ЛЕЧЕНИЕ ЖИРОВОЙ БОЛЕЗНИ ПЕЧЕНИ С ПРИМЕНЕНИЕМ АНТАГОНИСТОВ ГЛЮКОКОРТИКОИДНЫХ И МИНЕРАЛОКОРТИКОИДНЫХ РЕЦЕПТОРОВ

ПЕРЕКРЕСТНЫЕ ССЫЛКИ НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[0001] В настоящей заявке испрашивается приоритет на основании предварительной заявки на патент США №62/090041, поданной 15 декабря 2014 года, и предварительной заявки на патент США №62/064358, поданной 15 октября 2014 года. Содержание вышеупомянутых предварительных заявок полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0002] Нарушения печени можно классифицировать по разным группам заболеваний, таким как индуцированная алкоголем жировая болезнь печени (AFLD), неалкогольная жировая болезнь печени (NAFLD), связанные с лекарствами или алкоголем заболевания печени, вирусные заболевания, иммуноопосредованные заболевания печени, метаболические заболевания печени и осложнения, связанные с печеночной недостаточностью и/или трансплантацией печени. Неалкогольная жировая болезнь печени представляет собой распространенное нарушение печени с гистологическими особенностями, сходными с особенностями при индуцированной алкоголем жировой болезни печени, у индивидуумов, которые употребляют мало или вообще не употребляют алкоголь. Жировая болезнь печени связана с аномальным удержанием липидов (жиров) в гепатоцитах.

[0003] Продолжает наблюдаться нехватка эффективных средств для лечения AFLD и NAFLD. На сегодняшний день таким пациентам не назначают терапевтическое лечение лекарственными средствами. Существует потребность в новых терапевтических возможностях для регулирования жировой болезни печени.

[0004] У большинства видов, включая человека, физиологический глюкокортикоид представляет собой кортизол (гидрокортизон). Глюкокортикоиды секретируются в ответ на АКТГ (кортикотропин), который демонстрирует одновременно изменение и повышения уровней в период циркадианного ритма в ответ на стресс и пищу. Уровни кортизола в течение нескольких минут быстро реагируют на многие физические и психологические стрессы, включая травму, хирургию, физические упражнения, беспокойство и депрессию. Кортизол является стероидом и действует посредством связывания с внутриклеточным глюкокортикоидным рецептором (GR). У человека глюкокортикоидные рецепторы присутствуют в двух формах: лигандсвязывающего GR-альфа 777 аминокислот и изоформе GR-бета, у которой отсутствует 50 карбоксильных концевых остатков. Поскольку эти остатки содержат лигандсвязывающий домен, GR-бета не может связывать естественный лиганд, и он конститутивно локалирозан в ядре. GR также известен как GR II.

[0005] Кортизол и другие глюкокортикоиды также могут воздействовать на минералокортикоидный рецептор (MR), в этом случае они упоминаются как антагонисты минералокортикоидов или минералокортикоидных рецепторов (MRA). Минералокортикоидный рецептор в основном регулирует концентрацию соли в организме. MR может по существу обладать одинаковой аффиностью по отношению к минералокортикоидам и глюкокортикоидам.

[0006] Биологические эффекты кортизола, в том числе те, которые вызваны гиперкортизолемией, можно модулировать на уровне GR с применением модуляторов рецепторов, таких как агонисты, частичные агонисты и антагонисты. Несколько различных классов агентов способны блокировать физиологические эффекты связывания GR-агонистов. Эти антагонисты включают композиции, которые посредством связывания с GR блокируют способность агониста эффективно связывать и/или активировать GR. Было обнаружено, что один из таких известных GR-антагонистов, мифепристон, является эффективным антиглюкокортикоидным агентом у людей (Bertagna (1984) J. Clin. Endocrinol. Metab. 59: 25). Мифепристон с высокой аффиностью связывается с GR со значением константы диссоциации (K_d) 10^-9 M (Cadepond (1997) Annu. Rev. Med. 48: 129).

[0007] В дополнение к кортизолу биологические эффекты других стероидов можно модулировать на уровне GR с применением модуляторов рецепторов, таких как агонисты, частичные агонисты и антагонисты. При введении субъектам, нуждающимся в этом, стероиды могут обеспечивать как предполагаемые терапевтические эффекты, например, путем стимуляции трансрепрессии глюкокортикоидного рецептора, так и негативных побочных эффектов, например, путем трансактивации хронического глюкокортикоидного рецептора.

[0008] В данной области техники необходимы новые композиции и способы модуляции GR-рецепторов для лечения жировой болезни печени. Неожиданным образом настоящее изобретение отвечает этим и другим потребностям.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0009] В одном варианте реализации настоящего изобретения предложен способ лечения жировой болезни печени. Способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения Формулы I, тем самым осуществляется лечение жировой болезни печени, при этом соединение Формулы I имеет структуру:

.

В указанном соединении Формулы I пунктирная линия отсутствует или представляет собой связь. X представляет собой О или S. R¹ представляет собой циклоалкил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил, необязательно замещенный одной-тремя R^1a группами. Каждый R^1a независимо представляет собой Н, C_1-6 алкил, C_2-6 алкенил, C_2-6 алкинил, C_1-6 алкокси, C_1-6 алкил-OR^1b, галоген, C_1-6 галогеналкил, C_1-6 галогеналокси, -OR^1b, -NR^1bR^1c, -C(O)R^1b, -C(O)OR^1b, -OC(O)R^1b, -C(O)NR^1bR^1c, -NR^1bC(O)R^1c, -SO₂R^1b, -SO₂NR^1bR^1c, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил. R^1b и R^1c каждый представляет собой Н или C_1-6 алкил. R² представляет собой Н, C_1-6 алкил, C_1-6 алкил-OR^1b, С_1-6 алкил-NR^1bR^1c или C_1-6 алкиленгетероциклоалкил. R³ представляет собой Н или C_1-6 алкил. Ar представляет собой арил, необязательно замещенный одной-четырьмя R⁴ группами. Каждый R⁴ представляет собой Н, C_1-6 алкил, C_1-6 алкокси, галоген, C_1-6 галогеналкил или C_1-6 галогеналкокси. L¹ представляет собой связь или C_1-6 алкилен. Подстрочный индекс n представляет собой целое число от 0 до 3. Также включены соли и изомеры приведенных в настоящем документе соединений.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[0010] На Фигуре 1 представлен процент жиров (липидных капелек) в окрашенной при помощи Oil Red О печени мышей, которые получали питание с высоким содержанием жиров и Соединение I (60 мг/кг/день), относительно контрольных мышей, которые получали питание с высоким содержанием жиров и среду-носитель.

[0011] На Фигурах 2А и 2В представлено окрашивание при помощи Oil Red О липидных капелек из печени мыши, которая получала питание с высоким содержанием жиров («HF») и Соединение 1 (Фигура 2А), и контрольной мыши, которая получала питание с высоким содержанием жиров и среду-носитель (Фигура 2В).

[0012] На Фигуре 3 представлен процент жиров (липидных капелек) в окрашенной при помощи Oil Red О печени мышей, которые получали питание с высоким содержанием жиров и либо мифепристон, либо Соединение 1 (60 мг/кг/день), относительно контрольных мышей, которые получали питание с высоким содержанием жиром и среду-носитель. * р<0,05 «Соединение 1» по сравнению с «CTRL».

[0013] На Фигуре 4 представлены уровни триглицеридов в печени мышей, получавших нормальное питание (группа «CHOW»), мышей, получавших питание с высоким содержанием жиров в течение 3 недель (группа «HF-3wks»), мышей, получавших питание с высоким содержанием жиров в течение 6 недель (группа «HF-6wks»), мышей, получавших питание с высоким содержанием жиров и Соединение 1 в течение 6 недель (группа «HF + 118335-6wks»), и мышей, получавших питание с высоким содержанием жиров в течение 6 недель с введением Соединения 1 только в последние 3 недели (группа «HF-118335 rev»). ** р<0,01 по сравнению с «CHOW»; # р<0,05 по сравнению с «HF-6wks»; ## р<0,01 по сравнению с «HF-6wks».

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

I. Общие положения

[0014] В настоящем изобретении предложены соединения и способы лечения жировой болезни печени посредством введения соединения согласно настоящему изобретению пациенту, страдающему от жировой болезни печени. Не ограничиваясь какой-либо теорией, вопреки общепринятому пониманию в данной области техники, что указанные соединения согласно настоящему изобретению специфически связываются с глюкокортикоидным рецептором, в настоящем изобретении лечение жировой болезни печени осуществляется посредством связывания как с глюкортикоидным, так и с минералокортикоидным рецептором, нежели чем специфического связывания с глюкокортикоидным рецептором по сравнению с другими ядерными рецепторами, такими как минералокортикоидный рецептор и прогестероновый рецептор.

II. Определения

[0015] Применяемые в настоящем документе аббревиатуры имеют общепринятое значение в области химии и биологии.

[0016] Если группы заместителей обозначены посредством общепринятых химических формул, написанных слева направо, они в равной степени охватывают химически идентичные заместители, которые могут возникнуть в результате записи структуры справа налево, например, -CH₂O- эквивалентен -OCH₂-.

[0017] «Алкил» относится к неразветвленному или разветвленному насыщенному алифатическому радикалу, содержащему указанное число атомов углерода. Например, C₁-С₆ алкил включает, но не ограничивается ими, метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил, изопропил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил и т.д.

[0018] «Алкилен» относится либо к неразветвленному, либо к разветвленному алкилену с 1-7 атомами углерода, т.е., к двухвалентному углеводородному радикалу с 1-7 атомами углерода; например, алкилену с неразветвленной цепью, являющемуся двухвалентным радикалом согласно Формуле -(CH₂)_n-, где n представляет собой 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7. Предпочтительно алкилен представляет собой алкилен с неразветвленной цепью, содержащей от 1 до 4 атомов углерода, например, метиленовой, этиленовой, пропиленовой или бутиленовой цепью, или метиленовой, этиленовой, пропиленовой или бутиленовой цепью, монозамещенной С₁-С₃ алкилом (предпочтительно метилом) или двузамещенной у одного и того же или разных атомов углерода C₁-С₃ алкилом (предпочтительно метилом), с общим количеством атомов углерода, составляющим не более и включительно 7. Специалисту в данной области техники будет понятно, что один углерод алкилена может быть двухвалентным, как, например, в -СН((CH₂)_nCH₃)-, при этом n=0-5.

[0019] «Алкенил» относится к углеводороду с либо неразветвленной, либо с разветвленной цепью с 2-6 атомами углерода, содержащей по меньшей мере одну двойную связь. Примеры алкенильных групп включают, но не ограничиваются ими, винил, пропенил, изопропенил, 1-бутенил, 2-бутенил, изобутенил, бутадиенил, 1-пентенил, 2-пентенил, изопентенил, 1,3-пентадиенил, 1,4-пентадиенил, 1-гексенил, 2-гексенил, 3-гексенил, 1,3-гексадиенил, 1,4-гексадиенил, 1,5-гексадиенил, 2,4-гексадиенил или 1,3,5-гексатриенил. Алкенильные группы также могут содержать от 2 до 3, от 2 до 4, от 2 до 5, от 3 до 4, от 3 до 5, от 3 до 6, от 4 до 5, от 4 до 6 и от 5 до 6 атомов углерода. Алкенильные группы обычно одновалентны, однако могут быть двухвалентными, например, когда алкенильная группа связывает вместе два фрагмента.

[0020] «Алкинил» относится к углеводороду либо с неразветвленной, либо с разветвленной цепью с 2-6 атомами углерода, содержащей по меньшей мере одну тройную связь. Примеры алкинильных групп включают, но не ограничиваются ими, ацетиленил, пропинил, 1-бутинил, 2-бутинил, изобутинил, втор-бутинил, бутадинил, 1-пентинил, 2-пентинил, изопентинил, 1,3-пентадинил, 1,4-пентадинил, 1-гексинил, 2-гексинил, 3-гексинил, 1,3-гексадинил, 1,4-гексадинил, 1,5-гексадинил, 2,4-гексадинил или 1,3,5-гексатринил. Алкинильные группы также могут содержать от 2 до 3, от 2 до 4, от 2 до 5, от 3 до 4, от 3 до 5, от 3 до 6, от 4 до 5, от 4 до 6 и от 5 до 6 атомов углерода. Алкинильные группы обычно одновалентны, однако могут быть двухвалентными, например, когда алкинильная группа связывает вместе два фрагмента.

[0021] «Алкокси» относится к описанному выше алкильному радикалу, который также содержит кислородный заместитель, способный ковалентно присоединяться к другому углеводороду, например, метокси, этокси или трет-бутоксигруппе.

[0022] «Галоген» сам по себе или как часть другого заместителя обозначает, если не указано иное, атом фтора, хлора, брома или йода.

[0023] «Галогеналкил» относится к определенному выше алкилу, у которого некоторые или все атомы водорода замещены атомами галогена. Галоген (halo) предпочтительно представляет собой хлор или фтор, однако также может представлять собой бром или йод. Например, галогеналкил включает трифторметил, фторметил, 1,2,3,4,5-пентафторфенил и т.д. Термин «перфтор» определяет соединение или радикал, которое содержит по меньшей мере два доступных водорода, замещенных фтором. Например, перфторметан относится к 1,1,1-трифторметилу.

[0024] «Галогеналкокси» относится к определенному выше алкокси, у которого некоторые или все атомы водорода замещены атомами галогена. Подразумевается, что «галогеналкокси» включает моногалогеналкил(окси) и полигалогеналкил(окси).

[0025] «Алкиламин» относится к определенным выше алкильным группам, содержащим одну или более аминогрупп. Аминогруппы могут быть первичными, вторичными или третичными. Алкиламин может быть также замещен гидроксильной группой. Алкиламины, подходящие для применения в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются ими, этиламин, пропиламин, изопропиламин, этилендиамин и этаноламин. Аминогруппа может связывать алкиламин через точку присоединения с остальной частью соединения, находиться в омега-положении алкильной группы или вместе связывать по меньшей мере два атома углерода алкильной группы. Специалисту в данной области техники будет понятно, что другие алкиламины являются подходящими для применения в настоящем изобретении.

[0026] «Циклоалкил» относится к насыщенному или частично ненасыщенному, моноциклическому, конденсированному бициклическому или соединенному мостиковой связью полициклическому ансамблю колец, содержащему от 3 до 12 кольцевых атомов или указанное число атомов. Например, C₃-C₈ циклоалкил включает циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и циклооктил. Циклоалкил также включает норборнил и адамантил.

