Результат интеллектуальной деятельности: Способ прогнозирования перехода средне-тяжёлого течения нумулярной микробной экземы в тяжёлое течение

Изобретение относится к области медицины, а именно дерматологии и клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для прогнозирования тяжести заболевания у больных нумулярной микробной экземой.

Нумулярная микробная экзема - это хронический аллергодерматоз, представляющий собой специфическую аллергическую реакцию кожи, возникающую вследствие сенсибилизации на продукты распада микроорганизмов и их токсины длительно существующего пиогенного очага при нарушении важнейших регуляторных систем организма [Molin S. Deletion of the late cornified envelope genes LCE3B and LCE3C may promote chronic hand eczema with allergic contact dermatitis / S. Molin, S. Vollmer, E.H. Weiss et al. // J. Investig Allergol Clin Immunol. - 2011. N. 21 (6). - P. 472-9].

Нумулярная микробная экзема характеризуется мультифакториальностью генеза, распространенностью процесса, резистентностью к стандартным видам терапии и тяжелым клиническим течением [Юнусов Е.И. Экзема: дифференцированный подход к выбору наружной терапии / Е.И. Юнусов // Леч врач. - 2013. - №5. - С. 46-48].

Патогенетической основой развития нумулярной микробной экземы являются иммунные нарушения [Масюкова С.А. Диагностическая значимость некоторых показателей врожденного иммунитета у больных аллергодерматозами / С.А. Масюкова, Е.В. Сорокина, Н.К. Ахматова, А.И. Головинов, Е.Л. Чалая // Вестник последипломного медицинского образования. - 2014. - №4. - С. 56-57]. Дезинтеграция функций иммунной системы, развивающаяся у больных нумулярной микробной экземой, приводит к формированию неадекватного по силе и продолжительности иммунного ответа. Инициирующая роль в патогенезе нумулярной микробной экземы принадлежит нарушениям функций Т-лимфоцитов [Shams K. What's new in atopic eczema an analysis of systematic reviews published in 2009-2010 / K. Shams, D.J. Grindlay, H.C. Williams // Clin Exp Dermatol. - 2011, Aug. N. 36 (6). - P. 573-7]. Стафилококковые суперантигены, экзотоксины, энзимы усиливают иммунное воспаление в коже, приводя к накоплению пула Т-клеток памяти, тропных к дермальным антигенам [Tanaka Т. Dental infection associated with nummular eczema as an over looked focal infection / T. Tanaka, T. Saton, H. Yokozeki // J. Dermatol. - 2009, Aug. N. 36(8). - P. 462-5].

Известен способ индивидуального прогнозирования вероятности ухудшения клинического течения экземы, перехода ее в эритродермию, заключающийся в том, что проводят интегрированную оценку патогенетической значимости выявленных факторов риска. Определяют прогностический коэффициент (ПК) для таких признаков, как: пол; возраст; рабочие нефтехимического производства; сельхозрабочие; строители; водители; служащие; гиперинсоляция; неблагоприятные условия сельхозтруда (контакт с пестицидами, удобрениями; контакт с нефтепродуктами; контакт со стройматериалами; нерациональное применение лекарств; наличие очагов хронической бактериальной и/или грибковой инфекции; часто рецидивирующие ОРВИ; хронические заболевания желудочно-кишечного тракта и/или печени; хронические заболевания органов дыхания; хронические заболевания ЛОР-органов; нарушения детоксикационной функции печени; нарушения метаболической функции печени; уменьшение иммунорегуляторного индекса; уменьшение индекса стимуляции; уменьшение цитотоксического индекса; увеличение уровня циркулирующих иммунных комплексов; увеличение среднего уровня иммуноглобулинов; наличие кожного антигена в крови; увеличение уровня противотканевых аутоантител; увеличение индекса торможения миграции лейкоцитов. При отсутствии фактора его прогностический коэффициент принимают за ноль. Суммируют полученные ПК и при значении суммы ПК от 2,64 до 10,23 прогнозируют низкую вероятность ухудшения клинического течения экземы и благоприятный прогноз заболевания без перехода ограниченной формы экземы в распространенную. При значении суммы ПК от 10,24 до 30,24 - среднюю вероятность ухудшения клинического течения экземы, возможность перехода ограниченной формы заболевания в распространенную, относительно благоприятный прогноз без развития эритродермии. При значении суммы ПК от 30,25 до 50,25 и выше - высокую вероятность ухудшения клинического течения заболевания и неблагоприятный прогноз, возможность перехода экземы в эритродермию [патент RU 2508901, 2014 г.]. Недостатками данного способа являются длительность и трудоемкость исследования.

