Способ определения степени тяжести преэклампсии по относительному содержанию CD16+ моноцитов в периферической крови беременных

Изобретение относится к медицине, в частности к акушерству и гинекологии и предназначено для определения степени тяжести преэклампсии по относительному содержанию CD16+ моноцитов в периферической крови беременных. Данный метод может быть использован на различных гестационных сроках после манифестации клинических признаков преэклампсии. Определение степени тяжести осуществляют с помощью проточной цитофлуориметрии. Определение степени тяжести преэклампсии позволяет своевременно провести комплекс профилактических и лечебных мероприятий, что способствует снижению частоты акушерских и перинатальных осложнений.

Преэклампсия (ПЭ) - это осложнение беременности, развивающееся как правило после 20 недели гестации и характеризующееся повышением артериального давления (выше 140 и/или 90 мм рт. ст.) протеинурией и нередко отеками. ПЭ встречается в 2-8% беременностей, является одной из важнейших причин материнской и перинатальной заболеваемости и смертности и за последние 10 лет не имеет тенденции к снижению. Отмечается, что материнская смертность в 12 раз выше при развитии ПЭ до 28 недель беременности. [1, 2, 3]. ПЭ влияет на отдаленные последствия, как для матери, так и для плода. Опасность этого осложнения заключается в том, что оно не излечивается полностью после завершения беременности. У женщин, перенесших ПЭ, повышен риск развития гипертензии, диабета, ишемической болезни сердца, инсульта и даже онкологических заболеваний. При тяжелых формах ПЭ часто наблюдается задержка роста плода и другие осложнения, что требует досрочного родоразрешения. Дети, рожденные у матерей с ПЭ, более предрасположены к гипертензии, инсультам, сахарному диабету, метаболическим нарушениям, неврологическим и психическим расстройствам. [4]. Высокая частота материнской и перинатальной заболеваемости и смертности при тяжелых формах преэклампсии связана с несовершенством способов оценки степени тяжести преэклампсии, что проявляется недооценкой истинного состояния компенсаторных возможностей, несвоевременным родоразрешением и соответственно тяжелыми последствиями для матери и плода. На сегодняшний день доказано, что в случае пролонгирования беременности на срок равный или более 48 часов, возможно проведение полного курса профилактики респираторного дистресс-синдрома (РДС) плода, а также токолитической терапии, что по данным современной литературы позволяет улучшить перинатальные исходы на 5-7%. [5, 6]. Таким образом, объективная оценка степени тяжести преэклампсии является актуальной задачей, которая способствует снижению частоты неблагоприятных материнских и перинатальных исходов.

В литературе описано множество факторов риска развития ПЭ, а этиопатогенетические механизмы сложны и недостаточно изучены. В настоящее время ведущей теорией развития ПЭ является иммунологическая теория, объясняющая ПЭ попаданием антигенов ребенка в кровоток матери. Предполагается, что ключевую роль в этом процессе играют моноциты, которые активируются под воздействием антигенов и участвуют в сложных процессах иммунной дезадаптации при развитии ПЭ. [7, 8, 9].

В изученной научно-медицинской и доступной патентной литературе не обнаружено способа прогнозирования тяжести ПЭ на основании определения относительного содержание CD16+ в периферической крови.

Было проведено исследование относительного содержания CD16+ моноцитов в периферической крови женщин с преэклампсией различной степени тяжести. В исследование было включено 40 беременных женщин, из них 28 женщин с умеренной и 12 с тяжелой преэклампсией.

При помощи ROC-анализа было определено значение относительного содержания CD16+ моноцитов в периферической крови женщин выше или равно которого у пациентов диагностируют тяжелую преэклампсию, а ниже умеренную. Данное значение относительного содержания CD16+ моноцитов в периферической крови женщин составляет 73,5%. Площадь под ROC-кривой составила 0,86, что характеризует качество полученной модели, как очень хорошее. Чувствительность метода - 83,3%. Специфичность метода - 100%. ROC анализ был проведен с помощью SPSS STATISTICS 17.

