ПРЕПАРАТ "РАЙДО" ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ МАСТИТОВ У КОРОВ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно, к лечебным препаратам на основе растительного сырья, используемым в ветеринарной гинекологии, и способам их получения и может быть использовано на предприятиях сельскохозяйственного назначения при проведении профилактических и лечебных мероприятий в ветеринарии.

Важнейшим фактором, определяющим рентабельное ведение животноводства, является формирование здорового стада животных с учетом последних достижений науки и передовой практики, получения на выходе экологически чистого мяса и молока без содержания антибиотиков.

Патоморфологическая картина поражений жизненно-важных органов при хронических заболеваниях или при возрастной дегенерации разнообразна, но она содержит один общий элемент - нарушение стабильности клеточных мембран, их биологический износ. Универсальная роль в патогенезе мембранно-клеточных поражений принадлежит свободным радикалам, которые вызывают деструкцию биополимеров. Повышение содержания свободных радикалов в организме сопровождается уменьшением общей противоокислительной активности, в частности, снижением антиоксидантной активности липидных комплексов. Некоторые вещества - ингибиторы свободнорадикальных процессов, не обладающие сами по себе противоокислительной активностью, способны увеличивать антиоксидантные свойства липидов и усиливают радиопротекторный эффект эндогенных антиоксидантов. Ингибиторы радикалов, экзогенные антиоксидантные препараты в оптимальных дозах восполняют дефицит эндогенных противоокислителей и уменьшают масштаб поражений, связанных со свободнорадикальными реакциями.

В этой связи актуальным является разработка специалистов Башкирского НИИСХ и ООО «Агровейт» препарата РАЙДО для профилактики и лечения воспалительных процессов в организме коров.

Известны народные средства для профилактики маститов у коров на начальном этапе заболевания, например, с использованием чеснока, капустных листьев, картофельного крахмала, лука, чайного гриба, свиного сала и т.п. (http://agronomwiki.ru/kak-lechit-mastit-u-korovy-prichiny-lechenie-profilaktika.html).

Однако, народные средства показали свою низкую эффективность при лечении осложненных форм маститов и могут найти применение только для профилактики заболевания у коров.

Известны различные лекарственные препараты для лечения маститов у коров, например, прополис содержащие (RU 2669926, опубл. 17.10.2018; RU 2102074, опубл. 20.01.1998; RU 2102074, опубл. 20.01.1998), с использованием наночастиц серебра (RU 2532407,опубл. 10.11.2014), озонированного рыбьего жира (RU 2238097,опубл. 20.10.2004), экстракта из листовых почек тополя черного (RU 2211044, опубл. 27.08.2003), изготовление которых является трудоемким и дорогостоящим.

Считается, что наиболее эффективными препаратами являются те, которые содержат в своем составе искусственные антибиотики, такие как «Максимакс», «Бенстреп», «Пенмицин», «Дорин» (http://fb.ru/article/318477/effektivnyie-antibiotiki-pri-mastite-u-korov)

Известно, что поступающие в организм человека по пищевой цепочке: «животные-продукция-человек» антибиотики представляют серьезную опасность для его здоровья (Уша Б.В., Кальницкая О.И. Контроль остатков антибиотиков в сырье и продуктах животного происхождения // «Современные проблемы ветеринарной фармакологии и токсикологии». Второй съезд ветеринарных фармакологов и токсикологов России. Казань. 9-12 июня 2009 г. Материалы съезда. - Казань, 2009, стр. 11-14). Важнейшим фактором, определяющим рентабельное ведение животноводства, является формирование здорового стада животных с учетом последних достижений науки и передовой практики, получения на выходе экологически чистого мяса и молока без содержания антибиотиков. По этой причине важным фактором является создание таких препаратов, которые содержат в своем составе компоненты, безвредные для человека.

Лиственница - одно из наиболее распространенных растений на территории России, поэтому неудивительно, что еще наши предки использовали это дерево, обогащенное микроэлементами и биологически активными веществами, для лечения многих заболеваний, т.к. в своем составе содержит биологически активные соединения: эфирное масло, дубильные вещества, камедь, катехины, флавоноиды, органические кислоты, каротин, лигнин и др.. (https://www.tiensmed.ru/news/listvennica-ab0.html).

