормализации в отношении эффективности праймеров посредством осуществления qPCR для каждой пары праймеров с применением входящей ДНК (Input DNA).

РЕЗУЛЬТАТЫ

[00503] Результаты показали, что Brd4 связывается с промоторной областью гена Ins2 (14-кратное усиление связывания относительно области отрицательного контроля) и промоторной областью Myc (17-кратное усиление относительно области отрицательного контроля), указывая на то, что Brd4 непосредственно регулирует эти гены и что ингибиторы бромодомена BET будут вероятнее всего вызывать снижение экспрессии Ins2 и Myc посредством нарушения способности Brd4 активировать экспрессию Ins2 и Myc (фиг. 13). Эти результаты являются сопоставимыми с данными анализа экспрессии генов qPCR, полученными в примере 5.

Пример 7. Секвенирование и иммунопреципитация хроматина (ChIP-seq) BRD4 и ацетилирование лизина 27 гистона H3 (H3K27ac)

[00504] Анализ иммунопреципитации хроматина с последующим массовым параллельным секвенированием (ChIP-Seq) осуществляли в отношении линии клеток инсулиномы, клеток RIN-m5F, с определением общегеномной локализации Brd4 и ацетилирования лизина 27 гистона H3 (H3K27ac).

[00505] ChIP и входящую ДНК получали как описано выше. Библиотеки секвенирования Illumina получали из ChIP и входящих ДНК с применением системы Apollo 324 (WaferGen). После конечной стадии амплификации ПЦР полученные в результате библиотеки ДНК измеряли количественно и секвенировали с помощью HiSeq 2500. Последовательности (50 нуклеотидных фрагментов, односторонние) выравнивали в отношении генома крысы (m5) с применением алгоритма BWA (параметры по умолчанию). Лишь те фрагменты, которые прошли фильтр чистоты Illumina, выровненные не более чем с 2 несоответствиями, и карту, уникальную для генома, применяли в последующем анализе. В дополнение дублирующие фрагменты были удалены. Выравнивания удлиняли при компьютерном моделировании эксперимента по их 3'-концам до длины 200 пар оснований, которая является средней длиной геномного фрагмента в подобранной по размеру библиотеке, и разделяли на 32-нуклеотидные сегменты по всему геному. Полученные гистограммы (геномные "сигнальные карты") хранили в BAR и файлах big Wig. Позиции пиков определяли с применением алгоритма MACS (v1.4.2) с порогом p-значения = 1e-7. (MACS: Zhang et al. Model-based Analysis of ChIP-Seq (MACS). Genome Biol (2008) vol. 9 (9) pp. R137; BWA: Li H. и Durbin R. (2009) Fast и accurate short read alignment with Burrows-Wheeler Transform. Bioinformatics, 25: 1754-60. [PMID: 19451168])

Входящую ДНК применяли для устранения ложноположительных пиков. Сигнальные карты и позиции пиков применяли в качестве входных данных для проприетарной программы анализа Active Motifs, которая создает таблицы Excel, содержащие подробную информацию о сравнении образцов, параметрах пиков, позициях пиков и примечаниях относительно генов.

РЕЗУЛЬТАТЫ

[00506] Общегеномную локализацию Brd4 определяли посредством иммунопреципитации хроматина с последующим массовым параллельным секвенированием (ChIP-Seq) в линии клеток инсулиномы. Brd4 продемонстрировал связывание 18875 областей (порог p-значения 1e-7) по всему геному (таблица C). Среди них 13009 (68,9%) обнаружили в пределах +/- 10 тысяч пар оснований начала или конца гена, и 5035 (26,7%) связанных сайтов Brd4 находились в пределах промоторной области генов (500 пар оснований сайта инициации транскрипции).

[00507] С целью определения того, связывается ли Brd4 с энхансерными областями, посредством ChIP-Seq (таблица D) определяли общегеномную локализацию энхансерной метки (H3K27ac). Было выявлено 27756 областей, которые характеризовались H3K27ac (порог p-значения 1e-7). Большинство Brd4-связанных областей (88,8%) перекрывались с H3K27ac, указывая на то, что Brd4 связывает энхансеры в клетках инсулиномы.

