ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИЕ СОЕДИНЕНИЯ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Хемокины регулируют миграцию различных типов мононуклеарных клеток. Их классифицируют на четыре подсемейства СС, СХС, СХ3С и С на основании положений консервативных остатков цистеина на их N-концах.

Стромальный фактор-1 (SDF-1), представляющий собой хемокин СХС, играет ключевые роли в эффекте возвращения и мобилизации гемопоэтических стволовых клеток, эндотелиальных клеток-предшественников и гемопоэтических клеток-предшественников. Физиологическая функция SDF-1 опосредована рецептором хемокинов типа 4 СХС (CXCR4).

Взаимодействие между CXCR4 и SDF-1 вносит вклад в многочисленные патологические состояния, такие как инфекция ВИЧ, ревматоидный артрит, бронхиальная астма и метастазы опухоли. Например, активация биохимического пути CXCR4/SDF-1 в опухолях приводит к стимуляции ангиогенного фактора роста эндотелия сосудов (VEGF). С другой стороны, прерывание взаимодействия между CXCR4 и SDF-1 под воздействием антагонистов CXCR4 подавляет VEGF-зависимый ангиогенез и рост опухоли. Соединения, прерывающие взаимодействие между CXCR4 и SDF-1, можно применять для лечения различных заболеваний, включая повреждение ткани, рак, воспалительное заболевание и аутоиммунное заболевание.

Существует необходимость в разработке новых соединений, которые могут эффективно прерывать взаимодействие между CXCR4 и SDF-1.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение основано на неожиданном обнаружении эффективного связывания некоторых гетероциклических соединений с CXCR4 и прерывания ими взаимодействия между CXCR4 и SDF-1.

В одном аспекте данное изобретение относится к гетероциклическим соединениям формулы (I):

В этой формуле каждый из R₁ и R₂ независимо представляет собой Н, атом галогена, нитро, циано, амино, C_1-6 алкил, C_1-6 алкоксил, С_3-10 циклоалкил, С_1-10 гетероциклоалкил, арил или гетероарил; либо R₁ и R₂ вместе с двумя атомами углерода, с которыми они связаны, представляют собой С_5-10 циклоалкил, С_3-10 гетероциклоалкил, арил или гетероарил, где каждый из C_1-6 алкила, C_1-6 алкоксила, С_3-10 циклоалкила, С_1-10 гетероциклоалкила, С_5-10 циклоалкила, С_3-10 гетероциклоалкила, арила и гетероарила необязательно замещен атомом галогена, нитро, циано, амино, C_1-6 алкилом, C_1-6 алкоксилом, арилом, гетероарилом или C(O)OR_a, в котором R_a представляет собой Н, С_1-10 алкил, С_3-10 циклоалкил, С_3-10 гетероциклоалкил, арил или гетероарил; и

каждый из R₃ и R₄ независимо представляет собой NR_bR_c, или ,

в которых каждый из R_b и R_c независимо представляет собой Н или C_1-6 алкил; R₅ представляет собой Н, C_1-6 алкил, С_3-10 циклоалкил, С_1-10 гетероциклоалкил, арилалкил, гетероарилалкил, арил или гетероарил, где каждый из C_1-6 алкила, С_3-10 циклоалкила, С_1-10 гетероциклоалкила, арилалкила, гетероарилалкила, арила и гетероарила необязательно замещен атомом галогена, нитро, циано, амино, C_1-6 алкилом, C_1-6 алкоксилом, С_3-10 циклоалкилом, C_1-10 гетероциклоалкилом, арилом или гетероарилом; R₆ представляет собой Н, C_1-6 алкил, C_1-6 алкоксил, С_3-10 циклоалкил, С_1-10 гетероциклоалкил, арил или гетероарил; L₁ представляет собой гетероарил, С_1-10 гетероциклоалкил, NH или NR_d, в котором R_d представляет собой C(O)(CH₂)₂CHNH₂CO₂R_e, где R_e представляет собой Н, C_1-6 алкил, С_3-10 циклоалкил, С_3-10 гетероциклоалкил, арил или гетероарил; R₇ представляет собой Н, C_1-6 алкил, C_1-6 алкоксил, С_3-10 циклоалкил, С_1-10 гетероциклоалкил, арил или гетероарил, где каждый из C_1-6 алкила, C_1-6 алкоксила, С_3-10 циклоалкила, С_1-10 гетероциклоалкила, арила и гетероарила необязательно замещен гидрокси, гидрокси C_1-6 алкилом, атомом галогена, нитро, циано, амино, амино C_1-6 алкилом, амино С_3-10 циклоалкилом, амино С_1-10 гетероциклоалкилом, С_3-10 циклоалкилом, С_1-10 гетероциклоалкилом, арилом или гетероарилом; m равно 1-6; n равно 1-6; каждый из R₈ и R₉ независимо представляет собой Н, C_1-6 алкил, С_3-10 циклоалкил, С_1-10 гетероциклоалкил, арил или гетероарил, где каждый из C_1-6 алкила, С_3-10 циклоалкила, С_1-10 гетероциклоалкила, арила и гетероарила необязательно замещен C(O)OR_f, в котором R_f представляет собой Н, С_1-10 алкил, С_3-20 циклоалкил, С_3-20 гетероциклоалкил, арил или гетероарил; либо R₈ и R₉, вместе с атомами азота, с которыми они связаны, представляют собой С_3-10 гетероциклоалкил; L₂ представляет собой C_1-6 алкил; либо L₂ вместе с R₈ или R₉ и атомом азота, с которыми они связаны, представляет собой С_4-10 гетероциклоалкил или гетероарил; и R₁₀ представляет собой Н, C_1-6 алкил, C_1-6 алкоксил, С_3-10 циклоалкил, С_1-10 гетероциклоалкил, арил, гетероарил, арилалкил, гетероарилалкил, C(O)OR_g, C(S)NR_hR_i, C(O)NR_jR_k или C(O)R_p, где каждый из C_1-6 алкила, C_1-6 алкоксила, С_3-10 циклоалкила, C_1-10 гетероциклоалкила, арила, гетероарила, арилалкила и гетероарилалкила необязательно замещен гидрокси, атомом галогена, нитро, циано, амино, C(O)OR₁₁ или P(O)(OR₁₂)₂, в котором каждый из R₁₁ и R₁₂ независимо представляет собой Н или C_1-6 алкил; либо R₁₀ вместе с R₉ и атомом азота, с которым они связаны, представляет собой С_4-10 гетероциклоалкил или гетероарил; где каждый из R_g, R_h, R_i, R_j и R_k независимо представляет собой Н, C_1-6 алкил, C_1-6 алкоксил, C_1-6 алкил, арилалкил, гетероарилалкил, арил или гетероарил; и R_p представляет собой Н, C_1-6 алкил, C_1-6 алкоксил, С_3-10 циклоалкил, С_1-10 гетероциклоалкил, арил, гетероарил, арилалкил, гетероарилалкил или , в котором каждый из C_1-6 алкила, C_1-6 алкоксила, С_3-10 циклоалкила, С_1-10 гетероциклоалкила, арила, гетероарила, арилалкила, гетероарилалкила необязательно замещен атомом галогена, Р(O)(ОН)₂ или P(O)(O-C_1-6 алкил)₂; о равно 0-2; D₁ представляет собой ОН или NR₁₄R₁₅, где каждый из R₁₄ и R₁₅ независимо представляет собой Н, C(O)CH(NH₂)CH₂OH или C(NH)NH₂; D₂ представляет собой О или NR₁₆, где R₁₆ представляет собой Н, C_1-6 алкил, S(O)₂R_q, NHR_r или CH₂CO₂R_s, в котором каждый из R_q и R_r независимо представляет собой арил, необязательно замещенный атомом галогена или алкоксилом, a R_s представляет собой Н, C_1-6 алкил, C_1-6 алкоксил, C_1-6 алкил, арилалкил, гетероарилалкил, арил или гетероарил; R₁₃ представляет собой Н, C_1-6 алкил, С_3-10 циклоалкил, С_3-10 гетероциклоалкил, арилалкил, гетероарилалкил, арил или гетероарил, где каждый из C_1-6 алкила, С_3-10 циклоалкила, С_3-10 гетероциклоалкила, арилалкила, гетероарилалкила, арила или гетероарила необязательно замещен гидрокси, C_1-6 алкилом, С_3-10 циклоалкилом, С_3-10 гетероциклоалкилом, арилалкилом, гетероарилалкилом, арилом, гетероарилом, Р(O)(ОН)₂, P(O)(O-C_1-6 алкил)₂, гидрокси или C(O)OR_t, в котором R_t представляет собой Н, C_1-6 алкил, C_1-6 алкоксил, C_1-6 алкил, арилалкил, гетероарилалкил, арил или гетероарил; и представляет собой или -арил.

Одна подгруппа вышеописанных гетероциклических соединений включает соединения, в которых каждый из R₁ и R₂ независимо представляет собой Н, амино или С_1-10 гетероциклоалкил (например, морфолин, пиперидин или пиперазин) необязательно замещен C_1-6 алкилом или C(O)OR_a, в котором R_a представляет собой Н или С_1-10 алкил.

Другая подгруппа гетероциклических соединений по данному изобретению включает соединения, в которых R₁ и R₂ вместе с двумя атомами углерода, с которыми они связаны, представляют собой С_5-10 циклоалкил, С_3-10 гетероциклоалкил, арил или гетероарил. Примеры гетероарила включают , , , или , где каждый из R_i, R_ii, R_iii, R_iv и R_v, независимо представляют собой Н, атом галогена, С_1-10 алкил, C_1-6 алкоксил, С_3-10 циклоалкил, С_3-10 гетероциклоалкил, арил или гетероарил.

Еще одна другая подгруппа гетероциклических соединений по данному изобретению включает соединения, в которых каждый из R₃ и R₄ независимо представляет собой или ; R₅ предпочтительно представляет собой Н, циано-замещенный арилалкил (например, ) или незамещенный гетероарилалкил (например, ); R₆ предпочтительно представляет собой Н, арил (например, фенил), гетероарил (например, пиридил); L₁ предпочтительно представляет собой NH, , , или -NC(O)(CH₂)₂CHNH₂CO₂H; R₇ предпочтительно представляет собой Н, СН₂ОН, , , , , , , , , , или ; каждый из R₈ и R₉ независимо представляет собой Н или C_1-6 алкил, необязательно замещенный C(O)OR_f, в котором R_f представляет собой Н или С_1-10 алкил, либо R₈ и R₉, вместе с атомами азота, с которыми они связаны, предпочтительно представляют собой ; L₂ вместе с R₈ или R₉ и атомом азота, с которым они связаны, предпочтительно представляет собой С_4-10 гетероциклоалкил (например, или ); R₁₀ предпочтительно представляет собой Н, C_1-6 алкил, C_1-6 алкоксил, С_3-10 циклоалкил, С_1-10 гетероциклоалкил, арил, гетероарил, арилалкил, гетероарилалкил, C(O)OR_g, C(S)NR_hR_i или C(O)NR_jR_k, где каждый из C_1-6 алкила, C_1-6 алкоксила, С_3-10 циклоалкила, С_1-10 гетероциклоалкила, арила, гетероарила, арилалкила и гетероарилалкила необязательно замещен гидрокси, атомом галогена, C(O)OR₁₁ или P(O)(OR₁₂)₂; либо R₁₀ вместе с R₉ и атомом азота, с которым они связаны, предпочтительно представляет собой С_4-10 гетероциклоалкил или гетероарил; либо R₁₀ предпочтительно представляет собой C(O)R_p, где R_p представляет собой C_1-6 алкил, С_3-10 циклоалкил, арил, гетероарил или , в котором каждый из C_1-6 алкила, С_3-10 циклоалкила, арила и гетероарил C_1-6 алкила необязательно замещен атомом галогена или Р(O)(ОН)₂.

Термин «алкил» в настоящем документе относится к насыщенной, линейной или разветвленной углеводородной группировке, такой как -СН₃ или разветвленный -С₃Н₇. Термин «циклоалкил» относится к неароматической, моноциклической, бициклической, трициклической или тетрациклической углеводородной группировке, такой как циклогексил, циклогексен-3-ил или адамантил. Термин «алкоксил» относится к -О-алкильному радикалу. Примеры алкокси включают без ограничений метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, изобутокси, втор-бутокси и трет-бутокси. Термин «гетероциклоалкил» относится к неароматической, моноциклической, бициклической, трициклической или тетрациклической группировке, имеющей один или более кольцевых гетероатомов (например, N, О или S), такой как 4-тетрагидропиранил или 4-пиранил. Термин «арил» относится к углеводородной группировке, имеющей одно или более ароматических колец. Примеры арильных группировок включают фенил (Ph), фенилен, нафтил, нафтилен, пиренил, антрил и фенантрил. Термин «гетероарил» относится к группировке, имеющей одно или более ароматических колец, которые содержат по меньшей мере один гетероатом (например, N, О или S). Примеры гетероарильных группировок включают фурил, фурилен, флуоренил, пирролил, тиенил, оксазолил, имидазолил, тиазолил, пиридил, пиримидинил, хиназолинил, хинолил, изохинолил и индолил. Термин «арилалкил» относится к алкилу, который замещен по меньшей мере одной арильной группой. Примеры арилалкила включают бензил (Bn) и 1-нафтилметил. Термин «гетероарилалкил» относится к алкилу, замещенному по меньшей мере одной гетероарильной группой. Примеры гетероарилалкила включают 2-фуранил-метил и 2-тиенилметил. Термин «аминоалкил» относится к алкилу, замещенному по меньшей мере одной аминогруппой. Примеры аминоалкила включают аминометил и 2-аминоэтил. Термин «аминоциклоалкил» относится к циклоалкилу, замещенному по меньшей мере одной аминогруппой. Примеры аминоциклоалкила включают аминоциклопропил и аминоциклопентил. Термин «гидроксилалкил» относится к алкилу, замещенному по меньшей мере одной гидроксильной группой. Примеры гидроксилалкила включают гидроксилметил и гидроксилэтил.

Алкил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, гетероарил, арилалкил и гетероарилалкил, упомянутые в настоящем документе, включают как замещенные, так и незамещенные группировки, если не указано иное. Возможные заместители циклоалкила, гетероциклоалкила, арила и гетероарила включают C_1-10 алкил, С_2-10 алкенил, С_2-10 алкинил, С_3-20 циклоалкил, С_3-20 циклоалкенил, С_1-20 гетероциклоалкил, С_1-20 гетероциклоалкенил, С_1-10 алкокси, арил, арилокси, гетероарил, гетероарилокси, амино, С_1-10 алкиламино, C_1-20 диалкиламино, ариламино, диариламино, гидроксил, атом галогена, тио, С_1-10 алкилтио, арилтио, С_1-10 алкилсульфонил, арилсульфонил, ациламино, аминоацил, аминотиоацил, амидино, гуанидина, уреидо, циано, нитро, ацил, тиоацил, ацилокси, карбоксил и сложный эфир карбоновой кислоты. С другой стороны, возможные заместители алкила включают все из перечисленных выше заместителей за исключением С_1-10 алкила, С_2-10 алкенила и С_2-10 алкинила. Циклоалкил, гетероциклоалкил, арил и гетероарил могут быть также конденсированы друг с другом.

Описанные выше гетероциклические соединения включают как сами соединения, так и их соли, пролекарства и сольваты, если применимо. Соль, например, может быть образована между анионом и положительно заряженной группой (например, амино) на гетероциклических соединениях. Подходящие анионы включают хлорид, бромид, йодид, сульфат, нитрат, фосфат, цитрат, метансульфонат, трифторацетат, ацетат, малат, тозилат, тартрат, фумарат, глутамат, глюкуронат, лактат, глутарат и малеат. Подобным образом, соль может быть также образована между катионом и отрицательно заряженной группой (например, карбоксилатом) на гетероциклическом соединении. Подходящие катионы включают ион натрия, ион калия, ион магния, ион кальция и катион аммония, такой как ион тетраметиламмония. Гетероциклические соединения также включают соли, содержащие четвертичные атомы азота. Примеры пролекарств включают сложные эфиры и другие фармацевтически приемлемые производные, которые после введения субъекту способны обеспечивать активные гетероциклические соединения. Сольват относится к комплексу, образованному между активным гетероциклическим соединением и фармацевтически приемлемым растворителем. Примеры фармацевтически приемлемого растворителя включают воду, этанол, изопропанол, этилацетат, уксусную кислоту и этаноламин.

Гетероциклические соединения могут содержать неароматические двойные связи, которые могут встречаться в виде цис- или транс-изомерных форм. Такие изомерные формы рассматриваются.

Другой аспект данного изобретения относится к способу мобилизации гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) и эндотелиальных клеток-предшественников (ЭКП) в периферическом кровообращении. Способ включает приведение в контакт ГСК и ЭКП с эффективным количеством одного или более гетероциклических соединений формулы (I), описанных выше.

Дополнительный аспект данного изобретения относится к способу лечения повреждения ткани, рака, воспалительного заболевания и аутоиммунного заболевания. Способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества одного или более гетероциклических соединений формулы (I), описанных выше. Примеры повреждения ткани включают нейродегенеративное заболевание, нарушение функции пигментного эпителия сетчатки, инфаркт сердца и миокарда, ишемическую болезнь (например, ишемический инсульт и ишемию конечностей), рану, перелом кости, повреждение поджелудочной железы, повреждение почки, повреждение кишечника и повреждение легкого. Примеры рака встречают острый миелоидный лейкоз, немелкоклеточный рак легкого, множественную миелому и рак поджелудочной железы. Примеры воспалительных заболеваний включают воспалительное заболевание кишечника, аллергическую бронхиальную астму и глазной увеит. Примером аутоиммунного заболевания является ревматоидный артрит.

В конкретном примере способ выполняют для лечения повреждения почки (например, острой почечной недостаточности). Способ включает введение субъекту, страдающему повреждением почки, эффективного количества одного или более из гетероциклических соединений, описанных выше.

В объеме изобретения также находится фармацевтическая композиция, содержащая одно или более из описанных выше гетероциклических соединений формулы (I). Фармацевтическую композицию можно применять для лечения повреждения ткани (например, острой почечной недостаточности), рака, воспалительного заболевания и аутоиммунного заболевания.

Признаком данного изобретения также является применение одного или более из описанных выше гетероциклических соединений формулы (I) для производства лекарственного средства для лечения повреждения ткани (например, острой почечной недостаточности), рака, воспалительного заболевания и аутоиммунного заболевания.

Термин «лечащий» или «лечение» относится к введению одного или более из гетероциклических соединений субъекту, страдающему описанным выше заболеванием, симптомом такого заболевания или предрасположенностью к такому заболеванию, с целью оказания терапевтического воздействия, например, для излечения, облегчения, изменения, влияния, улучшения течения или профилактики описанного выше заболевания, его симптома или предрасположенности к нему. «Эффективное количество» относится к количеству активного соединения, необходимому для оказания терапевтического воздействия. Эффективные дозы будут варьировать, как известно специалистам в данной области техники, в зависимости от типов заболевания, подлежащего лечению, пути введения, использования вспомогательных веществ и возможности совместного применения с другим терапевтическим лечением.

Для осуществления на практике способа по настоящему изобретению композицию, содержащая одно или более из описанных выше гетероциклических соединений, можно вводить парентеральным, пероральным, назальным, ректальным, местным или трансбуккальным путем. Термин «парентеральный» при использовании в настоящем документе относится к введению путем подкожной, внутрикожной, внутривенной, интраперитонеальной, внутримышечной, внутрисуставной, внутриартериальной, интрасиновиальной, интрастернальной, подоболочечной инъекции, инъекции в очаг поражения или интракраниальной инъекции, а также любым подходящим методом инфузии.

Стерильная инъекционная композиция может представлять собой раствор или суспензию в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, например раствор в 1,3-бутаноле. Среди приемлемых носителей и растворителей, которые можно применять, находятся маннит, вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя или суспендирующей среды традиционно применяют нелетучие масла (например, синтетические моно- или диглицериды). При приготовлении инъекционных препаратов полезна жирная кислота, такая как олеиновая кислота, и ее глицеридные производные, а также натуральные фармацевтически приемлемые масла, такие как оливковое масло и касторовое масло, особенно в их полиэтоксилированных вариантах. Эти масляные растворы или суспензии могут также содержать спиртовой разбавитель или диспергирующий агент, карбоксиметилцеллюлозу или подобные диспергирующие агенты. В целях включения в препарат можно также применять другие общепринятые поверхностно-активные вещества, такие как вещества группы Tween и Span, или другие подобные эмульгирующие агенты или усилители биодоступности, обычно применяемые в производстве фармацевтически приемлемых твердых, жидких или других дозированных форм.

Композиция для перорального введения может представлять собой дозированную форму, приемлемую для приема внутрь, включая капсулы, таблетки, эмульсии и водные суспензии, дисперсии и растворы. В случае таблеток общепринятые носители включают лактозу и кукурузный крахмал. В характерном случае также добавляют смазывающие вещества, такие как стеарат магния. Для перорального введения в форме капсулы полезные разбавители включают лактозу и высушенный кукурузный крахмал. При пероральном введении водных суспензий или эмульсий активный ингредиент можно суспендировать или растворять в масляной фазе, комбинированной с эмульгирующими или суспендирующими агентами. При желании могут быть добавлены некоторые подсластители, корригенты или красящие вещества.

Назальную аэрозольную или ингаляционную композицию можно готовить в соответствии с методами, хорошо известными в области приготовления фармацевтических препаратов. Например, такую композицию можно готовить в виде раствора в физиологическом растворе, применяя бензиловый спирт или другие подходящие консерванты, стимуляторы всасывания для усиления биодоступности, фторуглероды и/или другие солюбилизирующие или диспергирующие агенты, известные в данной области техники.

Композицию, содержащую одно или более из описанных выше гетероциклических соединений, можно также вводить в форме суппозиториев для ректального введения.

Носитель в фармацевтической композиции должен быть «приемлемым» в смысле совместимости с активным ингредиентом композиции (и предпочтительно способности к стабилизации активного ингредиента) и безвредности для субъекта, подлежащего лечению. Один или более солюбилизирующих агентов можно использовать в качестве фармацевтических вспомогательных веществ для доставки активного соединения 1,5-дифенил-пента-1,4-диен-3-она. Примеры других носителей включают коллоидный диоксид кремния, стеарат магния, целлюлозу, лаурилсульфат натрия и Желтый №10 D&C.

В приведенном ниже описании представлено подробное описание одного или более воплощений изобретения. Другие признаки, объекты и преимущества изобретения станут очевидными из этого описания и формулы изобретения.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Раскрыты гетероциклические соединения формулы (I):

Что касается данной формулы, две серии особенно предпочтительных гетероциклических соединений включают (i) соединения, в которых каждый из R₁ и R₂ независимо представляет собой Н, амино, С_1-10 гетероциклоалкил, необязательно замещенный C_1-6 алкилом или C(O)OR_a, в котором R_a представляет собой Н, С_1-10 алкил; R₅ представляет собой Н, арилалкил, гетероарилалкил, где каждый из арилалкила и гетероарилалкила необязательно замещен циано; R₆ представляет собой Н, арил или гетероарил; L₁ представляет собой NH, , , или -NC(O)(CH₂)₂CHNH₂CO₂H; R₇ представляет собой Н, СН₂ОН, , , , , , , , , , или ; каждый из R₈ и R₉, независимо представляет собой Н или C_1-6 алкил, необязательно замещенный C(O)OR_f, в котором R_f представляет собой Н или С_1-10 алкил, либо R₈ и R₉, вместе с атомами азота, с которыми они связаны, представляют собой ; и L₂ вместе с R₈ или R₉ и атом азота, с которым они связаны, представляет собой С_4-10 гетероциклоалкил; R₁₀ представляет собой Н, C_1-6 алкил, C_1-6 алкоксил, С_3-10 циклоалкил, С_1-10 гетероциклоалкил, арил, гетероарил, арилалкил, гетероарилалкил, C(O)OR_g, C(S)NR_hR_i или C(O)NR_jR_k, где каждый из C_1-6 алкила, C_1-6 алкоксила, С_3-10 циклоалкила, С_1-10 гетероциклоалкила, арила, гетероарила, арилалкила и гетероарилалкила необязательно замещен гидрокси, атомом галогена, C(O)OR₁₁ или P(O)(OR₁₂)₂; либо R₁₀ вместе с R₉ и атомом азота, с которым они связаны, представляет собой С_4-10 гетероциклоалкил или гетероарил; и (ii) соединения, в которых R₁ и R₂, вместе с двумя атомами углерода, с которыми они связаны, представляют собой С_5-10 циклоалкил, С_3-10 гетероциклоалкил, арил или гетероарил; R₅ представляет собой Н, арилалкил или гетероарилалкил, где каждый из арилалкила и гетероарилалкила необязательно замещен циано; R₆ представляет собой Н, арил или гетероарил; L₁ представляет собой NH, , , или -NC(O)(CH₂)₂CHNH₂CO₂H; R₇ представляет собой Н, СН₂ОН, , , , , , , , , , или ; каждый из R₈ и R₉, независимо представляет собой Н или C_1-6 алкил, необязательно замещенный C(O)OR_f, в котором R_f представляет собой Н или С_1-10 алкил, либо R₈ и R₉ вместе с атомами азота, с которыми они связаны, представляют собой ; и L₂ вместе с R₈ или R₉ и атомом азота, с которым они связаны, представляет собой С_4-10 гетероциклоалкил; R₁₀ представляет собой Н, C_1-6 алкил, C_1-6 алкоксил, С_3-10 циклоалкил, С_1-10 гетероциклоалкил, арил, гетероарил, арилалкил, гетероарилалкил, C(O)OR_g, C(S)NR_hR_j или C(O)NR_jR_k, где каждый из C_1-6 алкила, C_1-6 алкоксила, С_3-10 циклоалкила, С_1-10 гетероциклоалкила, арила, гетероарила, арилалкила и гетероарилалкила необязательно замещен гидрокси, атомом галогена, C(O)OR₁₁ или P(O)(OR₁₂)₂; либо R₁₀ вместе с R₉ и атомом азота, с которым они связаны, представляет собой С_4-10 гетероциклоалкил или гетероарил.