[0027] «Гетероциклоалкил» относится к кольцевой системе, содержащей от 3 кольцевых членов до приблизительно 20 кольцевых членов и от 1 до приблизительно 5 гетероатомов, таких как N, О и S. Дополнительные гетероатомы могут быть также подходящими, включая, но не ограничиваясь ими, В, Al, Si и Р. Гетероатомы могут быть также окисленными, такие как, но не ограничиваясь ими, -S(O)- и -S(O)₂-. Например, гетероцикл включает, но не ограничивается ими, тетрагидрофуранил, тетрагидротиофенил, морфолино, пирролидинил, пирролинил, имидазолидинил, имидазолинил, пиразолидинил, пиразолинил, пиперазинил, пиперидинил, индолинил, хинуклидинил и 1,4-диокса-8-азаспиро[4,5]дец-8-ил.

[0028] «Алкиленгетероциклоалкил» относится к определенной выше гетероциклоалкильной группе, которая связана с другой группой посредством алкилена. Гетероциклоалкил и группа, с которой гетероциклоалкил связан посредством алкилена, могут быть связаны с одним и тем же атомом или с другим атомом алкилена.

[0029] До тех пор, пока не указано иное, «арил» означает полиненасыщенный ароматический углеводородный заместитель, который может представлять собой одно кольцо или множество колец (предпочтительно от 1 до 3 колец), которые конденсированы или ковалентно связаны. Примеры включают, но не ограничиваются ими, фенил, бифенил, нафтил и бензил.

[0030] «Гетероарил» относится к арильным группам (или кольцам), которые содержат от одного до четырех гетероатомов, выбранных из N, О и S, при этом атомы азота и серы необязательно окислены, а атом(-ы) азота необязательно кватернизированы. Гетероарильную группу можно присоединить к остальной части молекулы через углерод или гетероатом. Неограничивающие примеры арильных и гетероарильных групп включают фенил, 1-нафтил, 2-нафтил, 4-бифенил, 1-пирролил, 2-пирролил, 3-пирролил, 3-пиразолил, 2-имидазолил, 4-имидазолил, пиразинил, 2-оксазолил, 4-оксазолил, 2-фенил-4-оксазолил, 5-оксазолил, 3-изоксазолил, 4-изоксазолил, 5-изоксазолил, 2-тиазолил, 4-тиазолил, 5-тиазолил, 2-фурил, 3-фурил, 2-тиенил, 3-тиенил, 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил, 2-пиримидил, 4-пиримидил, 5-бензотиазолил, пуринил, 2-бензимидазолил, 5-индолил, 1-изохинолил, 5-изохинолил, 2-хиноксалинил, 5-хиноксалинил, 3-хинолил и 6-хинолил. Заместители для каждой из вышеуказанных арильных и гетероарильных кольцевых систем выбраны из группы приемлемых заместителей, описанных ниже.

[0031] Для краткости термин «арил» при использовании в сочетании с другими терминами (например, арилокси, арилтиокси, арилалкил) включает как арильные, так и гетероарильные кольца, определенные выше. Таким образом, подразумевается, что термин «арилалкил» включает те радикалы, в которых арильная группа присоединена к алкильной группе (например, бензил, фенетил, пиридилметил и им подобные), включая те алкильные группы, в которых атом углерода (например, метиленовая группа) заменена, например, атомом кислорода (например, феноксиметил, 2-пиридилоксиметил, 3-(1-нафтилокси)пропил и им подобные). Аналогичным образом подразумевается, что термин «гетероарилалкил» включает те радикалы, в которых гетероарильная группа присоединена к алкильной группе.

[0032] Подразумевается, что каждый из вышеуказанных терминов (например, «алкил», «арил» и «гетероарил») включает как замещенные, так и незамещенные формы указанного радикала. Примеры заместителей для каждого типа радикала приведены ниже.

[0033] Заместители для алкильных и гетероалкильных радикалов (включая те группы, которые часто обозначают как алкилен, алкенил, гетероалкилен, гетероалкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, циклоалкенил и гетероциклоалкенил) могут представлять собой одну или более из множества групп, выбранных из, но не ограниченных ими: -OR', =O, =NR', =N-OR', -NR'R'', -SR', -галоген, -SiR'R''R''', -OC(O)R', -C(O)R', -CO₂R', -CONR'R'', -OC(O)NR'R'', -NR''C(O)R', -NR'-C(O)NR''R''', -NR''C(O)₂R', -NR-C(NR'R''R''')=NR'''', -NR-C(NR'R'')=NR''', -S(O)R', -S(O)₂R, -S(O)₂NR'R'', -NR(SO₂)R', -CN и -NO₂ в количестве от нуля до (2m'+1), где m' представляет собой общее число атомов углерода в таком радикале. R', R'', R''' и R'''' каждый предпочтительным образом независимо друг от друга обозначает водород, замещенные или незамещенные гетероалкильные, замещенные или незамещенные циклоалкильные, замещенные или незамещенные гетероциклоалкильные, замещенные или незамещенные арильные (например, арил, замещенный 1-3 галогенами), замещенные или незамещенные алкильные, алкокси или тиоалкоксигруппы или арилалкильные группы. Когда соединение согласно настоящему изобретению включает более, чем одну R-группы, например, независимым образом выбирают каждую из R-групп, также как и каждую R'-, R''-, R'''- и R''''-группу, когда представлена более, чем одна из указанных групп. Когда R' и R'' присоединены к одному и тому же атому азота, их можно объединить с атомом азота с образованием 4-, 5-, 6- или 7-членного кольца. Например, подразумевается, что -NR'R'' включает, но не ограничивается ими, 1-пирролидинил и 4-морфолинил. Из приведенного выше обсуждения заместителей специалисту в данной области техники будет понятно, что термин «алкил» будет включать группы, содержащие атомы углерода, связанные с группами, отличными от водородных групп, такие как галогеналкил (например, -CF₃ и -CH₂CF₃) и ацил (например, -С(O)СН₃, -C(O)CF₃, -С(O)CH₂OCH₃ и им подобные).

[0034] Аналогично заместителям, описанным для алкильного радикала, заместители для арильных и гетероарильных групп варьируются, и они выбраны, например, из: галогена, -OR', -NR'R'', -SR', -галогена, -SiR'R''R''', -OC(O)R', -C(O)R', -CO₂R', -CONR'R'', -OC(O)NR'R'', -NR''C(O)R', -NR'-C(O)NR''R''', -NR''C(O)₂R', -NR-C(NR'R''R''')=NR'''', -NR-C(NR'R'')=NR''', -S(O)R', -S(O)₂R', -S(O)₂NR'R'', -NR(SO₂)R', -CN и -NO₂, -R', -N₃, -CH(Ph)₂, фтор(C₁-C₄)алкокси и фтор(C₁-C₄)алкила в количестве от нуля до общего числа открытых валентностей в системе ароматических колец, и где R', R'', R''' и R'''' предпочтительным образом независимо выбраны из водорода, замещенного или незамещенного алкила, замещенного или незамещенного гетероалкила, замещенного или незамещенного циклоалкила, замещенного или незамещенного гетероциклоалкила, замещенного или незамещенного арила и замещенного или незамещенного гетероарила. Когда соединение согласно настоящему изобретению включает более, чем одну R-группу, например, независимым образом выбирают каждую из R-групп, также как и каждую R'-, R''-, R'''- и R''''-группу, когда представлена более, чем одна из указанных групп.

[0035] Когда два заместителя «необязательно соединены вместе с образованием кольца», два заместителя ковалентно связаны вместе с атомом или атомами, к которым присоединены два заместителя с образованием замещенного или незамещенного арильного, замещенного или незамещенного гетероарильного, замещенного или незамещенного циклоалкильного или замещенного или незамещенного гетероциклоалкильного кольца.

[0036] «Соль» относится к солям кислот или оснований соединений, применяемых в способах согласно настоящему изобретению. Иллюстративными примерами фармацевтически приемлемых солей являются соли минеральных кислот (соляная кислота, бромистоводородная кислота, фосфорная кислота и им подобные), соли органических кислот (уксусная кислота, пропионовая кислота, глутаминовая кислота, лимонная кислота и им подобные), соли четвертичного аммония (метилиодид, этилиодид и им подобные). Понятно то, что фармацевтически приемлемые соли являются нетоксичными. Дополнительную информацию о подходящих фармацевтически приемлемых солях можно найти в Remington's Pharmaceutical Sciences, 17^th ed., издательство Mack Publishing, Истон, Пенсильвания, 1985, которое включено в настоящий документ посредством ссылки.

[0037] «Гидрат» относится к соединению, которое находится к комплексе с по меньшей мере с одной молекулой воды. Указанные соединения согласно настоящему изобретению могут находиться в комплексе с 1-10 молекулами воды.

[0038] «Изомеры» относятся к соединениям с одной и той же химической формулой, но которые различаются по структуре.

[0039] «Таутомер» относится к одному из двух или более структурных изомеров, которые существуют в равновесии и которые легко преобразуются из одной формы в другую.

[0040] «Фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество» и «фармацевтически приемлемый носитель» относятся к веществу, которое способствует введению активного агента и абсорбции субъектом и которые можно включать в композиции согласно настоящему изобретению, не вызывая значимого неблагоприятного токсикологического эффекта у указанного пациента. Неограничивающие примеры фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ включают воду, NaCl, нормальные физиологические растворы, Рингера лактат, нормальную сахарозу, нормальную глюкозу, связующие вещества, наполнители, разрыхлители, лубриканты, вещества для покрытия, подсластители, ароматизаторы и красители и им подобные. Специалисту в данной области техники будет понятно, что другие фармацевтические вспомогательные вещества являются подходящими для применения в настоящем изобретении.

[0041] «Лечить», «лечение» (treating) и «лечение» (treatment) относятся к любым признакам эффективности при лечении или уменьшении интенсивности травмы, патологии или состояния, включая любые объективные или субъективные параметры, такие как ослабление боли или выраженности симптомов; ремиссия; ослабление симптомов или когда травма, патология или состояние становится более переносимым для пациента; показатель скорости дегенерации или ухудшения состояния здоровья; когда конечная точка дегенерации становится менее изнуряющей; улучшение физического или психического самочувствия пациента. Лечение или уменьшение интенсивности симптомов могут быть основаны на объективных или субъективных параметрах, включая результаты физического обследования, нейропсихиатрических обследований и/или психиатрической оценки.

[0042] «Ядерные рецепторы» относятся к классу белков, ответственных за распознавание и ответ на стероидные и тиреоидные гормоны, а также синтетические гормоны и соединения. Существует ряд подсемейств, включая подобные рецептору тиреоидного гормона, ретиноидному Х-рецептору, эстрогеновому рецептору и фактору роста нервов IB среди прочих. Подсемейство подобных эстрогеновому рецептору включает семейства эстрогенового рецептора, связанного с эстрогеном рецептора и 3-кетостероидные рецепторы. Семейство 3-кетостероидных рецепторов включает множество рецепторов, таких как, но не ограничиваясь ими, глюкокортикоидный рецептор (GR), минералокортикоидный рецептор (MR), эстрогеновый рецептор (ER), прогестероновый рецептор (PR) и андрогенный рецептор (АР).

[0043] «Глюкокортикоидный рецептор» («GR») относится к семейству внутриклеточных рецепторов, которые специфическим образом связываются с кортизолом и/или аналогами кортизола. Глюкокортикоидный рецептор также упоминается как рецептор кортизола. Термин включает изоформы GR, рекомбинантный GR и мутированный GR. «Глюкокортикоидный рецептор» («GR») относится к GR II типа, который специфическим образом связывается с кортизолом и/или аналогами кортизола, такими как дексаметазон (см., например, Turner & Muller, J. Mol. Endocrinol. 1 октября 2005 г., 35, 283-292). Константы ингибирования (K_i) для указанных соединений согласно настоящему изобретению в отношении ядерных рецепторов человека составляют от 0,0001 нМ до 1000 нМ, предпочтительно от 0,0005 нМ до 10 нМ и наиболее предпочтительно от 0,001 нМ до 1 нМ.

[0044] «Модуляция ядерного рецептора» относится к способам корректировки ответа глюкокортикоидного рецептора по отношению к глюкокортикоидам, антагонистам, агонистам и частичным агонистам глюкокортикоидов, а также минералокортикоидного рецептора по отношению к минералокортикоидам, антагонистам, агонистам и частичным агонистам MR. Способы включают взаимодействие GR и MR с эффективным количеством либо антагониста, агониста, либо частичного агониста, и обнаружения изменения активности GR или активности GR и MR.

[0045] «Модулятор ядерного рецептора» относится к любой композиции или соединению, которая модулирует связывание агониста глюкокортикоидного рецептора (GR), такого как кортизол или аналог кортизола, синтетический или природный, с GR, а также модулирует связывание агониста MR, такого как альдостерон или его аналогов, с MR. Модуляция может включать частичное или полное ингибирование (антагонизм) связывания агониста GR с GR и/или агониста MR с MR.

[0046] «Антагонизм» относится к блокированию связывания агониста на молекуле рецептора или к ингибированию сигнала, образуемого агонистом рецептора. Антагонист рецептора блокирует или ослабляет опосредованные агонистами ответы.

[0047] «Антагонист глюкокортикоидного рецептора» относится к любой композиции или соединению, которое частично или полностью ингибирует (антагонизирует) связывание агониста глюкокортикоидного рецептора (GR), такого как кортизол или аналог кортизола, синтетический или естественный, с GR

[0048] «Специфичный антагонист глюкокортикоидного рецептора» или «специфичный антагонист минералокортикоидного рецептора» относится к любой композиции или соединению, которое ингибирует любой биологический ответ, связанный со связыванием GR и/или MR с агонистом. Под «специфичным» авторы настоящего изобретения подразумевают, что лекарственное средство преимущественно связывается с GR и/или MR, нежели чем с другими ядерными рецепторами, такими как эстрогеновый рецептор (ER), прогестероновый рецептор (PR) или андрогенный рецептор (AR).

[0049] «Минералокортикоидный рецептор» относится к семейству внутриклеточных рецепторов, которые связываются с минералокортикоидами, такими как альдостерон, и глюкокортикоидами, такими как кортизол, с по существу равной аффиностью. Минералокортикоидный рецептор (MR) также упоминается как рецептор альдостерона или ядерный рецептор подсемейства 3, группы С, член 2 (NR3C2). MR относится к семейству цитозольных рецепторов. Активация MR осуществляется посредством минералокортикоидов, таких как альдостерон и его предшественник дезоксикортикостерон, а также глюкокортикоидов, таких как кортизол.

[0050] «Антагонист минералокортикоидного рецептора» относится к любой композиции или соединению, которое частично или полностью ингибирует (антагонизирует) связывание агониста минералокортикоидного рецептора (MR), такого как альдостерон или аналоги альдостерона, синтетических или природных, с MR.

