Метод изготовления микропрепаратов

Изобретение относится к области ветеринарно-санитарной экспертизы, контроля качества и термического состояния мяса животных и птицы.

В настоящее время для идентификации охлажденного и дефростированного мяса применяется гистологический метод исследования образцов, включающий процедуры обезвоживания материала, изготовление срезов тканей с использованием санных или замораживающих микротомов, окраской препаратов и последующей микроскопии с целью обнаружения механических повреждений структуры мышечных волокон, характерных для сырья ранее замороженного в соответствии с ГОСТ 19496-2013 «Мясо и мясные продукты. Метод гистологического исследования», ГОСТ 31931-2012 «Мясо птицы. Методы гистологического и микроскопического анализа». (ГОСТ 19496-2013 «Мясо и мясные продукты. Метод гистологического исследования» - М.: Стандартинформ, 2014-12 с; ГОСТ 31931-2012 «Мясо птицы. Методы гистологического и микроскопического анализа» - М.: Стандартинформ, 2013-9 с).

Недостатками данного метода являются большие затраты времени (полный анализ осуществляется в течецие 30 дней), необходимость специализированного дорогостоящего оборудования и расходных материалов к нему, высокой квалификации персонала, поэтому гистологический метод анализа мяса доступен только в крупных аккредитованных лабораториях.

Данный метод выбран в качестве прототипа стандартизированной методики подготовки микропрепаратов мяса, включающий в себя фиксацию и длительное обезвоживание мышечной ткани, изготовление тончайших срезов с помощью микротома, и может быть использован в лабораториях ветеринарно-санитарной экспертизы на^∧ продовольственных рынках, производственных лабораториях.

Техническим результатом является создание экспресс-метода, позволяющего при предложенном способе изготовить микропрепараты мышечной ткани, по структуре которых установить термическое состояние мяса животных и птицы.

Технический результат достигается за счет того, что экспресс-метод изготовления микропрепаратов для идентификации, охлажденного и дефростированного мяса убойных животных и птицы путем микроскопии структурного строения мышечных волокон из исследуемого образца мяса вырезают продольные срезы, раздавливают их между стеклами компрессориума, после чего их окрашивают и оценивают термическое состояние мяса по наличию механических повреждений мышечных волокон.

Экспресс-метод изготовления микропрепаратов мышечной ткани включает в себя следующие операции:

1. Для изготовления мышечного среза потребуется образец исследуемого мяса 15-20 грамм. Кусочек мяса необходимо удерживать пинцетом. Под контролем зрения в образце находят направление мышечных волокон и по этому направлению изогнутыми ножницами выпуклой стороной кнаружи делают срез толщиной 2-3 мм и длиной 8-10 мм.

2. Полученные срезы в количестве 5-7 штук раскладывают на нижнем стекле компрессориума так, чтобы расстояние между ними составляло не менее 1 см., накрывают верхним стеклом, которое насколько это возможно не прижимая, притягивают на себя, далее сильно сжимают стекла, друг к другу и с усилием продвигают верхнее стекло от себя, после чего скрепляют стекла винтами. В результате движения с одновременным нажатием мышечная ткань раздавливается, а при сжатии винтами - фиксируется в таком положении.

3. Далее необходимо ослабить и раскрутить винты компрессориума и с помощью препаровальных игл снять раздавленные мышечные срезы в фарфоровую чашку, где произвести их окраску известными методами гематоксилин-эозином и смесью красителей раствора метиленового синего и эозина.

4. После окраски при помощи препаровальных игл мышечные срезы по одному помещают на предметные стекла, разравнивают, наносят 1-2 капли 50% водного раствора глицерина, накрывают покровным стеклом, слегка придавливая его препаровальными иглами. Подготовленный микропрепарат мышечной ткани рассматривают под увеличением окуляра 7 и 10, объектива - 8 и 40 светового микроскопа и оценивают наличие микроповреждений мышечных волокон, характерных для дефростированного мяса. Структура мышечных волокон охлажденного мяса, не подвергшегося замораживанию, не нарушена и целостная. (Рогов И.А., Забашта А.Г., Казюлин Г.П. «Технология мяса и мясных продуктов. Книга 1. Общая технология мяса» - М.: КолосС, 2009- стр. 565 (стр. 216-223)).

