Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОРМОВОГО АНТИБИОТИКА ТЕРРАМИЦИНА И КОМПЛЕКСА ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ

Известны способы получения кормового антибиотика террамицина и препарата протеолитических ферментов путем глубинного выращивания продуцирующего их микроорганизма Actinomyces rimosus на питательной среде, содержащей кукурузную муку, кукурузный экстракт, сульфат аммония, углекислый кальций и поваренную соль, с последующим выделением ферментов из культуральной жидкости.

Предлагаемый способ позволяет получить комплекс протеолитических ферментов, не содержащих следы антибиотика террамицина, действующий в диапазоне рН от 4,5 до 10,5, а также обладающий широкой субстратной специфичностью. Для этого по окончании процесса выращивания мицелий террамицина отделяют от культуральной жидкости фильтрацией, полученный фильтрат очищают от остаточного количества антибиотика путем обработки его раствором хлористого магния, а выделение протеолитических ферментов проводят из очищенного фильтрата культуральной жидкости, например, осаждением органическими растворителями или высаливанием сульфатом аммония при рН, равном 6,8-7,0.

Сущность предлагаемого способа состоит в следующем.

Культуру Actinomyces rimosus выращивают глубинным способом при температуре, равной 26-28°С в течение пяти суток на среде следующего состава (в %):

Полученная культуральная жидкость обладает протеолигической активностью 7-10 ед/мл, а также содержит окситетрациклин в количестве 4000-4500 ед/мл.

Протеолитические ферменты к концу ферментации полностью переходят в раствор, а большая часть антибиотика (80-85%) находится в нерастворенном состоянии.

Для получения ферментного препарата используют только фильтрат культуральной жидкости.

Выделенная мицелиальная масса содержит антибиотик и используется как кормовой препарат террамицина (окситетрациклина).

Фильтрат культуральной жидкости, Actinomyces rimosus, представляет собой прозрачнуюную жидкость, содержащую 2-2,5% сухих веществ, в том числе 0,4-0,6 О. Р. В.; 0,3-0,5% белка и 500-700 ед/мл окситетрациклина.

Осаждение ферментного препарата из фильтрата культуральной жидкости производят с помощью органических растворителей или сульфата аммония.

Ферментный препарат выделяют из фильтрата при рН 6,8-7,0 и температуре 20-22°С.

Выход ферментного препарата получается наибольшим при смешении трех объемов этилового спирта и одного объема фильтрата и достигает 86-92%. Количество осадка при этом составляет 10-12 г с 1 л фильтрата, а протеолитическая активность его 1000-1200 ед/г.

При осаждении ферментного препарата ацетоном максимальный выход получается при смешении двух объемов ацетона и одного объема фильтрата и достигает 80-85%. Количество выделенного осадка 10-12 г с 1 л фильтрата.

Протеолитическая активность его 800-1000 ед/г.

Ферментный препарат можно получить из упаренного фильтрата, содержащего 10-15% сухих веществ, путем высаливания его сульфатом аммония при насыщении 0,65 от максимального.

Выход ферментного препарата при этом составляет 94-98%, а его протеолитическая активность - 800-2000 ед/мл.

Неочищенный ферментный препарат можно также получить путем высушивания фильтрата на распылительной сушилке.

Высушивание фильтрата проводят при температуре теплоносителя на входе 150-170°С и на выходе 70-90°С.

Протеолитическая активность высушенного ферментного препарата 200-300 ед/г. Потери активности при сушке составляют 1,7-2,8%.

Ферментный препарат, выделенный спиртом или ацетоном, представляет собой светло-желтый порошок с влажностью 8-10%.

Протеолитическая активность препарата проявляется при различных значениях рН. Так, при гидролизе гемоглобина она проявляется при рН 4,5; 7,5 и при 10,5, а при гидролизе казеина - при рН 7,5 и 10,5.

Методом электрофореза на бумаге ферментный препарат разделяют на несколько компонентов. Некоторые из них обладают протеолитической активностью и способностью разжижать желатин.

Таким образом, ферментный препарат представляет собой комплекс, состоящий из нескольких протеиназ, которые различаются по своей подвижности в электрическом поле, а также по оптимуму рН своего действия.

Максимальную скорость гидролиза белковых субстратов достигают при 50-55°С. Фермент устойчив к температурным воздействиям от 30 до 50°С.

Ферментный препарат обладает широкой субстрактной специфичностью, он способен гидролизовать казеин, гемоглобин, желатин, альбумин, эластин, каратин и другие белковые субстраты.