[0051] «Пациент» или «субъект» относится к живому организму, страдающему или подверженному состоянию, которое можно лечить путем введения фармацевтической композиции, предложенной в настоящем документе. Неограничивающие примеры включают людей, других млекопитающих и других животных, не являющихся млекопитающими.

[0052] «Терапевтически эффективное количество» относится к количеству конъюгированного функционального агента или фармацевтической композиции, подходящей для лечения или уменьшения эффективности идентифицированного заболевания или состояния, или для проявления обнаруживаемого терапевтического или ингибирующего эффекта. Указанный эффект можно обнаружить при помощи любого метода анализа, известного в данной области техники.

[0053] Термины «формы единственного числа», когда их используют в отношении группы заместителей или «группа заместителей» в настоящем документе, означают по меньшей мере один. Например, когда соединение замещено алкилом или арилом, соединение необязательно замещено по меньшей мере одним алкилом и/или по меньшей мере одним арилом, при этом каждый алкил и/или арил необязательно различны. В другом примере, когда соединение замещено группой заместителей, указанное соединение замещено по меньшей мере одной группой заместителей, при этом каждая группа заместителей необязательно различна.

[0054] «Жировая болезнь печени» относится к заболеванию или патологическому состоянию, вызванному, по меньшей мере частично, аномальными отложениями липидов в печени. Жировая болезнь печени включает, например, алкогольную жировую болезнь печени, неалкогольную жировую болезнь печени и острую жировую дистрофию печень при беременности. Жировая болезнь печени может представлять собой, например, макровезикулярный стеатоз или микровезикулярный стеатоз.

[0055] «Связанное с алкоголем заболевание печени» или «ARLD» относится к заболеваниям печени, которые полностью или частично вызваны или обусловлены чрезмерным потреблением алкоголя. Существует четыре основных типа ARLD, алкогольная жировая дистрофия печени (AFL, подтип жировой болезни печени), алкогольный стеатогепатит (ASH), индуцированный алкоголем цирроз и алкогольный гепатоцеллюлярный рак. В контексте настоящего описания термин «чрезмерное потребление алкоголя» обычно относится к потреблению более, чем приблизительно 15-30 г этанола в день.

[0056] Физиологические эффекты потребления алкоголя на функцию или заболевание печени зависят от множества генетических и негенетических факторов, которые изменяют как индивидуальную восприимчивость, так и клиническое течение ARLD. Таким образом, у определенных пациентов ARLD может развиваться при гораздо более низких показателях потребления алкоголя, включая потребление по меньшей мере приблизительно 12 г/день, 15 г/день, 20 г/день, 25 г/день и более. Более того, понятно то, что у некоторых пациентов оценки ежедневного потребления алкоголя представляют собой среднее значение, которое включает периоды чрезмерного употребления алкоголя и периоды употребления алкоголя в небольшом количестве или его неупотребления. Такое среднее значение может включать в себя среднее потребление алкоголя по меньшей мере в течение приблизительно недели, двух недель, месяца, трех месяцев, шести месяцев, девяти месяцев, года, 2, 3 или 4 лет или более. В некоторых случаях определение того, представляет ли собой дисфункция печени ARLD, основано на упоминании множества факторов, включая, но не ограничиваясь ими: количество и тип потребления алкогольного напитка (например, пиво или спиртные напитки); продолжительность злоупотребления алкоголем; модели поведения, связанные с употреблением алкоголя (например, неумеренное употребление алкоголя, употребление алкоголя без совместного потребления продуктов питания и т.д.); пол; этническая принадлежность; сопутствующие заболевания, такие как метаболический синдром или диабет, перенасыщение железом или инфекция вирусом гепатита, генетические маркеры; история семьи; уровни ферментов печени; уровни провоспалительных цитокинов; анализ экспрессии генов или белков или гистопатологическое исследование ткани или клеток печени.

[0057] «Нарушение печени, не связанное с чрезмерным употреблением алкоголя» - это нарушение печени, которое отличается от ARLD. Поэтому такое расстройство относится к широкому спектру заболеваний печени, которые не вызваны употреблением алкоголя. Например, гепатит может быть вызван вирусной инфекцией. Нарушение печени, вызванное чрезмерным употреблением алкоголя и другими факторами, рассматривается как ARLD, нежели чем нарушение печени, не связанное с чрезмерным потреблением внутрь алкоголя. В противоположность этому нарушение печени, всего лишь усугубленное чрезмерным употреблением алкоголя, рассматривается в качестве нарушения печени, не связанным с чрезмерным потреблением внутрь алкоголя.

[0058] «Неалкогольная жировая болезнь печени» или «NAFLD» относится к жировой болезни печени, характеризующейся наличием жира (липидов) в печени и отсутствием значительного воспаления или повреждения печени. NAFLD может прогрессировать в безалкогольный стеатогепатит, а затем в необратимое прогрессирующее рубцевание печени или цирроз.

[0059] «Неалкогольный стеатогепатит» или «NASH» относится к жировой болезни печени, которая напоминает алкогольную болезнь печени, но встречается у людей, которые употребляют мало или вообще не употребляют алкоголь. Основной особенностью при NASH является жир в печени наряду с воспалением и повреждением. NASH может привести к циррозу, при котором печень полностью повреждена и покрыта рубцами и больше не может нормально функционировать. Дифференциальный диагноз NASH в сравнении с NAFLD можно определить при помощи биопсии печени.

[0060] Описания соединений согласно настоящему изобретению ограничены принципами образования химических связей, известных специалистам в данной области техники. Соответственно там, где группы могут быть замещены одним или более заместителями, такие замены выбирают таким образом, чтобы соблюдать принципы образования химических связей и образовывать вещества, которые по своей сути не являются нестабильными и/или будут известны обычному специалисту в данной области техники как, по всей видимости нестабильные, в условиях окружающей среды, таких как водные, нейтральные или физиологические условия.

III. Жировая болезнь печени

[0061] Жировая болезнь печени (FLD, также известная как гепатостеатоз) - это распространенное заболевание печени, которое возникает при накапливании липидов в клетках печени. Накопление липидов вызывает повреждение клеток и делает печень восприимчивой к дальнейшим травмам. Жировая болезнь печени характеризуется накоплением избыточного жира (липидов) в клетках печени, что в целом вызвано аномальным удержанием липидов клетками печени (т.е., стеатозом). В дополнение к жиру в гепатоцитах удерживаются белки и вода, что может привести к баллонированию гепатоцитов. Накопление жира в печени может быть связано с нарушением одной из следующих стадий обмена липидов гепатоцитов и адипоцитов: (1) увеличенной доставкой свободных жирных кислот в печень; (2) усиленным синтезом свободных жирных кислот в печени; (3) пониженным бета-окислением жирных кислот и (4) пониженным синтезом или секрецией липопротеинов очень низкой плотности. (Bacon и др., Gastroenterology, 1994, 107: 1103-1109).

[0062] FLD может возникать по ряду причин, включая чрезмерное употребление алкоголя и нарушение обмена веществ, такие как те, которые связаны с нарушением восприимчивости к инсулину, ожирением и гипертонией. Указанная болезнь наиболее распространена у людей, страдающих ожирением или диабетом. При индуцированной алкоголем жировой болезни печени (AFL) изначально жир накапливается в клетках печени, однако затем болезнь может прогрессировать до алкогольного гепатита, что вызывает отек печени и приводит ее к повреждению, если индивидуум продолжает употреблять алкоголь. У указанного индивидуума также может развиться алкогольный цирроз или рубцевание печени, что, в свою очередь, может вызвать печеночную недостаточность. Употребляющие алкоголь в чрезмерных количествах с течением времени могут прогрессировать от AFL к алкогольному гепатиту до алкогольного цирроза.

[0063] Неалкогольная жировая болезнь печени (NAFLD) - это нарушение печени с гистологическими признаками AFL у людей, которые употребляют мало алкоголя или не употребляют его вообще. Подобно AFL, NAFLD обусловлена аномальным удержанием жира (липидов) гепатоцитами. Другие жировые болезни печени могут развиваться у пациента с другими видами заболеваний печени, такими как, но не ограничиваясь ими, хронический вирусный гепатит С (HCV), хронический вирусный гепатит В (HBV), хронический аутоиммунный гепатит (AIH), диабет и болезнь Вильсона. Жировая дистрофия печени также может быть связана с признаками, вызванными нарушениями в обмене липидов, такими как расстройства вследствие применения лекарственных средств, например, желудочно-кишечные расстройства (например, рост количества бактерий в кишечника, гастропарез и синдром раздраженной толстой кишки), химиотерапия, желудочно-кишечные операции при ожирении, недоедание и генетические нарушения в белках, которые процессируют липиды.

[0064] В некоторых вариантах реализации жировая болезнь печени представляет собой связанное с алкоголем заболевание печени (ARLD) или неалкогольную жировую болезнь печени (NAFLD). В некоторых случаях связанное с алкоголем заболевание печени - это алкогольная жировая болезнь печени (AFL), алкогольный стеатогепатит (ASH) или алкогольный цирроз. В некоторых случаях неалкогольная жировая болезнь печени представляет собой неалкогольный стеатогепатит (NASH) или неалкогольный цирроз.

А. Связанное с алкоголем заболевание печени (ARLD)

[0065] Связанное с алкоголем заболевание печени (ARLD) описывает семейство связанных с алкоголем или индуцированных алкоголем патологий печени, включая индуцированную алкоголем жировую болезнь печени (AFL), алкогольный гепатит и алкогольный цирроз. Практически у всех людей, которые хронически и в чрезмерном количестве употребляют алкоголь, будет развиваться AFL. Кроме того, вследствие высокой распространенности осложняющих факторов, таких как ожирение, диабет и метаболический синдром у населения в целом, многие индивидуумы, которые не попадают под критерий хронических потребителей алкоголя в чрезмерном количестве, восприимчивы к развитию AFL.

[0066] AFL можно диагностировать при помощи ультразвука. Как правило, печень пациента с AFL «эхогенна», что означает, что она более плотная, чем обычно, по отношению к отображающим звуковым волнам. Кроме того, печень обычно увеличена вследствие набухания и наличия большого количества жира.

[0067] AFL можно также определить и, таким образом, диагностировать вследствие наличия одного или нескольких симптомов или факторов риска (например, ожирение, диабет, характера употребления алкоголя и последствий этого и т.д.). Жировая болезнь печени может проявляться в таких симптомах, как усталость, мышечная слабость, дискомфорт в области живота, потеря веса и помрачение сознания. Однако при жировой болезни печени проявление явных физических симптомов обычно не происходит. Жировая болезнь печени также может сопровождаться воспалением печени или фиброзом печени или предшествовать им. У пациентов с жировой болезнью печени обычно содержатся повышенные уровни ферментов печени в сыворотке. Более того, изменяются относительные уровни нескольких ферментов печени. Уровень аспартатаминотрансферазы в сыворотке (AST) при AFL в целом обнаруживается в больших количествах, нежели чем уровень аланинаминотрансферазы (ALT). Это отличает указанное заболевание от неалкогольной жировой болезни печени, при которой ALT выше, чем AST.

[0068] Существует четыре основных патогенных фактора для AFL: (1) Увеличенное образование НАДФ, вызванное окислением алкоголя, благоприятное для синтеза жирных кислот и триглицеридов, и ингибирование митохондриального β-окисления жирных кислот.(2) Улучшенный приток к печени свободных жирных кислот из жировой ткани и хил омикронов из слизистой оболочки кишечника. (3) Опосредованное этанолом ингибирование активности АМФ-активируемой киназы (AMPK), приводящее к увеличенному липогенезу и уменьшенному липолизу вследствие ингибирования рецептора, активирующего пролиферацию пероксисом (PPARα), и стимулирования белка 1 с, связывающего стеролрегулирующие элементы (SREBP1c). А также (4) повреждение митохондрий и микротрубочек ацетальдегидом, что приводит к уменьшению окисления НАДФ и накоплению липопротеинов очень низкой плотности (VLDL) соответственно.

[0069] На эффективное лечение AFL указывает улучшение одного или более клинических, лабораторных или гистопатологических симптомов. Например, на эффективное лечение может указывать уменьшение объема жировой дистрофии печени, например, выявленное при помощи ультразвукового исследовании. В качестве другого примера на эффективное лечение может указывать уменьшение одного или более клинических симптомов, таких как усталость, слабость или прекращение потери веса. В качестве другого примера на эффективное лечение может указывать нормализация уровней ферментов печени или относительных уровней (например, нормализация отношения уровня аспартатаминотрансферазы к уровню аланинаминотрансферазы).

[0070] Алкогольный гепатит или алкогольный стеатогепатит (ASH) является следующей стадией ARLD после AFL. Таким образом, AFL является предпосылкой для развития ASH. В 17% случаев всех биопсий печени пациентов, которые поступают для проведения алкогольной детоксикации, обнаруживается ASH, а 40% пациентов с алкогольным циррозом также имеют ASH в цирротической печени. У 25% пациентов развивается усиленный некроз печени с клиническими признаками печеночной недостаточности и печеночной энцефалопатии. В тяжелых случаях ASH может вызывать глубокое повреждение печени, повышенное гемодинамическое сопротивление, и быть связан с неблагоприятным прогнозом. Высокая смертность от тяжелого ASH составляет от приблизительно 15% до 25%. ASH характеризуется воспалением печени. Различные факторы могут способствовать развитию ASH, включая: (1) токсичные эффекты, индуцированные ацетальдегидом; (2) образование активных форм кислорода (ROS) и возникающее в результате перекисное окисление липидов; (3) повышающая регуляция провоспалительных цитокинов; и (4) нарушение работы убиквитин-протеасомного пути.

[0071] Ацетальдегид связывается с белками и ДНК, что приводит к функциональным изменениям и образованию аддуктов белков. Такие аддукты могут активировать иммунную систему путем образования аутоантигенов. Ацетальдегид также вызывает повреждение митохондрий и нарушает работу глутатиона, что приводит к окислительному стрессу и апоптозу.

[0072] Основными источниками ROS являются CYP2E1-зависимый митохондриальный транспорт электронов, НАДФ-зависимая цитохромредуктаза и ксантиноксидаза. Хроническое употребление алкоголя явным образом повышающе регулирует CYP2E1, что приводит к ухудшению образования ROS. Более того, CYP2E1 метаболизирует этанол до ацетальдегида, что приводит к дальнейшим изменениям белка и ДНК.