Пример 1. Из образца охлажденной говядины отбирают пробу массой 20 грамм, зафиксировав ее пинцетом. Изогнутыми ножницами, направляя их лезвия выпуклой стороной наружу, девают 5 тонких срезов по ходу мышечных волокон размером 1 см длиной и 2 мм толщиной. Далее раскладывают их при помощи препаровальных игл на нижнем стекле компрессориума с промежутками между ними не менее 1 см. Аккуратно накрывают срезы верхним стеклом, отводя его относительно нижнего стекла максимально на себя, прижимают стекла с усилием друг к другу и сдвигают их в обратном направлении, сохраняя сжатие до исходного положения. Стекла фиксируют винтами, тем самым придавая мышечным срезам тонкую необходимую конфигурацию, доступную для просмотра структуры мышц в световом луче микроскопа.

Далее раскручивают винты, осторожно препаровальными иглами снимают раздавленные срезы и помещают их на дно фарфоровой чашки, после чего подвергают их окраске их гематоксилин-эозином. Сначала в фарфоровую чашку со срезами добавляют 3-4 капли квасцового гематоксилина Эрлиха и выдерживают окраску им в течение 3-4 минут. Далее промывают срезы в воде в течение 2 минут до обесцвечивания смываемой воды и для наиболее полного удаления гематоксилина срезы опускают в 1% раствор соляной кислоты до появления слабо-розовой окраски, затем помещают их в 1% раствор аммиака до синего окрашивания жидкости и промывают водой в течение 2 мин. Затем мышечные срезы обрабатывают 1% водно-спиртовым раствором эозина в течение 1 мин и вновь промывают водой.

После этого окрашенные срезы при помощи препаровальных игл, разравнивая, по одному помещают на предметное стекло, на срезы добавляют по 1 капле 50% водного раствора глицерина и фиксируют мышечную ткань, покровным стеклом слегка придавливая его. Подготовленный таким образом микропрепарат доступен для микроскопии и оценки структуры элементов мышечных волокон.

Пример 2. Образец замороженного мяса птицы дефростируют при комнатной температуре. После размораживания отбирают пробу массой 20 грамм, зафиксировав ее пинцетом. Изогнутыми ножницами, направляя их лезвия выпуклой стороной наружу, делают 5 тонких срезов по ходу мышечных волокон размером 1 см длиной и 2 мм толщиной. Далее раскладывают их при помощи препаровальных игл на нижнем стекле компрессориума с промежутками между ними не менее 1 см. Аккуратно накрывают срезы верхним стеклом, отводя его относительно нижнего стекла, максимально на себя, прижимают стекла с усилием друг к другу и сдвигают их в обратном направлении, сохраняя сжатие до исходного положения. Стекла фиксируют винтами, тем самым придавая мышечным срезам тонкую необходимую конфигурацию, доступную для просмотра структуры мышц в световом луче микроскопа.

Далее раскручивают винты, осторожно препаровальными иглами снимают раздавленные срезы и помещают их на дно фарфоровой чашки, после чего подвергают их окраске смесью красителей, состоящей из 1% спиртового раствора метиленового синего, 1% спиртового раствора эозина и водного раствора метиленового синего с бурой в течение 30 минут, после чего промывают водой до обесцвечивания смываемой жидкости.

После этого окрашенные срезы при помощи препаровальных игл, разравнивая, по одному помещают на предметное стекло, на срезы добавляют по 1 капле 50% водного раствора глицерина и фиксируют мышечную ткань, покровным стеклом слегка придавливая его. Подготовленный таким образом микропрепарат доступен для микроскопии и оценки структуры элементов мышечных волокон.

Предложенный экспресс-метод изготовления микропрепаратов для идентификации, охлажденного и дефростированного мяса убойных животных и птицы позволяет в кратчайшие сроки изготовить нативные препараты мышечной ткани с целью оценки термического состояния мяса по наличию механических повреждений мышечных волокон.