Возвращаясь к формуле (I), еще две серии особенно предпочтительных соединений включают (i) соединения, в которых каждый из R₁ и R₂ независимо представляет собой Н, амино, С_1-10 гетероциклоалкил, необязательно замещенный C_1-6 алкилом или C(O)OR_a, в котором R_a представляет собой Н, С_1-10 алкил; R₅ представляет собой Н, арилалкил, гетероарилалкил, где каждый из арилалкила и гетероарилалкила необязательно замещен циано; R₆ представляет собой Н, арил или гетероарил; L₁ представляет собой NH, , , или -NC(O)(CH₂)₂CHNH₂CO₂H; R₇ представляет собой Н, СН₂ОН, , , , , , , , , , или ; каждый из R₈ и R₉, независимо представляет собой Н или C_1-6 алкил, необязательно замещенный C(O)OR_f, в котором R_f представляет собой Н или С_1-10 алкил, либо R₈ и R₉, вместе с атомами азота, с которыми они связаны, представляют собой ; и L₂ вместе с R₈ или R₉ и атомом азота, с которым они связаны, представляет собой С_4-10 гетероциклоалкил; R₁₀ представляет собой C(O)R_p, где R_p представляет собой C_1-6 алкил, С_3-10 циклоалкил, арил, гетероарил или , в котором каждый из C_1-6 алкила, С_3-10 циклоалкила, арила и гетероарил C_1-6 алкил необязательно замещен атомом галогена или Р(O)(ОН)₂, и представляет собой ; и (ii) соединения, в которых R₁ и R₂, вместе с двумя атомами углерода, с которыми они связаны, представляют собой С_5-10 циклоалкил, С_3-10 гетероциклоалкил, арил или гетероарил; R₅ представляет собой Н, арилалкил или гетероарилалкил, где каждый из арилалкила и гетероарилалкила необязательно замещен циано; R₆ представляет собой Н, арил или гетероарил; L₁ представляет собой NH, , , или -NC(O)(CH₂)₂CHNH₂CO₂H; R₇ представляет собой Н, СН₂ОН, , , , , , , , , , или ; каждый из R₈ и R₉, независимо представляет собой Н или C_1-6 алкил, необязательно замещенный C(O)OR_f, в котором R_f представляет собой Н или С_1-10 алкил, либо R₈ и R₉, вместе с атомами азота, с которыми они связаны, представляют собой ; и L₂ вместе с R₈ или R₉ и атомом азота, с которым они связаны, представляет собой С_4-10 гетероциклоалкил; R₁₀ представляет собой C(O)R_p, где R_p представляет собой C_1-6 алкил, С_3-10 циклоалкил, арил, гетероарил или , в котором каждый из C_1-6 алкила, С_3-10 циклоалкила, арила и гетероарил C_1-6 алкила необязательно замещен атомом галогена или Р(O)(ОН)₂, и представляет собой .

В пределах объема данного изобретения находится фармацевтическая композиция, содержащая одно или более гетероциклических соединений формулы (I) для лечения повреждения ткани (например, острой почечной недостаточности), рака, воспалительного заболевания и аутоиммунного заболевания.

Дополнительно изобретение охватывает способ лечения повреждения ткани (например, острой почечной недостаточности), рака, воспалительного заболевания и аутоиммунного заболевания, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения формулы (I).

Описанные выше гетероциклические соединения формулы (I) могут быть получены хорошо известными в данной области техники способами. Ниже приведены фактические примеры получения соединений 1-273 из следующих исходных веществ и соединений боковой цепи.

Исходные вещества: 2,4-дихлор-гетероциклические производные

Соединения боковой цепи: S-I, S-II, S-III и S-IV

Ниже изображен типичный путь синтеза для синтеза некоторых соединений формулы (I). Соединение А, содержащее две галогеновые группы, взаимодействует с аминосоединением R₄-H с получением соединения В, которое взаимодействует с аминосоединением R₃-H (которое может быть таким же, как R₄-Н) с получением соединения С, т.е. соединения формулы (I).

Синтезированное таким путем соединение можно очистить способом, таким как колоночная хроматография, жидкостная хроматография высокого давления или перекристаллизация.

Промежуточные соединения, используемые в описанном выше синтезе, либо имеются в продаже, либо могут быть получены способами, известными в данной области техники. Способы могут также включать дополнительные стадии либо до, либо после стадий, конкретно описанных в настоящем документе, для присоединения или удаления при необходимости подходящих защитных групп, что облегчает синтез соединений. Кроме того, для получения желаемых соединений различные стадии синтеза можно выполнять в измененной последовательности или в измененном порядке.

Преобразования химического синтеза и методологии защитных групп (защита и удаление защиты), используемые для синтеза соединений формулы (I), хорошо известны в данной области техники. См., например, R. Larock, Comprehensive Organic Transformations (2^nd Ed., VCH Publishers 1999); P.G.M. Wuts and T.W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis (4^th Ed., John Wiley and Sons 2007); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis (John Wiley and Sons 1994); L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis (2^nd ed., John Wiley and Sons 2009); и G.J. Yu et al., J. Med. Chem. 2008, 51, 6044-6054.

Соединения, упомянутые в настоящем документе, могут содержать неароматическую двойную связь и один или более асимметрических центров. Следовательно, они могут встречаться в виде рацематов или рацемических смесей, отдельных энантиомеров, индивидуальных диастереомеров, диастереомерных смесей или цис- или транс-изомерных форм. Рассмотрены все такие изомерные формы.

Полученные таким путем соединения формулы (I) можно подвергать первоначальному скринингу с использованием тест-систем in vitro, например, количественного определения связывания радиоактивного лиганда, описанного ниже в Примере 2, на их активность при ингибировании связывания SDF-1 с CXCR4. Затем их можно подвергать последовательной оценке с использованием тест-систем in vivo, например, анализа колониеобразующей активности, на их эффективность при усилении мобилизации гемопоэтических стволовых клеток у млекопитающего. Отобранные соединения можно дополнительно исследовать для проверки их эффективности при лечении повреждения ткани (например, острой почечной недостаточности и ишемического инсульта), рака, воспалительного заболевания и аутоиммунного заболевания. Например, соединение можно вводить животному (например, мыши), имеющему острую ишемическую почечную недостаточность, а затем оценивать его терапевтические эффекты. На основании результатов можно определить подходящий диапазон дозы и путь введения.

Считают, что специалист в данной области техники может на основании приведенного выше описания без дополнительной разработки применять на практике настоящее изобретение в максимальной степени. Таким образом, приведенные ниже конкретные примеры следует толковать как исключительно иллюстративные и никоим образом не ограничивающие остальную часть описания. Все публикации, цитируемые в настоящем документе, включены в настоящий документ посредством ссылки.

Ниже показаны структуры 273 примеров соединений формулы (I). Способы получения этих соединений, а также аналитические данные для полученных таким путем соединений представлены ниже в Примере 1. Методики исследования этих соединений также описаны ниже в Примерах 2-4.

Ниже описаны методики получения четырех боковых цепей, т.е. S-I, S-II, S-III и S-IV, которые использовали для синтеза 273 примеров соединений. Следует отметить, что боковые цепи S-II, S-III и S-IV были получены способом, подобным используемому для получения боковой цепи S-I.

Все химические вещества и растворители были приобретены у коммерческих поставщиков и использованы в том виде, в котором были получены. Все реакции проводили в атмосфере безводного азота. За ходом реакций следили на основании тонкослойной хроматографии (ТСХ), используя стеклянные пластинки ТСХ со слоем силикагеля Merck 60 F254 (5×10 см); и зоны детектировали визуально под ультрафиолетовым излучением (254 нм) или путем напыления реагента на основе фосфомолибденовой кислоты (Aldrich) с последующим нагреванием при 80°С. Все флэш-хроматографии проводили с использованием в качестве стационарной фазы силикагеля Merck Kieselgel 60, №9385, 230-400 меш согласно стандарту ASTM. Спектры протонного (¹Н) ядерного магнитного резонанса измеряли на спектрометре Varian Mercury-300 или Varian Mercury-400. Химические сдвиги регистрировали в миллионных долях (ppm,) на дельта (δ) шкале относительно резонанса от пика растворителя. Для описания связи использовали следующие сокращения: s = синглет; d = дублет; t = триплет; q = квартет; quin = квинтет; br = широкий; и m = мультиплет. Данные жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией (ЖХ-МС) измеряли на приборе Agilent MSD-1100 с ионизацией электрораспылением (ИЭР) с тандемной масс-спектрометрией (МС/МС), Agilent 1200 серии LC/MSD VL и системы сверхэффективной жидкостной хроматографии (СЭЖХ)-ИЭР-МС/МС Waters Acquity.

Получение S-I

Боковую цепь S-I получали в соответствии с приведенной ниже схемой:

Бензилхлорформиат (6,07 г, 35,47 ммоль) добавляли при 5-10°С к раствору проп-2-иниламина (1,97 г, 35,82 ммоль) и карбоната калия (K₂CO₃; 10,11 г, 73,26 ммоль) в смеси тетрагидрофурана и воды (ТГФ/H₂O; 20 мл/40 мл) в атмосфере азота. Полученную в результате смесь подогревали до комнатной температуры в течение 15 ч, а затем гасили хлоридом аммония NH₄Cl (водн.) (100 мл, 2 М). Водную фазу экстрагировали этилацетатом (3×100 мл). Объединенные органические экстракты промывали водой и соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного остатка. В результате кристаллизации неочищенного остатка с использованием смеси растворителей н-гексан/дихлорметан при -20°С получили продукт S-I-I (6,42 г, выход: 95%). ¹Н-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,38-7,32 (m, 5Н), 5,13 (s, 2Н), 3,99 (m, 2Н), 2,24 (dd, J=2,8, 2,4 Гц, 1H); ЭРМС m/z: 190,1 (М+1).

К раствору S-I-I (6,42 г, 33,97 ммоль) и 2-азидоэтанола (3,56 г, 40,88 ммоль) в этаноле (EtOH; 150 мл) в атмосфере азота добавляли раствор сульфата меди (CuSO₄; 0,83 г, 5,18 ммоль), (+) L-аскорбата натрия (1,65 г, 8,34 ммоль) и K₂CO₃ (3,40 г, 24,64 ммоль) в H₂O (36 мл). Смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч, а затем концентрировали при пониженном давлении путем удаления EtOH с получением остатка. Остаток экстрагировали дихлорметаном (CH₂Cl₂; 3×100 мл), и объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного остатка. В результате кристаллизации неочищенного остатка путем использования системы растворителей с н-гексаном получили продукт S-I-II (7,79 г, выход: 83%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,63 (br s, 1Н), 7,38-7,31 (m, 5Н), 5,09 (s, 2Н), 4,46-4,42 (m, 4Н), 4,03 (m, 2Н); ЭРМС m/z: 277,1 (М+1).

MsCl (3,40 г, 29,72 ммоль) добавляли по каплям при 5-10°С к раствору S-I-II (7,79 г, 28,18 ммоль) и триэтиламина (ТЭА) (7,92 г, 78,43 ммоль) в дихлорметане (180 мл). Полученную смесь подогревали до комнатной температуры в течение 15 ч, а затем гасили NH₄Cl (водн.). Водную фазу экстрагировали CH₂Cl₂. Объединенные органические экстракты промывали NaHCO₃ (водн.) и соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта S-I-III (7,75 г, выход: 78%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,62 (br s, 1Н), 7,40-7,32 (m, 5Н), 5,09 (s, 2Н), 4,68-4,61 (m, 4Н), 4,46 (m, 2Н), 2,91 (s, 3Н); ЭР-МС m/z: 355,1 (М+1).

Раствор S-I-III (7,75 г, 21,89 ммоль) и этан-1,2-диамина (9,30 г, 154,77 ммоль) в тетрагидрофуране (ТГФ) (160 мл) нагревали при 65°С в течение 15 ч. После того как реакция прошла полностью, смесь концентрировали при пониженном давлении путем удаления ТГФ с получением остатка. Остаток экстрагировали CH₂Cl₂ (2×150 мл), и объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта S-I-IV (5,69 г, выход: 82%) в виде желтого твердого вещества. Раствор линкера S-I-IV (5,69 г, 17,86 ммоль) и циклогексанона (1,68 г, 17,17 ммоль) в МеОН (210 мл) нагревали при 60°С в течение 15 ч, а затем охлаждали до 5-10°С. К смеси медленно добавляли NaBH₄ (0,56 г, 14,85 ммоль) и перемешивали в течение 1 ч, а затем гасили NH₄Cl (водн.) (50 мл, 2 М). Смесь концентрировали при пониженном давлении путем удаления МеОН с получением остатка. Остаток экстрагировали CH₂Cl₂ (2×150 мл), и объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали с получением фильтрата продукта S-I-V. К перемешанному с помощью магнитной мешалки продукту S-I-V добавляли ангидрид Boc₂O (7,09 г, 32,52 ммоль) одной порцией. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч, а затем концентрировали при пониженном давлении путем удаления CH₂Cl₂ c получением неочищенного остатка, который очищали флэш-хроматографией с н-гексаном/этилацетатом (1:1) с получением продукта S-I-VI (6,49 г, выход: 61% за 2 стадии). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,50 (br s, 1Н), 7,32-7,28 (m, 5Н), 5,10 (s, 2Н), 4,50 (m, 2Н), 4,43 (d, J=6,0 Hz, 1H), 3,56 (m, 2H), 3,16-2,94 (m, 4H), 1,72 (m, 2H), 1,64-1,58 (m, 3Н), 1,45-1,21 (m, 23H), 1,02 (m, 1H); ЭРМС m/z: 601,4 (M+1).

Раствор S-I-VI (6,49 г, 10,81 ммоль) и Pd/C (0,65 г) в метаноле (65 мл) перемешивали в атмосфере Н₂ (газ) при 25°С в течение 6 ч. После того, как реакция прошла полностью, полученную в результате смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением продукта S-I (4,5 г, выход: 89%) в виде клейкого масла. ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,46 (br s, 1Н), 4,50 (m, 2Н), 3,88-3,63 (m, 4Н), 3,21-2,96 (m, 4Н), 1,73 (m, 2Н), 1,64-1,59 (m, 3Н), 1,47-1,21 (m, 23Н), 1,04 (m, 1Н); ЭРМС m/z: 467,3 (М+1).

Получение S-II

Начиная с проп-2-иниламина (1,97 г, 35,82 ммоль), получали S-II в виде клейкого масла (4,22 г, 25% за шесть стадий). ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,42 (br s, 1Н), 4,51 (m, 2Н), 3,95 (br s, 2Н), 3,61 (m, 2Н), 3,15-2,91 (m, 4Н), 1,73 (m, 2Н), 1.65-1,59 (m, 5Н), 1,46-1,22 (m, 23Н), 1,03 (m, 1Н); ЭРМС m/z: 481,3 (М+1)

Получение S-III

Начиная с проп-2-иниламина ((1,97 г, 35,82 ммоль)), получали S-III в виде клейкого масла (4,16 г, 24% за шесть стадий). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,61 (br s, 1Н), 4,33 (t, J=6,9 Гц, 2Н), 3,97 (s, 2Н), 3,38-3,06 (m, 6Н), 2,14 (m, 2Н), 1,78-1,59 (m, 5Н), 1,47-1,22 (m, 23Н), 1,03 (m, 1Н); ЭРМС m/z: 481,3 (М+1).

Получение S-IV

Начиная с проп-2-иниламина (1,97 г, 35,82 ммоль), получали S-IV в виде клейкого масла (3,91 г, 22% за шесть стадий). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,63 (br s, 1Н), 4,35 (t, J=6,8 Гц, 2H), 4,10 (s, 2Н), 3,35-3,00 (m, 6Н), 2,15 (m, 2Н), 1,76-1,59 (m, 7Н), 1,48-1,23 (m, 23Н), 1,05 (m, 1H); ЭРМС m/z: 495,3 (М+1).

ПРИМЕР 1

Соединения 1-273 синтезировали путем сборки исходных веществ и соединений боковых цепей, описанных ниже:

Получение соединения 1

Ниже показана схема синтеза соединения 1 через промежуточные соединения 1-I и 1-II.

Трет-Бутиловый сложный эфир 4-амино-пиперидин-1-карбоновой кислоты (930 мг) и триэтиламин (ТЭА; 1,01 г) добавляли к раствору 2,4-дихлорхиназолина (1,01 г) в тетрагидрофуране (ТГФ; 30 мл) в атмосфере азота. Полученную реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч, а затем гасили водным хлоридом аммония (NH₄Cl; 50 мл, 2 М). Смесь экстрагировали этилацетатом (3×100 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с н-гексаном/этилацетатом (1:1) с получением соединения 1-I (1,31 г, выход 71%) в виде твердого вещества.

Раствор соединения 1-I (800 мг) и промежуточного соединения S-I (1,32 г) в 1-пентаноле (1,4 мл) нагревали при 120°С в течение 15 мин с использованием микроволнового излучения. Полученную смесь концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:32) с получением соединения 1-II (960 мг, выход 55%).

К раствору соединения 1-II (400 мг) в дихлорметане (16 мл) добавляли раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (8 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 1 (280 мг, выход 87%). ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,15 (s, 1Н), 7,87 (d, J=8,4 Гц, 1Н), 7,68 (dd, J=8,0, 7,6 Гц, 1Н), 7,31 (dd, J=8,4, 7,6 Гц, 1Н), 7,25 (m, 1Н), 4,90 (m, 2Н), 4,85 (s, 2Н), 4,38 (m, 1Н), 3,78 (t, J=5,2 Гц, 2Н), 3,61-3,44 (m, 5Н), 3,24-3,16 (m, 3Н), 2,19 (m, 2Н), 2,07 (m, 2Н), 1,94 (m, 2Н), 1,83 (m, 2Н), 1,66 (m, 1Н), 1,41-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 493,3 (М+1).

Получение соединения 2

Соединение 2 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,12 (s, 1Н), 7,93 (d, J=8,4 Гц, 1Н), 7,73 (dd, J=8,0, 7,6 Гц, 1Н), 7,36 (dd, J=8,4, 7,6 Гц, 1Н), 7,32 (m, 1Н), 4,86 (s, 2Н), 4,84 (m, 2Н), 4,42 (m, 1Н), 3,70 (t, J=6,0 Гц, 2Н), 3,57 (m, 2Н), 3,26-3,12 (m, 6Н), 2,22-2,04 (m, 6Н), 1,92 (m, 2Н), 1,83 (m, 2Н), 1,66 (m, 1Н), 1,41-1,17 (m, 6Н); ЭИ-МС: 507,3 (М+1).

Получение соединения 3

Соединение 3 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,07 (s, 1Н), 7,91 (d, J=8,4 Гц, 1Н), 7,70 (dd, J=8,0, 7,6 Гц, 1Н), 7,36-7,2 (m, 2Н), 4,83 (s, 2Н), 4,57 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 4,36 (m, 1Н), 3,57 (m, 2Н), 3,44-3,41 (m, 4Н), 3,22-3,16 (m, 4Н), 2,38 (m, 2Н), 2,04-1,98 (m, 4Н), 1,92 (m, 2Н), 1,82 (m, 2Н), 1,66 (m, 1Н), 1,41-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 507,3 (М+1).

Получение соединения 4

Соединение 4 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05 (s, 1Н), 7,92 (d, J=8,4 Гц, 1Н), 7,72 (dd, J=8,0, 7,6 Гц, 1Н), 7,36-7,31 (m, 2Н), 4,84 (s, 2Н), 4,55 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 4,40 (m, 1Н), 3,56 (m, 2Н), 3,20-3,14 (m, 8Н), 2,34 (m, 2Н), 2,20-2,02 (m, 6Н), 1,92 (m, 2Н), 1,82 (m, 2Н), 1,66 (m, 1Н), 1,41-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 521,3 (М+1).

Получение соединения 5

Соединение 5 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,07 (s, 1Н), 7,83 (d, J=8,4 Гц, 1Н), 7,63 (dd, J=8,0, 7,6 Гц, 1Н), 7,26-7,21 (m, 2Н), 4,82 (s, 2Н), 4,47 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 4,33 (m, 1Н), 3,57 (m, 2Н), 3,20-3,04 (m, 8Н), 2,15-1,96 (m, 8Н), 1,84 (m, 2Н), 1,78 (m, 2Н), 1,75-1,60 (m, 3Н), 1,39-1,17 (m, 6Н); ЭИ-МС: 535,4 (М+1).

Получение соединения 6

Соединение 6 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 1. Масс-спектрометрия с ионизацией электронным ударом (ЭИ-МС): 493,3 (М+1).

Получение соединения 7

Соединение 7 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 1. ЭИ-МС: 523,3 (М+1).

Получение соединения 8

Соединение 8 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,15 (s, 1Н), 7,75 (d, J=9,0 Гц, 1Н), 6,74 (dd, J=9,0, 2,1 Гц, 1Н), 6,53 (d, J=2,1 Гц, 1Н), 4,90 (m, 2Н), 4,62 (s, 2Н), 4,38 (m, 1Н), 3,83 (s, 3Н), 3,78 (t, J=5,2 Гц, 2Н), 3,62-3,45 (m, 5Н), 3,24-3,16 (m, 3Н), 2,18 (m, 2Н), 2,06 (m, 2Н), 1,92 (m, 2Н), 1,82 (m, 2Н), 1,63 (m, 1Н), 1,38-1,17 (m, 6Н); ЭИ-МС: 523,3 (М+1).

Получение соединения 9

Соединение 9 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (300 МГц, D₂O) δ 8,13 (s, 1Н), 7,76 (d, J=9,0 Гц, 1Н), 6,75 (dd, J=9,0, 2,1 Гц, 1Н), 6,54 (d, J=2,1 Гц, 1Н), 4,83 (s, 2Н), 4,59 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 4,35 (m, 1Н), 3,82 (s, 3Н), 3,60 (m, 2Н), 3,44-3,41 (m, 4Н), 3,22-3,17 (m, 4Н), 2,37 (m, 2Н), 2,20-2,04 (m, 4Н), 1,90 (m, 2Н), 1,82 (m, 2Н), 1,66 (m, 1Н), 1,38-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 537,3 (М+1).

Получение соединения 10

Соединение 10 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 1. ЭИ-МС: 565,4 (М+1).

Получение соединения 11

Соединение 11 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,07 (s, 1Н), 7,77 (d, J=9,0 Гц, 1Н), 6,80 (d, J=9,0 Гц, 1Н), 6,60 (s, 1Н), 4,84 (s, 2Н), 4,57 (t, J=6,9 Гц, 2Н), 4,36 (m, 1Н), 3,84 (s, 3Н), 3,57 (m, 2Н), 3,23-3,08 (m, 8Н), 2,34 (m, 2Н), 2,20-2,02 (m, 6Н), 1,92 (m, 2Н), 1,84 (m, 2Н), 1,65 (m, 1Н), 1,40-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 551,4 (М+1).

Получение соединения 12

Соединение 12 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06 (s, 1Н), 7,27 (s, 1Н), 6,61 (s, 1Н), 4,83 (s, 2Н), 4,56 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 4,38 (m, 1Н), 3,88 (s, 3Н), 3,85 (s, 3Н), 3,57 (m, 2H), 3,23-3,08 (m, 8H), 2,34 (m, 2H), 2,18-2,00 (m, 6H), 1,94 (m, 2H), 1,82 (m, 2H), 1,64 (m, 1H), 1,38-1,18 (m, 6H); ЭИ-МС: 581,4 (М+1)

Получение соединения 13

Соединение 13 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 1. ЭИ-МС: 535,4 (М+1).

Получение соединения 14

Соединение 14 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,12 (s, 1Н), 7,87 (d, J=2,0 Гц, 1Н), 7,47 (dd, J=8,4, 2,0 Гц, 1Н), 7,15 (d, J=8,4 Гц, 1Н), 4,83 (s, 2Н), 4,57 (t, J=6,8 Гц, 2Н), 4,35 (m, 1Н), 3,57 (m, 2Н), 3,22-3,08 (m, 8Н), 2,35 (m, 2Н), 2,21-2,01 (m, 6Н), 1,95 (m, 2Н), 1,79 (m, 2Н), 1,61 (m, 1Н), 1,36-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 555,3 (М+1).

Получение соединения 15

Ниже показана схема синтеза соединения 15 через промежуточные соединения 15-I и 15-II.

1-Этилпиперазин (750 мг) и триэтиламин (ТЭА; 1,01 г) добавляли к раствору 2,4-дихлорхиназолина (1,0 г) в ТГФ (30 мл) в атмосфере азота. Полученную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч, а затем гасили водным NH₄Cl (50 мл, 2 М). Смесь экстрагировали этилацетатом (3×100 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с н-гексаном/этилацетатом (1:1) с получением соединения 15-I (1,1 г, выход 78%) в виде твердого вещества. Раствор соединения 15-I (0,5 г) и S-IV (0,8 г) в 1-пентаноле (1,4 мл) нагревали при 120°С в течение 15 мин с использованием микроволнового излучения. Полученную смесь концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией с МеОН/ДХМ (1:32) с получением соединения 15-II (860 мг, выход 65%).