[0073] Метаболиты алкоголя и ROS стимулируют сигнальные пути, такие как те, которые опосредованы NF-κВ, STAT-JAK и JNK в резидентных клетках печени, что приводит к локальному синтезу воспалительных медиаторов, таких как ФНО-α и СХС-хемокины (например, интерлейкин-8), а также остеопонтин. Злоупотребление алкоголем также приводит к изменениям в кишечной микробиоте и повышенной проницаемости кишечника, что приводит к повышенным уровням липополисахаридов в сыворотке, которые индуцируют воспалительные действия в клетках Купфера посредством CD14/TLR4. Возникающая в результате воспалительная среда в пораженной алкоголем печени приводит к полиморфноядерной лейкоцитарной инфильтрации (PMN), образованию ROS и гепатоцеллюлярному повреждению.

[0074] Гистопатологию ASH можно охарактеризовать при помощи баллонирующей дистрофии гепатоцитов, связанной с некрозом, усиленным апоптозом и часто с появлением тел Мэллори-Денка (MDB). Гистопатология ASH также может демонстрировать инфильтрацию иммунных клеток, включая полиморфноядерные клетки, Т-лимфоциты или природные клетки-киллеры. MDB связывают с неблагоприятным прогнозом. В дополнение к MDB, в клетках печени пациентов с ASH могут наблюдаться гигантские митохондрии. Дополнительные гистопатологические характеристики ASH включают макровезикулярный стеатоз, микровезикулярный стеатоз, лобулярный гепатит, ядерные вакуоли, пролиферацию каналов, перивенулярный фиброз и фиброз или цирроз.

[0075] У пациентов с ASH может развиваться прогрессирующий фиброз. При ARLD фиброзная ткань обычно располагается в перицентральных и перисинусоидальных областях. На поздних стадиях появляются коллагеновые стяжки и развивается мостиковый фиброз. Это состояние предшествует развитию узлов регенерации и цирроза печени. Клеточные и молекулярные механизмы фиброза при ARLD не полностью понятны. Метаболиты алкоголя, такие как ацетальдегид, могут непосредственно активировать звездчатые клетки печени (HSC), основные коллагенообразующие клетки в поврежденной печени. Поврежденные гепатоциты, активированные клетки Купфера и инфильтрационные PMN-клетки паракринным образом также могут активировать HSC. Эти клетки высвобождают фиброгенные медиаторы, такие как факторы роста (TGF-β1, PDGF), цитокины (лептин, ангиотензин II, интерлейкин-8 и ФНО-α), растворимые медиаторы (оксид азота) и ROS. Важно отметить то, что ROS стимулируют профиброгенные внутриклеточные сигнальные пути в HSC, включая те, которые опосредованы ERK, PI3K/AKT и JNK. Они также повышающе регулируют TIMP-1 и уменьшают действие металлопротеиназ, тем самым способствуя накоплению коллагена. Клетки, отличные от HSC, также могут синтезировать коллаген при ARLD. Они включают портальные фибробласты и клетки, полученные из костного мозга.

[0076] ASH можно классифицировать на мягкие, умеренные и тяжелые формы вследствие интенсивности и частоты широкого многообразия субъективных и объективных результатов клинических исследований. Клинические симптомы ASH включают: неспецифические боли в правом верхнем квадранте, тошноту и рвоту, часто сопровождающиеся лихорадкой и желтухой. Другие симптомы включают: усталость, сухость во рту и повышенную жажду, или кровотечение из расширенных вен в стенках нижней части пищевода. Другие состояния кожи, указывающие на ASH, включают: маленькие красные паукообразные вены на коже, очень темную или бледную кожу, покраснение на ногах или руках или зуд. У пациентов с ASH могут также проявляться симптомы отказа от алкоголя и признаки недоедания. Кроме того клинические маркеры включают гепатомегалию, асцит, анорексию, энцефалопатию, спленомегалию, потерю веса, панкреатит или желудочно-кишечные кровотечения. В тяжелых случаях у пациентов могут наблюдаться проблемы с мышлением, памятью и настроением, обмороки или предобморочное состояние или онемение нижних конечностей и ступней.

[0077] Присутствующие в сыворотке и крови маркеры ASH включают увеличение активности аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы, сопровождающееся более высоким уровнем аспартатаминотрансферазы по сравнению с аланинаминотрансферазой. Как правило, у пациентов с ASH также повышается уровень гаммаглутамилпептидазы. Повышенный уровень гаммаглутамилпептидазы в целом рассматривается как результат индукции фермента этанолом, тем не менее, уровни аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы рассматриваются как маркеры повреждения клеток печени. У 40-80% пациентов также наблюдаются повышенные уровни активности щелочной фосфатазы. При тяжелом ASH повышены уровни бета- и гамма-глобулинов. Кроме того, при ASH может наблюдаться повышенное количество лейкоцитов с токсической грануляцией и лихорадкой. Гематологические аномалии для ASH включают макроцитозную гиперхромную анемию и тромбоцитоз. При тяжелом ASH может также обнаруживаться снижение параметров, указывающих на первичную функцию печени, таких как протромбиновое время, билирубин в сыворотке или сывороточный альбумин. В некоторых случаях ASH можно определить по наличию билирубина в моче.

[0078] В целом ASH неотличим от AFL посредством ультразвука. Тем не менее, ультразвук может быть подходящим для исключения внепеченочного холестаза, при котором могут наблюдаться схожие клинические симптомы (например, желтуха). Если диагноз не может быть установлен посредством изучения клинических признаков, присутствующих в крови и сыворотке маркеров и ультразвука, можно провести биопсию печени. Биопсия печени может помочь при определении тяжести заболевания или для направления фармакологического вмешательства.

[0079] На эффективное лечение ASH указывает улучшение одного или более клинических, лабораторных или гистопатологических симптомов. Например, на эффективное лечение может указывать уменьшение объема жировой дистрофии печени, например, выявленное при помощи ультразвукового исследования. В качестве другого примера на эффективное лечение может указывать уменьшение одного или более клинических симптомов, таких как усталость, слабость или прекращение потери веса. В качестве другого примера на эффективное лечение может указывать нормализация уровней ферментов печени или относительных уровней (например, нормализация отношения уровня аспартатаминотрансферазы к уровню аланинаминотрансферазы). В качестве еще одного примера на эффективное лечение может указывать снижение уровней бета- и гамма-глобулина или уровней щелочной фосфатазы. В качестве другого примера на эффективность лечения может указывать восстановление или улучшение параметров первичной функции печени, таких как протромбиновое время, билирубин в сыворотке или моче и сывороточный альбумин. В еще одном примере на эффективное лечение может указывать уменьшение интенсивности или прекращение одного или более признаков: гепатомегалии, асцита, анорексии, энцефалопити, спленомегалии, потери веса, панкреатита или желудочно-кишечного кровотечения.

[0080] Алкогольный цирроз - это поздняя стадия серьезного заболевания печени, которая отмечается воспалением, отеком, фиброзом, поврежденными клеточными мембранами, рубцами и некрозом. У от приблизительно 10% до приблизительно 20% употребляющих алкоголь в чрезмерных количествах развивается цирроз печени. Симптомы цирроза включают, но не ограничиваются ими, желтуху, увеличение печени, боль и болезненную чувствительность. На эффективное лечение может указывать любое снижение скорости прогрессирования ухудшения функции печени.

В. Неалкогольная жировая болезнь печени (NAFLD)

[0081] NAFLD включает в себя спектр гистологических форм, включая печеночный стеатоз и неалкогольный стеатогепатит (NASH), который характеризуется воспалением печени, стеатозом, некрозом и фиброзом вследствие разрушения клеток печени. Условия, связанные с NAFLD, различны и включают диабет 2 типа, ожирение, дислипидемию, метаболический синдром, лечение гепатотоксическими лекарственными средствами, токсины, инфекционные агенты или другие экзогенные причины. Например, NAFLD может являться результатом метаболических нарушений, таких как, например, галактоземия, болезнь накопления гликогена, гомоцистинурия и тиросемия, а также пищевые статусы, такие как недоедание, общее парентеральное питание, голодание и переедание. В определенных случаях NAFLD связана с операциями по шунтированию тощей кишки. Другие причины включают воздействие определенных химических веществ, таких как, например, углеводородные растворители, и определенных лекарственные препаратов для медицинского применения, таких как, например, амиодарон, эстрогены (например, синтетические эстрогены), тамоксифен, малеат, метотрексат, нуклеозидные аналоги и перхексилин. Острые состояния жировой дистрофии печени печени также могут возникать во время беременности.

[0082] Клиническое течение NAFLD как правило является доброкачественным и непрогрессирующим, тем не менее NASH представляет собой потенциально серьезное состояние. До 25% пациентов с NASH могут прогрессировать до выраженного фиброза, цирроза и осложнений, связанных с портальной гипертензией, печеночной недостаточностью и гепатоцеллюлярной карциномой (Yeh и Brunt, Am. J. Clin. Pathol, 2007, 128(5): 837-47).

[0083] У индивидуумов с NAFLD может не быть симптомов, однако клинические лабораторные тесты могут демонстрировать повышенные уровни ферментов печени. У индивидуумов могут наблюдаться симптомы NAFLD, такие как дискомфорт в области живота (например, дискомфорт в правом верхнем брюшном квадранте), чернеющий акантоз, расстройство кишечника, кома, запор, диссеминированная внутрисосудистая коагулопатия, боли в эпигастральной области, усталость, недомогание, гепатомегалия (обычно с гладкой твердой поверхностью при пальпации), гипогликемия, желтуха, липоматоз, липоатрофия, липодистрофия, тошнота, неврологические дефекты, эритема Палмера, панникулит, околопупочные боли, чрезмерный рост бактерий кишечника, сосудистые звездочки, спленомегалия, подострая печеночная недостаточность и рвота. Клиническая оценка для исключения связанной с алкоголем жировой болезни печени может включать определение того, употребляет ли индивидуум алкоголь в избыточных количествах (например, >60 г/день для мужчин и >20 г/день для женщин на протяжении последних 5 лет). Наличие уровня антител к гепатиту С и уровней церулоплазмина в сыворотке можно применять для того, чтобы выявить у индивидуума NAFLD.

[0084] Неинвазивную оценку биохимии и метаболизма может применять для диагностики NAFLD и NASH. Применяя биологический образец, такой как кровь, плазма или сыворотка, высокий уровень ферментов, таких как аланинаминотрансфераза (ALT), аспартатаминотрансферсафаза (AST), щелочная фосфатаза (АР) и/или γ-глутамилтранспептидаза (GGT), а также наличие других белков печеночного происхождения (включая гаптоглобин, общий билирубин, альфа-2-микроглобулин, резистин, расщепленный или интактный цитокератин-18) обычно измеряют в дополнение к глюкозе в сыворотке и параметров нарушения восприимчивости к инсулину. Поскольку уровень активности ALT часто увеличен у пациентов с NASH (Angulo и Lindor, BestPract. Res. Clin. Gastroenterol, 2002, 16(5): 797-810), данный критерий считается суррогатным маркером для оценки повреждения печени.

[0085] У индивидуума с подозрением на NAFLD или NASH контрольное исследование сыворотки может включать измерение или определение уровней AST, ALT, общего и прямого билирубина и глюкозы в сыворотке натощак, а также липидограммы. Например, на стеатоз может указывать повышенные уровни в сыворотке (часто умеренно повышенные, например, повышенные приблизительно 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 11 или 12-кратно относительно нормальных уровней) ферментов печени (таких как, например, AST, ALT, GGT и щелочная фосфатаза), когда были устранены другие причины (такие как, например, острый гепатит, аутоиммунное заболевание, хронический гепатит, цирроз, фульминантный гепатит, гепатоцеллюлярная карцинома, метастатическая карцинома, сердечная недостаточность и вирусный гепатит). Например, значения ALT, большие, чем 32, 24 или 56 единиц на литр сыворотки, или превышающие по меньшей мере в 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-кратном или более размере нормальные значения, могут указывать на нарушение, связанное с отложением липидов в печени, или значения AST, большие, чем 40 единиц на литр сыворотки или по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12-кратно или более раз превышающие нормальные значения. Наиболее часто обнаруживают слабовыраженные до умеренного уровня уровни аминотрансферазы в сыворотке (средний диапазон - 100-200 МЕ/л). Соотношение AST/ALT при NAFLD часто меньше единицы, однако оно может быть больше единицы у пациентов с алкогольной болезнью печени или прогрессирующим заболеванием печени или если пациент прогрессирует до фиброза. Уровни GGT также могут быть значимо увеличены, например, по меньшей мере в 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или более раз относительно нормальных значений, определяемых у нормального здорового индивидуума. Уровни ферментов печени могут быть нормальными у большого процента пациентов с NAFLD, поэтому нормальные уровни AST или ALT не исключают наличия прогрессирующего заболевания. Уровни щелочной фосфатазы и GGT в сыворотке могут быть слегка аномальными. Учитывая, что более, чем 80% пациентов с NAFLD имеют некоторые компоненты метаболического синдрома, можно определить уровни холестерина и триглицеридов натощак, а также уровней глюкозы и инсулина натощак. Уровни альбумина, билирубина и тромбоцитов могут быть нормальными до тех пор, пока болезнь не развилась до цирроза. Некоторые пациенты с NAFLD имеют низкие титры аутоиммунных антител (например, антиядерные антитела и антитела против клеток гладких мышц) и повышение ферритина (Carey и др., «Nonalcoholic Fatty Liver Disease» in Current Clinical Medicine, 2-е издание, Elsevier, Нью-Йорк). В некоторых вариантах реализации соотношение AST/ALT, превышающее единицу, может служить прогнозом для жировой болезни печени более поздней стадии.

[0086] Для обнаружения NAFLD можно применять радиологические методы, такие как, но не ограничиваясь ими, рентгенологическое исследование, ультрасонография, компьютерная томография (КТ), магнитно-резонансная томография (МРТ) и магнитно-резонансная спектроскопия. При ультрасонографии повышенная эхогенность печени по сравнению с почками может указывать на стеатоз печени.

[0087] NASH можно диагностировать с применением гистопатологических методов на образцах печени (например, биопсии) для того, чтобы произвести оценку макровезикулярного стеатоза, баллонирующей дегенерации, некроза гепатоцитов, лобулярного воспаления, мегамитохондрий, инфильтрации воспалительных клеток, апоптоза и фиброза (см., например, Brunt и Tiniakos, World J. Gastroenterol., 2010, 16 (42): 5286-8296). Баллонирование гепатоцитов характеризуется набуханием и увеличением клеток, а иногда и появлением цитоплазматических изменений, содержащих тела Мэллори-Денка. С течением времени может также развиваться фиброз, первоначально как перицеллюлярный/первичный фиброз, и в конечном итоге до портально-центрального мостикового фиброза и цирроза.

