×
19.06.2019
219.017.8668

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ БАКТЕРИЙ РОДА Salmonella ИЗ ВОДНЫХ ОБЪЕКТОВ

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к биотехнологии, в частности к санитарной микробиологии, и может быть использовано учреждениями государственной санитарно-эпидемиологической службы, осуществляющими надзор и контроль за качеством воды поверхностных водоемов, зон рекреации, сточных и питьевых вод. Питательная среда содержит калий фосфорнокислый однозамещенный, едкий натр, экстракт кормовых дрожжей, 0,1%-ый водный раствор бриллиантового зеленого, 0,01%-ный водный раствор кристаллического фиолетового, дистиллированную воду. Изобретение позволяет повысить накопительные свойства питательной среды и упростить ее состав. 6 табл.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к санитарной бактериологии и может быть использовано учреждениями государственной санитарно-эпидемической службы, осуществляющими надзор и контроль за качеством воды поверхностных водоемов, зон рекреации, сточных и питьевых вод.

Известны способы выделения сальмонелл из воды с использованием высокоингибиторных селективных сред накопления: магниевой, селенитовой и тетратионатной.

Недостатком вышеуказанных сред является то, что наряду с угнетением сопутствующей микрофлоры ингибиторами, входящими в их состав, происходит одновременно угнетение и ряда сероваров сальмонелл, что затрудняет их высеваемость из воды и снижает оценку эпидемической безопасности водоисточника.

В качестве прототипа выбрана магниевая среда, которая является наиболее эффективной и в настоящее время широко используется в практических лабораториях при исследовании водной среды (МУК 4.2.1884-04 Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов. М., 2005). Готовят магниевую среду по нижеследующей прописи, раздельно растворы А, Б, В:

РастворыИнгредиентыКонцентрация
АПептон ферментативный0,42 г
Натрий хлористый0,7 г
Калий фосфорнокислый однозамещенный0,15 г
Дрожжевой экстракт2,0 мл
Вода дистиллированная89,0 мл
БМагний хлористый кристаллический3,6 г
Вода дистиллированная9,0
ВБриллиантовый зеленый
0,1% водный раствор
0,5 мл

Ингредиенты растворяют, кипятят в течение 10 мин, затем растворы А, Б, В сливают в одну емкость.

рН магниевой среды - 5,6-5,8 (Г.П.Калина. Сальмонеллы в окружающей среде. М., 1978, с.117).

Недостатком магниевой среды является ее высокая ингибиторная способность не только по отношению к сопутствующей микрофлоре, но и целому ряду сероваров сальмонелл, а также токсичность действия хлористого магния на сальмонеллы, находящиеся в водной среде в сублетальном состоянии (Гипп Е.К. Экспериментальные и натурные исследования по разработке методов обнаружения сальмонелл в воде водоемов. Автореф. дисс. к.м.н. М., 1975).

Целью предлагаемого изобретения явилась жидкая слабоингибиторная питательная среда для выделения сальмонелл из воды (среда накопления). В качестве питательной основы используют экстракт кормовых дрожжей и минеральные соли. Ингибиторами сопутствующей микрофлоры являются бриллиантовый зеленый и кристаллический фиолетовый.

Предлагаемая питательная среда состоит из следующих компонентов:

Калий фосфорнокислый однозамещенный
(ГОСТ 4198-75; ЧДА)8,6-8,8 г
Едкий натр (ГОСТ 4328 - 77; ХЧ)1,3-1,4 г
Экстракт кормовых дрожжей (ЭКД)4,5-5,0 г
(ФГУП НПО «Питательные среды» г.Махачкала)

0,1% водного раствора бриллиантового

зеленого (ТУ 6-09-4278-76)4,5-5,0 мл
0,01% водного раствора кристаллического
фиолетового (ТУ 6-09-4119-75)9,5-10,0 мл
Вода дистиллированная1000,0 мл
рН 6,4-6,5

Приготовление среды: в 1000,0 мл дистиллированной воды последовательно растворяют все навески. Нагревают раствор до полного растворения ингредиентов, затем вносят водные растворы бриллиантового зеленого и кристаллического фиолетового. Стерилизуют при 112°С (0,5 кгс/м2) в течение 30 мин.