Флавоноиды относятся к числу широко распространенных растительных метаболитов, для которых характерна высокая разносторонняя биологическая активность и малая токсичность. Направление биологического действия флавоноидов связано с физико-химическими свойствами многообразия их структур. Большое значение придается противовоспалительному действию флавоноидов, с которым связано их противоязвенное, ранозаживляющее и жаропонижающее действие.

Существенным недостатком флавоноидов и других природных биологически активных веществ, снижающим эффективность препаратов на их основе, является их низкая водорастворимость. В связи с этим представляет интерес разработка новых лекарственных препаратов, обладающих повышенной водорастворимостью флавоноидов. (https://fundamental-research. ru/pdf/2014/11-10/35914.pdf).

Благодаря содержанию природных биологически активных веществ, в том числе флавоноидов воднодисперсные экстракты, полученные из древесной коры сосны, ивы, лиственницы, ели нашли широкое применение при лечении желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных (http://fb.ru/article/143078/flavonoid-chto-eto-takoe-v-chem-soderjatsya-flavonoidyi-i-kakovo-ih-vliyanie-na-organizm-cheloveka).

Известно также использование экстракта древесины лиственницы в сельском хозяйстве как средства для борьбы с болезнями пшеницы (RU 2464785,опубл. 27.10.2012), а также как биологически активной добавки к пище (RU 2373771,опубл. 27.11.2009), как натуральный краситель (RU 2585193, опубл. 27.05.2016) или биоактивный компонент косметического средства (RU 2454217,опубл. 27.06.2012).

Однако, использование экстракта, полученного из отходов переработки стволов лиственницы в качестве высокоэффективного препарата для лечения маститов у коров в мировой практике не обнаружено.

Известен способ комплексной переработки коры лиственницы с получением ценных химических продуктов, согласно которому экстракцию осуществляют неполярным растворителем, например, пентаном, гексанон, бензином, при этом экстракцию проводят при температуре кипения растворителя, а остаток коры обрабатывают спирто-водно-щелочным раствором, осаждают полифенолы и далее подвергают длительной очистке и промывке (RU 2657427, опубл. 13.06.2018).

Однако, получить указанным способом экологически чистый и безопасный фармацевтический препарат для лечения коров не представляется возможным.

Наиболее близким по технической сущности к изобретению является биорезонансный способ получения препарата для лечения ожогов и ран путем экстрагирования с получением водного экстракта растительного вещества -лиственницы сибирской (RU 2470653,опубл. 27.12.2012).

Указанный способ включает обработку распиленных частей ствола лиственницы, погруженных в дистиллированную воду, колебаниями заданной частоты. Излучатель опускали в ванну и опытным путем на генераторе подбирали частоты, соответствующие частотам лиственницы сибирской (от 10 до 30 Гц). Получали водный экстракт лиственницы сибирской.

Полученный препарат содержит флавоноиды, дигидрокверцитин, комплекс полисахаридов, компоненты эфирных масел, которые являются основой препарата для лечения ожогов и ран.

Однако в его составе присутствует недостаточное количество биологически активных веществ (флавоноидов) и химических элементов, которые необходимые для лечения и профилактики маститов разной формы у коров благодаря их уникальным свойствам проникновения сквозь клеточные мембраны живой клетки. Высокая эффективность воздействия препарата на клетку животного обусловлена тем, что клетка не воспринимает его как инородный.

Кроме того, для получения высокого фармацевтического эффекта в составе препарата необходимы такие активные вещества как: растворимые пищевые волокна (арабиногалактан лиственницы).

Для получения эффективного и недорогого природного препарата был разработан способ, который позволяет создать условия, обеспечивающие высокую растворимость субстанции флавоноидов и других природных биологически активных соединений в водной среде при производстве водного экстракта, проникновение его сквозь клеточные мембраны живой клетки животного и высокую степень биологической активности, что позволяет препарату воздействовать на причину возникновения заболевания, а не только снимать его симптомы.