К раствору соединения 15-II (300 мг) в дихлорметане (12 мл) добавляли раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (6 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 15 (224 мг, выход 81%). ЭИ-МС: 535,4 (М+1).

Получение соединения 16

Соединение 16 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 15. ЭИ-МС: 595,4 (М+1).

Получение соединения 17

Соединение 17 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 15. ЭИ-МС: 589,4 (М+1).

Получение соединения 18

Соединение 18 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 15. ЭИ-МС: 584,4 (М+1).

Получение соединения 19

Соединение 19 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 15. ЭИ-МС: 585,4 (М+1).

Получение соединения 20

Соединение 20 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 15. ЭИ-МС: 651,3 (М+1).

Получение соединения 21

Соединение 21 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 15. ЭИ-МС: 577,4 (М+1).

Получение соединения 22

Соединение 22 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 15. ЭИ-МС: 523,4 (М+1).

Получение соединения 23

Соединение 23 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 15. ЭИ-МС: 535,4 (М+1).

Получение соединения 24

Соединение 24 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 15. ЭИ-МС: 565,4 (М+1).

Получение соединения 25

Соединение 25 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 15. ЭИ-МС: 546,3 (М+1).

Получение соединения 26

Соединение 26 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 15. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,26 (s, 1Н), 8,13 (d, 1Н), 7,82 (t, 1Н), 7,48-7,41 (m, 2Н), 4,83 (s, 2Н), 4,61 (t, 2Н), 3,22-3,07 (m, 8Н), 2,38 (m, 2Н), 2,21-2,08 (m, 4Н), 1,87 (m, 2Н), 1,70 (m, 1Н), 1,44-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 438,3 (М+1).

Получение соединения 27

Соединение 27 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 15. ЭИ-МС: 535,4 (М+1).

Получение соединения 28

Соединение 28 было получено сходным способом, используемым для получения соединения 15. ЭИ-МС: 549,4 (М+1).

Получение соединения 29

Ниже показана схема синтеза соединения 29 из соединения 1-I через промежуточное соединение 29-I.

Раствор соединения 1-I (800 мг) и трет-бутиловый эфир [3-(4-аминометил-[1,2,3]триазол-1-ил)-пропил]-(2-пирролидин-1-ил-этил)-карбаминовой кислоты (1,0 г) в 1-пентаноле (3 мл) нагревали при 120°С в течение 15 минут с использованием микроволнового излучения. Полученную смесь концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:32) с получением соединения 29-I (1,0 г, выход 67%).

Раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (4 мл) добавляли к раствору соединения 29-I (200 мг) в дихлорметане (8 мл). Полученную в результате реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 29 (160 мг, выход 87%). ЭИ-МС: 479,3 (М+1).

Получение соединения 30

Соединение 30 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 29. ЭИ-МС: 509,3 (М+1).

Получение соединения 31

Соединение 31 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 29. ЭИ-МС: 507,3 (М+1).

Получение соединения 32

Соединение 32 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 29. ЭИ-МС: 490,3 (М+1).

Получение соединения 33

Соединение 33 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 29. ЭИ-МС: 450,3 (М+1).

Получение соединения 34

Соединение 34 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 29. ЭИ-МС: 464,2 (М+1).

Получение соединения 35

Соединение 35 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 29. ЭИ-МС: 533,4 (М+1).

Получение соединения 36

Соединение 36 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 29. ЭИ-МС: 595,2 (М+1).

Получение соединения 37

Соединение 37 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 29. ЭИ-МС: 528,3 (М+1).

Получение соединения 38

Соединение 38 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 29. ЭИ-МС: 539,3 (М+1).

Получение соединения 39

Соединение 39 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 29. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06 (s, 1Н), 8,03 (d, 1Н), 7,81 (t, 1Н), 7,48-7,40 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,52 (t, 2Н), 4,45 (m, 1Н), 3,98 (m, 1Н), 3,57 (m, 2Н), 3,45-2,96 (m, 8H), 2,59 (m, 2H), 2,31-1,80 (m, 14H), 1,68 (m, 1H), 1,41-1,16 (m, 6H); ЭИ-МС: 650,4 (M+1).

Получение соединения 40

Ниже показана схема синтеза соединения 40 из соединения 1-I через промежуточное соединение 40-I.

Раствор соединения S-IV (494 мг) и 4-формил-бензонитрил (157 мг) в метаноле (8 мл) нагревали при 60°С в течение 6 ч, а затем охлаждали до комнатной температуры. К смеси медленно добавляли NaBH₄ (60 мг). Полученную в результате реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч, гасили водным раствором NH₄Cl (5 мл, 2 М) и концентрировали. Полученный таким образом остаток экстрагировали дихлорметаном (3×100 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:1) с получением соединения S-V (487 мг, выход 80%) в виде светло-желтого твердого вещества.

Раствор соединений 1-I (625 мг) и S-V (1,3 г) в 1-пентаноле (2 мл) нагревали при 130°С в течение 10 мин с использованием микроволнового излучения. Полученную в результате смесь концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:32) с получением соединения 40-I (806 мг, выход 50%).

Раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (16 мл) добавляли к раствору соединения 40-I (806 мг) в дихлорметане (32 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 40 (589 мг, выход 88%). ЭИ-МС: 636,4 (М+1).

Получение соединения 41

Ниже показана схема синтеза соединения 41 через промежуточные соединения 41-I и 41-II.

Соль гидрохлорид 1-(4-амино-пиперидин-1-ил)-2,2,2-трифторэтанона (1,01 г) и ТЭА (1,02 г) добавляли к раствору 2,4-дихлор-хиназолина (1,02 г) в ТГФ (30 мл) в атмосфере азота. Полученную в результате реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч, а затем гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М). Полученный в результате раствор экстрагировали этилацетатом (3×100 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с н-гексаном/этилацетатом (1:1) с получением соединения 41-I (1,37 г, выход 75%) в виде твердого вещества.

Раствор соединения 41-I (1,17 г) и S-IV (1,32 г) в 1-пентаноле (3 мл) нагревали при 120°С в течение 15 мин с использованием микроволнового излучения. Полученную в результате смесь концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:32) с получением соединения 41-II (1,43 г, выход 54%).

К раствору соединения 41-II (500 мг) в дихлорметане (20 мл) добавляли раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (10 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 41 (402 мг, выход 86%). ЭИ-МС: 617,3 (М+1).

Получение соединения 42

Соединение 42 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 41. ЭИ-МС: 603,3 (М+1).

Получение соединения 43

Ниже показана схема синтеза соединения 43 из соединения 41-II через промежуточные соединения 43-I и 43-II.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 41-II (6,5 г) в МеОН/ТГФ (58 мл/58 мл) в атмосфере азота добавляли раствор KOH (1,3 г) в H₂O (13 мл). Смесь перемешивали при 25°С в течение 15 часов, а затем концентрировали. Полученный таким образом остаток экстрагировали дихлорметаном (3×650 мл). Объединенные экстракты высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали с получением неочищенного соединения 43-I (5,5 г, выход 96%) в виде светло-желтого твердого вещества.

Раствор соединения 43-I (300 мг), пиридин-2-карбальдегида (67 мг), триацетоксиборгидрида натрия (390 мг) и НОАс (10 мг) в дихлорметане (30 мл) перемешивали при 25°С в течение 15 часов. Реакционную смесь гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М) и экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:4) с получением соединения 43-II (281 мг, выход 83%).

К раствору соединения 43-II (281 мг) в дихлорметане (11,2 мл) добавляли раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (5,6 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 43 (225 мг, выход 86%). ЭИ-МС: 612,4 (М+1).

Получение соединения 44

Соединение 44 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 43. ЭИ-МС: 591,4 (М+1).

Получение соединения 45

Ниже показана схема синтеза соединения 45 через промежуточные соединения 45-I и 45-IV.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 2,4-дихлорхиназолина (1,4 г) в ТГФ (42 мл) в атмосфере азота добавляли соль гидрохлорид 2,2,2-трифтор-1-пиперазин-1-ил-этанона (2,8 г). Смесь перемешивали при 25°С в течение 15 часов, а затем гасили NH₄Cl (водн.) (75 мл, 2 М). Полученный в результате раствор экстрагировали этилацетатом (3×150 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с этилацетатом/н-гексаном (1:1) с получением соединения 45-I (1,8 г, выход 74%).

Раствор соединений 45-I (1,8 г) и S-IV (2,0 г) в 1-пентаноле (3 мл) нагревали при 120°С в течение 10 мин с использованием микроволнового излучения. Полученную в результате смесь концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией с МеОН/ДХМ (1:32) с получением соединения 45-II (2,0 г, выход 48%).

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 45-II (1,4 г) в EtOH (50 мл) в атмосфере азота добавляли раствор KOH (0,28 г) в H₂O (2,8 мл). Полученную в результате смесь перемешивали при 25°С в течение 15 часов, а затем концентрировали. Полученный таким образом остаток экстрагировали этилацетатом (3×150 мл). Объединенные экстракты концентрировали с получением соединения 45-III (901 мг, выход 73%) в виде твердого вещества.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 45-III (195 мг) в дихлорметане (10 мл) в атмосфере азота добавляли боковую цепь 3-(2-бром-этил)-1Н-индол (80 мг) и ТЭА (100 мг). Смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч, а затем гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М). Полученный в результате раствор экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Экстракт промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:4) с получением соединения 45-IV (183 мг, выход 78%) в виде твердого вещества.

К раствору соединения 45-IV (183 мг) в дихлорметане (4 мл) добавляли раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (2 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 45 (135 мг, выход 81%). ЭИ-МС: 650,4 (М+1).

Получение соединения 46

Соединение 46 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 45. ЭИ-МС: 621,4 (М+1).

Получение соединения 47

Ниже показана схема синтеза соединения 47 из соединения 45-III через промежуточное соединение 47-I.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 45-III (200 мг) в дихлорметане (10 мл) в атмосфере азота добавляли изоцианато-бензол (47 мг) и ТЭА (100 мг). Смесь перемешивали при 25°С в течение 3 ч, а затем гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М). Полученный в результате раствор экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Экстракт промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:32) с получением продукта 47-I (185 мг, выход 80%) в виде твердого вещества.

Раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (4 мл) добавляли к раствору соединения 47-I (185 мг) в дихлорметане (8 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 47 (134 мг, выход 81%). ЭИ-МС: 626,4 (М+1).

Получение соединения 48

Соединение 48 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 47. ЭИ-МС: 594,3 (М+1).

Получение соединения 49

Ниже показана схема синтеза соединения 49 из соединения 45-III через промежуточное соединение 49-I.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 45-III (150 мг) в дихлорметане (5 мл) в атмосфере азота добавляли циклогексанкарбонилхлорид (35 мг) и ТЭА (70 мг). Полученную в результате смесь перемешивали при 25°С в течение 3 ч, а затем гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М). Полученный в результате раствор экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Экстракт промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:32) с получением соединения 49-I (120 мг, выход 70%) в виде твердого вещества.

Раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (2 мл) добавляли к раствору соединения 49-I (120 мг) в дихлорметане (4 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 49 (91 мг, выход 85%). ЭИ-МС: 617,4 (М+1).

Получение соединения 50

Соединение 50 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 49. ЭИ-МС: 577,4 (М+1).

Получение соединения 51

Соединение 51 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 49. ЭИ-МС: 611,4 (М+1).

Получение соединения 52

Соединение 52 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 49. ЭИ-МС: 612,4 (М+1).

Получение соединения 53

Соединение 53 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 49. ЭИ-МС: 617,3 (М+1).

Получение соединения 54

Соединение 54 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 49. ЭИ-МС: 621,4 (М+1).

Получение соединения 55

Ниже показана схема синтеза соединения 55 из соединения 45-III через промежуточное соединение 55-I.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 45-III (268 мг) в ТГФ (8 мл) в атмосфере азота добавляли этилхлорформиат (65 мг). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 8 ч, а затем концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:32) с получением соединения 55-I (237 мг, выход 80%) в виде твердого вещества.

Раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (5 мл) добавляли к раствору соединения 55-I (237 мг) в дихлорметане (10 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 55 (175 мг, выход 84%). ЭИ-МС: 579,4 (М+1).

Получение соединения 56

Ниже показана схема синтеза соединения 56 из соединения 45-III через промежуточное соединение 56-I.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 45-III (203 мг) в дихлорметане (8 мл) в атмосфере азота добавляли ангидрид триметилуксусной кислоты (83 мг). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 2 ч, а затем концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:32) с получением соединения 56-I (170 мг, выход 75%) в виде твердого вещества.

Раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (3 мл) добавляли к раствору соединения 56-I (170 мг) в дихлорметане (6 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 56 (126 мг, выход 84%). ЭИ-МС: 591,4 (М+1).

Получение соединения 57

Ниже показана схема синтеза соединения 57 из соединения 45-III через промежуточное соединение 57-I.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 45-III (350 мг) в МеОН (10 мл) в атмосфере азота добавляли диэтилвинилфосфонат (224 мг). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч, а затем концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:32) с получением соединения 57-I (320 мг, выход 74%) в виде твердого вещества.

TMSBr (1 мл) добавляли к раствору соединения 57-I (320 мг) в дихлорметане (10 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидробромид соединения 57 (240 мг, выход 76%). ЭИ-МС: 615,3 (М+1).

Получение соединения 58

Соединение 58 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 57. ЭИ-МС: 628,3 (М+1).

Получение соединения 59

Ниже показана схема синтеза соединения 59 из соединения 45-III через промежуточные соединения 59-I и 59-II.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 45-III (200 мг) в МеОН (10 мл) в атмосфере азота добавляли метилакрилат (37 мг) и ТЭА (100 мг). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч, а затем концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:9) с получением соединения 59-I (147 мг, выход 66%) в виде твердого вещества.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 59-I (147 мг) в ТГФ (5 мл) в атмосфере азота добавляли водный раствор LiOH (0,5 М, 5 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч, а затем гасили водным раствором 1 н. HCl (12 мл). Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенные экстракты концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:3) с получением соединения 59-II (109 мг, выход 72%) в виде твердого вещества.

К раствору соединения 59-II (109 мг) в дихлорметане (4 мл) добавляли раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (2 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 59 (74 мг, выход 77%). ЭИ-МС: 579,4 (М+1).

Получение соединения 60

Ниже показана схема синтеза соединения 60 из соединения 43-I через промежуточное соединение 60-I.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору (диэтоксифосфорил)-уксусной кислоты (410 мг) в дихлорметане (20 мл) в атмосфере азота добавляли EDCl (680 мг) и HOBt (589 мг) при 25°С. После перемешивания смеси при 25°С в течение 1 часа к смеси добавляли раствор соединения 43-I (985 мг) в дихлорметане (10 мл) одной порцией. Реакционную смесь перемешивали еще в течение 6 часов, а затем наливали в воду. Полученную в результате смесь экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:32) с получением соединения 60-I (740 мг, выход 60%) в виде твердого вещества.

TMSBr (1,5 мл) добавляли к раствору соединения 60-I (740 мг) в дихлорметане (15 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидробромид соединения 60 (580 мг, выход 80%). ЭИ-МС: 643,3 (М+1).

Получение соединения 61

Ниже показана схема синтеза соединения 61 из соединения 43-I через промежуточное соединение 61-I.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки сложному эфиру монобензила 2-трет-бутоксикарбониламинопентандиоевой кислоте (0,8 г) в дихлорметане (40 мл) в атмосфере азота добавляли EDCl (450 мг) и HOBt (400 мг) при 25°С. После перемешивания смеси при 25°С в течение 1 часа добавляли раствор соединения 43-I (1,0 г) в ДХМ (10 мл) одной порцией. Смесь перемешивали еще в течение 6 часов, а затем наливали в воду. Полученный в результате раствор экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:19) с получением соединения 61-I (1,12 г, выход 78%) в виде твердого вещества.

Раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (10 мл) добавляли к раствору соединения 61-I (500 мг) в дихлорметане (20 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 61 (365 мг, выход 86%). ЭИ-МС: 740,4 (М+1).

Получение соединения 62

Соединение 62 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 61. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,07 (s, 1Н), 7,95 (d, 1Н), 7,78 (t, 1H), 7,50-7,22 (m, 7H), 5,29 (m, 2H), 4,88 (s, 2H), 4,58 (t, 2H), 4,40-4,28 (m, 3Н), 3,70 (m, 1H), 3,22-3,12 (m, 8H), 3,00 (m, 1H), 2,75-2,55 (m, 3Н), 2,37 (m, 2H), 2,30 (m, 2H), 2,18-2,00 (m, 5H), 1,90-1,80 (m, 3Н), 1,68 (m, 2H), 1,50-1,18 (m, 7H); ЭИ-МС:740,4 (М+1).

Получение соединения 63

Ниже показана схема синтеза соединения 63 из соединения 43-I через промежуточное соединение 63-I.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору 1-трет-бутилового сложного эфира 2-трет-бутоксикарбониламинодикарбоновой кислоты (300 мг) в дихлорметане (20 мл) в атмосфере азота добавляли EDCl (200 мг) и HOBt (200 мг) при 25°С. После перемешивания смеси при 25°С в течение 1 часа к смеси добавляли раствор соединения 43-I (400 мг) в дихлорметане (10 мл) одной порцией. Реакционную смесь перемешивали еще в течение 6 часов, а затем наливали в воду. Полученную в результате смесь экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:19) с получением соединения 63-I (401 мг, выход 72%) в виде твердого вещества.

Раствор 4 н. HCl/диоксан (4 мл) добавляли к раствору соединения 63-I (401 мг) в смеси дихлорметана (8 мл) и 1,4-диоксана (8 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 часов и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 63 (301 мг, выход 88%). ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,07 (s, 1Н), 7,97 (d, 1Н), 7,79 (t, 1Н), 7,44-7,38 (m, 2Н), 4,88 (s, 2Н), 4,60 (t, 2Н), 4,48 (m, 1Н), 4,38 (m, 1Н), 4,14 (m, 1Н), 4,02 (m, 1Н), 3,30 (m, 1Н), 3,22-3,12 (m, 6Н), 2,85-2,75 (m, 3Н), 2,37 (m, 2H), 2,30 (m, 2H), 2,18-1,80 (m, 8H), 1,68 (m, 2H), 1,58 (m, 1H), 1,42-1,18 (m, 6H); ЭИ-МС: 650,4 (М+1).

Получение соединения 64

Соединение 64 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 61. ЭИ-МС: 664,4 (М+1).

Получение соединения 65

Соединение 65 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 61. ЭИ-МС: 746,5 (М+1).

Получение соединения 66

Соединение 66 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 61. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,07 (s, 1Н), 7,87 (d, 1Н), 7,53-7,24 (m, 5Н), 6,99 (m, 1Н), 6,81 (m, 1Н), 5,31 (m, 2Н), 4,88 (s, 2Н), 4,58 (m, 2Н), 4,43-4.19 (m, 3Н), 3,94 (s, 3Н), 3,68 (m, 1Н), 3,22-2,96 (m, 7Н), 2,78-2,53 (m, 3Н), 2,41-2.20 (m, 4Н), 2,18-2,02 (m, 6Н), 1,94-1,80 (m, 4Н), 1,68 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 770,5 (М+1).

Получение соединения 67

Соединение 67 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 61. ЭИ-МС: 718,5 (М+1).

Получение соединения 68

Соединение 68 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 61. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,07 (s, 1Н), 7,93 (d, 1Н), 7,53-7,24 (m, 8Н), 5,32 (m, 2Н), 4,88 (s, 2Н), 4,59 (m, 2Н), 4,43-4,22 (m, 3Н), 3,71 (m, 1Н), 3,22-2,96 (m, 7Н), 2,78-2,53 (m, 3Н), 2,41-2,20 (m, 4Н), 2,18-2,02 (m, 5Н), 1,94-1,78 (m, 5Н), 1,69 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 774,4 (М+1).

Получение соединения 69

Ниже показана схема синтеза соединения 69 из соединения 43-I через промежуточное соединение 69-I.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору монобензилового сложного эфира 2-трет-бутоксикарбониламинопентадиоевой кислоты (0,8 г) в дихлорметане (40 мл) в атмосфере азота добавляли EDCl (450 мг) и HOBt (400 мг) при 25°С. После перемешивания смеси при 25°С в течение 1 ч добавляли раствор соединения 43-I (1,0 г) в дихлорметане (10 мл) одной порцией. Реакционную смесь перемешивали еще в течение 6 ч, а затем наливали в воду. Полученную в результате смесь экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:19) с получением соединения 69-I (1,06 г, выход 74%) в виде твердого вещества.

Раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (10 мл) добавляли к раствору соединения 69-I (500 мг) в дихлорметане (20 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 69 (343 мг, выход 81%). ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05 (s, 1Н), 8,01 (m, 2Н), 7,83 (t, 1Н), 7,47 (m, 2Н), 7,40-7,20 (m, 5Н), 4,87 (s, 2Н), 4,62-4,57 (m, 3Н), 4,42-4,26 (m, 3Н), 4,12 (m, 1Н), 3,78 (m, 1Н), 3,20-3,05 (m, 7Н), 2,78 (m, 1Н), 2,48 (m, 2Н), 2,35 (m, 2Н), 2,30-2,00 (m, 7Н), 1,96-1,80 (m, 4Н), 1,68 (m, 1Н), 1,58 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 739,5 (М+1).

Получение соединения 70

Соединение 70 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 61. ЭИ-МС: 774,4 (М+1).

Получение соединения 71

Соединение 71 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05-8,02 (m, 2Н), 7,83 (t, 1Н), 7,47-7,22 (m, 7Н), 4,88 (s, 2Н), 4,62 (m, 1Н), 4,60-4,57 (m, 3Н), 4,48-4,30 (m, 3Н), 3,73 (m, 1Н), 3,53 (m, 1Н), 3,35 (m, 1Н), 3,25-3,05 (m, 7Н), 2,78 (m, 1Н), 2,58 (m, 2Н), 2,40-2,20 (m, 4Н), 2,18-1,80 (m, 8Н), 1,78-1,58 (m, 5Н), 1,42-1,18 (m, 8Н), 0,95 (t, 3Н); ЭИ-МС: 795,5 (М+1).

Получение соединения 72

Соединение 72 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 61. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05-8,02 (m, 2Н), 7,83 (t, 1Н), 7,47-7,42 (m, 2Н), 4,88 (s, 2Н), 4,65 (m, 1Н), 4,60-4,57 (m, 3Н), 4,48-4,43 (m, 2Н), 4,33 (m, 1Н), 4,03 (m, 1Н), 3,93 (s, 3Н), 3,30 (m, 1Н), 3,20-3,12 (m, 6Н), 2,85-2,75 (m, 3Н), 2,40-2,20 (m, 4Н), 2,18-1,80 (m, 8Н), 1,68 (m, 2Н), 1,58 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 751,4 (М+1).

Получение соединения 73

Соединение 73 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 61. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06 (s, 1Н), 7,93 (d, 1Н), 7,76 (t, 1Н), 7,42-7,33 (m, 2Н), 5,08 (m, 1Н), 4,86 (s, 2Н), 4,57 (t, 2Н), 4,52-4,30 (m, 3Н), 4,28 (m, 1Н), 4,12-4,00 (m, 3Н), 3,30 (m, 1Н), 3,20-3,12 (m, 6Н), 2,82 (m, 1Н), 2,72 (t, 2Н), 2,38 (m, 2Н), 2,30-1,81 (m, 10Н), 1,68 (m, 2Н), 1,52 (m, 1Н), 1,42-1,19 (m, 12Н); ЭИ-МС: 779,5 (М+1).

Получение соединения 74

Соединение 74 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06-8,03 (m, 2Н), 7,83 (m, 1Н), 7,49-7,44 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,62-4,38 (m, 5Н), 4,30-4,13 (m, 5Н), 4,03 (m, 1Н), 3,30 (m, 1Н), 3,20-3,12 (m, 6Н), 2,87 (m, 1Н), 2,76 (m, 2Н), 2,57 (m, 2Н), 2,40-1,81 (m, 14Н), 1,68 (m, 2Н), 1,52 (m, 1Н), 1,42-1,19 (m, 12Н); ЭИ-МС: 835,5 (М+1).

Получение соединения 75

Соединение 75 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 61. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,86 (s, 1Н), 8,66 (m, 1Н), 8,17 (br s, 1Н), 8,16-7,98 (m, 3Н), 7,83 (m, 1Н), 7,49-7,44 (m, 2Н), 5,80-5,64 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,62 (t, 2Н), 4,52-4,38 (m, 3Н), 4,03 (m, 1Н), 3,26 (m, 1Н), 3,20-3,12 (m, 6Н), 2,87-2,70 (m, 3Н), 2,46-2,32 (m, 4Н), 2,18-1,81 (m, 8Н), 1,68 (m, 2Н), 1,52 (m, 1Н), 1,42-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 741,4 (М+1).