Данный способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример №1.

Калия фосфорнокислого однозамещенного - 8,1 г, едкого натра- 0,1 г, ЭКД - 4,5 г, 0,1% раствора бриллиантового зеленого - 4,0 мл, 0,01% раствора кристаллического фиолетового - 8,0 мл, воды дистиллированной - 1000,0 мл, рН - 4,8.

Далее способ осуществляется, как описано выше. Данные по накопительным свойствам среды представлены в таблице 1.

Пример №2.

Калия фосфорнокислого однозамещенного - 8,6 г, едкого натра - 1,3 г, ЭКД - 4,5 г, 0,1% раствора бриллиантового зеленого - 4,5 мл, 0,01% раствора кристаллического фиолетового - 9,5 мл, воды дистиллированной - 1000,0 мл, рН - 6,4.

Далее способ осуществляется, как описано выше. Данные по накопительным свойствам среды представлены в таблице 1.

Призер №3.

Калия фосфорнокислого однозамещенного - 8,8 г, едкого натра- 1,4 г, ЭКД - 5,0 г, 0,1% раствора бриллиантового зеленого - 5,0 мл, 0,01% раствора кристаллического фиолетового - 10,0 мл, воды дистиллированной - 1000,0 мл, рН - 6,5.

Далее способ осуществляется, как описано выше. Данные по накопительным свойствам среды представлены в таблице 1.

Пример №4.

Калия фосфорнокислого однозамещенного - 9,5 г, едкого натра- 1,6 г, ЭКД - 5,5 г, 0,1% раствора бриллиантового зеленого - 10,0 мл, 0,01% раствора кристаллического фиолетового - 20,0 мл, воды дистиллированной - 1000,0 мл, рН - 6,9. Далее способ осуществляется, как описано выше.

Данные по накопительным свойствам среды представлены в таблице 1, из которой видно, что рост S.typhimurium №9640 зарегистрирован до разведения 10-8 на среде с минимальным и оптимальным содержанием компонентов среды. Тогда как на среде с максимальным содержанием ингредиентов рост данного тест-штамма отсутствовал в разведениях от 10-6 до 10-8. Рост S.enteritidis отсутствовал в разведении 10-6 на средах с минимальным и максимальным содержанием ингредиентов, в то время как на среде с оптимальным содержанием компонентов рост отмечен из разведения 10-7.

Рост К.pneumoniae (предполагаемая сопутствующая микрофлора) отмечен до разведения 10-8 на среде с минимальной концентрацией компонентов, на среде с максимальным содержанием - рост отсутствовал в разведении 10-6. На среде с оптимальным соотношением ингредиентов рост К.pneumoniae зарегистрирован лишь до разведения 10-7.

Таким образом, самым оптимальным количественным соотношением ингредиентов для роста бактерий рода Salmonella и подавления сопутствующей микрофлоры является:

Калий фосфорнокислый однозамещенный8,6-8,8 г
Едкий натр1,3-1,4 г
Экстракт кормовых дрожжей4,5-5,0 г
0,1% водного раствора бриллиантового зеленого4,5-5,0 мл
0,01% водного раствора кристаллического фиолетового9,5-10,0 мл
Вода дистиллированная-1000,0 мл
рН 6,4-6,5

т.к. увеличение количества ингибирующих веществ по сравнению с указанными параметрами приводит к снижению накопления сальмонелл.

Пример №5.

Чувствительность среды определяли по наибольшему разведению, из которого при пересеве на твердые питательные среды наблюдался рост тест-штаммов: S.typhi №1196, S.paratyphi В №8006, S.typhimurium №9640 (получены из коллекции ГИСК им. Л.А.Тарасевича), S. typhimurium, S.anatum, S.enteritidis, выделены из речной воды.

Сравнительная характеристика чувствительности двух сред накопления представлена в табл.2.

Приведенные данные свидетельствуют, что опытная среда является более чувствительной, чем магниевая (прототип), так как рост тест-штаммов в ней наблюдался вплоть до разведения 10-8 (за исключением S.typhi №1196, рост которой зарегистрирован до 10-6 и S.enteritidis до 10-7), в то же время на магниевой среде рост S.typhi №1196 и S.enteritidis в изучаемых разведениях отсутствовал, a S.paratyphi В росла только лишь до разведения 10-7.