[0088] Окрашивание при помощи гематоксилина и эозина (Н&Е), трихрома Массона, Oil Red О и иммуногистохимическое окрашивание и другие стандартные гистологические методы, известные специалистам в данной области техники, можно проводить для анализа характеристик тканей и клеток. Для оценки и диагностики NAFLD, включая NASH, можно применять систему оценки (например, показатель активности NAFLD), которая включает одну или более гистологических характеристик. В некоторых вариантах реализации Систему Оценки Сети Центров Клинических Исследований NASH, разработанную Комитетом по патологии Сети центров клинических исследований NASH (см., например, Kleiner и др., Hepatology, 2005, 41 (6): 1313-1321), можно применять для прогнозирования у индивидуума NAFLD или NASH. Клиницист для диагностики или отслеживания NAFLD, включая неалкогольную жировую дистрофию печени, NASH и связанный с NASH цирроз, может следовать практическим рекомендациям, опубликованным Американской ассоциацией гастроэнтерологов, Американской ассоциацией по изучению заболеваний печени и Американским колледжем гастроэнтерологии (Chalasani и др., Gastroenterology, 2012, 142: 1592-1609).

[0089] Печень индивидуума может считаться стеатозной, когда при биопсии обнаруживают по меньшей мере 5-10% масс./масс. жировых отложений (см., например, Clark и др., J. Am. Med. Assoc., 2003, 289: 3000-3004 (2003) и Adams и др., Can. Med. Assoc. J., 2005, 172: 899-905). Печень с жировыми отложениями, содержащая не более 25% (масс./масс.), может считаться умеренно стеатозной, а печень с жировыми отложениями, содержащая более, чем 25% (масс./масс.), может считаться тяжело стеатозной.

[0090] Лечение NAFLD, включая NASH, включает физическую активность, потерю веса и исключение гепатотоксинов или любого вещества, которое может повредить печень. В некоторых вариантах реализации методы лечения включают введение антиоксидантов, цитозащитных агентов, противодиабетических агентов, агентов, чувствительных к инсулину (например, метформин), противогиперлипидемических агентов, других химических соединений, таких как фибраты, тиазолидиндионы (т.е., росиглитазон или пиоглитазон), бигуаниды, статины, каннабиноиды и другие терапевтические соединения или молекулы, которые нацелены на ядерные рецепторы, рецепторы ангиотензина, каннабиноидные рецепторы или HMG-CoA-редуктазу.

[0091] Эффективность лечения может быть определена путем выявления уменьшения одного или более симптомов или клинических проявлений заболевания, а также посредством любого из исследований, описанных выше для диагностики.

IV. Соединения

[0092] В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения предложено соединение формулы I:

,

при этом пунктирная линия отсутствует или представляет собой связь. X представляет собой О или S. R¹ представляет собой циклоалкил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил, необязательно замещенный одной-тремя группами R^1a. Каждый R^1a независимо представляет собой Н, C_1-6 алкил, C_2-6 алкенил, C_2-6 аалкинил, C_1-6 алкокси, C_1-6 алкил-OR^1b, галоген, C_1-6 галогеналкил, C_1-6 галогеналокси, -OR^1b, -NR^1bR^1c, -C(O)R^1b, -C(O)OR^1b, -OC(O)R^1b, -C(O)NR^1bR^1c, -NR^1bC(O)R^1c, -SO₂R^1b, -SO₂NR^1bR^1c, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил. R^1b и R^1c каждый представляет собой Н или C_1-6 алкил. R² представляет собой Н, C_1-6 алкил, C_1-6 алкил-OR^1b, C_1-6 алкил-NR^1bR^1c или C_1-6 алкиленгетероциклоалкил. R³ представляет собой Н или C_1-6 алкил. Ar представляет собой арил, необязательно замещенный одной-четырьмя R⁴ группами. Каждый R⁴ представляет собой Н, C_1-6 алкил, C_1-6 алкокси, галоген, C_1-6 галогеналкил или C_1-6 галогеналкокси. L¹ представляет собой связь или C_1-6 алкилен. Подстрочный индекс n представляет собой целое число от 0 до 3. Также включены соли и изомеры приведенных в настоящем документе соединений.

[0093] В некоторых других вариантах реализации настоящего изобретения предложено соединение формулы Ia:

.

[0094] В некоторых вариантах реализации L¹ представляет собой метилен. В других вариантах реализации Ar представляет собой фенил.

[0095] В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения предложено соединение формулы Ib:

.

[0096] В некоторых других вариантах реализации настоящего изобретения предложено соединение формулы Ic:

.

[0097] В некоторых других вариантах реализации настоящего изобретения предложено соединение формулы Id:

.

[0098] В некоторых вариантах реализации каждый R^1a, R² и R⁴ представляют собой группы, определенные выше для Формулы I. В некоторых вариантах реализации указанные соединения Формулы Id представляют собой те соединения, где каждый R^1a независимо представляет собой Н, C_1-6 алкил, галоген или C_1-6 галогеналкил; R² представляет собой Н или C_1-6 алкил и каждый R⁴ представляет собой Н, C_1-6 алкил, галоген или C_1-6 галогеналкил.

[0099] В некоторых других вариантах реализации настоящего изобретения предложено соединение, где R¹ представляет собой арил или гетероарил. В других вариантах реализации R¹ выбран из группы, состоящей из фенила, пиридила, пиримидина и тиазола. В некоторых других вариантах реализации каждый R^1a независимо представляет собой Н, C_1-6 алкил, C_1-6 алкокси, галоген, C_1-6 галогеналкил, -NR^1bR^1c или -SO₂R^1b. В других вариантах реализации каждый R^1a представляет собой C_1-6 галогеналкил. В некоторых других вариантах реализации каждый R^1a независимо представляет собой Н, Me, Et, -ОМе, F, Cl, -CF₃, -NMe₂ или -SO₂Me. В некоторых других вариантах реализации каждый R^1a независимо представляет собой Н, Me, Et, F, Cl или -CF₃. В других вариантах реализации каждый R^1a представляет собой -CF₃. В некоторых других вариантах реализации R² представляет собой Н или C_1-6 алкил. В других вариантах реализации R² представляет собой Н.

[0100] В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения предложено соединение, выбранное из следующих:

или .

[0101] В некоторых вариантах реализации указанное соединение представляет собой

или .

[0102] В некоторых других вариантах реализации настоящего изобретения предложено соединение формулы:

.

[0103] Соединения согласно настоящему изобретению могут существовать в виде солей. Настоящее изобретение включает такие соли. Примеры подходящих форм солей включают гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты, метансульфонаты, нитраты, малеаты, ацетаты, цитраты, фумараты, тартраты (например, (+)-тартраты, (-)-тартраты или их смеси, включая рацемические смеси, сукцинаты, бензоаты и соли с аминокислотами, такими как глутаминовая кислота. Эти соли можно получить способами, известными специалистам в данной области техники. Также включены соли присоединения оснований, такие как натрий, калий, кальций, аммоний, органический амино или магниевая соль или аналогичная соль. Когда соединения по настоящему изобретению содержат относительно основные функциональные группы, соли присоединения кислот можно получить путем взаимодействия нейтральной формы таких соединений с достаточным количеством желаемой кислоты, либо в беспримесном, либо в подходящем инертном растворителе. Примеры подходящих солей присоединения кислот включают те, которые получены из неорганических кислот, таких как соляная, бромистоводородная, азотная, карбоновая, моногидрогенкарбоновая, фосфорная, моногидрогенфосфорная, дигидрофосфорная, серная, моногидрогенсерная, йодистоводоростая или фосфористая кислоты и им подобные, а также соли, полученные из органических кислот, таких как уксусная, пропионовая, изомасляная, малеиновая, малоновая, бензойная, янтарная, субериновая, фумаровая, молочная, миндальная, фталевая, бензолсульфоновая, п-толилсульфоновая, лимонная, винная, метансульфоновая и им подобные. Также включены соли аминокислот, такие как аргинат и им подобные, и соли органических кислот, таких как глюкуроновая или галактунорная кислоты и им подобные. Определенные специфичные соединения согласно настоящему изобретению содержат как основные, так и кислотные функциональные группы, которые позволяют преобразовывать указанные соединения в соли присоединения либо оснований, либо или кислот.

[0104] Другие соли включают кислые и основные соли указанных соединений, применяемых в способах согласно настоящему изобретению. Иллюстративными примерами фармацевтически приемлемых солей являются соли минеральных кислот (соляная кислота, бромистоводородная кислота, фосфорная кислота и им подобные), соли органических кислот (уксусная кислота, пропионовая кислота, глутаминовая кислота, лимонная кислота и им подобные) и соли четвертичного аммония (метилиодид, этилиодид и им подобные). Понятно то, что фармацевтически приемлемые соли являются нетоксичными. Дополнительную информацию о подходящих фармацевтически приемлемых солях можно найти в Remington's Pharmaceutical Sciences, 17^th ed., издательство Mack Publishing, Истон, Пенсильвания, 1985, которое включено в настоящий документ посредством ссылки.

[0105] Фармацевтически приемлемые соли включают соли активных соединений, которые получают с относительно нетоксичными кислотами или основаниями, в зависимости от конкретных заместителей, обнаруживаемых на описанных в настоящем документе соединениях. Когда соединения согласно настоящему изобретению содержат относительно кислотные функциональные группы, соли присоединения оснований можно получить путем взаимодействия нейтральной формы таких соединений с достаточным количеством желаемого основания, либо в беспримесном, либо в подходящем инертном растворителе. Примеры фармацевтически приемлемых солей присоединения оснований включают натрий, калий, кальций, аммоний, органический амино или магниевую соль или аналогичную соль. Когда соединения согласно настоящему изобретению содержат относительно основные функциональные группы, соли присоединения кислот можно получить при помощи взаимодействия нейтральной формы таких соединений с достаточным количеством желаемой кислоты, либо в беспримесном, либо в подходящем инертном растворителе. Примеры фармацевтически приемлемых солей присоединения кислот включают соли, полученные из неорганических кислот, таких как соляная, бромистоводородная, азотная, карбоновая, моногидрогенкарбоновая, фосфорная, моногидрогенфосфорная, дигидрофосфорная, серная, моногидрогенсерная, йодистоводородная или фосфористая кислоты и им подобные, а также соли, полученные из относительно нетоксичных органических кислот, таких как уксусная, пропионовая, изомасляная, малеиновая, малоновая, бензойная, янтарная, субериновая, фумаровая, молочная, миндальная, фталевая, бензолсульфоновая, п-толилсульфоновая, лимонная, винная, метансульфоновая и им подобные. Также включены соли аминокислот, такие как аргинат и им подобные, и соли органических кислот, таких как глюкуроновая или галактунорная кислоты и им подобные (см., например, Berge и др., «Pharmaceutical Salts», Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19). Определенные специфичные соединения согласно настоящему изобретению содержат как основные, так и кислотные функциональные группы, которые позволяют превращать указанные соединения в соли присоединения либо оснований, либо или кислот.

[0106] Нейтральные формы соединений предпочтительным образом восстанавливают путем взаимодействия соли с основанием или кислотой и выделения исходного соединения обычным способом. Исходная форма указанного соединения отличается от различных солевых форм некоторыми физическими свойствами, такими как растворимость в полярных растворителях.

[0107] Некоторые соединения согласно настоящему изобретению могут существовать в несольватированных формах, также как и в сольватированных формах, включая гидратированные формы. В целом указанные сольватированные формы эквивалентны несольватированным формам, и они входят в объем настоящего изобретения. Некоторые соединения согласно настоящему изобретению могут существовать во множественных кристаллических или аморфных формах. В целом все физические формы равноценны для применений, предусмотренных настоящим изобретением, и предназначены для того, чтобы входить в объем настоящего изобретения.

[0108] Некоторые соединения согласно настоящему изобретению содержат асимметричные атомы углерода (оптические центры) или двойные связи; энантиомеры, рацематы, диастереомеры, таутомеры, геометрические изомеры, стереоизометрические формы, которые можно определить с точки зрения абсолютной стереохимии как (R)- или (S)- или как (D)- или (L)- для аминокислот, и индивидуальные изомеры включены в объем настоящего изобретения. Соединения согласно настоящему изобретению не включают те соединения, которые известны в данной области техники как слишком нестабильные для синтеза и/или выделения. Настоящее изобретение предназначено для включения соединений в рацемических и оптически чистых формах. Оптически активные (R)- и (S)- или (D)- и (L)-изомеры можно получить с применением хиральных синтонов или хиральных реагентов или разделить с применением обычных методов.

[0109] Изомеры включают соединения, содержащие одинаковое количество и вид атомов и, следовательно, обладающие одной и той же молекулярной массой, но различающиеся в отношении структурного расположения или конфигурации атомов.

[0110] Для специалиста в данной области техники будет очевидно, что некоторые соединения согласно настоящему изобретению могут существовать в таутомерных формах, причем все такие таутомерные формы соединений входят в объем настоящего изобретения. Таутомер относится к одному из двух или более структурных изомеров, которые существуют в равновесии и которые легко преобразуются из одной изомерной формы в другую.

[0111] До тех пор, пока не указано иное, подразумевается, что структуры, представленные в настоящем документе, включают все стереохимические формы указанной структуры, т.е., R- и S- конфигурации для каждого асимметричного центра. Следовательно, одиночные стереохимические изомеры, а также энантиомерные и диастереомерные смеси настоящих соединений, находятся в пределах объема настоящего изобретения.

[0112] До тех пор, пока не указано иное, соединения согласно настоящему изобретению могут также содержать не встречающиеся в природе пропорции атомных изотопов у одного или более атомов, которые составляют основу такого соединения. Например, соединения согласно настоящему изобретению можно пометить радиоактивными изотопами, такими как, например, дейтерий (²Н), тритий (³Н), йод-125 (¹²⁵I), углерод-13 (¹³С) или углерод-14 (¹⁴С). Все изотопные вариации соединений согласно настоящему изобретению, вне зависимости от того, являются ли они радиоактивными или нет, включены в объем настоящего изобретения.

[0113] В дополнение к солевым формам настоящего изобретения предложены соединения, которые находятся в форме пролекарственного средства. Пролекарственные средства соединений, описанных в настоящем документе, представляют собой соединения, которые легко подвергаются химическим изменениям в физиологических условиях для получения соединений согласно настоящему изобретению. Кроме того, пролекарственные средства можно преобразовать в соединения согласно настоящему изобретению при помощи химических или биохимических способов в среде ex vivo. Например, пролекарственные средства могут медленно преобразовываться в соединения согласно настоящему изобретению при их размещении в трасдермальном пластыре-резервуаре с подходящим ферментом или химическим реагентом.

[0114] Соединения согласно настоящему изобретению можно получить различными способами, известными в данной области техники. См., например, патент США №8685973, который полностью включен в настоящую заявку посредством ссылки.