Получение соединения 76

Соединение 76 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06 (s, 1Н), 8,04 (d, 1Н), 7,92 (d, 2Н), 7,85 (t, 1Н), 7,49-7,44 (m, 2Н), 7,09-7,03 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,59 (t, 2Н), 4,42-4,34 (m, 2Н), 4,03 (m, 1Н), 3,80 (s, 3Н), 3,64 (m, 1Н), 3,20-3,12 (m, 7Н), 2,81 (m, 1Н), 2,42-2,36 (m, 4Н), 2,34-1,81 (m, 10Н), 1,68 (m, 2Н), 1,52 (m, 1Н), 1,42-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 819,4 (М+1).

Получение соединения 77

Соединение 77 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06 (s, 1Н), 8,00 (d, 1Н), 7,81 (t, 1Н), 7,46-7,40 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,59 (t, 2Н), 4,52-4,38 (m, 2Н), 4,24(m, 1Н), 4,12-3,98 (m, 3Н), 3,84-3,78 (m, 4Н), 3,30 (m, 1Н), 3,22-3,14 (m, 6Н), 2,91-2,70 (m, 3Н), 2,42-2,20 (m, 4Н), 2,20-1,81 (m, 8Н), 1,68 (m, 2Н), 1,52 (m, 1Н), 1,42-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 751,4 (М+1).

Получение соединения 78

Ниже показана схема синтеза соединения 78 из соединения 43-I через промежуточное соединение 78-I.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 43-I (180,5 мг) в ДХМ (15 мл) в атмосфере азота добавляли метиловый сложный эфир 2-бромтиазол-5-карбоновой кислоты (68,8 мг) и ТЭА (200 мг). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч, а затем гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М). Полученный в результате раствор экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Экстракт промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:19) с получением соединения 78-I (161,2 мг, выход 75%) в виде твердого вещества.

Раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (3,2 мл) добавляли к раствору соединения 78-I (161,2 мг) в дихлорметане (6,4 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 78 (125 мг, выход 87%). ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06 (s, 1Н), 8,02 (d, 1Н), 7,97 (s, 1Н), 7,81 (t, 1Н), 7,48-7,40 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,60 (t, 2Н), 4,48 (m, 1Н), 4,06 (m, 2Н), 3,93 (s, 3Н), 3,52 (m, 2Н), 3,22-3,14 (m, 6Н), 2,37 (m, 2Н), 2,20-1,81 (m, 10Н), 1,68 (m, 1Н), 1,42-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 662,3 (М+1).

Получение соединения 79

Соединение 79 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 61. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,02-7,90 (m, 2Н), 7,84-7,71 (m, 3Н), 7,70-7,38 (m, 10Н), 5,23 (br s, 1Н), 4,88 (s, 2Н), 4,56 (m, 2Н), 4,42-4,23 (m, 2Н), 4,07 (m, 1Н), 3,78 (m, 1Н), 3,32 (m, 1Н), 3,22-3,04 (m, 6Н), 2,83 (m, 1Н), 2,33 (m, 2Н), 2,18-1,80 (m, 8Н), 1,68 (m, 2Н), 1,58 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 788,4 (М+1).

Получение соединения 80

Соединение 80 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 61. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05 (s, 1Н), 8,00 (d, 1Н), 7,81 (m, 1Н), 7,46-7,40 (m, 2Н), 5,17 (m, 1Н), 4,86 (s, 2Н), 4,58 (t, 2Н), 4,52-4,38 (m, 2Н), 4,20 (m, 1Н), 4,03 (m, 1Н), 3,26 (m, 1Н), 3,20-3,12 (m, 6Н), 2,87-2,73 (m, 3Н), 2,40-2,22 (m, 4Н), 2,18-1,81 (m, 8Н), 1,68 (m, 2Н), 1,52 (m, 1Н), 1,42-1,19 (m, 12Н); ЭИ-МС: 692,4 (М+1).

Получение соединения 81

Соединение 81 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05 (s, 1Н), 8,02 (d, 1Н), 7,83 (t, 1Н), 7,58-7,41 (m, 7Н), 5,59 (s, 1Н), 4,86 (s, 2Н), 4,59 (t, 2Н), 4,51-4,40 (m, 2Н), 4,20 (m, 1Н), 4,08 (m, 1Н), 3,79 (s, 3Н), 3,34 (m, 1Н), 3,22-3,14 (m, 6Н), 2,91-2,78 (m, 3Н), 2,42-2,20 (m, 4Н), 2,20-1,81 (m, 8Н), 1,68 (m, 2Н), 1,52 (m, 1Н), 1,42-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 797,5 (М+1).

Получение соединения 82

Соединение 82 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 61. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,04 (d, 1Н), 8,03 (s, 1Н), 7,84 (m, 1Н), 7,50-7,44 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,58 (t, 2Н), 4,52-4,38 (m, 4Н), 4,20 (m, 1Н), 4,03 (m, 1H), 3,26 (m, 1H), 3,20-3,12 (m, 6H), 2,87-2,73 (m, 3Н), 2,40-2,22 (m, 4H), 2,18-1,81 (m, 8H), 1,68 (m, 2H), 1,52 (m, 1H), 1,42-1,19 (m, 9H); ЭИ-МС: 678,4 (М+1).

Получение соединения 83

Соединение 83 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,04 (s, 1Н), 8,02 (d, 1Н), 7,83 (m, 1Н), 7,49-7,42 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,58 (t, 2Н), 4,50-4,40 (m, 2Н), 4,05-3,98(m, 3Н), 3,26 (m, 1Н), 3,20-3,12 (m, 6Н), 2,85 (m, 1Н), 2,64 (m, 2Н), 2,37 (m, 2Н), 2,22 (m, 2Н), 2,18-1,81 (m, 8Н), 1,68 (m, 2Н), 1,52 (m, 1Н), 1,42-1,19 (m, 12Н); ЭИ-МС: 691,5 (М+1).

Получение соединения 84

Соединение 84 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05-8,01 (m, 2Н), 7,83 (t, 1Н), 7,48-7,36 (m, 7Н), 4,88 (s, 2Н), 4,82 (d, 1Н), 4,58 (t, 2Н), 4,44-4,32 (m, 3Н), 4,22-4,12 (m, 3Н), 3,96-3,84 (m, 2Н), 3,51 (d, 1Н), 3,25-3,10 (m, 8Н), 2,81 (m, 1Н), 2,71 (m, 1Н), 2,35 (m, 2Н), 2,26 (m, 2Н), 2,22-2,05 (m, 5Н), 1,94-1,82 (m, 3Н), 1,68 (m, 2Н), 1,57 (m, 1Н), 1,42-1,17 (m, 9Н); ЭИ-МС: 825,5 (М+1).

Получение соединения 85

Соединение 85 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 61. ЭИ-МС: 730,4 (М+1).

Получение соединения 86

Соединение 86 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,04-8,02 (m, 2Н), 7,83 (t, 1Н), 7,50-7,44 (m, 2Н), 4,88 (s, 2Н), 4,58 (m, 2Н), 4,52-4,42 (m, 2Н), 4,22-4,01 (m, 6Н), 3,51 (m, 2Н), 3,32 (m, 1Н), 3,22-3,04 (m, 6Н), 2,85 (m, 1Н), 2,68 (t, 2Н), 2,36 (m, 2Н), 2,30-2,20 (m, 4Н), 2,18-1,80 (m, 8Н), 1,68 (m, 2Н), 1,58 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 12Н); ЭИ-МС: 813,5 (М+1).

Получение соединения 87

Ниже показана схема синтеза соединения 87 из соединения 43-I через промежуточное соединение 87-I.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору 4-трет-бутоксикарбониламино-4-[2-(диэтоксифосфорил)-этилкарбамоил]-масляной кислоты (410 мг) в дихлорметане (50 мл) в атмосфере азота добавляли EDCl (680 мг) и HOBt (589 мг) при 25°С. После перемешивания смеси при 25°С в течение 1 ч к смеси добавляли раствор соединения 43-I (1000 мг) в дихлорметане (10 мл) одной порцией. Реакционную смесь перемешивали еще в течение 6 ч, а затем наливали в воду. Полученную в результате смесь экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:19) с получением соединения 87-I (850 мг, выход 67%) в виде твердого вещества.

TMSBr (0,6 мл) добавляли к раствору соединения 87-I (200 мг) в дихлорметане (15 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидробромид соединения 87 (205 мг, выход 83%). ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,12 (s, 1Н), 7,79 (d, 1Н), 7,83 (t, 1Н), 7,28-7,17 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,59 (t, 2Н), 4,42 (m, 1Н), 4,24 (m, 1Н), 4,08 (m, 1Н), 3,98 (s, 1Н), 3,57 (m, 2Н), 3,26 (m, 1Н), 3,20-3,08 (m, 6Н), 2,81 (m, 1Н), 2,68 (m, 2Н), 2,36 (m, 2Н), 2,22-1,79 (m, 12Н), 1,70 (m, 2Н), 1,59 (m, 1Н), 1,39-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 757,4 (М+1).

Получение соединения 88

Соединение 88 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,08 (s, 1Н), 7,87 (d, 1Н), 7,74 (t, 1Н), 7,41-7,30 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,59 (t, 2Н), 4,03 (t, 1Н), 3,66 (t, 2Н), 3,22-3,10 (m, 6Н), 2,37 (m, 2Н), 2,18-1,79 (m, 14Н), 1,68 (m, 1H), 1,42-1,17 (m, 6H); ЭИ-МС: 553,3 (М+1).

Получение соединения 89

Соединение 89 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,10-8,00 (m, 3Н), 7,86 (m, 1Н), 7,52-7,41 (m, 3Н), 6,95 (t, 1Н), 4,87 (s, 2Н), 4,62-4,40 (m, 3Н), 4,40-4,26 (m, 2Н), 3,78 (m, 1Н), 3,20-3,10 (m, 7Н), 2,81-2,67 (m, 3Н), 2,40-2,26 (m, 4Н), 2,20-2,00 (m, 5Н), 1,96-1,80 (m, 4Н), 1,68 (m, 2Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 808,4 (М+1).

Получение соединения 90

Соединение 90 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 87. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,04-8,02 (m, 2Н), 7,83 (t, 1Н), 7,48-7,41 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,58 (t, 2Н), 4,53-4,40 (m, 4Н), 4,24 (t, 1Н), 4,03 (m, 1Н), 3,28 (m, 1Н), 3,22-3,12 (m, 8Н), 2,84(m, 1Н), 2,78 (t, 2Н), 2,35 (t, 2Н), 2,30 (m, 2Н), 2,19-1,78 (m, 8Н), 1,70 (m, 2Н), 1,55 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 758,4 (М+1).

Получение соединения 91

Соединение 91 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ЭИ-МС: 753,5 (М+1).

Получение соединения 92

Соединение 92 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05 (s, 1Н), 8,01 (m, 1Н), 7,81 (t, 1Н), 7,47-7,24 (m, 7Н), 4,87 (s, 2Н), 4,62-4,57 (m, 3Н), 4,42-4,38 (m, 2Н), 4,24 (m, 1Н), 3,91-3,78 (m, 2Н), 3,20-3,05 (m, 7Н), 2,81 (m, 1Н), 2,52 (m, 2Н), 2,35 (m, 2Н), 2,26-1,80 (m, 11Н), 1,68 (m, 1Н), 1,58 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 781,5 (М+1).

Получение соединения 93

Соединение 93 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,76 (d, 1Н), 8,58 (m, 1Н), 8,06-7,97 (m, 4Н), 7,83 (t, 1Н), 7,50-7,43 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,82 (m, 2Н), 4,58 (t, 2Н), 4,50-4,42 (m, 2Н), 4,27 (t, 1Н), 3,98 (t, 1Н), 3,29 (m, 1Н), 3,22-3,14 (m, 6Н), 2,85 (m, 1Н), 2,72 (m, 2Н), 2,41-2,24 (m, 4Н), 2,18-2,04 (m, 5Н), 1,94-1,81 (m, 3Н), 1,70 (m, 2Н), 1,53 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 740,5 (М+1).

Получение соединения 94

Соединение 94 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,04 (s, 1Н), 8,01 (d, 1Н), 7,82 (m, 1Н), 7,49-7,42 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,58 (t, 2Н), 4,50-4,40 (m, 2Н), 4,05-3,98 (m, 2Н), 3,26 (m, 1Н), 3,20-3,12 (m, 6Н), 2,85 (m, 1Н), 2,71 (m, 1Н), 2,64 (m, 2Н), 2,35 (m, 2Н), 2,20 (m, 2Н), 2,18-1,81 (m, 8Н), 1,68 (m, 2Н), 1,52 (m, 1Н), 1,42-1,19 (m, 6Н), 0,84 (d, 2Н), 0,60 (br s, 2Н); ЭИ-МС: 689,5 (М+1).

Получение соединения 95

Соединение 95 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,10 (d, 1Н), 8,05-8,01 (m, 2Н), 7,85 (t, 1Н), 7,50-7,44 (m, 2Н), 7,30-7,17 (m, 5Н), 4,88 (s, 2Н), 4,59-4,45 (m, 3Н), 4,38-4,24 (m, 3Н), 4,10 (m, 1Н), 3,82 (d, 1Н), 3,71 (d, 1Н), 3,47 (m, 1Н), 3,20-3,06 (m, 7Н), 2,98-2,64 (m, 3Н), 2,42-2,18 (m, 4Н), 2,18-2,02 (m, 5Н), 1,90-1,76 (m, 4Н), 1,68-1,60 (m, 2Н), 1,42-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 820,4 (М+1).

Получение соединения 96

Соединение 96 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05-8,01 (m, 2Н), 7,84 (m, 1Н), 7,50-7,44 (m, 2Н), 7,36 (m, 1Н), 7,11 (m, 1Н), 6,97 (m, 1Н), 4,88 (s, 2Н), 4,60-4,36 (m, 6Н), 4,09 (t, 1Н), 3,69 (m, 1Н), 3,22-3,06 (m, 9Н), 2,78 (m, 1Н), 2,49 (m, 2Н), 2,35 (m, 2Н), 2,22-2,04 (m, 5Н), 1,94-1,81 (m, 4Н), 1,70 (m, 1Н), 1,54 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 745,4 (М+1).

Получение соединения 97

Соединение 97 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06 (s, 1Н), 8,03 (d, 1Н), 7,94-7,80 (m, 2Н), 7,61-7,40 (m, 5Н), 4,90 (s, 2Н), 4,59-4,53 (m, 4Н), 4,38-4,28 (m, 2Н), 4,12 (m, 1Н), 3,78 (s, 3Н), 3,58 (m, 1Н), 3,20-3,00 (m, 9Н), 2,76 (m, 1Н), 2,44-2,04 (m, 9Н), 1,90-1,78 (m, 4Н), 1,67 (m, 1Н), 1,50 (m, 1Н), 1,40-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 797,5 (М+1).

Получение соединения 98

Соединение 98 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,08-8,04 (m, 2Н), 7,86 (m, 1Н), 7,54-7,48 (m, 2Н), 7,35 (d, 2Н), 7,21 (d, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,65-4,53 (m, 4Н), 4,42-4,26 (m, 2Н), 4,18 (m, 1Н), 3,51 (m, 1Н), 3,22-3,03 (m, 9Н), 2,78 (m, 1Н), 2,48-2,22 (m, 4Н), 2,18-2,02 (m, 5H), 1,93-1,81 (m, 3Н), 1,68 (m, 2H), 1,56 (m, 1H), 1,42-1,18 (m, 6H); ЭИ-МС: 773,4 (М+1).

Получение соединения 99

Соединение 99 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,08 (s, 1Н), 7,97 (d, 1Н), 7,90-7,62 (m, 3Н), 7,58-7,38 (m, 4Н), 4,88 (s, 2Н), 4,64-4,56 (m, 3Н), 4,42-4,24 (m, 4Н), 3,78 (d, 1Н), 3,20-3,06 (m, 7Н), 2,90-2,64 (m, 3Н), 2,42-2,22 (m, 4Н), 2,18-2,02 (m, 5Н), 1,94-1,78 (m, 3Н), 1,76-1,42 (m, 3Н), 1,42-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 779,5 (М+1).

Получение соединения 100

Соединение 100 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05-8,02 (m, 2Н), 7,82 (m, 1Н), 7,48-7,42 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,55 (t, 2Н), 4,48-4,43 (m, 2Н), 4,07 (t, 1Н), 4,00 (m, 1Н), 3,23 (m, 1Н), 3,20-3,06 (m, 8Н), 2,85 (m, 1Н), 2,69 (t, 2Н), 2,36 (m, 2Н), 2,24 (m, 2Н), 2,18-2,02 (m, 5Н), 1,98-1,83 (m, 3Н), 1,70 (m, 2Н), 1,67 (m, 1Н), 1,42-1,17 (m, 6Н), 1,06 (m, 1Н), 0,56 (m, 2Н), 0,27 (m, 2Н); ЭИ-МС: 703,5 (М+1).

Получение соединения 101

Соединение 101 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,72 (s, 1Н), 8,07-8,03 (m, 2Н), 7,84 (m, 1Н), 7,50-7,44 (m, 3Н), 4,86 (s, 2Н), 4,65-4,56 (m, 4Н), 4,50-4,41 (m, 2Н), 4,15 (t, 1Н), 3,98 (m, 1Н), 3,29 (m, 1Н), 3,22-3,12 (m, 6Н), 2,84 (m, 1Н), 2,67 (m, 2Н), 2,36 (m, 2Н), 2,24 (m, 2Н), 2,18-2,04 (m, 5Н), 1,94-1,81 (m, 3Н), 1,70 (m, 2Н), 1,54 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 729,4 (М+1).

Получение соединения 102

Соединение 102 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05-8,03 (m, 2Н), 7,84 (m, 1Н), 7,50-7,42 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,58 (t, 2Н), 4,52-4,41 (m, 2Н), 4,08 (t, 1Н), 3,98 (m, 1Н), 3,31-3,29 (m, 2Н), 3,22-3,11 (m, 6Н), 3,03 (m, 1Н), 2,84 (m, 1Н), 2,65 (t, 2Н), 2,37 (m, 2Н), 2,24 (m, 2Н), 2,18-2,02 (m, 5Н), 1,93-1,84 (m, 3Н), 1,78-1,50 (m, 10Н), 1,42-1,17 (m, 8Н), 0,98 (m, 2Н); ЭИ-МС: 745,5 (М+1).

Получение соединения 103

Соединение 103 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 61. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,00-7,94 (m, 2Н), 7,80 (t, 1Н), 7,50-7,36 (m, 7Н), 5,32 (m, 2Н), 4,47 (t, 2Н), 4,41 (m, 1Н), 4,29 (m, 1Н), 4,05-4,03 (m, 2Н), 3,87 (m, 2Н), 3,22-3,01 (m, 10Н), 2,78 (m, 1Н), 2,62 (m, 1Н), 2,38-2,20 (m, 4Н), 2,18-1,82 (m, 9Н), 1,68 (m, 1Н), 1,56 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 754,5 (М+1).

Получение соединения 104

Соединение 104 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05-8,03 (m, 3Н), 7,86 (t, 1Н), 7,48-7,41 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,82 (m, 2Н), 4,74 (d, 1Н), 4,58 (t, 2Н), 4,46-4,38 (m, 3Н), 4,20-4,11 (m, 3Н), 3,80 (m, 1Н), 3,22-3,12 (m, 7Н), 2,81 (m, 1Н), 2,54 (t, 2Н), 2,35 (t, 2Н), 2,32-2,02 (m, 7Н), 1,98-1,78 (m, 4Н), 1,68 (m, 1Н), 1,55 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н), 1,17 (t, 3Н); ЭИ-МС: 816,5 (М+1).

Получение соединения 105

Соединение 105 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05-8,03 (m, 2Н), 7,83 (t, 1Н), 7,48-7,41 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,58 (t, 2Н), 4,51-4,40 (m, 2Н), 4,09 (t, 1Н), 4,01 (m, 1Н), 3,40 (m, 2Н), 3,30 (m, 1Н), 3,20-3,06 (m, 8Н), 2,85(m, 1Н), 2,68 (t, 2Н), 2,35 (t, 2Н), 2,22 (m, 2Н), 2,18-1,80 (m, 15Н), 1,78-1,52 (m, 4Н), 1,42-1,18 (m, 12Н); ЭИ-МС: 788,5 (М+1).

Получение соединения 106

Соединение 106 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 1 и 57. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,09 (s, 1Н), 7,92 (m, 1Н), 7,77 (t, 1Н), 7,43-7,37 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,60 (t, 2Н), 4,01 (t, 1Н), 3,63 (m, 2Н), 3,50-3,30 (m, 4Н), 3,20-3,10 (m, 6Н), 2,38 (m, 2Н), 2,18-1,62 (m, 11Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 660,3 (М+1).

Получение соединения 107

Соединение 107 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,09-8,00 (m, 2Н), 7,83 (t, 1Н), 7,50-7,41 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,58 (t, 2Н), 4,52-4,41 (m, 2Н), 4,02 (t, 1Н), 3,62-3,56 (m, 5Н), 3,32-3,08 (m, 7Н), 2,84 (m, 1Н), 2,65 (t, 2Н), 2,34 (m, 2Н), 2,24-1,50 (m, 19Н), 1,42-1,17 (m, 6Н); ЭИ-МС: 717,5 (М+1).

Получение соединения 108

Соединение 108 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05-8,03 (m, 2Н), 7,85 (m, 1Н), 7,58-7,46 (m, 6Н), 4,86 (s, 2Н), 4,56 (m, 2Н), 4,42-4,10 (m, 5Н), 3,53 (m, 1Н), 3,20-3,03 (m, 9Н), 2,75 (m, 1Н), 2,50-2,22 (m, 4Н), 2,18-2,02 (m, 5Н), 1,93-1,81 (m, 3Н), 1,68 (m, 2Н), 1,56 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 807,4 (М+1).

Получение соединения 109

Соединение 109 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,02-7,97 (m, 3Н), 7,83 (t, 1Н), 7,49-7,43 (m, 2Н), 4,93 (s, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,57-4,56 (m, 4Н), 3,26-3,07 (m, 12Н), 2,43-2,28 (m, 4Н), 2,21-2,02 (m, 8Н), 1,93-1,80 (m, 4Н), 1,74-1,63 (m, 2Н), 1,44-1,18 (m, 12Н); ЭИ-МС: 701,5 (М+1).

Получение соединения 110

Соединение 110 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63. ЭИ-МС: 636,4 (М+1).

Получение соединения 111

Соединение 111 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 61. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,04 (s, 1Н), 7,41-7,34 (m, 2Н), 7,31 (d, 1Н), 4,86 (s, 2Н), 4,57 (t, 2Н), 4,48 (m, 1Н), 4,35 (m, 1Н), 4,09 (m, 1Н), 4,03 (m, 1Н), 3,90 (s, 6Н), 3,26 (m, 1Н), 3,20-3,10 (m, 6Н), 2,81 (m, 1Н), 2,75 (m, 2Н), 2,35 (m, 2Н), 2,25 (m, 2Н), 2,18-1,81 (m, 8Н), 1,68 (m, 2Н), 1,52 (m, 1Н), 1,42-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 694,4 (М+1).

Получение соединения 112

Соединение 112 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63, ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,04 (s, 1Н), 7,41-7,30 (m, 3Н), 4,86 (s, 2Н), 4,57 (t, 2Н), 4,47 (m, 1Н), 4,40 (m, 1Н), 4,09 (m, 1Н), 4,03 (m, 1Н), 3,90 (s, 3Н), 3,25 (m, 1Н), 3,20-3,10 (m, 6Н), 2,81 (m, 1Н), 2,76 (m, 2Н), 2,35 (m, 2Н), 2,26 (m, 2Н), 2,18-1,81 (m, 8Н), 1,68 (m, 2Н), 1,52 (m, 1Н), 1,42-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 680,4 (М+1).

Получение соединения 113

Соединение 113 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,04 (s, 1Н), 8,00 (m, 1Н), 7,82 (m, 1Н), 7,47-7,42 (m, 2Н), 7,28-7,22 (m, 2Н), 6,83-6,73 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,82 (m, 1Н), 4,57 (t, 2Н), 4,41-4,24 (m, 2Н), 4,18-4,04 (m, 2Н), 3,56 (m, 1Н), 3,22-3,01 (m, 9Н), 2,78 (m, 1Н), 2,48-2,18 (m, 4Н), 2,18-2,02 (m, 5Н), 1,93-1,80 (m, 4Н), 1,68 (m, 1Н), 1,50 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 755,5 (М+1).

Получение соединения 114

Соединение 114 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 87. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05-8,03 (m, 3Н), 7,82 (t, 1Н), 7,48-7,41 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,70 (d, 1Н), 4,62-4,56 (m, 4Н), 4,46-4,40 (m, 3Н), 4,11 (t, 1H), 3,80 (m, 1H), 3,22-3,12 (m, 7H), 2,81 (m, 1H), 2,54 (t, 2H), 2,36 (t, 2H), 2,32-2,02 (m, 8H), 1,98-1,78 (m, 5H), 1,68 (m, 1H), 1,55 (m, 1H), 1,42-1,18 (m, 6H); ЭИ-МС: 838,4 (M+1).

Получение соединения 115

Соединение 115 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 7,97 (d, 1Н), 7,93 (s, 1Н), 7,78 (t, 1Н), 7,44-7,37 (m, 2Н), 4,54-4,42 (m, 4Н), 4,14 (t, 1Н), 4,08 (m, 1Н), 3,87 (m, 2Н), 3,31 (m, 1Н), 3,22-3,01 (m, 9Н), 2,92 (m, 1Н), 2,77 (m, 1Н), 2,36-2,20 (m, 4Н), 2,18-1,80 (m, 8Н), 1,68 (m, 2Н), 1,61 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 664,4 (М+1).