Пример №6.

Эффективность накопления сальмонелл на двух средах исследовали на примере следующих тест-штаммов: S.typhi №1196, S.paratyphi В №8006, S.typhimurium №9640, S.typhimurium, S.anatum, S.enteritidis. Посев микроорганизмов проводился в магниевую и опытную среды в виде микробной взвеси, приготовленной по стандартному образцу мутности ОСО 42-28-85 П 2005 года выпуска, из разведении от 10-3 до 10-8 с последующим пересевом на мясопептонный агар.

Сравнение эффективности накопления сальмонелл, выросших при инкубации на опытной и магниевой средах, представлены в табл.3.

Полученные данные свидетельствуют, что эффективность накопления тест-штамма S.paratyphi В №8006 на опытной среде в 103 раза, S.enteritidis в 104 раза, S.typhi №1196, S.typhimurium №9640, S.anatum, S.typhimurium в 10 раз выше, чем на магниевой.

Пример №7.

Была изучена возможность практического использования среды накопления для выделения сальмонелл из воды поверхностных водоемов с различной степенью загрязнения. Количественное определение сальмонелл проводили путем посева воды в двух параллельных рядах в объемах: 100 мл, 10 мл, 1 мл, 0,1 мл и т.д., в зависимости от степени биологического загрязнения изучаемого водного объекта.

Результаты представлены в табл.4.

Всего было исследовано 35 проб воды р. Дон. С помощью опытной среды сальмонеллы обнаружены в 88,6% (31 проба) со средним индексом 447,0±107,0 микр. кл./л и в 65,7% (23 пробы) - при посеве в магниевую среду, при этом средний индекс составил 17,5±3,6 микр. кл./л. Различия между количественным содержанием сальмонелл существенны и достоверны (t=4,01; р<0,001).

На изучаемом участке водоема с помощью опытной среды выделено 135 культур сальмонелл 36-ти сероваров, из них группы В - 105 культур, группы C - 11, D - 5, E - 14. Из магниевой среды выделено всего лишь 49 культур 18-ти сероваров, из которых сальмонеллы группы В представлены 40 культурами, группы С, D, Е - 5, 0,4 культурами, соответственно. Результаты представлены в табл.5.

Пример №8.

При исследовании хозяйственно-бытовых сточных вод (табл.4) изучены 22 пробы. Сальмонеллы обнаружены в 100% проб со средним индексом 1162,8±263,0 микр. кл./л при использовании опытной среды, в то время на магниевой - в 81,8% (18) проб со средним индексом 66,9±16,7 микр. кл./л. Различия между количественным содержанием сальмонелл существенны и статистически достоверны (t=4,16; р<0,001).

При использовании опытной и магниевой сред выделено 126 и 57 культур 26-ти и 16-ти сероваров сальмонелл, соответственно. При этом с использованием опытной среды было выделено 92 культуры сальмонелл группы В и 46 - с применением магниевой среды, тогда как группы С - 16 и 4, группы D - 3 и 4, группы Е - 15 и 3, соответственно. Результаты представлены в табл.6.

Натурные исследования показали преимущество использования предлагаемой жидкой слабоингибиторной питательной среды накопления при выделении сальмонелл из воды различной степени биологического загрязнения, что позволяет адекватно оценивать степень потенциальной эпидемической опасности водных объектов.