V. Фармацевтические композиции

[0115] В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество и соединение согласно настоящему изобретению.

[0116] Соединения согласно настоящему изобретению можно получить и вводить в широком диапазоне лекарственных форм для перорального, парентерального и местного применений. Пероральные препараты включают таблетки, пилюли, порошок, драже, капсулы, жидкости, таблетки для рассасывания, гели, сиропы, взвеси, суспензии и т.д., подходящие для приема внутрь пациентом. Соединения согласно настоящему изобретению можно также вводить путем инъекций, то есть внутривенно, внутримышечно, внутрикожно, подкожно, интрадуоденально или внутрибрюшинно. Кроме того, описанные в настоящем документе соединения можно вводить посредством ингаляции, например, интраназально. Кроме того, соединения согласно настоящему изобретению можно вводить трансдермально. Модуляторы GR согласно настоящему изобретению можно также вводить при помощи внутриглазного, внутривагинального и внутриректального способов введения, включая суппозитории, инсуффляцию, порошки и аэрозольные составы (примеры стероидных ингалянтов см. Rohatagi, J. Clin. Pharmacol, 35: 1187-1193, 1995; Tjwa, Ann. Allergy Asthma Immunol., 75: 107-111, 1995). Соответствующим образом, в настоящем изобретении также предложены фармацевтические композиции, содержащие фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество и либо соединение Формулы (I), либо фармацевтически приемлемую соль соединения Формулы (I).

[0117] Для получения фармацевтических композиций из соединений согласно настоящему изобретению фармацевтически приемлемые носители могут быть либо твердыми, либо жидкими. Твердые формы препаратов включают порошки, таблетки, пилюли, капсулы, крахмальные капсулы, суппозитории и диспергируемые гранулы. Твердый носитель может представлять собой одно или более веществ, которые также могут действовать как разбавители, ароматизаторы, связующие вещества, консерванты, дезинтегрирующие таблетки агенты или инкапсулирующий материал. Подробная информация о методах приготовления и введения хорошо описана в научной и патентной литературе, см., например, последнее издание Remington's Pharmaceutical Sciences, Maack Publishing Co, Истон, Пенсильввания («Remington's»)

[0118] В порошках указанный носитель представляет собой тонкоизмельченное твердое вещество, которое находится в смеси с тонкоизмельченным активным компонентом. В таблетках указанный активный компонент смешивают в подходящих пропорциях с указанным носителем, обладающим необходимыми связывающими свойствами, и уплотняют до желаемой формы и размера.

[0119] Порошки и таблетки предпочтительно содержат от 5% или 10% до 70% активного соединения. Подходящими носителями являются карбонат магния, стеарат магния, тальк, сахар, лактоза, пектин, декстрин, крахмал, желатин, трагакант, метилцеллюлоза, натрий карбоксиметилцеллюлоза, низкоплавкий воск, масло какао и им подобные. Термин «препарат» предназначен для включения составов активного соединения с инкапсулирующим материалом в качестве носителя, обеспечивающего капсулу, в которой указанный активный компонент с другим или без других носителей окружен носителем, который таким образом связан с ним. Аналогичным образом включены таблетки для рассасывания и крахмальные капсулы. Таблетки, порошки, капсулы, пилюли, крахмальные капсулы и таблетки для рассасывания можно применять в виде твердых лекарственных форм, подходящих для перорального введения.

[0120] Подходящими твердыми вспомогательными веществами являются углеводородные или белковые наполнители, включая, но не ограничиваясь ими, сахара, включая лактозу, сахарозу, маннит или сорбит; крахмал из кукурузы, пшеницы, риса, картофеля или других растений; целлюлозу, такую как метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза или натрий карбоксиметилцеллюлоза, и камедь, включая арабик и трагакант; а также белки, такие как желатин и коллаген. Если это необходимо, можно добавлять дезинтегрирующие или солюбилизирующие агенты, такие как поперечно-сшитый поливинилпирролидон, агар, альгиновая кислота или ее соль, такую как альгинат натрия.

[0121] Сердцевину драже можно обеспечить подходящими веществами для покрытия, такими как концентрированные растворы сахара, которые могут также содержать гуммиарабик, тальк, поливинилпирролидон, гель карбопол, полиэтиленгликоль и/или диоксид титана, лаковые растворы, и подходящие органические растворители или смеси растворителей. Красители или пигменты можно добавлять к таблеткам или веществам для покрытия драже для идентификации продукта или для того, чтобы охарактеризовать количество активного вещества (т.е., дозировку). Фармацевтические препараты согласно настоящему изобретению можно также применять перорально с применением, например, твердых капсул, полученных из желатина, а также мягких герметичных капсул, полученных из желатина и покрытия, такого как глицерин или сорбит. Твердые капсулы могут содержать модулятор GR, смешанный с наполнителем или связующими веществами, такими как лактоза или крахмал, лубрикантами, такими как тальк или стеарат магния, и, необязательно стабилизаторами. В мягких капсулах соединения для модуляции GR можно растворять или суспендировать в подходящих жидкостях, таких как жирные масла, жидкий парафин или жидкий полиэтиленгликоль со стабилизаторами или без них.

[0122] Для приготовления суппозиториев низкоплавкий воск, такой как смесь глицеридов жирных кислот или масла какао, сначала расплавляют и гомогенно в нем диспергируют активный компонент, как при перемешивании. Затем указанную расплавленную гомогенную смесь выливают в формы удобного размера, дают возможность охладиться и тем самым затвердеть.

[0123] Жидкие формы препаратов включают растворы, суспензии и эмульсии, например растворы воды или воды/пропиленгликоля. Для парентеральной инъекции жидкие препараты можно приготавливать в растворе в водном растворе полиэтиленгликоля.

[0124] Водные растворы, подходящие для перорального применения, можно получить путем растворения активного компонента в воде и добавления подходящих красителей, ароматизаторов, стабилизаторов и загустителей при необходимости. Водные суспензии, подходящие для перорального применения, могут быть получены путем диспергирования тонкоизмельченного активного компонента в воде с вязким материалом, таким как природная или синтетическая камедь, смолы, метилцеллюлоза, натрий карбоксиметилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакантовая камедь и аравийская камедь, и диспергирующими или смачивающими агентами, такими как встречающийся в природе фосфатид (например, лецитин), продукт конденсации алкиленового оксида с жирной кислотой (например, полиоксиэтиленстеарат), продукт конденсации этиленоксида с длинноцепочечным алифатическим спиртом (например, гептадекаэтиленоксицетанол), продукт конденсации этиленоксида с неполным эфиром, полученным из жирной кислоты и гексита (например, полиоксиэтиленсорбитолмоноолеат), или продукт конденсации этиленоксида с неполным эфиром, полученным из жирной кислоты и ангидрида гексита (например, моноолеат полиоксиэтиленсорбитана). Водная суспензия может также содержать один или более консервантов, таких как этил или н-пропил-п-гидроксибензоат, один или более красителей, один или более ароматизаторов и один или более подсластителей, таких как сахароза, аспартам или сахарин. Составы можно регулировать по значению осмолярности.

[0125] Также включены твердые формы препаратов, которые незадолго до применения предназначены для преобразования в жидкие формы препаратов для перорального введения. Такие жидкие формы включают растворы, суспензии и эмульсии. Эти препараты могут содержать в дополнение к активному компоненту красители, ароматизаторы, стабилизаторы, буферы, искусственные и натуральные подсластители, диспергаторы, загустители, солюбилизирующие агенты и им подобные.

[0126] Масляные суспензии можно приготовить путем суспендирования соединения согласно настоящему изобретению в растительном масле, таком как арахисовое масло, оливковое масло, кунжутное масло или кокосовое масло, или в минеральном масле, таком как жидкий парафин, или их смеси. Масляные суспензии могут содержать загуститель, такой как пчелиный воск, твердый парафин или цетиловый спирт. Подсластители можно добавлять для получения перорального препарата с приятным вкусом, такие как глицерин, сорбит или сахароза. Эти составы могут быть сохранены добавлением антиоксиданта, такого как аскорбиновая кислота. В качестве примера масляной среды-носителя для инъекций см. Minto, J. Pharmacol. Exp. Ther. 281: 93-102, 1997. Фармацевтические составы согласно настоящему изобретению также могут быть в форме эмульсий типа масло-в-воде. Масляная фаза может представлять собой растительное масло или минеральное масло, описанное выше, или их смесь. Подходящие эмульгаторы включают встречающуюся в природе камедь, такую как аравийская камедь и трагакант, встречающиеся в природе фосфатиды, такие как соевый лецитин, эфиры или неполные эфиры, полученные из жирных кислот и ангидридов гексита, такие как моноолеат сорбитана, и продукты конденсации этих неполных эфиров с этиленоксидом, такие как моноолеат полиоксиэтиленсорбитана. Указанная эмульсия может также содержать подсластители и ароматизаторы, как в составе сиропов и эликсиров. Такие составы могут также содержать мягчительное средство, консервант или краситель.

[0127] Обеспечить доставку соединений согласно настоящему изобретению можно трансдермально, посредством местного способа введения, приготовленных в виде палочек-аппликаторов, растворов, суспензий, эмульсий, гелей, кремов, мазей, паст, желе, наносимых кисточкой веществ, порошков и аэрозолей.

[0128] Доставку соединений и композиций согласно настоящему изобретению можно также осуществить в виде микросфер для медленного высвобождения в организме. Например, микросферы можно вводить посредством внутрикожной инъекции микросфер, содержащих лекарственные средства, которые медленно высвобождаются подкожно (см. Rao, J. Biomater. Sci. Polym, Ed., 7: 623-645, 1995), в виде биоразлагаемых и гелевых составов для инъекций (см., например, Gao, Pharm, Res. 12: 857-863, 1995) или в виде микросфер для перорального введения (см., например, Eyles, J. Pharm. 49: 669-674, 1997). Как трансдермальный, так и внутрикожный способ введения обеспечивает постоянную доставку в течение недель или месяцев.

[0129] Фармацевтические составы согласно настоящему изобретению можно получить в виде соли, и их можно образовать из многих кислот, включая, но не ограничиваясь ими, соляную, серную, уксусную, молочную, винную, яблочную, янтарную и т.д. Соли, как правило, более растворимы в водных или других протонных растворителях, которые представляют собой соответствующие формы свободного основания. В других случаях указанный препарат может представлять собой лиофилизированный порошок в 1 мМ - 50 мМ гистидине, 0,1%-2% сахарозе, 2%-7% манните при значении рН от 4,5 до 5,5, который объединяют с буфером перед применением.

[0130] В другом варианте реализации доставку составов согласно настоящему изобретению можно осуществлять с применением липосом, которые сливаются с клеточной мембраной или эндоцитируются, т.е., посредством использования лигандов, прикрепленных к указанной липосоме или прикрепленных непосредственно к олигонуклеотиду, которые связываются с рецепторными белками поверхностной мембраны клетки, приводя к эндоцитозу. Применяя липосомы, в частности там, где поверхность липосомы несет на себе лиганды, специфичные для клеток-мишеней, или иным образом предпочтительно направленных на специфичный орган, можно сфокусировать доставку модулятора GR в клетки-мишени in vivo, (см., например, Al-Muhammed, J. Microencapsul, 13: 293-306, 1996; Chonn, Curr. Opin. Biotechnol. 6: 698-708, 1995; Ostro, Am. J. Hosp., Pharm., 46: 1576-1587, 1989).

[0131] Фармацевтический препарат предпочтительным образом находится в единичной лекарственной форме. В такой форме указанный препарат подразделяют на единичные дозы, содержащие соответствующие количества активного компонента. Единичная лекарственная форма может представлять собой упакованный препарат, упаковку, содержащую дискретные количества препарата, такие как пакетированные таблетки, капсулы, и порошки во флаконах или ампулах. Кроме того, единичная лекарственная форма может представлять собой капсулу, таблетку, крахмальную капсулу или таблетку для рассасывания в исходном виде, или она может представлять собой соответствующее количество любого из них в упакованной форме.

[0132] Количество активного компонента в препарате с единичной дозой можно варьировать или регулировать от 0,1 мг до 10000 мг, более часто от 1,0 мг до 1000 мг, наиболее часто от 10 мг до 500 мг, в соответствии с конкретным применением и эффективностью указанного активного компонента. При необходимости указанная композиция может также содержать другие совместимые терапевтические агенты.

[0133] При режиме дозирования также учитываются параметры фармакокинетики, хорошо известные в данной области техники, т.е., скорость абсорбции, биологическая доступность, обмен веществ, клиренс и им подобные (см., например, Hidalgo-Aragones (1996) J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 58: 611-617; Groning (1996) Pharmazie 51: 337-341; Fotherby (1996) Contraception 54: 59-69; Johnson (1995) J. Pharm. Sci. 84: 1144-1146; Rohatagi (1995) Pharmazie 50: 610-613; Brophy (1983) Eur. J. Clin. Pharmacol. 24: 103-108; последнее издание Remington's, см. выше). Современное развитие области техники позволяет клиницисту определять режим дозирования для каждого отдельного пациента, модулятора GR и подвергающегося лечению заболевания или состояния.

[0134] Одиночное или множественное введение составов можно осуществлять в зависимости от дозировки и частоты по мере необходимости и переносимости пациентом. Указанные составы должны обеспечивать достаточное количество активного агента для эффективного лечения стадии заболевания. Таким образом, в одном варианте реализации фармацевтические составы для перорального введения соединения согласно настоящему изобретению находятся в диапазоне суточного количества от приблизительно 0,5 до приблизительно 20 мг на килограмм массы тела в день. В альтернативном варианте реализации применяются дозировки от приблизительно 1 до приблизительно 4 мг на килограмм массы тела пациента в день. Можно применять более низкие дозировки, в частности тогда, когда указанное лекарственное средство вводят в анатомически труднодоступный участок, такой как пространство цереброспинальной жидкости (CSF), в отличие от перорального введения, в поток крови, в полость тела или в полость органа. Значительно более высокие дозировки можно применять при местном введении. Фактические способы получения вводимых парентерально составов будут известны или очевидны специалистам в данной области техники, и более подробно описаны в таких публикациях, как Remington's, см. выше. См. также Nieman в публикации «Receptor Mediated Antisteroid Action», Agarwal и др., Eds., De Gruyter, Нью-Йорк (1987).

[0135] Соединения, описанные в настоящем документе, можно применять в сочетании друг с другом, с другими активными агентами, которые известны как подходящие для модуляции глюкокортикоидного рецептора, или со вспомогательными агентами, которые могут быть неэффективны по отдельности, однако могут способствовать эффективности активного агента.