[00508] Было показано, что экспрессия генов c-Myc, n-Myc, Cdk6 и Ins1 снижалась в линиях клеток инсулиномы крысы, если функционирование Brd4 ингибировалось с помощью ингибиторов бромодомена BET (пример 5). Результаты общегеномной локализации Brd4 и H3K27ac показали, что Brd4 связывает как энхансерную область, так и промоторную область онкогенов и генов инсулинового пути в клетках инсулиномы. На фиг. 14 показано, что связывание Brd4 происходит в промоторных и энхансерных областях (отмечается перекрывание с H3K27ac) генов c-Myc, n-Myc, Cdk6, Вс12, гена инсулина 1 (Ins1), Abcc8, Kcnj11, Gck и Igf2 (фиг. 14A и 14B). Взятые вместе данные результаты показывают, что Brd4 связывает промоторы и энхансеры онкогенов и генов инсулинового пути в клетках инсулиномы, и обеспечивают доказательства того, почему линии раковых клеток инсулиномы являются чувствительными к ингибиторам бромодомена BET.

[00509] Как показано на фиг. 14B, Brd4 связывает промоторные и энхансерные области генов Abcc8, Kcnj11, Gck и Igf2, которые связывали не только с инсулиномами, но также с другими врожденными гиперинсулинемическими нарушениями. Эти результаты указывают на то, что ингибиторы бромодомена BET могут иметь терапевтическое благоприятное воздействие на индивидуумов, страдающих от инсулином или врожденных гиперинсулинемических состояний, заключающееся в уменьшении продуцирования инсулина.

[00510] Суперэнхансеры являются особо крупными энхансерными областями, которые связаны коактиваторами, такими как Brd4. Суперэнхансеры обнаружены в онкогенах в ряде типов рака и в генах, которые важны для определения биологии клеточного типа. Гены, которые являются наиболее чувствительными к ингибированию бромодомена BET, как правило, регулируются суперэнхансерами. Идентификация суперэнхансеров позволяет предопределять гены, которые будут наиболее чувствительными к обработке ингибитором бромодомена BET. С целью идентификации потенциальных суперэнхансеров в инсулиноме все связанные области Brd4 распределяли по общему количеству фрагментов (фиг. 15). Небольшой процент (верхние 4%) Brd4-связанных областей содержит большую часть фрагментов Brd4 (21%). Эти области, вероятно, представляют собой суперэнхансеры. Некоторые из данных областей изображены рядом с онкогенами (c-Myc, Pax6 и Sp1) и генами, которые важны для инсулинового пути (Ins1, Abcc8, Kcnj11, Gck и Irs2). Эти результаты предполагают, что Brd4 регулирует онкогены и ключевые гены инсулинового пути, и что эти гены должны быть наиболее чувствительны к ингибированию бромодомена BET.

[00511] Общегеномная локализация Brd4 и H3K27ac показывает, что Brd4 связывает как энхансерную так и промоторную области в инсулиноме. Brd4 обнаруживали в промоторах, энхансерах и потенциальных суперэнхансерах как онкогенов, так и генов инсулинового пути, обеспечивая логическое обоснование для применения ингибиторов бромодомена BET для снижения уровней экспрессии этих генов как у пациентов с инсулиномой, так и пациентов с CHI.

Пример 8. Клеточный анализ инсулиномы крысы, дополнительные данные

[00512] Анализ Cell Titer-Glo применяли для испытания чувствительности четырех линий клеток инсулиномы крысы (RIN), RIN-14B, RIN-m5F, RIN-m и RIN-5, к соединениям (S)-JQ1 и (S)-JQ35.

[00513] Клетки высевали при концентрации 5000 клеток на лунку в 96-луночный планшет для микрокультуры в общем объеме 100 мкл/лунка и инкубировали в течение 24 часов. В каждую лунку добавляли 100 мкл 2Х испытуемых соединений ((S)-JQ1 или (S)-JQ35), последовательно разбавленных 1:4. Испытуемые концентрации для (S)-JQ1 и (S)-JQ35 составляли 20 мкМ, 5 мкМ, 1,25 мкМ, 0,313 мкМ, 0,0781 мкМ, 0,0195 мкМ, 0,00488 мкМ, 0,00122 мкМ, 0,000305 мкМ и 0,0000763 мкМ. В общей сложности через 168-192 часа культивирования 100 мкл среды удаляли из каждой лунки и в каждую лунку добавляли 50 мкл Cell Titer-Glo (Promega №G7571). Планшет встряхивали в течение 2 минут и обеспечивали уравновешивание в течение 10 минут. Люминесценцию измеряли на считывающем устройстве для микропланшетов GENios от Tecan. Процент ингибирования жизнеспособности клеток рассчитывали относительно необработанных контрольных лунок. Все испытания осуществляли в трех повторностях или в четырех повторностях при каждом уровне концентрации. Значения IC50 рассчитывали с применением программы подбора кривой Prism 6.00 с помощью логистического уравнения с четырьмя параметрами.