Способ определения степени тяжести осуществляют следующим образом:

К 50 мкл периферической крови с ЭДТА добавляют 5 мкл коктейля из антител против CD16+ и HLA-DR меченных FITC и АРС соответственно («Becman Coulter», USA). Инкубацию с антителами проводят в течение 15 минут при комнатной температуре. Далее к образцам добавляют 1 мл лизирующий эритроциты буфер и инкубируют 10 минут при комнатной температуре. Анализ осуществляют на проточном цитофлуориметре («BD FACSCalibur», USA). HLA-DR используют как моноцитарный маркер. Относительное содержание CD16+ в периферической крови используют для определения степени тяжести преэклампсии.

Техническим результатом патентуемого способа является: расширение арсенала средств определения степени тяжести преэклампсии, а также соответствие патентуемого способа определения степени тяжести преэклампсии современной классификации гипертензивных расстройств во время беременности.

Заявляемый технический результат достигается тем, что у беременных женщин на различных гестационных сроках после манифестации клинических признаков преэклампсии в периферической венозной крови определяют показатель относительного содержания CD16+ моноцитов и при его значении, равном или более 73,5%, диагностируют тяжелую преэклампсию, а при равном или менее 73,5% - умеренную.

Новизна заявляемого способа: впервые предлагается диагностировать тяжелую преэклампсию у беременных по определению в периферической венозной крови беременной женщины относительного содержания CD16+ моноцитов с высокой чувствительностью и специфичностью.

Предложены способы диагностики тяжести преэклампсии:

Способ диагностики преэклампсии путем определения уровня альфа-амилазы в сыворотке крови количественным методом. (RU 2426129 С1, Гребенкин Б.Е. и др., 10.08.2011).

Недостатки метода: возможность получения высоких значений альфа-амилазы и, следовательно, ложноположительного результата при наличии заболеваний поджелудочной железы. Кроме того, отсутствуют данные о точности, специфичности и чувствительности данного способа.

Способ диагностики тяжелой преэклампсии путем определения уровня гомоцистеина в плазме венозной крови. (RU 2259568 С2, Сухих Г.Т. и др., 27.08.2005).

Недостатки метода: гомоцистеин не является специфическим маркером преэклампсии, его уровень может повышаться при различных состояниях.

Способ диагностики тяжелой преэклампсии на основе определения концентрации гормонов лептина и грелина в венозной крови методом иммуноферментного анализа. (RU 2476880 С1, Шкурат Т.П. и др., 27.02.2013).

Недостатки метода: повышение уровня лептина может быть ассоциировано с наличием ожирения, метаболического синдрома, сахарного диабета и эссенциальной артериальной гипертензии, что может способствовать гипердиагностике преэклампсии.

Способ оценки тяжести преэклампсии у беременных путем определения в сыворотке крови беременных женщин содержание циркулирующего иммунного комплекса, основного белка миелина с иммуноглобулином класса G в сроки беременности после 20 недели. (RU 2250468 С2, Левченко В.Г. и др., 20.04.2005).

Недостатки метода: данный способ не учитывает современные диагностические критерии, на основании которых определяется степень тяжести преэклампсии.

Наиболее близким по техническому решению к заявляемому способу является способ определения относительного содержания CD62L+ клеток в популяции нейтрофилов. При значении, равном или менее 57%, диагностируют тяжелую преэклампсию. Использование изобретения позволяет диагностировать преэклампсию вне зависимости от наличия у женщины хронической артериальной гипертензии. (RU 2587781С1, Панова И.А. и др. 20.06.2016).

Недостатки метода: по сравнению с предлагаемым нами методом более низкая чувствительность и специфичность.

Из вышеизложенного очевидно, что на сегодняшний день основной сложностью в определении степени тяжести преэклампсии являются неспецифичность и трудоемкость методов, а также необходимость использования дорогостоящего оборудования и высококвалифицированного персонала. Предложенный нами способ прост в использовании, экономически выгоден и не требует закупки дорогостоящих реактивов. Данная методика позволяет нам верифицировать степень тяжести преэклампсии с высокой специфичностью и достоверностью результатов.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами:

Пример №1.

Беременная Н., 33 года (3234/18) поступила в стационар с диагнозом: «Беременность 28 недель 2 дня. Угроза ранних преждевременных родов, Умеренная преэклампсия».