Наиболее близким аналогом изобретения является способ прогнозирования перехода средне-тяжелого течения нумулярной микробной экземы в тяжелое течение, заключающийся в том, что до начала терапии в сыворотке крови больных определяют концентрацию фактора некроза опухоли альфа и при ее значении 60 пг/мл и выше прогнозируют вероятность перехода средне-тяжелого течения нумулярной микробной экземы в тяжелое течение [патент RU 2681656, 12.03.2019]. Недостатками данного способа являются длительность, трудоемкость и высокая себестоимость исследования.

Задачей изобретения стала разработка способа прогнозирования перехода средне-тяжелого течения заболевания в тяжелое течение у больных нумулярной микробной экземой.

Техническим результатом при использовании изобретения является упрощение исследования за счет сокращения его продолжительности и трудоемкости.

Предлагаемый способ прогнозирования перехода средне-тяжелого течения заболевания в тяжелое течение у больных нумулярной микробной экземой осуществляется следующим образом. У больного нумулярной микробной экземой для оценки содержания Т-лимфоцитов - хелперов (CD3+CD4+) и цитотоксических Т-лимфоцитов (CD3+CD8+) до начала терапии строго натощак из локтевой вены проводят забор 4 мл крови в пробирку VACUETTE-K₃EDTA (Bio-One, Австрия). В каждую пробирку вносят 5 мкл моноклональных антител (Beckman Coulter,США), добавляют по 100 мкл образца цельной крови, инкубируют 20 мин в темноте при комнатной температуре (20-25°С). После инкубации для лизиса эритроцитов в пробирки вносят по 1 мл рабочего лизирующего реагента Cal-lyse (Becton Dickinson, США), инкубируют 10 мин при комнатной температуре в темноте. Пробирки центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин, удаляют надосадочную жидкость, добавляют 2 мл раствора Cell-WASH (Becton Dickinson, США) для отмывания образца от разрушенных клеток. Осадок ресуспендируют и центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин, удаляют надосадочную жидкость, полученную клеточную взвесь ресуспендируют в 0,5 мл раствора Cell-WASH. Полученные образцы анализируют на проточном цитофлюориметре FACSCALIBUR с использованием программы исследования CellQuest (Becton Dickinson, США). Результаты содержания клеток в крови выражают в относительных (процент клеток, несущих данный антиген) и абсолютных (×10⁹/л) единицах. При уровнях CD3+CD4+ ниже 0,7×10⁹/л и CD3+CD8+ ниже 0,5×10⁹/л в крови прогнозируют вероятность перехода средне-тяжелого течения нумулярной микробной экземы в тяжелое течение.

Предлагаемым способом была проведена оценка вероятности перехода средне-тяжелого течения нумулярной микробной экземы в тяжелое течение у 81 больного. Ретроспективный анализ уровня CD3+CD4+ и CD3+CD8+ показал достоверно низкие концентрации данных параметров (ниже 0,7×10⁹/л и ниже 0,5×10⁹/л соответственно) в венозной крови больных нумулярной микробной экземой со средне-тяжелым течением до начала лечения, которое в ходе проводимой стандартной терапии трансформировалось в тяжелое течение (таблица).

Изобретение иллюстрируется следующими примерами:

Пример 1. Больная Н., поступила на стационарное лечение в ГАУЗ Республиканский кожно-венерологический диспансер №1 с жалобами на высыпания на гладкой коже верхних и нижних конечностей, зуд. Возраст - 35 лет. Больна в течение 3-х лет. Обострение наблюдается в течение 1-го месяца. Лечение по данному обострению дерматоза не получала. На коже верхних и нижних конечностей наблюдались множественные высыпания в виде характерных округлых бляшек от 1*1 см до 4*4 см с четкими границами, гиперемированные, умеренно инфильтрированные, с множественными серозными колодцами, пустулами и гнойными корками. До лечения ИОТМЭ составлял 19 баллов, что соответствовало средне-тяжелому течению данного дерматоза. При бактериологическом исследование с очагов высеян Staphylococcus aureus. Клинический диагноз - экзема микробная, нумулярная форма, распространенная, хроническая, обострение, средне-тяжелое течение. При поступлении до начала лечения уровень в венозной крови CD3+CD4+ составлял 0,79×10⁹/л и CD3+CD8+ 0,59×10⁹/л. Больной было назначено стандартное лечение. Системная терапия: кальция глюконат 10% 10 мл внутримышечно 1 раз в сутки в течение 10 дней через день; натрия тиосульфат 30% 10 мл внутривенно-струйно 1 раз в сутки в течение 10 дней через день; таблетки хлоропирамин 25 мг перорально 3 раз в сутки в течение 20 дней; цефазолин 1.0 г внутримышечно 2 раза в сутки в течение 10 дней (в соответствии с результатами культурального посева на флору и чувствительность к антибиотикам).

Наружная терапия: мазь бетаметазона валерат 0,1% 1 раз в сутки в течение 20 дней, мазь гентамициновая 0,1% 2 раза в сутки в течение 20 дней.

В процессе лечения отмечалось обратное развитие воспалительных явлений в очагах. На 15-ый день проводимой терапии ИОТМЭ составлял 12 баллов, что соответствовало легкому течению дерматоза, уровень в венозной крови CD3+CD4+ составил 0,87×10⁹/л и CD3+CD8+ 0,61×10⁹/л. К моменту выписки из стационара (20-ый день лечения) гиперемия, инфильтрация и мокнутие разрешились, корки отпали, на месте разрешившихся очагов сохранялась поствоспалительная пигментация. Таким образом, у данной больной до лечения уровень в венозной крови CD3+CD4+ был выше 0,7×10⁹/л и CD3+CD8+ выше 0.5×10⁹/л, течение дерматоза соответствовало средне-тяжелому, и трансформации в тяжелое течение на фоне стандартной терапии не произошло.

Пример 2. Больная Ю., поступила на стационарное лечение в ГАУЗ Республиканский кожно-венерологический диспансер №1 с жалобами на высыпания на гладкой коже верхних и нижних конечностей, зуд. Возраст - 38 лет. Считает себя больной в течение 3,5 лет. Обострение наблюдается в течение 1-го месяца. Лечение по данному обострению дерматоза не получала. На коже верхних и нижних конечностей наблюдались множественные высыпания в виде характерных округлых бляшек от 1*1 см до 5*5 см с четкими границами, гиперемированные, инфильтрированные, с множественными серозными колодцами, пустулами и гнойными корками. До лечения ИОТМЭ составлял 18 баллов, что соответствовало средне-тяжелому течению данного дерматоза. При бактериологическом исследование с очагов высеян Staphylococcus aureus. Клинический диагноз - экзема микробная, нумулярная форма, распространенная, хроническая, обострение, средне-тяжелое течение. При поступлении до начала лечения уровень в венозной крови CD3+CD4+ составлял 0,53×10⁹/л и CD3+CD8+ 0,47×10⁹/л. Больной было назначено стандартное лечение. Системная терапия: кальция глюконат 10% 10 мл внутримышечно 1 раз в сутки в течение 10 дней через день; натрия тиосульфат 30% 10 мл внутривенно-струйно 1 раз в сутки в течение 10 дней через день; таблетки хлоропирамин 25 мг перорально 3 раз в сутки в течение 20 дней; цефазолин 1.0 г внутримышечно 2 раза в сутки в течение 10 дней (в соответствии с результатами культурального посева на флору и чувствительность к антибиотикам).

Наружная терапия: мазь бетаметазона валерат 0,1% 1 раз в сутки в течение 20 дней, мазь гентамициновая 0,1% 2 раза в сутки в течение 20 дней.

В процессе лечения воспалительные явления в очагах продолжали сохраняться, инфильтрация усиливалась. На 15-ый день терапии ИОТМЭ составил 26 баллов, что соответствовало переходу средне-тяжелого течения заболевания в тяжелое течение. В венозной крови уровень CD3+CD4+ 0,48×10⁹/л и CD3+CD8+ 0,37×10⁹/л. К стандартному лечению дополнительно был назначен иммуномодулятор. К моменту выписки из стационара (20-ый день лечения) гиперемия, инфильтрация значительно уменьшились, мокнутие разрешилось, корки отпали, на месте разрешившихся очагов сохранялась поствоспалительная пигментация.