Таблица 1
Зависимость роста сальмонелл от концентрации ингредиентов среды.
Состав средыS.typhimurium №9640S.enteritidisК.pneumoniae
разведения
-6-7-8-6-7-8-6-7-8
Минимальное
содержание
компонентов
КН2PO4 - 8,1 г
NaOH - 0,1 г
ЭКД - 4,5
0,1% р-р бриллиантового зеленого - 4,0 мл
0,01% р-р кристаллического фиолетового - 8,0 мл
воды очищенной - 1000,0 мл рН - 4,8
Спл.
рост
Спл.
рост
Спл.
рост
---Спл.
рост
Спл.
рост
Спл.
рост
Оптимальное
содержание
компонентов
КН2PO4 - 8,6 гСпл. Спл.Спл.Спл.2×102-Спл.3×102-
NaOH - 1,3 грострострострострост
ЭКД - 4,5 г
0,1% р-р бриллиантового зеленого - 4,5 мл
0,01% р-р кристаллического фиолетового - 9,5 мл
воды очищенной - 1000,0 мл рН - 6,4
КН2PO4 - 8,8 г
NaOH - 1,4 г
ЭКД - 5,0 г
0,1% р-р бриллиантового зеленого - 5,0 мл
0,01% р-р кристаллического фиолетового - 10,0 мл
воды очищенной - 1000,0 мл рН - 6,5
Спл.
рост
Спл.
рост
Спл.
рост
Спл.
рост
3×102-Спл.
рост
3×102-
Максимальное
содержание
компонентов
КН2PO4 - 9,5 г---------
NaOH - 1,6 г
ЭКД - 5,5 г
0,1% р-р бриллиантового зеленого - 10,0 мл
0,01% р-р кристаллического фиолетового - 20,0 мл
воды очищенной - 1000,0 мл рН - 6,9
Примечание: спл. рост - сплошной рост; - - отсутствие роста.

Таблица 2
Сравнение чувствительности сред накопления для выделения сальмонелл из водных объектов
Тест-штаммОпытная средаМагниевая среда
РазведенияРазведения
-6-7-8-6-7-8
S.paratyphi В №8006+++++-
S.typhi №1196+-----
S.typhimurium №9640++++++
S.typhimurium++++++
S.enteritidis++----
S.anatum++++++
Таблица 3
Эффективность накопления сальмонелл при культивировании на опытной и магниевой средах
ШтаммРаз-яКол-во бак.кл./мл
Магниевая средаОпытная среда
S.paratyphi В №8006-8013,0
-71,2×1056,2×108
S.typhi №1196-800
-700
-608,0
-511,0170,0
S.typhimurium №9640-89,0×l073,0×108
-7Спл. ростСпл. рост
-6Спл. ростСпл. рост
S.anatum-85,0×1073,2×108
-7Спл. ростСпл. рост
S.typhimurium-83,1×1061,3×107
-7Спл. ростСпл. рост
S.enteritidis-800
-70342.0
-60Спл. рост
-50Спл. рост
-421,0Спл. рост

Таблица 4
Сравнительная оценка опытной и магниевой среды при выделении сальмонелл из речной и сточной воды.
Объекты Кол-во сальмонелл (НВЧ/л)ТР
исследованияОпытная средаМагниевая среда
M1±m1nМ2±m2n
Вода р. Дон447,0±107,03117,52±3,64314,01<0,001
Сточная вода1162,8±263,02266,9±16,7224,16<0,001
Таблица 5
Серологические группы сальмонелл, выделенных из речной воды
Серологические группы сальмонеллКол-во выделенных культур
Опытная средаМагниевая среда
Группа В10540
Группа С115
Группа D50
Группа Е144
Всего культур:13549
Таблица 6
Серологические группы сальмонелл, выделенных из сточной воды
Серологические группы сальмонеллКоличество выделенных культур
Опытная средаМагниевая среда
Группа В9246
Группа С164
Группа D34
Группа Е153
Всего культур:12657

ПитательнаясредадлявыделениябактерийродаSalmonellaизводныхобъектов,содержащаяэкстракткормовыхдрожжей,калийфосфорнокислыйоднозамещенный,бриллиантовыйзеленый,водудистиллированную,отличающаясятем,чтосодержитедкийнатрикристаллическийфиолетовыйвследующихконцентрациях:Калийфосфорнокислыйоднозамещенный8,6-8,8гЕдкийнатр1,3-1,4гЭкстракткормовыхдрожжей4,5-5,0г0,1%-ныйводныйраствор бриллиантовогозеленого4,5-5,0мл0,01%-ныйводнйраствор кристаллическогофиолетового9,5-10,0млВодадистиллированная1000,0млрН6,4-6,5 c0c1211none1558
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-1 из 1.
06.07.2019
№219.017.a86a