Получение соединения 116

Соединение 116 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 69. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,07-8,04 (m, 2Н), 7,86 (t, 1Н), 7,54-7,48 (m, 2Н), 7,38-7,35 (m, 2Н), 6,88-6,80 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,80-4,76 (m, 3Н), 4,22-4,06 (m, 2Н), 3,51 (m, 1Н), 3,22-3,00 (m, 9Н), 2,78 (m, 1Н), 2,48-2,22 (m, 4Н), 2,18-2,02 (m, 5Н), 1,93-1,81 (m, 3Н), 1,68 (m, 2Н), 1,56 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 769,5 (М+1).

Получение соединения 117

Соединение 117 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 1 и 57. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,34 (s, 1H), 8,26-8,22 (m, 2Н), 7,79 (t, 1Н), 7,48-7,41 (m, 2Н), 4,91 (s, 2Н), 4,68-4,61 (m, 4Н), 4,07 (t, 1Н), 3,73 (m, 2Н), 3,24-3,10 (m, 8Н), 2,45-2,37 (m, 4Н), 2,25-1,78 (m, 10Н), 1,68 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 741,4 (М+1).

Получение соединения 118

Соединение 118 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 1 и 57. ЭИ-МС: 646,3 (М+1).

Получение соединения 119

Соединение 119 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 87. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,03-8,00 (m, 2Н), 7,82 (t, 1Н), 7,48-7,41 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,58 (t, 2Н), 4,46-4,43 (m, 2Н), 4,14 (t, 1Н), 4,01 (m, 1Н), 3,53 (m, 2Н), 3,23 (m, 1Н), 3,22-3,14 (m, 6Н), 2,84 (m, 1Н), 2,70 (t, 2Н), 2,36 (t, 2Н), 2,23 (m, 2Н), 2,19-2,02 (m, 4Н), 1,99-1,81 (m, 4Н), 1,68 (m, 2Н), 1,58 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 743,4 (М+1).

Получение соединения 120

Соединение 120 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05 (s, 1Н), 8,01 (d, 1Н), 7,82 (t, 1Н), 7,68-7,41 (m, 8Н), 4,86 (s, 2Н), 4,55 (t, 2Н), 4,49 (t, 2Н), 4,42 (m, 1Н), 3,69 (m, 1Н), 3,59 (m, 1Н), 3,22-3,04 (m, 8Н), 2,40-2,26 (m, 4Н), 2,20-1,80 (m, 12Н), 1,71 (m, 1Н), 1,43-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 750,4 (М+1).

Получение соединения 121

Ниже показана схема синтеза соединения 121 через промежуточные соединения 121-I и 121-II.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору 2,4-дихлор-пиридо[2,3-d]пиримидина (450 мг) в ТГФ (30 мл) в атмосфере азота добавляли трет-бутиловый сложный эфир 4-аминопиперидин-1-карбоновой кислоты (470 мг) и ТЭА (500 мг). Смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч, а затем гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М). Смесь экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали перекристаллизацией из н-гексана/этилацетата с получением соединения 121-I (610 мг, выход 75%) в виде светло-желтого твердого вещества.

Раствор соединений 121-I (610 мг) и S-IV (860 мг) в 1-пентаноле (3 мл) нагревали при 120°С в течение 2 мин с использованием микроволнового излучения. Полученную в результате смесь концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией с МеОН/ДХМ (1:9) с получением соединения 121-II (825 мг, выход 60%).

К раствору соединения 121-II (400 мг) в дихлорметане (16 мл) добавляли раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (8 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 121 (348 мг, выход 93%). ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,72 (d, 1Н), 8,58 (d, 1Н), 8,05 (s, 1Н), 7,51 (dd, 1Н), 4,91 (s, 2Н), 4,57 (t, 2Н), 4,51 (m, 1Н), 3,56 (m, 2Н), 3,22-3,08 (m, 8Н), 2,36 (m, 2Н), 2,22-2,04 (m, 6Н), 1,98-1,82 (m, 4Н), 1,68 (m, 1Н), 1,41-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 522,3 (М+1).

Получение соединения 122

Соединение 122 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 121 и 45. ЭИ-МС: 618,3 (М+1).

Получение соединения 123

Соединение 123 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 121 и 63. ЭИ-МС: 651,4 (М+1).

Получение соединения 124

Ниже показана схема синтеза соединения 124 из соединения 121-II через промежуточное соединение 124-I.

Раствор соединения 121-II (400 мг) и PtO₂ (40 мг) в метаноле (8 мл) перемешивали в атмосфере Н₂ (1 атм.) при 25°С в течение 15 ч. Полученную в результате смесь концентрировали. Полученный в результате остаток очищали флэш-хроматографии с МеОН/ДХМ (1:4) с получением соединения 124-I (310 мг, выход 77%).

Раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (6 мл) добавляли к раствору соединения 124-I (310 мг) в дихлорметане (12 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 124 (223 мг, выход 88%). ЭИ-МС: 526,4 (М+1).

Получение соединения 125

Соединение 125 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 122 и 124. ЭИ-МС: 622,4 (М+1).

Получение соединения 126

Соединение 126 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 63 и 124. ЭИ-МС: 655,4 (М+1).

Получение соединения 127

Ниже показана схема синтеза соединения 127 через промежуточные соединения 127-I и 127-III.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору 2,6 дихлорпурина (10 г) в этилацетате (100 мл) добавляли моногидрат пара-толуолсульфоновой кислоты (0,08 г). Полученную в результате смесь нагревали до 50°С в атмосфере азота и добавляли 3,4-дигидро-2Н-пиран (7,5 мл) в течение периода 2 ч. Смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч и фильтровали с получением неочищенного твердого вещества. Твердое вещество промывали смесью н-гексан/этилацетат (1:1) с получением соединения 127-I (14,4 г, выход 100%) в виде бесцветного твердого вещества.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 127-I (1,01 г) в ТГФ (30 мл) в атмосфере азота добавляли 1-метил-пиперазин (500 мг) и ТЭА (1,01 г). Смесь нагревали до 50°С в течение 15 ч, а затем гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М). Полученный в результате раствор экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с н-гексаном/этилацетатом (1:9) с получением соединения 127-II (0,93 г, выход 76%) в виде твердого вещества.

Раствор соединений 127-II (800 мг) и S-IV (1,32 г) в 1-пентаноле (3 мл) нагревали при 150°С в течение 180 мин с использованием микроволнового излучения. Затем реакционную смесь концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:9) с получением соединения 127-III (322 мг, выход 17%).

К раствору соединения 127-III (322 мг) в дихлорметане (16 мл) добавляли раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (8 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 127 (248 мг, выход 89%). ЭИ-МС: 511,3 (М+1).

Получение соединения 128

Соединение 128 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,35 (s, 1Н), 7,60 (d, 1Н), 7,40 (d, 1Н), 4,84 (s, 2Н), 4,65 (t, 2Н), 4,37 (m, 4Н), 3,47 (m, 4Н), 3,28-3,08 (m, 6Н), 2,44 (m, 2Н), 2,20-2,13 (m, 4Н), 2,02 (m, 2Н), 1,71 (m, 1Н), 1,43-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 513,3 (М+1).

Получение соединения 129

Соединение 129 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 1. ЭИ-МС: 471,3 (М+1).

Получение соединения 130

Соединение 130 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 1. ЭИ-МС: 457,3 (М+1).

Получение соединения 131

Соединение 131 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 1. ЭИ-МС: 499,4 (М+1).

Получение соединения 132

Ниже показана схема синтеза соединения 132 из 2,4-дихлорпиримидина через промежуточные соединения 132-I-132-IV.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору 2,4-дихлор-пиримидина (4,01 г) в ТГФ (120 мл) в атмосфере азота добавляли трет-бутиловый сложный эфир 4-аминопиперидин-1-карбоновой кислоты (6,42 г) и ТЭА (4,01 г). Смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч, а затем гасили водным раствором NH₄Cl (200 мл, 2 М). Раствор экстрагировали этилацетатом (3×400 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с н-гексаном/этилацетатом (1:1) с получением соединения 132-I (4,4 г, выход 63%) в виде твердого вещества.

Раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (56 мл) добавляли к раствору соединения 132-I (4,4 г) в дихлорметане (112 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 132-II (2,8 г, выход 88%).

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 132-II (2,8 г) в дихлорметане (42 мл) в атмосфере азота добавляли ангидрид трифторуксусной кислоты (2,8 г) и ТЭА (2,8 г) при 5-10°С. Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 2 ч, а затем концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с н-гексаном/этилацетатом (1:3) с получением соединения 132-III (1,9 г, выход 55%).

Раствор соединений 132-III (1,2 г) и S-IV (2,0 г) в 1-пентаноле (3 мл) нагревали при 120°С в течение 10 мин с использованием микроволнового излучения. Полученную в результате смесь концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией с МеОН/ДХМ (1:32) с получением соединения 132-IV (1,8 г, выход 60%).

К раствору соединения 132-IV (256 мг) в дихлорметане (6,6 мл) добавляли раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (3,3 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 132 (203 мг, выход 90%). ЭИ-МС: 567,3 (М+1).

Получение соединения 133

Соединение 133 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 40. ЭИ-МС: 586,4 (М+1).

Получение соединения 134

Соединение 134 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 40. ЭИ-МС: 551,4 (М+1).

Получение соединения 135

Ниже показана схема синтеза соединения 135 из соединения 132-IV через промежуточные соединения 135-I и 135-II.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 132-IV (320 мг) в EtOH (2 мл) в атмосфере азота добавляли раствор KOH (64 мг) в H₂O (0,64 мл). Смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч, а затем концентрировали. Полученный в результате остаток экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенные экстракты концентрировали с получением соединения 135-I (250 мг, выход 89%) в виде твердого вещества.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 135-I (250 мг) в ТГФ (8 мл) в атмосфере азота добавляли имидазол-1-ил-(1-метилциклогексил)-метанон (100 мг). Реакционную смесь перемешивали при 60°С в течение 15 ч, а затем концентрировали. Полученный в результате образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:32) с получением соединения 135-II (231 мг, выход 78%) в виде твердого вещества.

К раствору соединения 135-II (231 мг) в дихлорметане (9,2 мл) добавляли раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (4,6 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 135 (168 мг, выход 82%). ЭИ-МС: 595,4 (М+1).

Получение соединения 136

Соединение 136 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 56 и 135. ЭИ-МС: 555,4 (М+1).

Получение соединения 137

Соединение 137 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 56 и 135. ЭИ-МС: 569,4 (М+1).

Получение соединения 138

Соединение 138 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 55 и 135. ЭИ-МС: 543,4 (М+1).

Получение соединения 139

Соединение 139 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 61 и 135. ЭИ-МС: 690,4 (М+1).

Получение соединения 140

Соединение 140 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 61 и 135. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,01 (s, 1Н), 7,53 (d, 1Н), 7,47-7,38 (m, 5Н), 6,16 (d, 1Н), 5,38 (d, 1Н), 5,24 (d, 1Н), 4,75 (s, 2Н), 4,53 (t, 2Н), 4,28 (m, 1Н), 4,06-4,01 (m, 2Н), 3,57 (m, 1Н), 3,37 (m, 1Н), 3,22-3,05 (m, 7Н), 2,82 (t, 1Н), 2,52 (m, 2Н), 2,37-2,06 (m, 11Н), 1,90-1,55 (m, 5H), 1,43-1,18 (m, 6H); ЭИ-МС: 704,4 (М+1).

Получение соединения 141

Соединение 141 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 61 и 135. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,02 (s, 1Н), 7,55 (d, 1Н), 6,09 (d, 1Н), 4,83 (s, 2Н), 4,58 (t, 2Н), 4,36-4,02 (m, 5Н), 3,92 (m, 1Н), 3,28 (m, 1Н), 3,22-3,06 (m, 6Н), 2,92 (m, 1Н), 2,74 (m, 2Н), 2,40-2,22 (m, 4Н), 2,18-1,80 (m, 10Н), 1,77-1,45 (m, 9Н), 1,42-1,18 (m, 10Н); ЭИ-МС: 696,5 (М+1).

Получение соединения 142

Ниже показана схема синтеза соединения 142 через промежуточные соединения 142-I и 142-II.

Раствор 2,6-дихлорпиримидин-4-иламина (0,51 г) и соединения S-IV (1,46 г) в 1-пентаноле (2 мл) нагревали при 120°С в течение 15 минут с использованием микроволнового излучения. Смесь концентрировали. Полученный в результате образом остаток очищали флэш-хроматографией с МеОН/ДХМ (1:32) с получением соединения 142-I (0,98 г, выход 51%).

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 142-I (0,98 г) в 1-пентаноле (4 мл) в атмосфере азота добавляли пиперазин (2 г). Смесь перемешивали при 150°С в течение 4 часов, а затем гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М). Полученный в результате раствор экстрагировали этилацетатом (3×100 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:1) с получением соединения 142-II (0,77 г, выход 73%) в виде твердого вещества.

К раствору соединения 142-II (304 мг) в дихлорметане (12 мл) добавляли раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (6 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 часов и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 142 (256 мг, выход 86%). ЭИ-МС: 472,3 (М+1).

Получение соединения 143

Соединение 143 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 142. ЭИ-МС: 458,3 (М+1).

Получение соединения 144

Соединение 144 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 142. ЭИ-МС: 458,3 (М+1).

Получение соединения 145

Ниже показана схема синтеза соединения 145 через промежуточные соединения 145-I и 145-III.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору 2,4,6-трихлорпиримидина (1,02 г) в ТГФ (50 мл) в атмосфере азота добавляли трет-бутиловый сложный эфир 4-аминопиперидин-1-карбоновой кислоты (1,01 г) и ТЭА (1,01 г). Смесь перемешивали при 25°С в течение 15 часов, а затем гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М). Полученный в результате раствор экстрагировали этилацетатом (3×100 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с н-гексаном/этилацетатом (1:1) с получением соединения 145-I (1,27 г, выход 66%) в виде твердого вещества.

Раствор соединений 145-I (1,27 г) и S-III (1,76 г) в 1-пентаноле (4 мл) нагревали при 120°С в течение 15 мин с использованием микроволнового излучения. Затем полученную в результате смесь концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией с МеОН/ДХМ (1:9) с получением соединения 145-II (1,48 г, выход 51%).

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 145-II (0,96 г) в 1-пентаноле (4 мл) в атмосфере азота добавляли пиперазин (2 г). Смесь перемешивали при 150°С в течение 4 ч, а затем гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М). Полученный в результате раствор экстрагировали этилацетатом (3×100 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:1) с получением соединения 145-III (0,72 г, выход 70%).

К раствору соединения 145-III (360 мг) в дихлорметане (16 мл) добавляли раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (8 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 145 (267 мг, выход 86%). ЭИ-МС: 541,4 (М+1).

Получение соединения 146

Соединение 146 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 145. ЭИ-МС: 542,4 (М+1).

Получение соединения 147

Соединение 147 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 145. ЭИ-МС: 540,4 (М+1).

Получение соединения 148

Соединение 148 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 145. ЭИ-МС: 599,4 (М+1).

Получение соединения 149

Соединение 149 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 145. ЭИ-МС: 541,4 (М+1).

Получение соединения 150

Соединение 150 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 61. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05 (s, 1Н), 7,44-7,41 (m, 3Н), 7,33 (t, 2Н), 7,25 (t, 1Н), 5,29 (s, 2Н), 4,73 (s, 2Н), 4,58 (t, 2Н), 4,31 (t, 1Н), 3,50 (m, 4Н), 3,30-3,10 (m, 10Н), 2,58 (m, 2H), 2,42-2,22 (m, 4H), 2,18-2,02 (m, 4H), 1,87 (m, 2H), 1,68 (m, 1H), 1,42-1,18 (m, 6H); ЭИ-МС: 691,4 (М+1).

Получение соединения 151

Ниже показана схема синтеза соединения 151 из соединения 127-I через промежуточные соединения 151-I и 151-II.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 127-I (1,3 г) в этилацетате (35 мл) в атмосфере азота добавляли соединение S-II (2,3 г) и ТЭА (1,5 г). Смесь нагревали до 50°С в течение 4 ч, охлаждали до 25°С, а затем гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М). Полученный в результате раствор экстрагировали этилацетатом (3×100 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:9) с получением соединения 151-I (2,1 г, выход 62%) в виде светло-желтого твердого вещества.

Раствор соединения 151-I (2,1 г) и пиперазин (2 г) в 1-пентаноле (6 мл) нагревали при 100°С в течение 15 ч. Полученную в результате смесь концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:1) с получением соединения 151-II (1,2 г, выход 53%).

К раствору соединения 151-II (240 мг) в дихлорметане (9,6 мл) добавляли раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (4,8 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 часов и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 151 (186 мг, выход 89%). ЭИ-МС: 483,3 (М+1).

Получение соединения 152

Соединение 152 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 151. ЭИ-МС: 497,3 (М+1).

Получение соединения 153

Ниже показана схема синтеза соединения 153 из соединения 151-II через промежуточное соединение 153-I.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 151-II (350 мг) в МеОН (10 мл) в атмосфере азота добавляли диэтилвинилфосфонат (224 мг). Смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч, а затем концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:9) с получением соединения 153-I (320 мг, выход 75%) в виде твердого вещества.

TMSBr (1 мл) добавляли к раствору соединения 153-I (320 мг) в дихлорметане (10 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 153 (220 мг, выход 92%). ЭИ-МС: 591,3 (М+1).

Получение соединения 154

Ниже показана схема синтеза соединения 154 из соединения 127-I через промежуточные соединения 154-I - 154-III.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 127-I (1,0 г) в этилацетате (35 мл) в атмосфере азота добавляли соединение S-IV (2,0 г) и ТЭА (1,2 г). Смесь нагревали до 50°С в течение 4 ч, охлаждали до 25°С, а затем гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М). Полученный в результате раствор экстрагировали этилацетатом (3×100 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:9) с получением соединения 154-I (1,7 г, выход 64%) в виде светло-желтого твердого вещества.

Раствор соединения 154-I (1,7 г) и пиперазин (2 г) в 1-пентаноле (6 мл) нагревали при 100°С в течение 15 ч. Полученную в результате смесь концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:1) с получением соединения 154-II (1,2 г, выход 66%).

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору моно-трет-бутилового сложного эфира 3-трет-бутоксикарбониламинодикарбоновой кислоты (150 мг) в дихлорметане (30 мл) в атмосфере азота добавляли EDCl (100 мг) и HOBt (100 мг) при 25°С. После перемешивания смеси при 25°С в течение 1 ч добавляли раствор соединения 154-II (200 мг) в дихлорметане (10 мл) одной порцией. Реакционную смесь перемешивали еще в течение 6 ч, а затем наливали в воду. Полученный в результате раствор экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:9) с получением соединения 154-III (185 мг, выход 67%) в виде твердого вещества.

К раствору соединения 154-III (185 мг) в дихлорметане (4 мл) добавляли раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (2 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 154 (113 мг, выход 89%). ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,21 (s, 1Н), 8,05 (s, 1Н), 4,95 (s, 2Н), 4,57 (t, 2Н), 4,11 (m, 1Н), 3,90 (m, 4Н), 3,78 (m, 4Н), 3,22-3,10 (m, 6Н), 2,76 (m, 2Н), 2,35 (m, 2Н), 2,28 (m, 2Н), 2,20-2,02 (m, 4Н), 1,86 (m, 2Н), 1,67 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 626,4 (М+1).

Получение соединения 155

Ниже показана схема синтеза соединения 155 из соединения 154-II через промежуточное соединение 155-I.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору монобензилового сложного эфира 3-трет-бутоксикарбониламинопентандиоевой кислоты (0,4 г) в дихлорметане (30 мл) в атмосфере азота добавляли EDCl (225 мг) и HOBt (200 мг) при 25°С. После перемешивания смеси при 25°С в течение 1 ч добавляли раствор соединения 154-II (0,5 г) в дихлорметане одной порцией. Реакционную смесь перемешивали еще в течение 6 ч, а затем наливали в воду. Полученный в результате раствор экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:9) с получением соединения 155-I (570 мг, выход 81%) в виде твердого вещества.

Раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (4 мл) добавляли к раствору соединения 155-I (190 мг) в дихлорметане (8 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 155 (135 мг, выход 87%). ЭИ-МС: 716,4 (М+1).

Получение соединения 156

Ниже показана схема синтеза соединения 156 через промежуточные соединения 156-I - 156-III.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору 2,6-дихлорпурина (0,5 г) в трет-BuOH (30 мл) в атмосфере азота добавляли соединение S-IV (1,51 г) и ТЭА (0,5 г). Смесь нагревали до 50°С в течение 4 ч, а затем гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М). Полученный в результате раствор экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:9) с получением соединения 156-I (1,52 г, выход 89%) в виде твердого вещества.

Раствор соединения 156-I (300 мг), MeI (300 мг) и K₂CO₃ (72 мг) в ДМФ (6 мл) перемешивали при 25°С в течение 3 ч. Затем реакционную смесь наливали в воду. Полученный в результате раствор экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:9) с получением соединения 156-II (297 мг, выход 97%).

Реакционную смесь соединения 156-II (210 мг) и пиперазина (87 мг) в монометиловом эфире этиленгликоля (6 мл) нагревали при 120°С в течение 15 ч. Затем реакционную смесь наливали в воду. Полученный в результате раствор экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией с МеОН/ДХМ (1:1) с получением соединения 156-III (156 мг, выход 69%).

К раствору соединения 156-III (156 мг) в дихлорметане (6 мл) добавляли раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (3 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 156 (132 мг, выход 87%). ЭИ-МС: 511,3 (М+1).

Получение соединения 157

Ниже показана схема синтеза соединения 157 через промежуточные соединения 157-I и 157-II.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору 2,4-дихлор-6,7-диметоксихиназолина (0,5 г) в ТГФ (60 мл) в атмосфере азота добавляли соединение S-IV (1,2 г) и ТЭА (0,5 г). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч, а затем гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М). Полученный в результате раствор экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с EtOAc/гексаном (9:1) с получением соединения 157-I (1,15 г, выход 82%) в виде светло-желтого твердого вещества.

Раствор соединения 157-I (1,15 г) и пиперазин (0,6 г) в 1-пентаноле (6 мл) нагревали при 100°С в течение 15 ч. Полученную в результате смесь концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией с МеОН/ДХМ (1:3) с получением соединения 157-II (0,82 г, выход 67%).

К раствору соединения 157-II (250 мг) в дихлорметане (9,6 мл) добавляли раствор 1 н. HCl/диэтиловый эфир (4,8 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 157 (210 мг, выход 90%). ЭИ-МС: 567,4 (М+1).

Получение соединения 158

Соединение 158 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 157 и 57. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,27-8,24 (m, 2Н), 7,82 (t, 1Н), 7,50-7,42 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,73-4,60 (m, 3Н), 3,77 (m, 2Н), 3,53-3,41 (m, 4Н), 3,23-3,06 (m, 8Н), 2,43-2,06 (m, 10Н), 1,87 (m, 2Н), 1,70 (m, 1Н), 1,43-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 675,4 (М+1).

Получение соединения 159

Соединение 159 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 157. ЭИ-МС: 513,3 (М+1).

Получение соединения 160

Соединение 160 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 157. ЭИ-МС: 508,3 (М+1).

Получение соединения 161

Соединение 161 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 157. ЭИ-МС: 471,3 (М+1).

Получение соединения 162

Соединение 162 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 145. ЭИ-МС: 541,4 (М+1).

Получение соединения 163

Соединение 163 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63. ЭИ-МС: 664,4 (М+1).

Получение соединения 164

Соединение 164 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 87. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,11 (s, 1Н), 8,00 (s, 1Н), 4,68-4,55 (m, 7Н), 4,43 (d, 1Н), 3,97 (t, 1Н), 3,76-3,61 (m, 6Н), 3,36-3,06 (m, 8Н), 2,64 (t, 2Н), 2,42-2,30 (m, 4Н), 2,32-2,12 (m, 6Н), 1,92-1,81 (m, 2Н), 1,71 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 789,4 (М+1).

Получение соединения 165

Соединение 165 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63. ЭИ-МС: 664,4 (М+1).

Получение соединения 166

Соединение 166 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63. ЭИ-МС: 664,4 (М+1).

Получение соединения 167

Соединение 167 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 142. ЭИ-МС: 351,1 (М+1).

Получение соединения 168

Соединение 168 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 142. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,11 (s, 1Н), 4,68 (s, 2Н), 4,55 (t, 2Н), 3,96 (m, 4Н), 3,53 (m, 2Н), 3,30 (m, 4Н), 3,16 (m, 2Н), 2,95 (m, 2Н), 2,41 (m, 2Н), 2,00-1,78 (m, 5Н), 1,50 (m, 1Н); ЭИ-МС: 401,3 (М+1).

Получение соединения 169

Соединение 169 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 142. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,10 (s, 1Н), 6,22 (s, 1Н), 4,71 (s, 2Н), 4,56 (t, 2Н), 3,08 (m, 2Н), 2,31 (m, 2Н), 2,09 (m, 2Н), 1,85 (m, 2Н), 1,71 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 365,2 (М+1).

Получение соединения 170

Соединение 170 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 142. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05 (s, 1Н), 4,73 (s, 2Н), 4,60 (t, 2Н), 3,96 (m, 4Н), 3,35 (m, 4Н), 3,07 (m, 2Н), 2,34 (m, 2Н), 2,03 (m, 2Н), 1,85 (m, 2Н), 1,69 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 415,3 (М+1).