Из анамнеза: Менструальная функция с 13 лет, регулярная через 30 дней, по 5 дней. Данная беременность 2-я, наступила самопроизвольно, в анамнезе 1 роды путем операции кесарева сечения, без особенностей. Беременность протекала на фоне токсикоза легкой степени в первой половине беременности. II триместр - нарушение маточно-плацентарного кровотока, угроза преждевременных родов, проведена профилактика РДС плода.

Получены следующие результаты:

Относительное содержание CD16+ моноцитов в периферической крови 88,5% Что больше или равно 73,5%.

Таким образом, мы верифицировали тяжелую преэклампсию. Также диагноз был подтвержден данными АД 150/90 мм.рт.ст. и протеинурией 4,16 г/л в разовой порции мочи. Пациентка была стабилизирована и родоразрешена в экстренном порядке. Родился живой недоношенный мальчик массой 995 г, рост 38 см.

Пример №2.

Беременная Л., 26 лет (38169/17) поступила в стационар с диагнозом: «Беременность 36 недель. Головное предлежание. Гестационная артериальная гипертензия. Преэклампсия?».

Из анамнеза: Менструальная функция с 16 лет, регулярная через 28 дней, по 7 дней. Данная беременность 1-я, наступила самопроизвольно. Беременность протекала на фоне токсикоза легкой степени в первом триместре. В третьем триместре отметила повышение АД до 140/90 мм.рт.ст. Максимальные цифры повышения АД 150/95 мм.рт.ст., по данной причине была госпитализирована в стационар.

Получены следующие результаты:

Относительное содержание CD16+ моноцитов в периферической крови 67,5% Что меньше или равно 73,5%.

Таким образом, мы верифицировали умеренную преэклампсию. Также диагноз был подтвержден данными АД 140/85 мм.рт.ст. и протеинурией 0.4 г/л в разовой порции мочи. Беременность удалость пролонгирована до 39 недель гестации, пациентка вступила в естественные роды, однако была родоразрешена в экстренном порядке путем операции кесарева сечения в связи с острой гипоксией плода. Родилась живая доношенная девочка массой 2510 г, рост 48 см, здорова.

Список литературы

1. Преэклампсия: руководство. / Под ред. акад. РАМН Г.Т. Сухих, проф. Л.Е. Мурашко. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. С. 226-228.

2. Сидорова И.С.Тяжелая преэклампсия и эклампсия - критические состояния для матери и плода / И.С. Сидорова, А.П. Милованов, Н.А. Никитина // Акушерство и гинекология. 2013. №12. С. 34-40.

3. Савельева Г.М. Эклампсия в современном акушерстве. / Г.М. Савельева, Р.И. Шалина, М.А. Курцер // Акушерство и гинекология. 2010. №6. С.4-9

4. Crowley P. Prophylactic corticosteroids for preterm birth. Cochrane Database Syst Rev 2002; (4):CD000065.

5. Simpson KN, Lynch SR. Cost savings from the use of antenatal steroids to prevent respiratory distress syndrome and related conditions in premature infants. Am J Obstet Gynecol 1995; 173:316-21.

6. Сухих Г.Т. Федеральные клинические рекомендации. Гипертензивные расстройства во время беременности, в родах и послеродовом периоде. Преэклампсия. Эклампсия. / Г.Т. Сухих, З.С. Ходжаева, О.С. Филиппов, Л.В. Адамян и др.Москва, 2016.4-9.

7. Levine RJ, Maynard SE, Qian С, Lim KH, England LJ, Yu KF, Schisterman EF, Thadhani R, Sachs BP, Epstein FH, Sibai BM, Sukhatme VP, Karumanchi SA: Circulating angiogenic factors and the risk of preeclampsia. N Engl J Med 2004; 350:672-83.

8. Мейл Д., Бростофф Дж., Рот Д.Б., Ройтт А. - М., 2007. - 343-401 с. Иммунология.

9. Практикум. Учебное пособие. Под ред. Л.В. Ковальчука, Г.А. Игнатьевой, Л.В. Ганковской. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012; 176 с.