РЕЗУЛЬТАТЫ

[00514] Все линии клеток были чувствительными к (S)-JQ1 со значениями IC50 до 100 нМ и к (S)-JQ35 до 200 нМ. Более высокие концентрации (S)-JQ1 и (S)-JQ35 снижали жизнеспособность клеток практически до 0%, указывая на то, что как (S)-JQ1, так и (S)-JQ35 обладают цитотоксическим эффектом. Данные результаты показали, что ингибиторы бромодомена BET являются высоко эффективными в снижении жизнеспособности линий клеток инсулиномы.

[00515] Пример 9. Анализ экспрессии обработанных JQ1 клеток инсулиномы RIN-m5F

[00516] Анализ экспрессии генов проводили в отношении линии клеток инсулиномы RIN-m5F после обработки с помощью JQ1. Как показано ниже, ингибирование BET нарушает как транскрипционный профиль онкогенных клеток, так и транскрипционный профиль клеток панкреатических островков.

[00517] Клетки инсулиномы крысы RIN-m5F обрабатывали посредством JQ1 (500 нМ) или DMSO (контроль) в течение 24 часов. Клетки подвергали очистке и общую РНК выделяли и очищали с применением мини-набора RNeasy от Qiagen (кат. 74104), как описано в протоколе изготовителя. Остаточную ДНК удаляли посредством обработки ДНКазой I. Конечный выход РНК составлял 123 мкг и 136 мкг соответственно для обработанных DMSO и JQ1 клеток. Для каждого образца 4 мкг общей РНК затем применяли в наборе V2 для получения образцов TruSeq RNA от Illumina. Концентрации конечных препаратов библиотек составляли соответственно 71 нг/мкл и 79 нг/мкл для образцов DMSO и JQ1. Библиотеки секвенировали с помощью NextSeq 500 от Illumina в виде 75-нуклеотидных фрагментов со спаренными концами.

[00518] Секвенированные фрагменты анализировали с помощью программного конвейера TopHat - Cufflinks. Средний размер молекул библиотек составлял 400 пар оснований, следовательно, параметр - r устанавливали на уровне 125. (Версии были следующими: TopHat v2.0.9, Bowtie 2.1.0.0, Cufflinks v2.1.1.). Справочный файл GTF для гена крысы (rn5) был получен с помощью iGenomes от Illumina.

[00519] РЕЗУЛЬТАТЫ

[00520] Для подтверждения набора данных RNA-Seq проверяли изменения в экспрессии двух известных контрольных генов, c-Myc и гексаметилен-бис-ацетамид индуцибельного гена 1 (Heximl) (фигура 16). В соответствии с различными доклиническими моделями рака в результате ингибирования BET наблюдалось примерно 2-кратное снижение уровней c-Myc. Аналогично наблюдалось примерно 5-кратное повышение уровней Heximl в соответствии с предварительными исследованиями, таким образом, подтверждая набор данных RNA-Seq.

[00521] Обработка с помощью JQ1 приводила в результате к большому количеству генов со сниженной экспрессией по сравнению с повышенной экспрессией (таблица Е).

[00522] Исследование отдельных генов продемонстрировало, что онкогены в дополнение к c-Myc, такие как ген белка клеточного цикла 20 (cdc20), также подверглись негативной регуляции (фигура 16 и таблица F). Экспрессия генов, важных для функционирования клеток панкреатических островков, также снижалась, как например, NK2 гомеобокс 2 (Nkx2-2), гена островкового амилоидного полипептида (Iapp) и члена 4 семейства сайта интеграции MMTV типа Wingless (Wnt4) (фигура 16 и таблица F).

[00523] Идеи всех патентов, опубликованных заявок и ссылок, перечисленных в данном документе, включены посредством ссылки во всей своей полноте.

[00524] В то время как настоящее изобретение было подробно показано и описано со ссылками на иллюстративные варианты его осуществления, специалистам в данной области техники должно быть понятно, что различные изменения в форме и деталях могут быть сделаны в нем без отступления от объема изобретения, охваченного прилагаемой формулой изобретения.


ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
ЛЕЧЕНИЕ СОСТОЯНИЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ГИПЕРИНСУЛИНЕМИЕЙ
Источник поступления информации: Роспатент
+ добавить свой РИД