Получение соединения 171

Соединение 171 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 29. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,28 (d, 1Н), 8,14 (s, 1Н), 7,82 (t, 1Н), 7,48-7,42 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,62 (m, 1Н), 4,56 (t, 2Н), 3,52 (m, 2Н), 3,24 (m, 2H), 3,07 (m, 2H), 2,31 (m, 2H), 2,22-1,98 (m, 6H), 1,85 (m, 2H), 1,68 (m, 1H), 1,42-1,18 (m, 6H); ЭИ-МС: 464,3 (М+1).

Получение соединения 172

Соединение 172 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 87. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,03 (s, 1Н), 4,71 (s, 2Н), 4,58 (m, 2Н), 4,13 (t, 1Н), 3,80-3,50 (m, 9Н), 3,22-3,10 (m, 7Н), 2,68 (t, 2Н), 2,38 (m, 2Н), 2,19-2,04 (m, 4Н), 1,87 (m, 2Н), 1,71 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 694,4 (М+1).

Получение соединения 173

Соединение 173 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,07 (s, 1Н), 7,27 (s, 1Н), 7,23-7,16 (m, 2Н), 4,84 (s, 2Н), 4,57 (t, J=6,8 Hz, 2Н), 4,38 (m, 1Н), 3,81 (s, 3Н), 3,57 (m, 2Н), 3,23-3,09 (m, 8Н), 2,33 (m, 2Н), 2,20-2,02 (m, 6Н), 1,92 (m, 2Н), 1,82 (m, 2Н), 1,65 (m, 1Н), 1,38-1,16 (m, 6Н); ЭИ-МС: 551,4 (М+1).

Получение соединения 174

Соединение 174 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,26 (d, 1Н), 8,14 (br s, 1Н), 7,79 (t, 1Н), 7,49-7,42 (m, 2Н), 4,87 (s, 2Н), 4,61-4,40 (m, 4Н), 4,15-4,02 (m, 2Н), 3,38-2,88 (m, 8Н), 2,58 (m, 2Н), 2,36-1,84 (m, 17Н), 1,67 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 692,4 (М+1).

Получение соединения 175

Соединение 175 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,20 (d, 1Н), 8,08 (br s, 1Н), 7,81 (t, 1Н), 7,48-7,42 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,60-4,44 (m, 5Н), 4,02 (m, 1Н), 3,31-3,06 (m, 7Н), 2,78 (m, 1Н), 2,55 (m, 2Н), 2,36 (m, 2Н), 2,23-1,80 (m, 13Н), 1,67 (m, 2Н), 1,56 (m, 1Н), 1,43-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 692,4 (М+1).

Получение соединения 176

Соединение 176 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,15 (s, 1Н), 7,20 (s, 1Н), 6,51 (s, 1Н), 4,88 (t, J=6,0 Hz, 2Н), 4,83 (s, 2Н), 4,38 (m, 1Н), 3,78 (s, 6Н), 3,76 (m, 2Н), 3,61-3,43 (m, 5Н), 3,24-3,15 (m, 3Н), 2,20 (m, 2Н), 2,06 (m, 2Н), 1,94 (m, 2Н), 1,83 (m, 2Н), 1,67 (m, 1Н), 1,41-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 553,3 (М+1).

Получение соединения 177

Соединение 177 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (300 МГц, CD₃OD) δ 8,04 (d, J=9,0 Hz, 1Н), 7,91 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,48 (d, J=9,0 Hz, 1H), 4,83 (s, 2H), 4,57 (t, J=6,8 Hz, 2H), 4,38 (m, 1H), 3,57 (m, 2H), 3,22-3,08 (m, 8H), 2,34 (m, 2H), 2,21-2,01 (m, 6H), 1,95 (m, 2H), 1.79 (m, 2H), 1,61 (m, 1H), 1,36-1,18 (m, 6H); ЭИ-МС: 589,3 (M+1).

Получение соединения 178

Соединение 178 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,23 (d, 1Н), 8,11 (br s, 1Н), 7.80 (t, 1Н), 7,48-7,41 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,65-4,51 (m, 4Н), 4,13-4,02 (m, 2Н), 3,63 (m, 1Н), 3,40 (t, 2Н), 3,06 (m, 2Н), 2,98 (m, 2Н), 2,81-2,75 (m, 3Н), 2,56 (m, 2Н), 2,34 (m, 2Н), 2,21-2,03 (m, 8Н), 1,91-1,18 (m, 12Н); ЭИ-МС: 692,4 (М+1).

Получение соединения 179

Соединение 179 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 57. ЭИ-МС: 580,3 (М+1).

Получение соединения 180

Соединение 180 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 60. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,22 (s, 1Н), 4,69 (s, 2Н), 4,62 (m, 2Н), 3,80-3,62 (m, 8Н), 3,26-3,10 (m, 8Н), 2,39 (m, 2Н), 2,19-2,10 (m, 4Н), 1,87 (m, 2Н), 1,71 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 594,3 (М+1).

Получение соединения 181

Ниже показана схема синтеза соединения 181 из соединения 43-I через промежуточные соединения 181-I-181-III.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 43-I (362 мг) в ацетонитриле (50 мл) в атмосфере азота добавляли 2-(2-бромэтил)-изоиндол-1,3-дион (254 мг) и K₂CO₃ (100 мг). Полученную в результате смесь перемешивали при 60°С в течение 15 часов, а затем гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М). Полученный в результате раствор экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Экстракт промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:19) с получением соединения 181-I (301 мг, выход 67%) в виде твердого вещества.

К перемешанному раствору соединения 181-I (280 мг) в метаноле (2,8 мл) добавляли по каплям 85% NH₂NH₂⋅H₂O (200 мг). Полученную в результате смесь перемешивали при 25°С в течение 15 часов. Смесь концентрировали при пониженном давлении путем удаления этанола с получением остатка, который экстрагировали CH₂Cl₂ (3×50 мл) и 10% K₂CO₃ (50 мл). Экстракты объединяли, промывали H₂O и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:19) с получением соединения 181-II (220 мг, выход 92%) в виде твердого вещества.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору 1-трет-бутилового сложного эфира 2-трет-бутоксикарбониламинопентандиоевой кислоты (125 мг) в дихлорметане (50 мл) в атмосфере азота добавляли EDCl (100 мг) и HOBt (80 мг) при 25°С. После перемешивания смеси при 25°С в течение 1 часа к смеси добавляли раствор соединения 181-II (210 мг) в дихлорметане (10 мл) одной порцией. Реакционную смесь перемешивали еще в течение 6 часов, а затем наливали в воду. Полученную в результате смесь экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:19) с получением соединения 181-III (206 мг, выход 70%) в виде твердого вещества.

Раствор 4 н. HCl/диоксан (1,8 мл) добавляли к раствору соединения 181-III (196 мг) в смеси дихлорметана (3,6 мл) и 1,4-диоксана (3,6 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 181 (145 мг, выход 92%). ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,25 (d, 1Н), 8,14 (s, 1Н), 7,81 (t, 1Н), 7,48-7,41 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,60-4,59 (m, 3Н), 4,10 (t, 1Н), 3,82 (m, 2Н), 3,40-3,34 (m, 4Н), 3,20-3,08 (m, 8Н), 2,58 (m, 2Н), 2,36 (m, 2Н), 2,30-2,12 (m, 10Н), 1,88 (m, 2Н), 1,70 (m, 1Н), 1,42-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 693,4 (М+1).

Получение соединения 182

Ниже показана схема синтеза соединения 182 из соединения 43-I через промежуточные соединения 182-I - 182-III.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору 3-(1,3-диоксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)-пропионовой кислоты (160 мг) в дихлорметане (50 мл) в атмосфере азота добавляли EDCl (153 мг) и HOBt (190 мг) при 25°С. После перемешивания смеси при 25°С в течение 1 часа к смеси добавляли раствор соединения 43-I (362 мг) в дихлорметане (10 мл) одной порцией. Реакционную смесь перемешивали еще в течение 6 часов, а затем наливали в воду. Полученную в результате смесь экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:19) с получением соединения 182-II (320 мг, выход 69%) в виде твердого вещества.

К перемешанному раствору соединения 182-II (300 мг) в метаноле (3 мл) добавляли по каплям 85% NH₂NH₂⋅H₂O (200 мг). Полученную в результате смесь перемешивали при 25°С в течение 15 часов. Смесь концентрировали при пониженном давлении путем удаления этанола с получением остатка, который экстрагировали CH₂Cl₂ (3×50 мл) и 10% K₂CO₃ (50 мл). Экстракты объединяли, промывали Н₂О и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:19) с получением соединения 182-II (210 мг, выход 81%) в виде светло-желтого твердого вещества.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору 1-трет-бутилового сложного эфира 2-трет-бутоксикарбониламинопентандиовой кислоты (115 мг) в дихлорметане (50 мл) в атмосфере азота добавляли EDCl (100 мг) и HOBt (80 мг) при 25°С. После перемешивания смеси при 25°С в течение 1 часа к смеси добавляли раствор соединения 182-II (200 мг) в дихлорметане (10 мл) одной порцией. Реакционную смесь перемешивали еще в течение 6 часов, а затем наливали в воду. Полученную в результате смесь экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:19) с получением соединения 182-III (202 мг, выход 74%) в виде твердого вещества.

Раствор 4 н. HCl/диоксан (1,8 мл) добавляли к раствору соединения 182-III (190 мг) в смеси дихлорметана (3,6 мл) и 1,4-диоксана (3,6 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 часов и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 182 (130 мг, выход 89%). ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,22 (d, 1Н), 8,10 (br s, 1Н), 7,81 (t, 1Н), 7,48-7,41 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,61-4,48 (m, 4Н), 4,06-4,02 (m, 2Н), 3,47 (t, 2Н), 3,29 (m, 1Н), 3,20-3,11 (m, 6Н), 2,81 (m, 1Н), 2,67 (t, 2Н), 2,49 (t, 2Н), 2,36 (m, 2Н), 2,23-2,03 (m, 7Н), 1,92-1,82 (m, 3Н), 1,73 (m, 2Н), 1,55 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 721,5 (М+1).

Получение соединения 183

Соединение 183 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 60. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,50-8,43 (m, 2Н), 4,82-4,70 (m, 4Н), 3,98-3,50 (m, 8Н), 3,26-3,10 (m, 8Н), 2,45 (m, 2Н), 2,22-2,06 (m, 4Н), 1,96-1,80 (m, 4Н), 1,71 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 608,3 (М+1).

Получение соединения 184

Соединение 184 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,10 (s, 1Н), 4,68 (s, 2Н), 4,59 (m, 2Н), 4,07 (t, 1Н), 3,83-3,55 (m, 6Н), 3,20-3,03 (m, 8Н), 2,74 (t, 2Н), 2,41-2,03 (m, 8Н), 1,88 (m, 2Н), 1,71 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 601,4 (М+1).

Получение соединения 185

Соединение 185 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 60. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,14 (s, 1Н), 4,86 (s, 2Н), 4,76-4,58 (m, 4Н), 3,26-3,10 (m, 10Н), 2,90 (d, 2Н), 2,38 (m, 2Н), 2,22-2,10 (m, 4Н), 1,96-1,67 (m, 6Н), 1,42-1,18 (m, 8Н); ЭИ-МС: 622,3 (М+1).

Получение соединения 186

Соединение 186 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,08 (s, 1Н), 4,66 (s, 2Н), 4,59 (t, 2Н), 4,04 (t, 1Н), 3,85 (d, 1Н), 3,81 (t, 1Н), 3,20-2,83 (m, 10Н), 2,51 (t, 2Н), 2,35 (m, 2Н), 2,24-2,10 (m, 7Н), 1,96-1,64 (m, 6Н), 1,42-1,18 (m, 7Н); ЭИ-МС: 629,4 (М+1).

Получение соединения 187

Соединение 187 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 60. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,24 (s, 1Н), 4,70 (s, 2Н), 4,65 (t, 2Н), 3,26-3,06 (m, 12Н), 2,88 (m, 2Н), 2,40 (m, 2Н), 2,22-2,10 (m, 4Н), 1,94-1,67 (m, 6Н), 1,42-1,18 (m, 8Н); ЭИ-МС: 622,3 (М+1).

Получение соединения 188

Соединение 188 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 60. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,37-8,33 (m, 2Н), 4,72 (s, 2Н), 4,68 (m, 2Н), 3,97 (m, 1Н), 3,26-3,06 (m, 10Н), 2,87 (d, 2Н), 2,42 (m, 2Н), 2,22-2,10 (m, 4Н), 1,96-1,80 (m, 4Н), 1,71 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 8Н); ЭИ-МС: 608,3 (М+1).

Получение соединения 189

Соединение 189 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,13 (s, 1Н), 4,66 (s, 2Н), 4,60 (t, 2Н), 4,05 (t, 1Н), 3,71-3,55 (m, 4Н), 3,20-3,04 (m, 10Н), 2,69 (m, 1Н), 2,57 (m, 1Н), 2,37 (m, 2Н), 2,24-2,06 (m, 6Н), 1,89-1,83 (m, 4Н), 1,73 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 615,4 (М+1).

Получение соединения 190

Соединение 190 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 60. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,21 (d, 1Н), 8,17 (s, 1Н), 7,49 (br s, 1Н), 7,43 (d, 1Н), 4,86 (s, 2Н), 4,60 (t, 2Н), 4,53 (m, 1Н), 4,47 (m, 1Н), 4,13 (m, 1Н), 3,34 (m, 1Н), 3,22-3,07 (m, 8Н), 2,83 (m, 1Н), 2,38 (m, 2Н), 2,21-2,11 (m, 4Н), 2,00-1,67 (m, 6Н), 1,60 (m, 1Н), 1,40-1,17 (m, 6Н); ЭИ-МС: 677,3 (М+1).

Получение соединения 191

Соединение 191 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,04 (s, 1Н), 7,45-7,32 (m, 4Н), 7,25 (m, 1Н), 4,76 (s, 2Н), 4,62 (d, 1Н), 4,56 (t, 2Н), 4,29 (d, 1Н), 4,12 (t, 1Н), 3,68-3,56 (m, 4Н), 3,38-3,10 (m, 10Н), 2,42 (t, 2Н), 2,36 (m, 2Н), 2,30-2,04 (m, 6Н), 1,93-1,83 (m, 2Н), 1,70 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 690,4 (М+1).

Получение соединения 192

Соединение 192 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 7,99 (s, 1Н), 6,18 (s, 1Н), 4,82 (s, 2Н), 4,57 (t, 2Н), 4,30 (m, 1Н), 4,18-4,03 (m, 2Н), 3,94 (m, 1Н), 3,27 (m, 1Н), 3,22-3,12 (m, 6Н), 2,89 (m, 1Н), 2,73 (m, 2Н), 2,35 (m, 2Н), 2,30-2,21 (m, 5Н), 2,18-1,80 (m, 8Н), 1,68 (m, 2Н), 1,56 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 614,4 (М+1).

Получение соединения 193

Соединение 193 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 87. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,22 (d, 1Н), 8,17 (s, 1Н), 7,81 (t, 1Н), 7,48-7,41 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,64-4,48 (m, 4Н), 4,03 (m, 1Н), 3,87 (m, 2Н), 3,65 (m, 1Н), 3,48 (m, 2Н), 3,38-3,06 (m, 7Н), 2,85 (m, 1Н), 2,72 (m, 2Н), 2,41 (m, 2Н), 2,24-1,81 (m, 14Н), 1,78-1,60 (m, 3Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 865,4 (М+1).

Получение соединения 194

Соединение 194 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63. ЭИ-МС: 629,4 (М+1).

Получение соединения 195

Ниже показана схема синтеза соединения 195 из соединения 142-I через промежуточные соединения 195-I и 195-II.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 142-I (311 мг) в 1-пентаноле (2 мл) в атмосфере азота добавляли пиперидин-4-карбоновую кислоту (129 мг). Смесь перемешивали при 150°С в течение 4 часов, а затем гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М). Полученный в результате раствор экстрагировали этилацетатом (3×100 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:1) с получением соединения 195-I (260 мг, выход 73%) в виде твердого вещества.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору 195-I (240 мг) в дихлорметане (50 мл) в атмосфере азота добавляли EDCl (100 мг) и HOBt (80 мг) при 25°С. После перемешивания смеси при 25°С в течение 1 часа к смеси добавляли раствор соединения трет-бутилового сложного эфира 5-амино-2-трет-бутоксикарбониламинопентановой кислоты (140 мг) в дихлорметане (10 мл) одной порцией. Реакционную смесь перемешивали еще в течение 6 часов, а затем наливали в воду. Полученную в результате смесь экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:19) с получением соединения 195-II (230 мг, выход 70%) в виде твердого вещества.

Раствор 4 н. HCl/диоксан (2,2 мл) добавляли к раствору соединения 195-II (220 мг) в смеси дихлорметана (4,4 мл) и 1,4-диоксана (4,4 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 часов и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 195 (149 мг, выход 90%). ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,16 (br s, 1Н), 4,88 (s, 2Н), 4,75-4,58 (m, 4Н), 4,06 (m, 1Н), 3,30-3,06 (m, 10Н), 2,58 (m, 1Н), 2,37 (m, 2Н), 2,22-2,06 (m, 4Н), 2,04-1,56 (m, 11Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 629,4 (М+1).

Получение соединения 196

Соединение 194 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 63 и 142. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,14 (s, 1Н), 4,88 (s, 2Н), 4,70 (d, 1Н), 4,67 (d, 1Н), 4,60 (t, 2Н), 4,06 (m, 1Н), 3,75 (m, 1Н), 3,30-3,06 (m, 8Н), 2,50 (m, 2Н), 2,38 (m, 2Н), 2,18-1,80 (m, 11Н), 1,69-1,61 (m, 2Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 615,4 (М+1).

Получение соединения 197

Соединение 194 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 60. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,22 (d, 1Н), 8,17 (s, 1Н), 7,80 (t, 1Н), 7,48-7,41 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,62 (t, 2Н), 4,60-4,44 (m, 2Н), 4,13 (m, 1Н), 3,30 (m, 1Н), 3,22-3,06 (m, 8Н), 2,84 (m, 1Н), 2,39 (m, 2Н), 2,20-2,10 (m, 4Н), 2,02-1,82 (m, 4Н), 1,71 (m, 2Н), 1,61 (m, 1Н), 1,40-1,17 (m, 6Н); ЭИ-МС: 643,3 (М+1).

Получение соединения 198

Соединение 198 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 87 и 182. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,22 (d, 1Н), 8,17 (s, 1Н), 7,80 (t, 1Н), 7,48-7,41 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,68-4,51 (m, 5Н), 4,18 (m, 1Н), 3,89 (m, 1Н), 3,65 (m, 2Н), 3,54 (m, 2Н), 3,38 (m, 1Н), 3,22-3,08 (m, 6Н), 2,85 (m, 1Н), 2,60 (t, 2Н), 2,41-2,30 (m, 4Н), 2,21-1,81 (m, 14Н), 1,78-1,60 (m, 3Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 854,5 (М+1).

Получение соединения 199

Соединение 199 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 63 и 182. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,20 (d, 1Н), 8,11 (s, 1Н), 7,81 (t, 1Н), 7,48-7,41 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,61-4,52 (m, 5Н), 4,16 (m, 1Н), 4,06 (m, 1Н), 3,38 (m, 1Н), 3,20-3,07 (m, 8Н), 2,88 (m, 1Н), 2,68 (m, 2Н), 2,41-2,22 (m, 4Н), 2,21-1,82 (m, 12Н), 1,78-1,60 (m, 3Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 747,4 (М+1).

Получение соединения 200

Соединение 200 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 182. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,28-8,24 (m, 2Н), 7,81 (t, 1Н), 7,48-7,32 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,68-4,57 (m, 4Н), 4,08 (m, 1Н), 3,24-3,04 (m, 7Н), 2,95 (m, 2Н), 2,83 (m, 1Н), 2,51 (m, 2Н), 2,40 (m, 2Н), 2,20-1,80 (m, 8Н), 1,78-1,43 (m, 7Н), 1,42-1,18 (m, 8Н); ЭИ-МС: 634,4 (М+1).

Получение соединения 201

Соединение 201 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 61. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,21 (s, 1Н), 7,47-7,32 (m, 5Н), 6,03 (s, 1Н), 5,30 (m, 2Н), 4,79 (s, 2Н), 4,63 (t, 2Н), 4,33 (m, 1Н), 4,21-4,06 (m, 2Н), 3,76 (m, 1Н), 3,22-3,12 (m, 9Н), 2,89 (m, 1Н), 2,61 (m, 2Н), 2,39 (m, 2Н), 2,29 (s, 3Н), 2,30-1,80 (m, 11Н), 1,68 (m, 1Н), 1,56-1,18 (m, 7Н); ЭИ-МС: 704,4 (М+1).

Получение соединения 202

Ниже показана схема синтеза соединения 202 из соединения 43-I через промежуточное соединение 202-I.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору (этоксикарбонилметиламино)-уксусной кислоты (161 мг) в дихлорметане (50 мл) в атмосфере азота добавляли EDCl (153 мг) и HOBt (190 мг) при 25°С. После перемешивания смеси при 25°С в течение 1 ч к смеси добавляли раствор соединения 43-I (362 мг) в дихлорметане (10 мл) одной порцией. Реакционную смесь перемешивали еще в течение 6 часов, а затем наливали в воду. Полученную в результате смесь экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:19) с получением соединения 202-I (312 мг, выход 64%) в виде твердого вещества.

Раствор 4 н. HCl/диоксан (1,8 мл) добавляли к раствору соединения 202-I (150 мг) в смеси дихлорметана (3,6 мл) и 1,4-диоксана (3,6 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 часов и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 202 (110 мг, выход 87%). ЭИ-МС: 664,4 (М+1).

Получение соединения 203

Соединение 203 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63. ЭИ-МС: 629,4 (М+1).

Получение соединения 204

Соединение 204 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 182. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,04-8,01 (m, 2Н), 7,83 (t, 1Н), 7,48-7,43 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,59 (t, 2Н), 4,45-4,41 (m, 2Н), 4,10 (m, 1Н), 4,07 (m, 1Н), 3,29-3,12 (m, 9Н), 2,81 (m, 1Н), 2,57-2,48 (m, 4Н), 2,35 (m, 2Н), 2,24 (m, 2Н), 2,19-1,82 (m, 8Н), 1,75-1,55 (m, 9Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 763,5 (М+1).

Получение соединения 205

Ниже показана схема синтеза соединения 205 из соединения 43-I через промежуточные соединения 205-I - 205-III.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 43-I (362 мг) в ДХМ (50 мл) в атмосфере азота добавляли метиловый сложный эфир 5-бром-пентановой кислоты (194 мг) и ТЭА (200 мг). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 часов, а затем гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М). Полученный раствор экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Экстракт промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:19) с получением соединения 205-I (300 мг, выход 71%) в виде твердого вещества.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 205-I (280 мг) в ТГФ (5 мл) в атмосфере азота добавляли водный раствор LiOH (0,5 М, 5 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч, а затем подкисляли водным раствором 1 н. HCl (12 мл). Полученную в результате смесь экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенные экстракты концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:3) с получением соединения 205-II (235 мг, выход 87%) в виде твердого вещества.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору 205-II (220 мг) в дихлорметане (50 мл) в атмосфере азота добавляли EDCl (100 мг) и HOBt (80 мг) при 25°С. После перемешивания смеси при 25°С в течение 1 часа к смеси добавляли раствор соединения диэтилового сложного эфира (2-амино-этил)фосфоновой кислоты (115 мг) в дихлорметане (10 мл) одной порцией. Реакционную смесь перемешивали еще в течение 6 часов, а затем наливали в воду. Полученную в результате смесь экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:19) с получением соединения 205-III (230 мг, выход 76%) в виде твердого вещества.

TMSBr (1 мл) добавляли к раствору соединения 205-III (220 мг) в дихлорметане (15 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 часов и концентрировали с получением соли гидробромид соединения 205 (186 мг, выход 86%). ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05-8,03 (m, 2Н), 7,84 (t, 1Н), 7,49-7,45 (m, 2Н), 4,89 (s, 2Н), 4,59 (t, 2Н), 4,56 (m, 1Н), 3,76 (m, 2Н), 3,47 (m, 2Н), 3,23-3,12 (m, 10Н), 2,41-2,35 (m, 4H), 2,30-2,02 (m, 7H), 1,98-1,63 (m, 10Н), 1,42-1,18 (m, 6H); ЭИ-МС: 728,5 (М+1).

Получение соединения 206

Ниже показана схема синтеза соединения 206 из соединения 202-I через промежуточное соединение 206-I.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 202-I (150 мг) в ТГФ (5 мл) в атмосфере азота добавляли водный раствор LiOH (0,5 М, 5 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч, а затем гасили водным раствором 1 н. HCl (12 мл). Полученную в результате смесь экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Объединенные экстракты концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:3) с получением соединения 206-I (110 мг, выход 76%) в виде твердого вещества.