Группа изобретений решает единую техническую задачу, которая заключается в получении безопасного и недорогого препарата растительного происхождения, содержащего природные биологически активные соединения, из отходов переработки стволов лиственницы, обладающего выраженными фармакологическими свойствами и высокой эффективностью при профилактике и лечении маститов у коров в результате воздействия на динамику иммунобиологических показателей организма коров путем устранения нарушений в органах их репродуктивной системы.

Технический результат заключается в получении указанного препарата при создании условий, обеспечивающих высокую растворимость субстанции флаваноидов и других природных биологически активных соединений в водной среде при производстве водного экстракта, проникновение его сквозь клеточные мембраны живой клетки животного и высокую степень биологической активности, что позволит препарату воздействовать на причину возникновения заболевания, а не только снимать его симптомы.

Технический результат достигается тем, что предложен препарат для профилактики и лечения маститов у коров в виде растительного экстракта сырья из отходов переработки стволов лиственницы в воднодисперсном состоянии при следующем соотношении компонентов, мас. %:

при этом сырье содержит кору, древесину, луб и ветки с хвоей лиственницы в соотношении, мас %:

Указанный технический результат достигается тем, что способ получения препарата для профилактики и лечения маститов у коров путем экстрагирования включает измельчение сырья, заливку дистиллированной водой и вибрационную обработку частотными колебаниями, характеризуется тем, что в качестве сырья используют кору, древесину, луб и ветки с хвоей лиственницы из отходов переработки стволов лиственницы в соотношении, мас %:

а измельчение осуществляют до фракции 1-2 мм, вибрационную обработку осуществляют с помощью колебаний в инфразвуковом частотном диапазоне, продолжительность вибрационной обработки составляет 15-16 суток с получением воднодисперсного с размером частиц 15-27 микрон растительного экстракта сырья из отходов переработки стволов лиственницы при следующем соотношении компонентов, мас. %:

и в стерильных условиях расфасовывают в емкости.

Измельчение сырья до фракции 1-2 мм позволяет ускорить технологический процесс деструкции сырья, т.к. фракция не больше 2 мм способствует ускорению деструкции и повышению выхода полезных составляющих.

Экспериментально доказано, что с точки зрения содержания биологически активных веществ и химического состава наиболее оптимальным является сырье, содержащее кору, древесину, луб в соотношении (18-22):(38-42):(8-12), соответственно, и ветки с хвоей - остальное.

Такое соотношение компонентов в сырье позволило получать максимальный выход конечного продукта при низкой стоимости его изготовления.

Если указанное соотношение не выдерживается, то выход высоко эффективного растительного экстракта в составе препарата снижается. Причем в составе экстракта сырье не должно превышать 22 мас. %, но и не быть менее 18 мас. %, что объясняется тем, что выход биологически активных веществ (флавоноидов) в это случае будет достаточно высокий и составит порядка 90%.

Экспериментально доказано, что биологически активные вещества в достаточных объемах переносятся в конечный продукт в том случае, если вибрационную обработку осуществляют с помощью колебаний в частотном инфразвуковом диапазоне, а продолжительность этой обработки составляет 15-16 суток.

Продолжительность вибрационной обработки, соответствующая 15-16 суткам, была выбрана экспериментальным путем с учетом максимально возможного перехода размельченного сырья в воднодисперсное состояние с получением экстракта, в котором размеры основной массы частиц были в диапазоне 15-27 микрон.

Согласно п. 3 формулы максимальный эффект наблюдается в том случае, когда частота колебаний при инфразвуковой обработке составляет 4-7,5 Гц, что подтверждается расчетом создаваемой инфразвуковыми волнами интерференционной картины с целью обеспечить необходимое воздействие колебаниями заданной длины на конкретный объект. В данном случае подбирали длину волны, «созвучную» (резонансную) волне растения - лиственницы, которое служит в качестве сырья для получения препарата «РАЙДО». При этом ветки с хвоей в диаметре составляют 10-15 мм, что позволяет перерабатывать практически весь объем древесины с минимальными затратами.

Технология изготовления препарата предусматривает максимальное сохранение полифенолов, флавоноидов, лигнина, танина, кверцитина, дигидрокверцитина, арабиногалоктановых волокон, кумаринов и других активных веществ, содержащихся в исходном сырье.