Способ диагностики степени выраженности дисбактериоза кишечника

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для диагностики степеней выраженности дисбактериоза кишечника. Для осуществления способа в копрофильтратах людей с дисбактериозами кишечника методом иммуноферментного анализа определяют содержание иммуноглобулинов IgA, IgG, IgE,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002338197
Дата охранного документа: 10.11.2008
Показаны записи 1-9 из 9.
27.05.2014
№216.012.cb10

Питательная среда для выделения бактерий рода shigella из водных объектов

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к санитарной микробиологии. Предложена питательная среда для выделения бактерий рода из водных объектов. Питательная среда содержит следующие компоненты: 0,1% спиртовой раствор бромкрезолового зеленого - 9,0 мл; 0,2% спиртовой раствор...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002517750
Дата охранного документа: 27.05.2014
20.02.2019
№219.016.be47

Инфракрасный светосильный трехлинзовый объектив

Изобретение относится к объективам несканирующих тепловизионных приборов с неохлаждаемыми матричными приемниками. Объектив содержит первый положительный, второй отрицательный и третий положительный мениски. Первый и третий мениски обращены вогнутостью к плоскости изображений, второй - к...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002348953
Дата охранного документа: 10.03.2009
11.03.2019
№219.016.d998

Проекционный светосильный объектив

Объектив может быть использован в приборах ночного видения для изображения с экрана ЭОП на ПЗС-матрицу. Объектив содержит шесть компонентов, расположенных по ходу лучей. Первый компонент - двояковыпуклая линза. Второй - положительный мениск, обращенный вогнутой поверхностью к плоскости...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002371744
Дата охранного документа: 27.10.2009
20.03.2019
№219.016.e671

Двухканальный коаксиальный зеркально-линзовый объектив

Зеркально-линзовый объектив содержит зеркально-линзовый канал видимого диапазона и линзовый ТП канал, расположенный в зоне центрального экранирования зеркально-линзового канала, имеющие общую визирную ось. Зеркально-линзовый канал содержит четыре компонента, первый из которых - защитная...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002335790
Дата охранного документа: 10.10.2008
09.05.2019
№219.017.4c08

Инфракрасный объектив с переменным фокусным расстоянием

Изобретение может быть использовано в оптических системах тепловизоров, в том числе смотрящего типа с матричными приемниками инфракрасного диапазона. Объектив содержит расположенные по ходу лучей первый положительный мениск, обращенный вогнутостью к плоскости изображений, вторую двояковогнутую...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002348954
Дата охранного документа: 10.03.2009
13.06.2019
№219.017.81f0

Проекционный светосильный телецентрический объектив

Объектив включает первый и второй компоненты в виде положительных менисков, обращенных выпуклыми поверхностями друг к другу, третий компонент - отрицательный мениск, обращенный вогнутой поверхностью к пространству изображений и склеенный из положительной и отрицательной линз, четвертый -...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002385476
Дата охранного документа: 27.03.2010
06.07.2019
№219.017.a7e3

Оптоволоконное устройство регистрации линейных перемещений

Изобретение относится к области измерительной техники и может быть использовано для решения задач сейсморазведки, промышленного контроля и охраны периметра территорий. Оптоволоконное устройство регистрации линейных перемещений содержит, по крайней мере, один датчик, включающий герметичный...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002349934
Дата охранного документа: 20.03.2009
27.12.2019
№219.017.f2cb

Питательная среда для выделения pseudomonas aeruginosa из водных объектов

Изобретение относится к санитарной микробиологии. Питательная среда для выделения бактерий Pseudomonas aeruginosa из водных объектов содержит мясо-пептонный агар, глюкозу, глицерин и сульфат меди (CuSO×5HO) при заданном содержании компонентов. Изобретение позволяет повысить селективное...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002710160
Дата охранного документа: 24.12.2019
23.05.2023
№223.018.6e84

Селективная питательная среда для выделения аэромонад из водных объектов

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой питательную селективную среду для выделения аэромонад из водных объектов, которая содержит пептон, экстракт кормовых дрожжей, аргинин, калий фосфорнокислый однозамещенный, сульфат магния, хлорид натрия, дезоксихолат,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002795907
Дата охранного документа: 15.05.2023
+ добавить свой РИД