Раствор 4 н. HCl/диоксан (1,3 мл) добавляли к раствору соединения 206-I (150 мг) в смеси дихлорметана (2,6 мл) и 1,4-диоксана (2,6 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 206 (83 мг, выход 88%). ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,04-8,01 (m, 2Н), 7,82 (t, 1Н), 7,47-7,42 (m, 2Н), 4,83 (s, 2Н), 4,58 (t, 2Н), 4,46-4,42 (m, 2Н), 4,33 (d, 1Н), 4,31 (d, 1Н), 4,04 (m, 2Н), 3,81 (m, 1Н), 3,30 (m, 1Н), 3,19-3,12 (m, 6Н), 2,93 (m, 1Н), 2,36 (m, 2Н), 2,19-1,83 (m, 8Н), 1,71 (m, 2Н), 1,61 (m, 1Н), 1,40-1,17 (m, 6Н); ЭИ-МС: 636,4 (М+1).

Получение соединения 207

Соединение 207 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 182 и 205. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,04 (s, 1Н), 8,02 (d, 1Н), 7,83 (t, 1Н), 7,46-7,42 (m, 2Н), 4,84 (s, 2Н), 4,59 (t, 2Н), 4,46-4,42 (m, 2Н), 4,10 (m, 1Н), 4,03 (m, 1Н), 3,58-3,50 (m, 4Н), 3,29 (m, 1Н), 3,20-3,12 (m, 6Н), 2,83 (m, 1Н), 2,76 (m, 2Н), 2,46 (t, 2Н), 2,36 (m, 2Н), 2,22 (m, 2Н), 2,19-1,96 (m, 5Н), 1,90-1,86 (m, 3Н), 1,69 (m, 2Н), 1,58 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 814,4 (М+1).

Получение соединения 208

Соединение 208 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 87. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,01 (s, 1Н), 4,78 (s, 2Н), 4,59 (t, 2Н), 4,29 (m, 1Н), 4,13 (t, 1Н), 4,07 (m, 1Н), 3,79 (m, 1Н), 3,61 (m, 2Н), 3,28-3,12 (m, 7Н), 2,91(m, 1Н), 2,67 (t, 2Н), 2,36 (t, 2Н), 2,27 (s, 3Н), 2,22-1,81 (m, 10Н), 1,68 (m, 2Н), 1,58 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 707,4 (М+1).

Получение соединения 209

Соединение 209 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 181 и 87. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06-8,04 (m, 2Н), 7,85 (t, 1Н), 7,51-7,44 (m, 2Н), 4,87 (s, 2Н), 4,59 (t, 2Н), 4,54 (m, 1Н), 4,04 (t, 1Н), 3,80 (m, 2Н), 3,70 (t, 2Н), 3,47 (m, 2Н), 3,41 (m, 2Н), 3,26-3,12 (m, 8Н), 2,50 (t, 2Н), 2,36 (m, 2Н), 2,28-2,22 (m, 4Н), 2,19-2,01 (m, 6Н), 1,93 (t, 2Н), 1,87 (m, 2Н), 1,70 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 800,4 (М+1).

Получение соединения 210

Соединение 210 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 87. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,04 (s, 1Н), 7,99 (d, 1Н), 7,83 (t, 1Н), 7,46-7,42 (m, 2Н), 4,82 (s, 2Н), 4,59 (t, 2Н), 4,48-4,41 (m, 2Н), 4,36 (d, 1Н), 4,33 (d, 1Н), 4,07 (s, 2Н), 3,78 (m, 1Н), 3,61 (d, 1Н), 3,54 (d, 1Н), 3,33 (m, 1Н), 3,20-3,12 (m, 6Н), 2,94 (m, 1Н), 2,36 (m, 2Н), 2,17-1,80 (m, 8Н), 1,72 (m, 2Н), 1,62 (m, 1Н), 1,41-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 729,4 (М+1).

Получение соединения 211

Соединение 211 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 202. ЭИ-МС: 678,4 (М+1).

Получение соединения 212

Соединение 212 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 195. ЭИ-МС: 551,3 (М+1).

Получение соединения 213

Соединение 213 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 206. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05 (s, 1Н), 8,01 (d, 1Н), 7,82 (t, 1Н), 7,46-7,42 (m, 2Н), 4,89 (s, 2Н), 4,59 (t, 2Н), 4,48-4,42 (m, 2Н), 4,01 (m, 1Н), 3,95 (s, 2Н), 3,46 (t, 2Н), 3,30 (m, 1Н), 3,20-3,11 (m, 6Н), 3,03 (t, 2Н), 2,86 (m, 1Н), 2,36 (m, 2Н), 2,18-2,10 (m, 6Н), 1,87 (m, 2Н), 1,71 (m, 2Н), 1,58 (m, 1Н), 1,41-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 650,4 (М+1).

Получение соединения 214

Соединение 214 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 59. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,07-8,04 (m, 2Н), 7,84 (t, 1Н), 7,52-7,44 (m, 2Н), 4,89 (s, 2Н), 4,60-4,42 (m, 3Н), 3,78 (m, 2Н), 3,51 (t, 2Н), 3,22-3,08 (m, 8Н), 2,89 (t, 2Н), 2,38 (m, 2Н), 2,26 (m, 2Н), 2,20-2,09 (m, 4Н), 2,00 (m, 2Н), 1,88 (m, 2Н), 1,71 (m, 1Н), 1,43-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 593,4 (М+1).

Получение соединения 215

Соединение 215 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 195. ЭИ-МС: 714,4 (М+1).

Получение соединения 216

Ниже показана схема синтеза соединения 216 из соединения 43-I через промежуточные соединения 216-I-216-III.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору соединения 43-I (392 мг) в этаноле (50 мл) в атмосфере азота добавляли 2-оксиранилметилизоиндол-1,3-дион (203 мг). Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 15 часов, а затем гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М). Полученный в результате раствор экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Экстракт промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:19) с получением соединения 216-I (311 мг, выход 67%) в виде твердого вещества.

К перемешанному раствору соединения 216-I (300 мг) в метаноле (2,8 мл) добавляли по каплям 85% NH₂NH₂⋅H₂O (200 мг). Полученную в результате смесь перемешивали при 25°С в течение 15 часов. Смесь концентрировали при пониженном давлении путем удаления этанола с получением остатка, который экстрагировали CH₂Cl₂ (3×50 мл) и 10% K₂CO₃ (50 мл). Экстракты объединяли, промывали Н₂О и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:19) с получением соединения 216-II (220 мг, выход 86%) в виде твердого вещества.

К перемешанному с помощью магнитной мешалки раствору 1-трет-бутилового сложного эфира 2-трет-бутоксикарбониламинопентадиовой кислоты (120 мг) в дихлорметане (50 мл) в атмосфере азота добавляли EDCl (100 мг) и HOBt (80 мг) при 25°С. После перемешивания смеси при 25°С в течение 1 часа к смеси добавляли раствор соединения 216-II (218 мг) в дихлорметане (10 мл) одной порцией. Реакционную смесь перемешивали еще в течение 6 ч, а затем наливали в воду. Полученную в результате смесь экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:19) с получением соединения 216-III (202 мг, выход 68%) в виде твердого вещества.

Раствор 4 н. HCl/диоксан (1,8 мл) добавляли к раствору соединения 216-III (198 мг) в смеси дихлорметана (3,6 мл) и 1,4-диоксана (3,6 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 часов и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 216 (145 мг, выход 91%). ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,07-8,04 (m, 2Н), 7,85 (t, 1Н), 7,51-7,46 (m, 2Н), 4,89 (s, 2Н), 4,57 (t, 2Н), 4,30 (m, 1Н), 3,96 (m, 1Н), 3,80 (m, 1Н), 3,56-3,10 (m, 14Н), 2,55 (m, 2Н), 2,36 (m, 2Н), 2,30-2,00 (m, 10Н), 1,88 (m, 2Н), 1,70 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 723,4 (М+1).

Получение соединения 217

Соединение 217 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 202. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,02 (s, 1Н), 4,76 (s, 2Н), 4,58 (t, 2Н), 4,36 (q, 2Н), 4,10 (s, 2Н), 3,80-3,62 (m, 8Н), 3,46 (t, 2Н), 3,21-3,11 (m, 6Н), 3,02 (t, 2Н), 2,36 (m, 2Н), 2,20-1,98 (m, 4Н), 1,88 (m, 2Н), 1,67 (m, 1Н), 1,41-1,18 (m, 9Н); ЭИ-МС: 629,4 (М+1).

Получение соединения 218

Соединение 218 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 216 и 87. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,07-8,01 (m, 2Н), 7,83 (t, 1Н), 7,49-7,43 (m, 2Н), 4,88 (s, 2Н), 4,57 (t, 2Н), 4,28 (m, 1Н), 4,05 (m, 1Н), 3,78 (m, 1Н), 3,56-3,08 (m, 16Н), 2,50 (m, 2Н), 2,35 (m, 2Н), 2,30-1,90 (m, 12Н), 1,86 (m, 2H), 1,69 (m, 1H), 1,42-1,18 (m, 6H); ЭИ-МС: 830,4 (М+1).

Получение соединения 219

Соединение 219 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 206. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,04 (s, 1Н), 4,73 (s, 2Н), 4,58 (t, 2Н), 3,94 (s, 2Н), 3,80-3,66 (m, 8Н), 3,46 (t, 2Н), 3,23-3,12 (m, 6Н), 3,01 (t, 2Н), 2,36 (m, 2Н), 2,20-2,05 (m, 4Н), 1,88 (m, 2Н), 1,71 (m, 1Н), 1,41-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 601,4 (М+1).

Получение соединения 220

Соединение 220 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 195. ЭИ-МС: 665,4 (М+1).

Получение соединения 221

Соединение 221 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 182. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,07 (s, 1Н), 8,00 (d, 1Н), 7,79 (t, 1Н), 7,44-7,38 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,59 (t, 2Н), 4,48-4,39 (m, 2Н), 4,08 (m, 1Н), 3,38-3,12 (m, 11Н), 2,82 (m, 1Н), 2,54 (t, 2Н), 2,37 (m, 2Н), 2,20-2,00 (m, 6Н), 1,97-1,62 (m, 8Н), 1,60-1,18 (m, 11Н); ЭИ-МС: 742,4 (М+1).

Получение соединения 222

Соединение 222 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 182. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06 (s, 1Н), 8,01 (d, 1Н), 7,80 (t, 1H), 7,44-7,40 (m, 2H), 4,86 (s, 2H), 4,59 (t, 2H), 4,48-4,39 (m, 2H), 4,07 (m, 1H), 3,45 (m, 4H), 3,34-3,26 (m, 3Н), 3,20-3,12 (m, 6H), 2,82 (m, 1H), 2,55 (t, 2H), 2,36 (m, 2H), 2,20-2,00 (m, 10Н), 1,92-1,78 (m, 4H), 1,77-1,64 (m, 4H), 1,58-1,42 (m, 3Н), 1,42-1,18 (m, 6H); ЭИ-МС: 850,4 (М+1).

Получение соединения 223

Соединение 223 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 182. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,04 (s, 1Н), 7,98 (d, 1Н), 7,80 (t, 1Н), 7,46-7,38 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,58 (t, 2Н), 4,48-4,37 (m, 2Н), 3,98 (m, 1Н), 3,41-3,23 (m, 5Н), 3,20-3,12 (m, 6Н), 2,99 (t, 2Н), 2,82 (m, 1Н), 2,36 (m, 2Н), 2,17-1,98 (m, 7Н), 1,97-1,80 (m, 3Н), 1,69 (m, 2Н), 1,56 (m, 1Н), 1,41-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 700,4 (М+1).

Получение соединения 224

Соединение 224 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06 (s, 1Н), 8,00 (d, 1Н), 7,82 (t, 1Н), 7,48-7,42 (m, 2Н), 4,87 (s, 2Н), 4,60 (t, 2Н), 4,48-4,38 (m, 2Н), 4,30 (m, 1Н), 4,13 (m, 1Н), 4,05 (m, 1Н), 3,38-3,12 (m, 7Н), 2,85 (m, 1Н), 2,77 (m, 2Н), 2,40 (m, 2Н), 2,29 (m, 2Н), 2,18-1,83 (m, 6Н), 1,71 (m, 2Н), 1,56 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 666,4 (М+1).

Получение соединения 225

Соединение 225 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 182 и 60. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06 (s, 1Н), 8,01 (d, 1Н), 7,81 (t, 1Н), 7,46-7,40 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,60 (t, 2Н), 4,48-4,36 (m, 2Н), 4,07 (m, 1Н), 3,33-3,15 (m, 9Н), 2,85-2,81 (m, 3Н), 2,53 (t, 2Н), 2,37 (m, 2Н), 2,17-1,80 (m, 8Н), 1,76-1,52 (m, 7Н), 1,41-1,18 (m, 8Н); ЭИ-МС: 756,4 (М+1).

Получение соединения 226

Соединение 226 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 216. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06 (s, 1Н), 8,03 (m, 2Н), 7,83 (t, 1Н), 7,51-7,42 (m, 2Н), 4,88 (s, 2Н), 4,57 (t, 2Н), 4,07 (m, 1Н), 3,95 (m, 1Н), 3,74 (m, 2Н), 3,38 (m, 1Н), 3,30-3,06 (m, 6Н), 2,93 (m, 1Н), 2,47 (m, 2Н), 2,34 (m, 2Н), 2,20-2,00 (m, 6Н), 1,84 (m, 2Н), 1,67 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 640,4 (М+1).

Получение соединения 227

Соединение 227 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 182. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06 (s, 1Н), 8,03 (d, 1Н), 7,87 (t, 1Н), 7,50-7,43 (m, 2Н), 4,88 (s, 2Н), 4,60 (t, 2Н), 4,51-4,43 (m, 2Н), 4,07-3,83 (m, 3Н), 3,41 (m, 1Н), 3,22-3,13 (m, 8Н), 2,96 (m, 1Н), 2,71 (m, 2Н), 2,37 (m, 2Н), 2,26 (m, 2Н), 2,18-1,81 (m, 8Н), 1,71 (m, 2Н), 1,61 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 737,4 (М+1).

Получение соединения 228

Соединение 228 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 202. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,07 (s, 1Н), 8,01 (d, 1Н), 7,84 (t, 1Н), 7,49-7,41 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,61 (t, 2Н), 4,50-4,30 (m, 5Н), 4,12 (s, 2Н), 4,03 (m, 1Н), 3,50 (t, 2Н), 3,36-3,13 (m, 7Н), 3,05 (t, 2Н), 2,87 (m, 1Н), 2,42 (m, 2Н), 2,20-2,02 (m,3H), 1,99-1,83 (m, 3Н), 1,74 (m, 2Н), 1,60 (m, 1Н), 1,41-1,19 (m, 9Н); ЭИ-МС: 694,4 (М+1).

Получение соединения 229

Соединение 229 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 182. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,07 (s, 1Н), 8,03 (d, 1Н), 7,83 (t, 1Н), 7,50-7,41 (m, 2Н), 4,88 (s, 2Н), 4,60 (t, 2Н), 4,51-4,44 (m, 2Н), 4,19-4,16 (m, 2Н), 4,07-3,78 (m, 4Н), 3,43 (m, 1Н), 3,22-3,11 (m, 6Н), 2,96 (m, 1Н), 2,73-2,65 (m, 4Н), 2,40-2,21 (m, 6Н), 2,18-1,80 (m, 8Н), 1,71 (m, 2Н), 1,62 (m, 1Н), 1,42-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 866,5 (М+1).

Получение соединения 230

Соединение 230 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 202. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,02 (s, 1Н), 4,86 (s, 2Н), 4,60 (t, 2Н), 4,38 (q, 2Н), 4,29 (m, 1Н), 4,18 (m, 1Н), 4,11 (s, 2Н), 3,91(m, 1Н), 3,49 (t, 2Н), 3,30 (m, 1Н), 3,24-3,13 (m, 6Н), 3,05-2,92 (m, 3Н), 2,38 (m, 2Н), 2,29 (s, 3Н), 2,20-2,08 (m, 5Н), 1,99-1,83 (m, 4Н), 1,74 (m, 1Н), 1,60 (m, 1Н), 1,41-1,19 (m, 9Н); ЭИ-МС: 642,4 (М+1).

Получение соединения 231

Соединение 231 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,07 (s, 1Н), 7,97 (d, 1Н), 7,79 (t, 1Н), 7,44-7,38 (m, 2Н), 4,88 (s, 2Н), 4,60 (t, 2Н), 4,48 (m, 1Н), 4,38 (m, 1Н), 4,14 (m, 1Н), 4,02 (m, 1Н), 3,30 (m, 1Н), 3,22-3,12 (m, 6Н), 2,85-2,75 (m, 3Н), 2,37 (m, 2Н), 2,30 (m, 2Н), 2,18-1,80 (m, 8Н), 1,68 (m, 2Н), 1,58 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 650,4 (М+1).

Получение соединения 232

Соединение 232 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 206. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06 (s, 1Н), 8,02 (d, 1Н), 7,84 (t, 1H), 7,49-7,42 (m, 2H), 4,91 (s, 2H), 4,61 (t, 2H), 4,53-4,43 (m, 2H), 4,32 (m, 1H), 4,00 (m, 1H), 3,95 (s, 2H), 3,47 (t, 2H), 3,37-3,08 (m, 7H), 3,04 (t, 2H), 2,88 (m, 1H), 2,41 (m, 2H), 2,20-2,02 (m, 3H), 1,96-1,84 (m, 3H), 1,73 (m, 2H), 1,58 (m, 1H), 1,41-1,19 (m, 6H); ЭИ-МС: 666,4 (M+1).

Получение соединения 233

Соединение 233 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 206. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,02 (s, 1Н), 5,94 (s, 1Н), 4,86 (s, 2Н), 4,60 (t, 2Н), 4,30 (m, 1Н), 4,17 (m, 1Н), 3,99 (s, 2Н), 3,91 (m, 1Н), 3,46 (t, 2Н), 3,30 (m, 1Н), 3,23-3,12 (m, 6Н), 3,01 (t, 2Н), 2,94 (m, 1Н), 2,36 (m, 2Н), 2,28 (s, 3Н), 2,20-2,08 (m, 5Н), 1,99-1,81 (m, 4Н), 1,73 (m, 1Н), 1,57 (m, 1Н), 1,41-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 614,4 (М+1).

Получение соединения 234

Соединение 234 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 15. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,00 (d, 1Н), 7,93-7,89 (m, 2Н), 7,83 (t, 1Н), 7,50-7,42 (m, 2Н), 4,93 (s, 2Н), 4,66- 4,50 (m, 6Н), 3,23-3,12 (m, 6Н), 2,37 (m, 2Н), 2,28 (m, 2Н), 2,20-2,06 (m, 4Н), 1,90-1,80 (m, 2Н), 1,71 (m, 1Н), 1,43-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 627,3 (М+1).

Получение соединения 235

Соединение 235 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 151 и 202. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,24 (s, 1Н), 8,07 (s, 1Н), 4,99 (s, 2Н), 4,60 (t, 2Н), 4,36 (q, 2Н), 4,12 (s, 2Н), 3,94-3,90 (m, 4Н), 3,81-3,77 (m, 4Н), 3,50 (t, 2Н), 3,21-3,15 (m, 6Н), 3,06 (t, 2Н), 2,38 (m, 2Н), 2,18-2,06 (m, 4Н), 1,89 (m, 2Н), 1,72 (m, 1Н), 1,41-1,19 (m, 9Н); ЭИ-МС: 654,4 (М+1).

Получение соединения 236

Соединение 236 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 182 и 57. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,01 (s, 1Н), 5,92 (s, 1Н), 4,86 (s, 2Н), 4,59 (t, 2Н), 4,28 (m, 1Н), 4,19 (m, 1Н), 3,88 (m, 1Н), 3,41-3,30 (m, 5Н), 3,22-3,17 (m, 6Н), 2,98 (t, 2Н), 2,90 (m, 1Н), 2,37 (m, 2Н), 2,27 (s, 3Н), 2,19-2,02 (m, 7Н), 1,97-1,78 (m, 3Н), 1,69 (m, 2Н), 1,56 (m, 1Н), 1,41-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 664,4 (М+1).

Получение соединения 237

Соединение 237 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 151 и 206. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,24 (s, 1Н), 8,07 (s, 1Н), 4,98 (s, 2Н), 4,60 (t, 2Н), 3,96 (s, 2Н), 3,95-3,90 (m, 4Н), 3,79-3,75 (m, 4Н), 3,49 (t, 2H), 3,23-3,12 (m, 6H), 3,04 (t, 2H), 2,39 (m, 2H), 2,19-2,09 (m, 4H), 1,88 (m, 2H), 1,73 (m, 1H), 1,41-1,18 (m, 6H); ЭИ-МС: 626,4 (М+1).

Получение соединения 238

Соединение 238 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 182. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06 (s, 1Н), 8,01 (d, 1Н), 7,83 (t, 1Н), 7,48-7,42 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,59 (t, 2Н), 4,43-4,41 (m, 2Н), 4,15 (m, 1Н), 4,02 (m, 1Н), 3,82 (m, 1Н), 3,54 (m, 2Н), 3,30 (m, 1Н), 3,20-3,12 (m, 8Н), 2,82-2,70 (m, 2Н), 2,62 (m, 1Н), 2,40-2,24 (m, 4Н), 2,18-1,80 (m, 9Н), 1,68 (m, 2Н), 1,55 (m, 1Н), 1,40-1,15 (m, 12Н); ЭИ-МС: 834,5

Получение соединения 239

Соединение 239 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 182. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06 (s, 1Н), 8,01 (d, 1Н), 7,83 (t, 1Н), 7,48-7,42 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,59 (t, 2Н), 4,46-4,42 (m, 2Н), 4,15 (m, 1Н), 4,05-4,01 (m, 2Н), 3,82 (m, 1Н), 3,56 (m, 2Н), 3,30 (m, 1Н), 3,22-3,12 (m, 8Н), 2,85-2,75 (m, 2Н), 2,62 (m, 1Н), 2,40 (m, 2Н), 2,24 (m, 2Н), 2,18-1,80 (m, 8Н), 1,68 (m, 2Н), 1,55 (m, 1Н), 1,40-1,15 (m, 6Н); ЭИ-МС: 778,5 (М+1).

Получение соединения 240

Соединение 240 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 202. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06 (s, 1Н), 7,94 (d, 1Н), 7,77 (t, 1Н), 7,42-7,33 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,58 (t, 2Н), 4,45 (m, 1Н), 4,42 (m, 1Н), 4,05 (m, 1Н), 3,27 (m, 1Н), 3,22-3,10 (m, 9Н), 2,80 (m, 1Н), 2,56 (t, 2Н), 2,50 (t, 2Н), 2,35 (m, 2Н), 2,18-2,08 (m, 4Н), 2,02-1,82 (m, 6Н), 1,69 (m, 2Н), 1,56 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 649,4 (М+1).

Получение соединения 241

Соединение 241 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 206.¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,04 (s, 1Н), 7,93 (d, 1Н), 7,76 (t, 1Н), 7,42-7,33 (m, 2Н), 4,88 (s, 2Н), 4,59 (t, 2Н), 4,45 (m, 1Н), 4,38 (m, 1Н), 4,06 (m, 1Н), 3,27 (m, 1Н), 3,22-3,14 (m, 6Н), 2,80 (m, 1Н), 2,56 (t, 2Н), 2,50 (t, 2Н), 2,36 (m, 2Н), 2,18-2,04 (m, 6Н), 1,92 (t, 2Н), 1,84 (m, 2Н), 1,68 (m, 2Н), 1,56 (m, 1Н), 1,41-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 635,4 (М+1).

Получение соединения 242

Соединение 242 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 182. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06 (s, 1Н), 7,97 (d, 1Н), 7,79 (t, 1Н), 7,46-7,38 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,58 (t, 2Н), 4,48-4,37 (m, 2Н), 4,01 (m, 1Н), 3,50 (m, 1H), 3,36-3,12 (m, 12H), 2,84 (m, 1H), 2,36 (m, 2H), 2,19-1,80 (m, 8H), 1,69 (m, 2H), 1,58 (m, 1H), 1,41-1,18 (m, 6H); ЭИ-МС: 686,4 (M+1).

Получение соединения 243

Соединение 243 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 241. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06 (s, 1Н), 7,93 (d, 1Н), 7,76 (t, 1Н), 7,42-7,33 (m, 2Н), 4,88 (s, 2Н), 4,59 (t, 2Н), 4,45 (m, 1Н), 4,38 (m, 1Н), 4,06 (m, 1Н), 3,27 (m, 1Н), 3,22-3,14 (m, 6Н), 2,80 (m, 1Н), 2,50 (t, 2Н), 2,36-2,34 (m, 4Н), 2,18-2,04 (m, 6Н), 1,92 (m, 2Н), 1,84 (m, 2Н), 1,68 (m, 2Н), 1,56 (m, 3Н), 1,41-1,19 (m, 14Н); ЭИ-МС: 705,5 (М+1).

Получение соединения 244

Соединение 244 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 240. ЭИ-МС: 719,5 (М+1).

Получение соединения 245

Соединение 245 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,07 (s, 1Н), 7,96 (d, 1Н), 7,81 (t, 1Н), 7,49-7,41 (m, 2Н), 4,87 (s, 2Н), 4,60 (t, 2Н), 3,57 (m, 2Н), 3,47 (m, 2Н), 3,22-3,10 (m, 6Н), 2,92 (t, 2Н), 2,37 (m, 2Н), 2,18-1,82 (m, 9Н), 1,70 (m, 1Н), 1,58-1,18 (m, 8Н); ЭИ-МС: 535,4 (М+1).

Получение соединения 246

Соединение 246 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06 (s, 1Н), 7,97 (d, 1Н), 7,81 (t, 1Н), 7,51-7,43 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,59 (t, 2Н), 3,71 (m, 2Н), 3,51 (m, 2Н), 3,22-3,12 (m, 7Н), 2,37 (m, 2Н), 2,26 (m, 2Н), 2,18-2,04 (m, 5Н), 1,91-1,68 (m, 4Н), 1,42-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 521,4 (М+1).

