Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ СЕЛЕКЦИИ ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ ШТАММОВ АКТИНОМИЦЕТОВ - ПРОДУЦЕНТОВ ПРОТИВОГРИБКОВЫХ И ПРОТИВОГЕЛЬМИНТНЫХ АНТИБИОТИКОВ

Известны способы селекции производственных штаммов актиномицетов-продуцентов противогрибковых и противогельминтных антибиотиков, заключающиеся в отборе активных вариантов на агаризованных средах.

В предлагаемом способе, в отличие от известных, отбирают колонии с ограниченным спороношением, многократно пассируют их моноспоровые варианты в глубине регламентной среды, проводя ступенчатый отбор. Такая методика позволяет сократить срок и объем работы при селекции.

Для селекции противогрибковых и противогельминтных антибиотиков по предлагаемому способу изучают естественную морфологическую и антибиотическую изменчивость исходных штаммов-продуцентов антибиотиков и производят отбор наиболее активных вариантов с ограниченным спороношением.

Для этого взвесь исходной культуры в физиологическом растворе, профильтрованную через двойной бумажный фильтр, рассеивают на агаризованные среды, выявляющие колонии не только с обильным спороношением, но и с ограниченным, а также аспорогенные. Разведение взвеси для рассевов устанавливают экспериментально. Общее число колоний на чашке не должно превышать 30. После выдерживания в термостате в течение 10-14 дней при 26-28°С просматривают не менее 100 колоний и изучают все морфологические типы.

На первом этапе отбора по признаку антибиотикообразования проверяют по 4 колонии из каждого морфологического типа. Для этого используют ферментационные среды, разработанные для каждого продуцента. Ферментацию проводят в колбах емкостью 750 мл на качалке при объеме среды 100-150 мл. Продолжительность ферментации устанавливают экспериментально.

Активность определяют методом диффузии в агар с тест-культурами, рекомендованными для количественного определения соответствующих антибиотиков (при определении амфотерицина используют также спектрофотометрический метод). Из вариантов с ограниченным спороношением отбирают наиболее активный по антибиотикообразаванию и его моноапоровую культуру используют в качестве посевного материала для первой ступени пассирования в условиях глубинного роста.

На первой ступени пассирования моноопоровую культуру активного варианта продуцента антибиотика многократно пассируют в условиях тлубинного роста (5-10 пассажей). В пассажах посевным материалом служит культуральная жидкость предшествующей ферментации (в количестве 10% по объему). После каждого пассажа, начиная с третьего, производят рассев культуральной жидкости на агаризованную среду с последующим просмотром колоний по морфологической изменчивости и антибиотикообразованию. Разведение культуральной жидкости устанавливают экспериментально.

На второй ступени пассирования в условиях погруженного роста посевным материалом служит моноспоровая культура, отобранная на первой ступени. Производят еще 2-5 пассажей для повышения активности и стабильности варианта, отобранного на первой ступени пассирования. Из рассевов культуральной жидкости после второй ступени пассирования отбирают вариант, активность которого проверяют во многих ферментациях, в каждой по 5-10 раз. При наличии варианта, который в 1,5-2 раза активнее исходного штамма, производят более широкую проверку по антибиотикообразованию (50-100 колоний) из рассева с агаризованной среды для определения изменчивости по этому признаку и стабильности культуры в пересевах на твердых средах.

У штаммов, селекционированных описанным способом и устойчиво сохраняющих активность в десяти и более генерациях, изучают морфолого-культуральные особенности.