[0136] В некоторых вариантах реализации совместное введение включает введение одного активного агента в пределах 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20 или 24 часов от введения второго активного агента. Совместное введение включает введение двух активных агентов одновременно, приблизительно одновременно (например, в пределах приблизительно 1,5, 10, 15, 20 или 30 минут друг от друга) или последовательно в любом порядке. В других вариантах реализации совместное введение можно осуществить при помощи совместного приготовления, т.е., получения одной фармацевтической композиции, включающей оба активных агента. В другом варианте реализации указанные активные агенты можно вводить в состав по отдельности. В других вариантах реализации активные и/или вспомогательные агенты могут быть связаны или конъюгированы друг с другом.

[0137] После того, как фармацевтическую композицию, содержащую модулятор GR согласно настоящему изобретению, приготовили в подходящем носителе, ее можно поместить в соответствующую емкость и провести маркировку для лечения указанного состояния. Для введения соединений согласно настоящему изобретению такая маркировка будет включать, например, инструкции относительно количества, частоты и способа введения.

[0138] Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно получить в виде соли, и их можно образовать из многих кислот, включая, но не ограничиваясь ими, соляную, серную, уксусную, молочную, винную, яблочную, янтарную и т.д. Соли, как правило, более растворимы в водных или других протонных растворителях, которые представляют собой соответствующие формы свободного основания. В других случаях препарат может представлять собой лиофилизированный порошок в 1 мМ - 50 мМ гистидине, 0,1%-2% сахарозе, 2%-7% манните в диапазоне значений рН от 4,5 до 5,5, который смешивают с буфером перед применением.

[0139] В другом варианте реализации композиции согласно настоящему изобретению являются подходящими для парентерального введения, такого как внутривенное (в.в.) введение или введение в полость тела или просвет органа. Указанные составы для введения обычно будут содержать раствор композиций согласно настоящему изобретению, растворенных в фармацевтически приемлемом носителе. Приемлемые носители и растворители, которые могут быть использованы, представляют собой воду и раствор Рингера, изотонический хлорид натрия. Кроме того, стерильные нелетучие масла можно традиционно использовать в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для этой цели можно использовать любое мягкое нелетучее масло, включая синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, жирные кислоты, такие как олеиновая кислота, можно также применять для получения препаратов для инъекций. Эти растворы являются стерильными и в целом не содержат нежелательных веществ. Эти составы можно стерилизовать при помощи обычных хорошо известных методов стерилизации. Составы могут содержать фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, необходимые для приближения к физиологическим условиям, таких как агенты регуляции рН и буферизирующие агенты, агенты, регулирующие токсичность, например ацетат натрия, хлорид натрия, хлорид калия, хлорид кальция, лактат натрия и им подобные. Концентрация композиций согласно настоящему изобретению в этих составах может варьироваться в широких пределах и будет выбрана в основном на основе объемов жидкости, вязкости, массы тела и т.п., в соответствии с выбранным конкретным способом введения и потребностями пациента. Для в.в. введения указанный состав может представлять собой стерильный препарат для инъекций, такой как стерильная водная или масляная суспензия для инъекций. Эту суспензию можно приготовить согласно известному уровню техники с применением подходящих диспергирующих или смачивающих агентов и суспендирующих агентов. Указанный стерильный препарат для инъекций может также представлять собой стерильный раствор или суспензию для инъекций в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, таком как раствор 1,3-бутандиола.

VI. Способы лечения жировой болезни печени

[0140] В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения предложен способ лечения нарушения или состояния посредством модуляции глюкокортикоидного рецептора, причем указанный способ включает введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы I.

[0141] В некоторых других вариантах реализации настоящего изобретения предложен способ лечения нарушения или состояния через антагонизм глюкокортикоидного рецептора, причем указанный способ включает введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I.

[0142] В другом варианте реализации настоящего изобретения предложены способы модуляции активности ядерного рецептора с применением описанных в настоящем документе методов. В примере варианта реализации указанный способ включает взаимодействие GR и MR с эффективным количеством соединения согласно настоящему изобретению, такого как соединение формулы I, и обнаружение изменения в активности GR и MR.

[0143] В примере варианта реализации ядерный модулятор является антагонистом активности GR и MR. Применяемый в настоящем документе антагонист ядерного рецептора относится к любой композиции или соединению, которая частично или полностью ингибирует (антагонизирует) связывание агониста глюкокортикоидного рецептора (GR) (например, кортизола и синтетического или природного аналога кортизола) с GR, и частично или полностью ингибирует (антагонизирует) связывание агониста минералокортикоидного рецептора (MR) (например, альдостерона и синтетического или природного аналога альдостерона) с MR, тем самым ингибируя любой биологический ответ, связанный со связыванием GR и MR с указанным агонистом. В некоторых вариантах реализации антагонист ядерного рецептора предпочтительно связывается с GR и/или MR, а не с эстрогеновым рецептором (ER), прогестероновым рецептором (PR) и/или андрогенным рецептором (AR). Предпочтение антагониста ядерного рецептора в отношении GR и/или MR по сравнению с ER, PR и/или AR может составлять значение большее, чем по меньшей мере 10:1. Например, предпочтение может составлять по меньшей мере 10:1, 50:1,100:1, 500:1 или по меньшей мере 1000:1. В некоторых вариантах реализации антагонист ядерного рецептора предпочтительным образом связывается с GR и/или MR, а не с ER, PR и/или AR, со значением по меньшей мере 100:1.

[0144] В некоторых вариантах реализации антагонист ядерного рецептора согласно настоящему изобретению можно применять в сочетании с одним или более средств для лечения для уменьшения интенсивности или уменьшения одного или более симптомов жировой болезни печени. Ядерный антагонист можно вводить пациенту с жировой болезнью печени, у которого происходят или происходили изменения образа жизни, такие как адаптация к режиму потери веса или ограничению калорийности, повышенная физическая активность и/или избегание алкоголя или гептатоксинов. Указанный пациент может подвергаться или мог подвергаться операции по снижению веса (бариатрическая хирургия). В некоторых вариантах реализации специфичный антагонист глюкокортикоидного рецептора вводят индивидууму в сочетании с терапевтическим агентом, таким как, но не органичиваясь ими, пропилтиоурацил, инфликсимаб, инсулин, глюкагон, блокаторы кальциевых каналов, антиоксиданты (например, витамин Е), S-аденозил-L-метионин (SAMe), силимарин и пентоксифиллин для лечения связанной с алкоголем жировой болезни печени, включая AFL и ASH. В других вариантах реализации специфичный антагонист глюкокортикоидного рецептора вводят индивидууму с терапевтическим агентом, таким как, но не ограничиваясь ими, ингибитор обратного захвата серотонина, сибутрамин, орлистат, агент, чувствительный к инсулину (например, тиазолидиндион, розиглитазон и пиоглитазон), агент, понижающий количество липидов (например, пробукол), антиоксиданты (например, витамин Е, пентоксифиллин, бетаин и N-ацетилцистеин), гепатопротекторный препарат (например, урсодезоксихолевая кислота), ингибитор ангиотензинпревращающего фермента, блокатор ангиотензинового рецептора, метформин, мононенасыщенные жирные кислоты, полиненасыщенные жирные кислоты и их комбинации для лечения неалкогольной жировой болезни печени, включая NASH.

VII. Анализы и способы исследований соединений для лечения жировой болезни печени

[0145] Соединения согласно настоящему изобретению можно исследовать на их антиглюкокортикоидные свойства. В настоящем документе представлены способы осуществления анализа соединений, способных модулировать активность глюкокортикоидных рецепторов. Как правило, соединения согласно настоящему изобретению способны к модуляции активности ядерного рецептора посредством связывания с ядерными рецепторами, такими как GR и MR, или посредством предотвращения связывания GR- и MR-лигандов с соответствующими GR и MR. В некоторых вариантах реализации указанные соединения оказывают слабое или вообще не оказывают цитотоксического воздействия.

А. Анализы связывания

[0146] В некоторых вариантах реализации модуляторы ядерных рецепторов идентифицируют путем скрининга на молекулы, которые конкурируют с лигандом ядерного рецептора, таким как дексаметазон. Специалисты в данной области техники поймут, что существует множество способов проведения анализов конкурентного связывания. В некоторых вариантах реализации ядерный рецептор предварительно инкубируют с меченым лигандом ядерного рецептора и затем осуществляют взаимодействие с исследуемым соединением. Этот тип конкурентного анализа связывания в настоящем документе может также упоминаться как анализ смещения связывания. Изменение (например, уменьшение) количества лиганда, связанного с ядерным рецептором, указывает на то, что молекула представляет собой потенциальный модулятор ядерного рецептора. Альтернативным образом, связывание исследуемого соединения с ядерным рецептором можно непосредственно измерять при помощи меченого исследуемого соединения. Этот последний вид анализа называется анализом прямого связывания.

[0147] Анализ прямого связывания и анализ конкурентного связывания можно применять в многообразии различных форматов. Форматы могут быть аналогичны тем, которые применяют в иммуноанализе и анализе связывания рецепторов. Для описания различных форматов анализов связывания, в том числе анализов конкурентного связывания и анализов прямого связывания, см. Basic and Clinical Immunology 7^th Edition (D. Stites и A. Terr ed.) 1991; Enzyme Immunoassay, E.T. Maggio, ed., CRC Press, Boca Raton, Флорида (1980) и «Practice and Theory of Enzyme Immunoassays», P. Tijssen, Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, Elsevier Science Publishers B.V. Амстердам (1985), каждая из которых включена в настоящую заявку посредством ссылки.

[0148] В анализах конкурентного связывания на твердой фазе, например, образец соединения может конкурировать с меченым анализируемым веществом для специфичных сайтов связывания на связывающем агенте, связанном с твердой поверхностью. При данном типе формата указанное меченое анализируемое вещество может представлять собой лиганд ядерного рецептора, а связывающий агент может представлять собой ядерный рецептор, связанный с твердой фазой. Альтернативным образом, указанное меченое анализируемое вещество может представлять собой меченый ядерный рецептор, а связывающий агент может быть лигандом ядерного рецептора твердой фазы. Концентрация меченого анализируемого вещества, связанного с агентом захвата, обратно пропорциональна способности исследуемого соединения конкурировать в анализе связывания.

[0149] Альтернативным образом, анализ конкурентного связывания можно проводить в жидкой фазе, и любой из множества методов, известных в данной области техники, можно применять для отделения связанного меченого белка от несвязанного меченого белка. Например, было разработано несколько процедур для отличия связанного лиганда от избыточного связанного лиганда или связанного исследуемого соединения от избыточного несвязанного исследуемого соединения. Процедуры включают идентификацию связанного комплекса при помощи седиментации в градиентах сахарозы, гель-электрофореза или гель-изоэлектрической фокусировки; осаждение комплекса рецептор-лиганд с протаминсульфатом или адсорбцию на гидроксилапатите и удаление несвязанных соединений или лигандов посредством адсорбции на покрытом декстраном древесном угле (DCC) или связывания с иммобилизованным антителом. После разделения определяют количество связанного лиганда или исследуемого соединения.

[0150] Альтернативным образом, можно провести анализ гомогенного связывания, при котором этап разделения не требуется. Например, метка на ядерном рецепторе может быть изменена путем связывания ядерного рецептора с его лигандом или исследуемым соединением. Это изменение меченого ядерного рецептора приводит к уменьшению или увеличению сигнала, испускаемого меткой, так что измерение метки в конце анализа связывания позволяет обнаружить или количественно определить ядерный рецептор в связанном состоянии. Можно применять широкое разнообразие меток. Указанный компонент можно пометить при помощи любого из нескольких способов. Подходящими радиоактивными метками являются те, которые включают ³Н, ¹²⁵I, ³⁵S, ¹⁴С или ³²Р. Подходящими нерадиоактивными метками являются те, которые включают флуорофоры, хемилюминесцентные агенты, фосфоресцирующие агенты, электрохемилюминесцентные агенты и им подобные. Флуоресцентные являются особенно подходящими для применения в аналитических методах, которые применяют для обнаружения сдвигов в структуре белка, таких как анизотропия флуоресценции и/или поляризация флуоресценции. Выбор метки зависит от требуемой чувствительности, простоты конъюгации с соединением, требований к стабильности и доступных технических средств. Для обзора различных систем маркировки или образования сигналов, которые можно применять, см. Патент США №4391904, который полностью включен в настоящую заявку посредством ссылки для всех целей. Метку можно непосредственным или косвенным образом связать с желаемым компонентом анализа согласно способам, хорошо известным в данной области техники.

[0151] Способы высокопроизводительного скрининга можно применять для анализа большого числа потенциальных соединений для модуляции. Такие «библиотеки соединений» затем подвергают скринингу в одном или более анализах, описанных в настоящем документе, для идентификации тех членов библиотеки (конкретных химических видов или подклассов), которые демонстрируют желаемую характеристическую активность. Получение и скрининг химических библиотек хорошо известны специалистам в данной области техники. Устройства для получения химических библиотек коммерчески доступны (см., например, 357 MPS, 390 MPS, Advanced Chem. Tech., Louisville KY, Symphony, Rainin, Вобурн, Массачусетс, 433A Applied Biosystems, Фостер Сити, Калифорния, 9050 Plus, Millipore, Бедфорд, Массачусетс).

В. Клеточные анализы

[0152] Клеточные анализы включают в себя цельные клетки или клеточные фракции, содержащие ядерный рецептор, для анализа связывания или модуляции активности ядерного рецептора при помощи соединения согласно настоящему изобретению. Примеры типов клеток, которые можно применять согласно способов настоящего изобретения, включают, например, любые клетки млекопитающих, включая лейкоциты, такие как нейтрофилы, моноциты, макрофаги, эозинофилы, базофилы, тучные клетки и лимфоциты, такие как Т-клетки и В-клетки, лейкоза, лимфомы Буркитта (Burkitt), опухолевые клетки (включая клетки опухоли молочной железы мыши, вызванной вирусом), клетки эндотелия, фибробластов, клетки сердца, клетки мышц, клетки опухоли молочной железы, карциномы рака яичников, карциномы шейки матки, глиобластомы, клетки печени, клетки почек и нейрональные клетки, а также клетки грибов, включая дрожжи. Клетки могут быть первичными клетками или опухолевыми клетками или другими типами бессмертных линий клеток. Конечно, экспрессия ядерного рецептора может осуществляться в клетках, которые не экспрессируют эндогенный вариант ядерного рецептора.

[0153] В некоторых случаях для скрининга можно применять фрагменты ядерного рецептора, а также белки слияния. Когда желательны молекулы, которые конкурируют за связывание с лигандами ядерных рецепторов, применяемые фрагменты ядерного рецептора представляют собой фрагменты, способные к связыванию лигандов (например, дексаметазон). Альтернативным образом, любой фрагмент ядерного рецептора можно применять в качестве мишени для идентификации молекул, которые связывают ядерный рецептор. Фрагменты ядерного рецептора могут включать любой фрагмент, например, по меньшей мере 20, 30, 40, 50 аминокислот вплоть до белка, содержащего все, за исключением одной аминокислоты ядерного рецептора. Как правило, лигандсвязывающие фрагменты будут содержать трансмембранные области и/или большинство или все внеклеточные домены ядерного рецептора.