Заявляемый способ является простым, дешевым, технологичным и безвредным, все операции легко осуществимы, т.к. использованы отходы производства и исключено применение концентрированных кислот и щелочей.

Группа изобретений проиллюстрирована следующими фигурами.

На фиг. 1 представлена таблица 1. Содержание микроэлементов в препарате.

На фиг. 2 - таблица 2. Результаты титрования терапевтической дозы препарата.

На фиг. 3 - таблица 3. Срок выздоровления при лечении препаратом разных форм мастита у лактирующих коров.

На фиг. 4 - Таблица 4. Терапевтическая эффективность препарата при лечении клинической и катаральной форм мастита у лактирующих коров.

На фиг. 5 - Таблица 5. Содержание соматических клеток в молоке коров до и после лечения клинического мастита

Получают препарат способом, описанном в примере.

Для сырья были отобраны здоровые, одновозрастные деревья, которые находились в одинаковых условиях произрастания в Алтайском крае.

Компонентами сырья служили отходы переработки стволов лиственницы: кора - 20 мас. %, древесина - 40 мас. %, луб - 10 мас. %, ветки с хвоей - остальное,

Сырье измельчали на дробилке - измельчителе ВХ-42 до фракции 1-2 мм и помещали в ванну объемом 500 л.

В ванну с размельченным сырьем заливали дистиллированную воду. Затем над ванной размещали электрокатушку - излучатель, выполненную методом обмотки медной проволоки диаметром 2 мм вокруг пластикового конуса с диаметром основания 15 мм и с диаметром верхушки 1 см., которую подключали к источнику излучения частотных колебаний типа ПНГ-4. Устанавливали постоянную частоту колебаний 7 Гц.

В течение 15 дней сырье находилось под воздействием постоянной вибрации, создаваемой инфразвуковыми частотными колебаниями.

В это время осуществлялась экстракция веществ, находящихся в сырье, которые постепенно переходили в воднодисперсное состояние. Экстракт имел состав: сырье - 20 мас. %., вода - остальное.

Полученный продукт - воднодисперсный экстракт фильтровали на мембранном фильтре с картриджами от 14 мкр до 27 мкр.

Далее брали контрольную пробу для анализа.

Отфильтрованный продукт в стерильных условиях расфасовывали в стеклянные стерильные флаконы емкостью 100 и 200 см³ и укупоривали стерильными резиновыми пробками, затем закатывали металлическими колпачками из алюминиевой фольги и этикетировали.

Анализ полученного препарата проводили по таким показателям, как внешний вид, цвет, запах, вкус, прозрачность, содержание флавоноидов и других активных веществ.

Препарат представлял собой однородную прозрачную массу жидкой консистенции от светло-коричневого до коричневого цвета, горьковатого вкуса со специфическим для лиственницы запахом.

Анализ проводили с использованием масс-спектрометра с индуктивно-связанной плазмой Aurora М90 и системы капиллярного электрофореза Капель-105.

Результаты анализа полученного препарата представлены в таблице 1 на фиг. 1.

Полученный продукт содержал:

полифенолы - 18,4 мас %;

флавоноиды - 19,5 мас %;

лигнин - 7,17 мас %;

танин - 4,26 мас %;

кверцетин - 12,78 мас %;

дегидрокверцетин - 16,82 мас %;

арабиногалактан - 16,37 мас %;

кумарины - остальное.

Терапевтическое действие препарата при различных формах маститов изучали в двух хозяйствах Республики Башкортостан.

В опытах участвовали 211 коров, в том числе с клинической формой мастита - 137, с катаральной - 74. За животными, включенными в эксперименты, вели ежедневные наблюдения до полного их излечения.

Терапевтическую эффективность препарата определяли путем подсчета количества соматических клеток в камере Горяева и контрольного бактериологического исследования проб молока на наличие патогенной микрофлоры.

Результаты титрования оптимальной терапевтической дозы препарата для лечения коров, больных маститом, представлены в таблице 2 на фиг. 2.

Из результатов титрования следует, что при лечении коров, больных клинической и катаральной формами мастита, наиболее оптимальными дозами являются 5 см³ и 10 см³, соответственно при однократном ежедневном интрацистернальном введении.

Пример 1.

Больных коров разделили на 2 группы.