Таким образом, у данной больной до лечения в венозной крови CD3+CD4+ был ниже 0,7×10⁹/л и CD3+CD8+ ниже 0,5×10⁹/л, течение дерматоза соответствовало средне-тяжелому, но в ходе проводимой стандартной терапии произошла трансформация в тяжелое течение, что привело к необходимости коррекции схемы лечения.

Пример 3. Больной Ж., поступил на стационарное лечение в ГАУЗ Республиканский кожно-венерологический диспансер №1 с жалобами на высыпания на гладкой коже верхних и нижних конечностей, зуд. Возраст - 31 год. Болен в течение 2-х лет. Обострение наблюдается в течение 2-х недель. Лечение по данному обострению дерматоза не получал. На коже верхних и нижних конечностей наблюдались множественные высыпания в виде характерных округлых бляшек от 1*1 см до 2*2 см с четкими границами, гиперемированные, умеренно инфильтрированные, с множественными серозными колодцами, пустулами и гнойными корками. До лечения ИОТМЭ составлял 22 балла, что соответствовало средне-тяжелому течению данного дерматоза. При бактериологическом исследование с очагов высеян Staphylococcus aureus. Клинический диагноз - экзема микробная, нумулярная форма, распространенная, хроническая, обострение, средне-тяжелое течение. При поступлении до начала лечения уровень в венозной крови CD3+CD4+ составлял 0,7×10⁹/л и CD3+CD8+ 0,5×10⁹/л. Больному было назначено стандартное лечение. Системная терапия: кальция глюконат 10% 10 мл внутримышечно 1 раз в сутки в течение 10 дней через день; натрия тиосульфат 30% 10 мл внутривенно-струйно 1 раз в сутки в течение 10 дней через день; таблетки хлоропирамин 25 мг перорально 3 раз в сутки в течение 20 дней; цефазолин 1.0 г внутримышечно 2 раза в сутки в течение 10 дней (в соответствии с результатами культурального посева на флору и чувствительность к антибиотикам).

Наружная терапия: мазь бетаметазона валерат 0,1% 1 раз в сутки в течение 20 дней, мазь гентамициновая 0,1% 2 раза в сутки в течение 20 дней.

В процессе лечения отмечалось обратное развитие воспалительных явлений в очагах. На 15-ый день проводимой терапии ИОТМЭ составлял 10 баллов, что соответствовало легкому течению дерматоза, уровень в венозной крови CD3+CD4+ составил 0,93×10⁹/л и CD3+CD8+ 0,51×10⁹/л. К моменту выписки из стационара (20-ый день лечения) гиперемия, инфильтрация и мокнутие разрешились, корки отпали, на месте разрешившихся очагов сохранялась поствоспалительная пигментация. Таким образом, у данного больного до лечения уровни в венозной крови CD3+CD4+ и CD3+CD8+ достигали 0,7×10⁹/л и 0,5×10⁹/л, соответственно, течение дерматоза соответствовало средне-тяжелому и трансформации в тяжелое течение на фоне стандартной терапии не произошло.

Как видно из приведенных примеров, результаты определения уровня CD3+CD4+ и CD3+CD8+ в венозной крови до лечения позволяют прогнозировать вероятность перехода средне-тяжелого течения заболевания в тяжелое течение.

Авторами в научно-медицинской и патентной литературе не было обнаружено сведений об использовании определения уровня CD3+CD4+ и CD3+CD8+ в венозной крови у больных нумулярной микробной экземой до начала терапии для прогнозирования возможности перехода средне-тяжелого течения нумулярной микробной экземы в тяжелое течение. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию патентоспособности «новизна».

Исследованиями авторов была впервые доказана возможность прогнозирования предлагаемым способом вероятности перехода средне-тяжелого течения нумулярной микробной экземы в тяжелое течение. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».

Предлагаемый способ легко воспроизводим в условиях лаборатории стационара. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию патентоспособности «промышленная применимость».