[0154] В некоторых вариантах реализации для идентификации модуляторов ядерных рецепторов применяют передачу сигнала, запускаемую путем активации ядерного рецептора. Сигнальную активность ядерного рецептора можно определить многими способами. Например, можно отслеживать последующие молекулярные события для определения активности передачи сигнала. Последующие события включают те виды деятельности или проявления, которые происходят в результате стимулирования ядерного рецептора. Примеры последующих событий, подходящих для функциональной оценки активации транскрипции и антагонизма в неизмененных клетках, включают повышающую регуляцию ряда генов, зависимых от элементов ответа (RE) (PEPCK, тирозинаминотрансфераза, ароматаза). Кроме того, можно применять специфичные типы клеток, которые чувствительны к активации ядерного рецептора, такой как экспрессия остеокальцина в остеобластах, которую понижающе регулируют глюкокортикоиды; первичные гепатоциты, которые проявляют опосредованную ядерным рецептором повышающую регуляцию РЕРСK и глюкозо-6-фосфата (G-6-Pase). Экспрессия RE-опосредованного гена также была продемонстрирована в трансфицированных линиях клеток с применением хорошо известных RE-регулируемых последовательностей (например, промотор вируса опухоли молочной железы мыши (MMTV), трансфицированный против хода транскрипции конструкцией репортерного гена). Примеры подходящих конструкций репортерного гена включают люциферазу (luc), щелочную фосфатазу (ALP) и хлорамфениколацетилтрансферазу (CAT). Функциональную оценку транскрипционной репрессии можно осуществить в линиях клеток, таких как моноциты или фибробласты кожи человека. Подходящие функциональные анализы включают те, в которых измеряют экспрессию ИЛ-6, стимулированную ИЛ-1 бета; понижающую регуляцию коллагеназы, циклооксигеназы-2 и различных хемокинов (МСР-1, RANTES) или экспрессию генов, регулируемых факторами транскрипции NF-κВ или АР-1 в трансфицированных линиях клеток.

[0155] Как правило, соединения, которые исследуют в анализах с применением цельных клеток, также исследуют в анализе на определение цитотоксичности. Анализы на определение цитотоксичности применяют для определения степени, до которой воспринимаемый модулирующий эффект обусловлен клеточными эффектами связывания неядерного рецептора. В примере варианте реализации анализ на определение цитотоксичности включает взаимодействие конститутивно активной клетки с исследуемым соединением. Любое снижение клеточной активности указывает на цитотоксический эффект.

С. Специфичность

[0156] Соединения согласно настоящему изобретению могут быть подвергнуты анализу на определение специфичности (в настоящем документе также упоминаемому как анализ на селективность). Как правило, анализы на определение специфичности включают исследование соединения, которое связывает ядерный рецептор in vitro или в клеточном анализе, на степень связывания с неядерными рецепторными белками. Анализы на определение селективности можно проводить in vitro или в системах на основе клеток, описанных выше. Связывание с ядерным рецептором можно исследовать в отношении любого подходящего неядерного рецепторного белка, включая антитела, рецепторы, ферменты и им подобные. В примере варианта реализации неядерный рецептор-связывающий белок представляет собой рецептор клеточной поверхности или ядерный рецептор. В другом примере варианта реализации неядерный рецепторный белок представляет собой стероидный рецептор, такой как эстрогеновый рецептор, прогестероновый рецептор или андрогенный рецептор.

[0157] Термины и выражения, которые были использованы в настоящем документе, применяются в качестве терминов описания, а не ограничений, и при использовании таких терминов и выражений не подразумеваются исключающие эквиваленты представленных и описанных отличительных признаков или их частей, при этом признается то, что в объеме заявленного изобретения возможны различные модификации. Кроме того, любой один или более отличительных признаков любого варианта реализации настоящего изобретения можно объединить с любым одним или более другими отличительными признаками любого другого варианта реализации настоящего изобретения в пределах объема настоящего изобретения. Например, отличительные признаки соединений для модуляции ядерного рецептора одинаково применимы к способам лечения стадий заболевания и/или фармацевтическим композициям, описанным в настоящем документе. Все публикации, патенты и патентные заявки, приведенные в настоящем документе, полностью включены в настоящую заявку посредством ссылки для всех целей.

VIII. Примеры

Пример 1. Анализ репортерного гена GR с применением клеток SW1353/MMTV-5

[0158] SW1353/MMTV-5 представляет собой линию адгезивных клеток хондросаркомы человека, которая содержит эндогенные глюкокортикоидные рецепторы. Ее трансфицировали плазмидой (pMAMneo-Luc), кодирующей люциферазу светлячков, расположенной за чувствительным к глюкокортикоиду элементом (GRE), полученным из вирусного промотора (длинный концевой повтор вируса опухоли молочной железы мыши). Стабильную линию клеток SW1353/MMTV-5 отобрали с применением генетицина, который требовался для поддержания данной плазмиды. Таким образом, эта линия клеток была чувствительна к глюкокортикоидам (дексаметазону), что приводило к экспрессии люциферазы (EC₅₀^dex 10 нМ). Этот индуцированный дексаметазоном ответ постепенно исчезал с течением времени, и каждые три месяца начинали выращивание новой культуры, полученной из более раннего пассажа (из аликвоты, хранимой в низкотемпературных условиях).

[0159] В целях исследования GR-антагониста, такого как Соединение 1, клетки SW1353/MMTV-5 инкубировали с несколькими разведениями указанных соединений в присутствии 5xEC₅₀^dex (50 нМ) и измеряли ингибирование индуцированной люциферазой экспрессии, применяя люминесценцию, обнаруживаемую на Topcount (комплект Britelite Plus, Perking Elmer). Для каждого анализа получали кривую доза-ответ для дексаметазона, чтобы определить EC₅₀^dex, необходимый для вычисления K_i по значению IC₅₀ исследуемого соединения, например, Соединения 1.

[0160] Клетки SW1353/MMTV-5 распределяли по 96-луночным планшетам и инкубировали в среде (без генетицина) в течение 24 часов. Добавляли разведения указанного исследуемого соединения в среде + 50 нМ дексаметазона, и планшеты дополнительно инкубировали еще в течение 24 часов, после чего измеряли экспрессию люциферазы.

[0161] Соединение 1 названо (Е)-6-(4-фенилциклогексил)-5-(3-трифторметилбензил)-1Н-пиримидин-2,4-дион или 6-((1r,4r)-4-фенил-циклогексил)-5-(3-(трифторметил)бензил)пиримидин-2,4(1H,3Н)-дион, и обладает химической структурой, представленной ниже.

.

[0162] Соединение 1 является антагонистом глюкокортикоидного рецептора (GR II). В анализах репортерного гена Соединение 1 обладает значением K_i 24 нМ для GR.

Пример 2. Анализы репортерного гена MR и PR с применением клеток T47D/MMTV-5

[0163] T47D/MMTV-5 представляет собой линию адгезивных клеток карциномы молочной железы человека, содержащую эндогенные минералокортикоидные и прогестероновые рецепторы (PR). Как описано выше для линии клеток SW1353, клетки T47D трансфицировали одной и той же плазмидой pMAMneo-Luc, и стабильные линии отбирали с применением генетицина. Выделяли линию клеток T47D/MMTV-5, которая отвечала на альдостерон (ЕС₅₀ 100 нМ) и прогестерон (ЕС₅₀ 10 нМ), что приводило к экспрессии люциферазы. Для исследования антагонистов MR или PR клетки T47D/MMTV-5 инкубировали с несколькими разведениями указанных соединений в присутствии 5-кратного значения ЕС₅₀ агониста альдостерона или прогестерона. Для каждого анализа получали кривую зависимости доза-ответ как для альдостерона, так и прогестерона.

[0164] Клетки T47D/MMTV-5 распределяли по 96-луночным планшетам (100 мкл) в среде RPMI640 + 10% древесного угля, лишенной FCS. Клетки инкубировали в течение 24 часов в печи с СО₂. В среду добавляли разведения соединения в объем 100 мкл + агонист (500 нМ альдостерона, 50 нМ прогестерона), и планшеты инкубировали еще в течение 24 часов, после чего измеряли экспрессию люциферазы.

[0165] Соединение 1 представляет собой антагониста минералокортикоидного рецептора (MR, GR). В анализах репортерного гена Соединение 1 обладает значением K_i 148 нм для MR. Соединение 1 неактивно при анализе репортерного гена прогестеронового рецептора.

Пример 3. Определение липидов в печени у мышей, получавших питание с высоким содержанием жиров

[0166] Мыши C57B16/J (n=8 в группе) получали питание с высоким содержанием жиров (60% жира) в течение трех недель, затем их умерщвляли. Печень собирали и взвешивали. Кусочки печени получали и анализировали на определение уровней липидов при помощи окрашивания Oil Red О (Фигуры 1 и 3). Одна группа мышей получала Соединение 1, которое смешивали с пищей (60 мг/кг/день), в то время как другая группа мышей получала среду-носитель, смешанную с пищей. Печень мышей, получавших с питанием Соединение 1, не содержала или содержала низкий уровень липидных капелек (Фигура 2А), тогда как контрольные мыши обладали большим количеством липидных капелек (Фигура 2В). Дополнительная группа получала с пищей мифепристон (RU-486; 60 мг/кг/день). Соединение 1 обладает активностью антагониста GR и некоторой активностью антагониста MR. Данные показывают, что мифепристон вызывал увеличенную жировую дистрофию печени по сравнению с контролем. Соединение 1 обладало противоположным эффектом и не индуцировало жировую дистрофию печени.

[0167] В отдельном эксперименте (Фигура 4) накопление жира в печени мышей, которые получали питание с высоким содержанием жиров (60% жира), а затем были умерщвлены, определяли при помощи гомогенизации печени и экстрагирования триглицеридов. Этот эксперимент включал 5 групп мышей:

Группа 1 («CHOW»): нормальное питание в течение 6 недель;

Группа 2 («HF-3wks»): питание с высоким содержанием жиров в течение 3 недель;

Группа 3 («HF-6wks»): питание с высоким содержанием жиров в течение 6 недель;

Группа 4 («HF + 118335-6wks»): питание с высоким содержанием жиров и Соединение 1 в течение 6 недель;

Группа 5 («HF-118335 rev»): питание с высоким содержанием жиров в течение 3 недель с последующим питанием с высоким содержанием жиров и Соединением 1 в течение 3 недель.

Пример 4. Анализ взаимодействия GR-белок: белок

[0168] Анализы белок-белкового взаимодействия применяли для определения способности исследуемых соединений действовать в качестве антагонистов глюкокортикоидного рецептора и/или минералокортикоидного рецептора. В этих анализах используют коммерческую платформу для проведения анализа, предоставленную DiscoveRx Corp. (Фремонт, Калифорния). Технология DiscoveRx основана на комплементации фрагмента фермента β-галактозидазы с применением люминогенного субстрата. Вкратце, клетки яичника китайского хомячка (СНО-K1) конструировали для экспрессии либо рекомбинантного GR человека, либо MR совместно со стероид-чувствительным белком-коактиватором (SRCP), называемым PGC1α (коактиватор 1α рецептора, активируемого пролифераторами пероксисом, гамма). В анализе измеряют чистый результат активации GR или MR, т.е., ядерную транслокацию из цитоплазмы, и взаимодействие GR или MR с коактиватором PGC1α в ядрах клеток. Конфигурация анализа может быть как в режиме агониста, так и антагониста.

[0169] Клетки (100 мл) помещали в 96-луночные планшеты и размещали в инкубаторе при 37°С, 5% СО₂ в течение 24 часов. После удаления клеток из инкубатора в каждую лунку добавляли 5 мкл исследуемого соединения или среды-носителя, и планшеты инкубировали в течение 1 часа при 37°С, 5% СО₂. В каждую лунку планшета добавляли дексаметазон (5 мкл 792 нМ раствора) или среду-носитель, и планшеты инкубировали в течение 6 часов при 37°С, 5% СО₂. Добавляли реагент для обнаружения в количестве 55 мкл на лунку, и планшеты инкубировали при комнатной температуре в темноте без смешивания. Чтение планшетов для определения люминесценции осуществляли при помощи планшета-ридера EnVision® (прочтение в течение 3 часов). Значения люминесценции выражали как процент ингибирования (% ингибирования) 36 нМ дексаметазона, а значения K_i рассчитывали по экспериментально определенным значениям IC₅₀ с использованием уравнения Ченга-Прусова. Было установлено, что в этом анализе значение K_i для Соединения 1 составляет 118 нМ.

Пример 5. Анализ взаимодействия MR-белок: белок

[0170] Клетки (100 мл) помещали в 96-луночные планшеты и размещали в инкубаторе при 37°С, 5% СО₂ в течение 24 часов. После удаления клеток из инкубатора в каждую лунку добавляли 5 мкл исследуемого соединения или среды-носителя, и планшеты инкубировали в течение 1 часа при 37°С, 5% СО₂. В каждую лунку планшета добавляли альдостерон (5 мл 88 нМ раствора) или среду-носитель, и планшеты инкубировали в течение 6 часов при 37°С, 5% СО₂. Добавляли реагент для обнаружения в количестве 55 мкл на лунку, и планшеты инкубировали при комнатной температуре в темноте без смешивания. Чтение планшетов для определения люминесценции осуществляли при помощи планшета-ридера En Vision® (Perkin Elmer, Уолтем, Массачусетс) (прочтение в течение 3 часов). Значения люминесценции выражали как процент ингибирования (% ингибирования) 4 нМ альдостерона, а значения K_i рассчитывали по экспериментально определенным значениям IC₅₀ с использованием уравнения Ченга-Прусова. Было установлено, что в этом анализе значение K_i для Соединения 1 составляет 125 нМ.

[0171] Хотя вышеприведенное изобретение более подробно было описано при помощи иллюстрации и примера для ясности понимания, специалист в данной области техники поймет, что определенные изменения и модификации могут быть реализованы в рамках прилагаемой формулы изобретения. Кроме того, каждая ссылка, представленная в настоящем документе, в такой же степени в полном объеме включена посредством ссылки, как если бы каждая ссылка была индивидуально включена посредством ссылки. В случае разночтений между заявкой, рассматриваемой в данный момент, и ссылкой, приведенной в настоящем документе, заявка, рассматриваемая в данный момент, будет иметь решающее значение.