Коровам 1-ой группы, больных клинической формой мастита, вводили препарат в дозе 5,0 мл интрацистернально, кратность введения - 1 раз в день в течение 5 суток,

Коровам 2-ой группы, больных катаральной формой мастита, вводили препарат в дозе 10,0 мл интрацистернально, кратность введения - 1 раз в день в течение 6 суток.

Результаты представлены в таблице 3 на фиг. 3.

В результате проводимого лечения наблюдали положительную динамику уже после первой инъекции в обеих группах: уплотненность и болезненность молочной железы стали уменьшаться, во второй день в молоке исчезла примесь крови, затем выделения увеличенного объема вымени стали уменьшаться и переходить на выделения с преобладанием слизи, у животных появился аппетит и жвачка.

На 4-5 дни выделение желтовато-белого цвета наблюдали только в начале выдаивания соска, а затем получали чистое молоко, надои стали повышаться.

Из представленных данных таблицы 3 следует, что терапевтический эффект при лечении мастита у коров был достигнут. Выздоровление наступило на 5-е сутки при лечении клинической формы мастита и на 6-е сутки при лечении катаральной формы мастита у коров.

Пример 2.

С целью определения терапевтической эффективности применения препарата было отобрано 80 коров, больных клинической и катаральной формами мастита.

Животные были разделены на две опытные группы.

Опытной группе коров с клинической формой мастита интрацистернально вводили препарат в дозе 5,0 мл, опытной группе коров с катаральной формой мастита - в дозе 10,0 мл один раз в сутки до выздоровления.

Оценку эффективности способа лечения проводили путем подсчета соматических клеток в камере Горяева и контрольного бактериологического исследования проб молока, учетом сроков выздоровления.

Как следует из таблицы 4 (фиг. 4), излечение клинической формы мастита у коров опытной группы наступило в 80-95% случаев (96% долей вымени) на 5-е сутки лечения.

Излечение катаральной формы мастита наступило у 95% коров (93% долей вымени) на 6-е сутки лечения.

Результаты исследований свидетельствуют о том, что лечение препаратом обусловило ускорение процесса обезвреживания микрофлоры в больных маститом долях молочной железы. Это выразилось в уменьшении количества соматических клеток в молоке и снижении сроков выздоровления коров, что подтверждено данными таблицы 5 на фиг. 5.

Из данных таблицы 5 следует, что после лечения в молоке коров опытной группы содержание соматических клеток снизилось на (53,6-64,8) % относительно начала лечения.

Для изучения влияния препарата на микрофлору вымени было проведено бактериологическое исследование секрета молочной железы коров.

Пробы секрета отбирали из пораженных долей с соблюдением правил асептики и антисептики до введения средств и после лечения коров с клинической формой мастита.

До введения препаратов у больных коров обнаружили микрофлору в количестве 6-95,9×10³ кл/мл. Выделенная микрофлора была представлена микроорганизмами родов Staphylococcus (St. albus, St. aureus), Streptococcus (Str. agalactiae, Str. dysagalactiae, Str. spp.), Escherichia (Esh. coli), Enterobacter (Enter, agglomerans), Klebsiella (Kleb. pneumoniae).

После окончания лечения в секрете молочной железы у 100% коров ранее выделяемая микрофлора отсутствовала.

Терапевтические экспериментальные и клинические исследования при лечении маститов у коров дают основание считать, что природный растительный препарат обладает широким спектром антимикробного действия, благодаря этому отпадает необходимость в предварительном определении вида или штамма возбудителя и ускоряет лечебный процесс.

Быстрота лечебного эффекта, а также отсутствие кумулятивного действия позволяют проводить мероприятия в сжатые сроки, исключая возможность привыкания микробов к препарату и появлению устойчивых форм. Дополнительно, как положительный аспект, следует учесть фунгицидные, антивирусные свойства препарата.

При применении он не вызывают аллергических реакций и побочных эффектов.

Чем раньше будет проведен профилактический курс обработки указанным препаратом, тем эффективнее будет его действие. Уменьшается срок инволюции матки, что профилактирует возникновение заболевания коров субинволюцией матки. В результате повышается экономическая эффективность животноводства в хозяйстве.