Получение соединения 247

Соединение 247 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,11 (d, 1Н), 8,05 (s, 1Н), 7,81 (t, 1Н), 7,50-7,40 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,82 (m, 1Н), 4,57 (t, 2Н), 3,61 (m, 2Н), 3,44 (t, 3Н), 3,22-3,10 (m, 8Н), 2,36 (m, 2Н), 2,20-2,00 (m, 8Н), 1,88 (m, 2Н), 1,70 (m, 1Н), 1,42-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 499,4 (М+1).

Получение соединения 248

Соединение 248 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 195 и 214. ЭИ-МС: 707,5 (М+1).

Получение соединения 249

Соединение 249 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 202. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06-8,03 (m, 2Н), 7,83 (t, 1Н), 7.50-7,44 (m, 2Н), 4,88 (s, 2Н), 4,61-4,47 (m, 5Н), 4,02 (m, 1Н), 3,41 (m, 1Н), 3,22-3,12 (m, 6Н), 3,00 (m, 1Н), 2,75 (d, 3Н), 2,36 (m, 2Н), 2,18-1,60 (m, 14Н), 1,42-1,18 (m, 6Н), 1,10-0,98 (m, 6Н); ЭИ-МС: 648,4 (М+1).

Получение соединения 250

Соединение 250 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 202. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,03 (s, 1Н), 6,17 (s, 1Н), 4,80 (s, 2Н), 4,63-4,52 (m, 4Н), 4,36 (q, 2Н), 4,10 (s, 2Н), 4,00(m, 1Н), 3,47 (t, 2Н), 3,24-3,11 (m, 7Н), 3,00 (t, 2Н), 2,98 (s, 3Н), 2,72 (m, 1Н), 2,42-2,34 (m, 5Н), 2,18-2,06 (m, 5Н), 1,94-1,80 (m, 3Н), 1,71 (m, 2Н), 1,57 (m, 1Н), 1,42-1,18 (m, 9Н); ЭИ-МС: 656,4 (М+1).

Получение соединения 251

Соединение 251 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05-7,94 (m, 3Н), 7,84 (t, 1Н), 7.51-7,43 (m, 2Н), 5,40 (s, 2Н), 4,93 (s, 2Н), 4,52 (t, 2Н), 4,14 (t, 2Н), 3,22-3,13 (m, 8Н), 2,35 (m, 2Н), 2,18-2,06 (m, 4Н), 1,87 (m, 2Н), 1,70 (m, 1Н), 1,45 (m, 2Н), 1,42-1,18 (m, 6Н), 1,10-0,98 (m, 4Н), 0,63 (t, 3Н); ЭИ-МС: 647,4 (М+1).

Получение соединения 252

Соединение 252 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 202. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,06 (d, 1Н), 7,97 (s, 1Н), 7,83 (t, 1Н), 7,57 (d, 1Н), 7,48 (t, 1Н), 4,86 (s, 2Н), 4,62 (m, 1Н), 4,59 (t, 2Н), 4,52 (s, 2Н), 3,62 (m, 2Н), 3,36-3,10 (m, 10Н), 2,79 (m, 1Н), 2,42-2,36 (m, 4Н), 2,18-1,97 (m, 8Н), 1,88-1,70 (m, 5Н), 1,42-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 632,4 (М+1).

Получение соединения 253

Соединение 253 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 202. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05-8,00 (m, 2Н), 7,83 (t, 1Н), 7,49-7,43 (m, 2Н), 4,87 (s, 2Н), 4,59 (t, 2Н), 4,48-4,42 (m, 2Н), 4,29 (m, 2Н), 4,18 (m, 1Н), 3,92 (s, 3Н), 3,78 (m, 1Н), 3,31 (m, 1Н), 3,20-3,12 (m, 6Н), 2,93 (m, 1Н), 2,36 (m, 2Н), 2,16-2,06 (m, 6Н), 2,00-1,82 (m, 5Н), 1,71 (m, 2Н), 1,56 (m, 1Н), 1,41-1,18 (m, 6Н), 1,02 (d, 6Н); ЭИ-МС: 706,5 (М+1).

Получение соединения 254

Соединение 254 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 206. ЭИ-МС: 628,4 (М+1).

Получение соединения 255

Соединение 255 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,07 (d, 1Н), 8,05 (s, 1Н), 7,83 (t, 1Н), 7,51-7,44 (m, 2Н), 4,91 (s, 2Н), 4,52 (m, 1Н), 4,47 (s, 2Н), 3,56 (m, 2Н), 3,26-3,10 (m, 6Н), 3,05 (s, 2Н), 2,26-1,82 (m, 10Н), 1,70 (m, 1Н), 1,42-1,19 (m, 6Н), 1,13 (s, 6Н); ЭИ-МС: 549,4 (М+1).

Получение соединения 256

Соединение 256 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 202. ЭИ-МС: 692,4 (М+1).

Получение соединения 257

Соединение 257 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 206. ЭИ-МС: 692,4 (М+1).

Получение соединения 258

Соединение 258 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 78 и 59. ЭИ-МС: 621,4 (М+1).

Получение соединения 259

Соединение 259 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 7,99 (s, 1Н), 6,19 (s, 1Н), 4,86 (s, 2Н), 4,82 (m, 1Н), 4,55 (t, 2Н), 3,58 (m, 2Н), 3,22-3,10 (m, 8Н), 3,01 (s, 3Н), 2,36-2,30 (m, 5Н), 2,20-1,80 (m, 10Н), 1,70 (m, 1Н), 1,42-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 499,4 (М+1).

Получение соединения 260

Соединение 260 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,29 (d, 1Н), 7,99 (s, 1Н), 7,81 (t, 1Н), 7,48-7,42 (m, 2Н), 4,58 (m, 2Н), 4,40 (m, 1Н), 4,10 (m, 2Н), 3,62 (m, 2Н), 3,30 (m, 2Н), 3,20-3,04 (m, 4Н), 3,04 (m, 2Н), 2,98 (m, 2Н), 2,62 (t, 2Н), 2,38 (m, 2Н), 2,20-1,82 (m, 10Н), 1,77-1,63 (m, 1Н), 1,43-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 535,4 (М+1).

Получение соединения 261

Соединение 261 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 142. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,01 (s, 1Н), 4,69 (s, 2Н), 4,57 (t, 2Н), 3,22-3,04 (m, 10Н), 2,79 (m, 1Н), 2,35 (m, 2Н), 2,18-2,02 (m, 4Н), 1,98 (m, 2Н), 1,87 (m, 2Н), 1,70 (m, 1Н), 1,56 (m, 2Н), 1,42-1,19 (m, 6Н); ЭИ-МС: 515,3 (М+1).

Получение соединения 262

Ниже показана схема синтеза соединения 262 из соединения 43-I через промежуточные соединения 262-I - 262-IV.

EtI (936 мг) и K₂CO₃ (100 мг) добавляли к раствору 1-трет-бутилового сложного эфира 2-трет-бутоксикарбониламинопентандиовой кислоты (909 мг) в ДМФ (8 мл) в атмосфере азота. Полученную в результате реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч и затем гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М). Полученный в результате раствор экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Экстракт промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали с получением неочищенного 262-I (712 мг, выход 72%).

Boc₂O (710 мг), ТЭА (420 мг) и DMAP (122 мг) добавляли к раствору 262-I (710 мг) в ДХМ. Смесь перемешивали при 60°С в течение 15 ч, а затем концентрировали при пониженном давлении путем удаления CH₂Cl₂ c получением неочищенного остатка, который очищали флэш-хроматографией с н-гексаном/этилацетатом (30:1) с получением продукта 262-II (670 мг, выход 72%).

К раствору 262-II (650 мг) в диэтиловом эфире (20 мл) добавляли DIBAL (1 М, 2 мл) при -78°С. Полученную в результате смесь перемешивали при -78°С в течение 2 ч, а затем гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М). Полученный в результате раствор экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Экстракт промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с н-гексаном/этилацетатом (19:1) с получением соединения 262-III (347 мг, выход 59%).

262-III (130 мг), триацетоксиборгидрид натрия (150 мг) и НОАс (60 мг) добавляли к раствору 43-I (363 мг) в ДХМ (20 мл). Полученную в результате смесь перемешивали при 25°С в течение 15 ч, а затем гасили водным раствором NH₄Cl (50 мл, 2 М). Полученный в результате раствор экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Экстракт промывали соляным раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем фильтрат концентрировали. Полученный таким образом остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с МеОН/ДХМ (1:19) с получением соединения 262-IV (311 мг, выход 62%).

Раствор 4 н. HCl/диоксан (1,8 мл) добавляли к раствору соединения 262-IV (196 мг) в смеси дихлорметана (3,6 мл) и 1,4-диоксана (3,6 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч и концентрировали с получением соли гидрохлорид соединения 262 (135 мг, выход 87%). ЭИ-МС: 636,4 (М+1).

Получение соединения 263

Соединение 263 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 241. ЭИ-МС: 599,4 (М+1).

Получение соединения 264

Соединение 264 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 1. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,10-8,05 (m, 2Н), 7,86 (t, 1Н), 7,65 (d, 1Н), 7,51 (t, 1Н), 5,15 (s, 2Н), 4,60- 4,50 (m, 3Н), 3,57 (m, 2Н), 3,38 (s 3Н), 3,22-3,15 (m, 8Н), 2,38 (m, 2Н), 2,26 (m, 2Н), 2,20-2,05 (m, 4Н), 2,00-1,82 (m, 4Н), 1,71 (m, 1Н), 1,43-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 535,4 (М+1).

Получение соединения 265

Соединение 265 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 195. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,03-7,93 (m, 3Н), 7,84 (t, 1Н), 7,48 (d, 2Н), 5,24 (s, 2Н), 4,96 (s, 2Н), 4,52 (m, 2Н), 3,95 (m, 1Н), 3,30 (m, 2Н), 3,22-3,08 (m, 8Н), 2,34 (m, 2Н), 2,18-1,61 (m, 11Н), 1,43-1,18 (m, 6Н); ЭИ-МС: 691,4 (М+1).

Получение соединения 266

Соединение 266 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 262. ЭИ-МС: 600,4 (М+1).

Получение соединения 267

Соединение 267 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,05 (s, 1Н), 7,84 (d, 1Н), 6,92 (dd, 1Н), 6,75 (s, 1Н), 4,86 (s, 2Н), 4,58 (t, 2Н), 4,45 (m, 1Н), 4,32 (m, 1Н), 4,15 (m, 1Н), 4,02 (m, 1Н), 3,26 (m, 1Н), 3,20-3,12 (m, 6Н), 2,82 (m, 1Н), 2,77 (t, 2Н), 2,35 (m, 2Н), 2,27 (m, 2Н), 2,18-1,80 (m, 8Н), 1,68 (m, 2Н), 1,55 (m, 1Н), 1,40-1,17 (m, 6Н); ЭИ-МС: 680,4 (М+1).

Получение соединения 268

Соединение 268 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,08 (s, 1Н), 7,87 (d, 1Н), 7,36-7,24 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,46 (t, 2Н), 4,46 (m, 1Н), 4,38 (m, 1Н), 4,17 (m, 1Н), 4,04 (m, 1Н), 3,30 (m, 1Н), 3,20-3,06 (m, 6Н), 2,81 (m, 1Н), 2,78 (t, 2Н), 2,36 (m, 2Н), 2,26 (m, 2Н), 2,16-1,80 (m, 8Н), 1,67 (m, 2Н), 1,58 (m, 1Н), 1,40-1,13 (m, 6Н); 684,3 (М+1).

Получение соединения 269

Соединение 269 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 260 и 63. ЭИ-МС: 664,4 (М+1).

Получение соединения 270

Соединение 270 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63. ¹Н ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,04-8,01 (m, 2Н), 7,83 (m, 1Н), 7,46-7,42 (m, 2Н), 4,86 (s, 2Н), 4,58 (t, 2Н), 4,44-4,41 (m, 2Н), 4,30 (m, 1Н), 4,03 (m, 1Н), 3,40-3,12 (m, 9Н), 2,83 (m, 1Н), 2,35 (m, 2Н), 2,21-1,80 (m, 8Н), 1,70 (m, 2Н), 1,58 (m, 1Н), 1,43-1,18 (m, 6Н); 636,4 (М+1).

Получение соединения 271

Соединение 271 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 63. ЭИ-МС: 664,4 (М+1).

Получение соединения 272

Соединение 272 было получено способом, подобным используемому для получения соединения 258. ЭИ-МС: 585,4 (М+1).

Получение соединения 273

Соединение 273 было получено способом, подобным используемому для получения соединений 181 и 63. ЭИ-МС: 693,4 (М+1).

ПРИМЕР 2

Определение связывания радиоактивного лиганда с использованием препаратов мембран, приготовленных из трансфицированных CXCR4 клеток HEK293 человека

Конкуренцию за связывание между соединениями формулы (I) и SDF-1 человека оценивали с использованием количественного определения связывания радиоактивного лиганда, как описано ниже.

Мембранные препараты (2-4 мкг), приготовленные из трансфицированных CXCR4 клеток HEK293 человека в 40 мкл аналитического буфера (50 мМ ГЭПЭС-NaOH, рН 7,4, 100 мМ NaCl, 5 мМ MgCl₂, 1 мМ CaCl₂, 0,5% бычий сывороточный альбумин), инкубировали с 20 мкл меченного радиоактивной меткой ¹²⁵I-SDF-1 (0,16 нМ) и 20 мкл тестируемого соединения в аналитическом планшете (Costar Corning, г. Кембридж, штат Массачусетс, США). После 60 минут при 30°С инкубацию останавливали перенесением полученной реакционной смеси в лунки 96-луночного планшета с фильтром GF/B (Millipore Corp., г. Биллерика, штат Массачусетс, США) и фильтровали с помощью коллектора. Планшет промывали четыре раза 100 мкл охлажденного во льду промывочного буфера (50 мМ ГЭПЭС-NaOH, рН 7,4, 100 мМ NaCl). Количество радиоактивного вещества, связанного с фильтром, измеряли с помощью счетчика Topcount (PerkinElmer Inc., г. Уолтем, штат Массачусетс, США).

Неожиданно наблюдали, что концентрация, необходимая для ингибирования связывания ¹²⁵I-SDF-1 с CXCR4 на 50% (IC₅₀) 42-х протестированных соединений, была ниже 25 нМ, 97 протестированных соединений имели значения IC₅₀ 25-100 нМ, и 104 протестированных соединения имели значения IC₅₀ 100-1000 нМ.

Результаты указывают на то, что соединения формулы (I) обладают высокой аффинностью связывания с CXCR4.

Определение мобилизации кальция с использованием трансфицированных CXCR4 клеток HEK293 человека

Соединения формулы (I) тестировали на их эффективность при связывании CXCR4 с использованием количественного определения мобилизации кальция, как описано ниже:

Трансфицированные CXCR4 клетки HEK293 человека инкубировали с 50 мкл красителя Fluo-4 (2Х) набора для количественного определения кальция Fluo-4 (DIRECT™, Molecular Probes; Invitrogen, г. Бреда, Нидерланды) в 40 мкл модифицированной Дульбекко среды Игла с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки в аналитическом планшете при плотности 2×10⁴ клеток/лунка. После 60 минут при 37°С клетки обрабатывали 10 мкл тестируемого соединения и 25 мкл SDF-1 (1 нМ) при комнатной температуре.

Неожиданно концентрация, требующаяся для ингибирования связывания SDF-1 с CXCR4 на 50% (ЕС₅₀) пяти тестируемых соединений составляла менее 100 нМ, и для 40 тестируемых соединений показаны значения ЕС₅₀ 100-1000 нМ.

Результаты указывают на то, что соединения формулы (I) прочно связываются с CXCR4.

Определение хемотаксиса с использованием клеток лимфобластного лейкоза (CCRF-CEM)

Ответ раковых клеток на соединения формулы (I) оценивали с использованием количественного определения хемотаксиса, как описано ниже.

Клетки Т-клеточного острого лимфобластного лейкоза (CCRF-CEM) в среде Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 с добавлением 10% бычьего сывороточного альбумина инкубировали с 250 мкл тестируемого соединения. Количественное определение выполняли с использованием подвесных культуральных вставок Millicell (размер пор 5 мкм; 24-луночный планшет; Millipore, г. Бедфорд, штат Массачусетс, США). После 10 минут при 37°С 250 мкл клеток на лунку, предварительно проинкубированных с тестируемым соединением, высевали в верхние камеры вставок при плотности 2,5×10⁵ клеток/лунка. В нижнюю камеру вставки вносили 300 мкл/лунка среды, содержащей SDF-1 (10 нМ) и тестируемое соединение. После 2,5 ч при 37°С клетки в обеих камерах вставок измеряли с помощью проточной цитометрии (Guava Technologies, Хейворд, штат Калифорния, США).

Наблюдали, что 33 протестированных соединения неожиданно показали значения концентрации, необходимой для ингибирования хемотаксиса на 50% (ЕС₅₀), ниже 100 нМ, и 20 протестированных соединений показали значения ЕС₅₀ 100-1000 нМ.

Эти результаты указывают на то, что соединения формулы (I) обладают высокой эффективностью при ингибировании хемотаксиса некоторых раковых клеток.

ПРИМЕР 3

Определение колониеобразования для оценки мобилизации стволовых клеток у мышей

Для 31 соединения формулы (I) проведено тестирование для оценки их эффективности при усилении мобилизации стволовых клеток/клеток-предшественников, как описано ниже.

Каждое из 31 соединения растворяли в физиологическом растворе с образованием раствора. Этот раствор вводили подкожно самцам мышей C57BL/6 (National Laboratory Animal Center, г. Тайпей, Тайвань). В качестве контроля использовали мышей, которым вводили физиологический раствор. Через 2 ч после подкожной инъекции собирали цельную кровь и метили следующими антителами: (i) антителом к CXCR4, конъюгированным с апофикоцианином (АФЦ) (клон 2В11; eBioscience), (ii) антителом к CD34, конъюгированным с флуоресцеин изотиоцианатом (ФИТЦ) (клон RAM34; eBioscience), (iii) антителом к CD133, конъюгированным с фикоэритрином (ФЭ) (клон 13А4; eBioscience), (iv) антителом к c-kit (клон 2В8; eBioscience), (v) антителом к Sca-1 (клон D7; eBioscience), (vi) антителом к линии клеток (Mouse Hematopoietic Lineage Biotin Panel, eBioscience) и (vii) стрептавидин PE-Cy7 (eBioscience). Гемопоэтические стволовые клетки (CD34⁺) и эндотелиальные клетки-предшественники (CD133⁺) определяли количественно, используя окрашивание поверхностных антител и проточную цитометрию (Guava Technologies, г. Хейворд, штат Калифорния, США).

Тестируемые соединения неожиданно значительно усиливали мобилизацию гемопоэтических стволовых клеток CD34⁺ (до 7,8 раз) и эндотелиальных клеток-предшественников CD133⁺ (до 5,8 раз) в периферической крови по сравнению с контрольным физиологическим раствором. Кроме того, было неожиданно обнаружено, что тестируемые соединения в комбинации с G-CSF приводят к синергической мобилизации гемопоэтических стволовых клеток, о чем свидетельствовало значительное увеличение числа колониеобразующих единиц (КОЕ) гранулоцитов и макрофагов (GM).

Эти результаты указывают на то, что соединения формулы (I) обладают высокой эффективностью при усилении мобилизации стволовых клеток/клеток-предшественников.

ПРИМЕР 4

Лечение ишемически-реперфузионного повреждения у крыс

Эффективность некоторых соединений формулы (I) при лечении ишемически-реперфузионного повреждения оценивали с использованием модели острого повреждения почки, модели ишемического инсульта и модели ишемии конечности.

Модель острого повреждения почки (ОПП)

Каждое из пяти соединений растворяли в физиологическом растворе с образованием раствора. Этот раствор вводили подкожно самцам крыс Спрег-Доули (National Laboratory Animal Center, г. Тайпей, Тайвань) в дозировке 6 мг/кг. Через 40 минут после подкожной инъекции у крыс индуцировали ОПП путем пережимания почечной вены и артерии на один час с последующим снятием скоб с сосудов, чтобы дать возможность 24-ч реперфузии. Через 24 ч после индукции ОПП собирали цельную кровь. Азот мочевины крови (АМК) и сывороточный креатинин (СКР) являются двумя маркерами, уровень которых возрастает при повреждении почек, измеряли с использованием анализатора FUJI DRI-CHEM 3500s (Fujifilm, г. Токио, Япония). В качестве контролей использовали крыс без ОПП и крыс с ОПП, которым вводили физиологический раствор.

Наблюдали, что у крыс с ОПП, которым вводили тестируемые соединения, уровни АМК и СКР составляли, соответственно, 20-71% и 20-76% от уровней, индуцированных у крыс с ОПП, которым вводили физиологический раствор.

Эти результаты указывают на то, что соединения формулы (I) обладают высокой эффективностью при лечении повреждения почек.

Ишемический инсульт у крыс

Взрослых самцов крыс линии Спрег-Доули (250-300 г) обезболивали хлоралгидратом (400 мг/кг внутрибрюшинно (i.p.)). Проводили окклюзию правой средней мозговой артерии (МСАо), и билатеральные общие сонные артерии (ССА) пережимали на 60 минут, чтобы создать очаговую ишемию в коре головного мозга справа. Центральную температуру тела поддерживали при 37°С.

Соединения 62 и 63 и носитель вводили крысам в дозе 1 мг/кг/сут (i.p.) в течение 5 последовательных дней. Первую дозу вводили через 90 минут после МСАо. В день 2 после МСАо каждое животное помещали в монитор активности 42×42×31 см на 1 ч. Монитор содержал 16 горизонтальных и 8 вертикальных инфракрасных датчиков, расположенных на расстоянии 2,5 см друг от друга. Локомоторную активность вычисляли, используя число инфракрасных лучей, прерываемых животными.

Чтобы определить размер очага омертвения, проводили окрашивание трифенилтетразолия хлоридом (ТТХ) на день 5 после МСАо, как описано ранее в статье Brain Research, том 1116, выпуск 1, 2006, с. 159-165. Кратко, крыс обезглавливали, и головной мозг извлекали и получали срезы толщиной 2,0 мм. Срезы головного мозга инкубировали в 2% растворе ТТХ (Sigma-Aldrich) в течение 15 минут при комнатной температуре, а затем переносили в 4% раствор параформальдегида для фиксации. Площадь очага омертвения на каждом срезе измеряли с помощью цифрового сканера и программ Imagetools (University of Texas Health Sciences Center). Значение объема очага омертвения у каждого животного получали из произведения средней толщины среза (2 мм) и суммы площадей очагов омертвения на всех исследованных срезах головного мозга.

У крыс, получавших соединения 62 и 63, неожиданно показано значительное увеличение числа горизонтальных движений по сравнению с животными, которым вводили носитель. Сходным образом под действием обоих соединений число вертикальных движений было значительно увеличено. У животных, которым вводили тестируемые соединения, объем очага омертвения был значительно меньше, по сравнению с животными, которым вводили носитель.

Эти результаты указывают на то, что оба соединения 62 и 63 оказывают защитный эффект при инсульте у животных.

Ишемия конечности у мышей

Одностороннюю ишемию задней конечности индуцировали у мышей ICR путем перевязки и вырезания правой бедренной артерии. Кратко, животных обезболивали путем внутрибрюшинной инъекции ксилокаина (2 мг/кг массы тела) вместе с золетилом (т.е. диссоциативного анестетика тилетамина/золазепама в соотношении 1:1; 5 мг/кг массы тела). Проксимальные и дистальные участки бедренной артерии перевязывали шелковой нитью и удаляли 0,2-сантиметровый участок кровеносного сосуда. Перфузию крови задней конечности измеряли с помощью лазерной допплеровской системы визуализации перфузии (Moor Instruments Limited, Девон, Великобритания) до и после операции, а затем наблюдали раз в неделю. После операции животным вводили подкожно соединение 4 (6 мг/кг/сут, два раза в неделю) в физиологическом растворе. По окончании семи недель эксперимента животных умерщвляли смещением шейных позвонков без седативных средств. Во избежание влияния света и температуры окружающей среды результаты выражали в виде соотношения перфузии в правой (ишемической) конечности и в левой (не ишемической) конечности.

Наблюдали, что соединение 4 неожиданно приводило к улучшению на 20-25% кровотока у мышей, страдающих ишемически-реперфузионным повреждением в ишемической задней конечности, по сравнению с контролем носителя.

Эти результаты указывают на то, что соединение 4 эффективно при лечении ишемии конечностей.

ДРУГИЕ ВОПЛОЩЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Все признаки, раскрытые в данном описании, могут быть объединены в любой комбинации. Каждый признак, раскрытый в данном описании, может быть заменен альтернативным признаком, служащим той же, эквивалентной или аналогичной цели. Таким образом, если явным образом не указано иное, каждый раскрытый признак является только примером родовых серий эквивалентных или аналогичных признаков.

На основании приведенного выше описания специалист в данной области техники может легко установить неотъемлемые характеристики настоящего изобретения и может выполнять различные изменения и модификации без отклонения от его сущности и объема, чтобы адаптировать его к различным практическим применениям и условиям. Таким образом, другие воплощения изобретения также находятся в пределах объема приведенной ниже формулы изобретения.