Вид РИД
Изобретение
Изобретение относится к санитарной бактериологии и может быть использовано учреждениями государственной санитарно-эпидемической службы, осуществляющими надзор и контроль за качеством воды поверхностных водоемов, зон рекреации, сточных и питьевых вод.
Известны способы выделения сальмонелл из воды с использованием высокоингибиторных селективных сред накопления: магниевой, селенитовой и тетратионатной.
Недостатком вышеуказанных сред является то, что наряду с угнетением сопутствующей микрофлоры ингибиторами, входящими в их состав, происходит одновременно угнетение и ряда сероваров сальмонелл, что затрудняет их высеваемость из воды и снижает оценку эпидемической безопасности водоисточника.
В качестве прототипа выбрана магниевая среда, которая является наиболее эффективной и в настоящее время широко используется в практических лабораториях при исследовании водной среды (МУК 4.2.1884-04 Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов. М., 2005). Готовят магниевую среду по нижеследующей прописи, раздельно растворы А, Б, В:
|
Ингредиенты растворяют, кипятят в течение 10 мин, затем растворы А, Б, В сливают в одну емкость.
рН магниевой среды - 5,6-5,8 (Г.П.Калина. Сальмонеллы в окружающей среде. М., 1978, с.117).
Недостатком магниевой среды является ее высокая ингибиторная способность не только по отношению к сопутствующей микрофлоре, но и целому ряду сероваров сальмонелл, а также токсичность действия хлористого магния на сальмонеллы, находящиеся в водной среде в сублетальном состоянии (Гипп Е.К. Экспериментальные и натурные исследования по разработке методов обнаружения сальмонелл в воде водоемов. Автореф. дисс. к.м.н. М., 1975).
Целью предлагаемого изобретения явилась жидкая слабоингибиторная питательная среда для выделения сальмонелл из воды (среда накопления). В качестве питательной основы используют экстракт кормовых дрожжей и минеральные соли. Ингибиторами сопутствующей микрофлоры являются бриллиантовый зеленый и кристаллический фиолетовый.
Предлагаемая питательная среда состоит из следующих компонентов:
|
0,1% водного раствора бриллиантового
|
Приготовление среды: в 1000,0 мл дистиллированной воды последовательно растворяют все навески. Нагревают раствор до полного растворения ингредиентов, затем вносят водные растворы бриллиантового зеленого и кристаллического фиолетового. Стерилизуют при 112°С (0,5 кгс/м2) в течение 30 мин.
Данный способ иллюстрируется следующими примерами.
Пример №1.
Калия фосфорнокислого однозамещенного - 8,1 г, едкого натра- 0,1 г, ЭКД - 4,5 г, 0,1% раствора бриллиантового зеленого - 4,0 мл, 0,01% раствора кристаллического фиолетового - 8,0 мл, воды дистиллированной - 1000,0 мл, рН - 4,8.
Далее способ осуществляется, как описано выше. Данные по накопительным свойствам среды представлены в таблице 1.
Пример №2.
Калия фосфорнокислого однозамещенного - 8,6 г, едкого натра - 1,3 г, ЭКД - 4,5 г, 0,1% раствора бриллиантового зеленого - 4,5 мл, 0,01% раствора кристаллического фиолетового - 9,5 мл, воды дистиллированной - 1000,0 мл, рН - 6,4.
Далее способ осуществляется, как описано выше. Данные по накопительным свойствам среды представлены в таблице 1.
Призер №3.
Калия фосфорнокислого однозамещенного - 8,8 г, едкого натра- 1,4 г, ЭКД - 5,0 г, 0,1% раствора бриллиантового зеленого - 5,0 мл, 0,01% раствора кристаллического фиолетового - 10,0 мл, воды дистиллированной - 1000,0 мл, рН - 6,5.
Далее способ осуществляется, как описано выше. Данные по накопительным свойствам среды представлены в таблице 1.
Пример №4.
Калия фосфорнокислого однозамещенного - 9,5 г, едкого натра- 1,6 г, ЭКД - 5,5 г, 0,1% раствора бриллиантового зеленого - 10,0 мл, 0,01% раствора кристаллического фиолетового - 20,0 мл, воды дистиллированной - 1000,0 мл, рН - 6,9. Далее способ осуществляется, как описано выше.
Данные по накопительным свойствам среды представлены в таблице 1, из которой видно, что рост S.typhimurium №9640 зарегистрирован до разведения 10-8 на среде с минимальным и оптимальным содержанием компонентов среды. Тогда как на среде с максимальным содержанием ингредиентов рост данного тест-штамма отсутствовал в разведениях от 10-6 до 10-8. Рост S.enteritidis отсутствовал в разведении 10-6 на средах с минимальным и максимальным содержанием ингредиентов, в то время как на среде с оптимальным содержанием компонентов рост отмечен из разведения 10-7.
Рост К.pneumoniae (предполагаемая сопутствующая микрофлора) отмечен до разведения 10-8 на среде с минимальной концентрацией компонентов, на среде с максимальным содержанием - рост отсутствовал в разведении 10-6. На среде с оптимальным соотношением ингредиентов рост К.pneumoniae зарегистрирован лишь до разведения 10-7.
Таким образом, самым оптимальным количественным соотношением ингредиентов для роста бактерий рода Salmonella и подавления сопутствующей микрофлоры является:
|
т.к. увеличение количества ингибирующих веществ по сравнению с указанными параметрами приводит к снижению накопления сальмонелл.
Пример №5.
Чувствительность среды определяли по наибольшему разведению, из которого при пересеве на твердые питательные среды наблюдался рост тест-штаммов: S.typhi №1196, S.paratyphi В №8006, S.typhimurium №9640 (получены из коллекции ГИСК им. Л.А.Тарасевича), S. typhimurium, S.anatum, S.enteritidis, выделены из речной воды.
Сравнительная характеристика чувствительности двух сред накопления представлена в табл.2.
Приведенные данные свидетельствуют, что опытная среда является более чувствительной, чем магниевая (прототип), так как рост тест-штаммов в ней наблюдался вплоть до разведения 10-8 (за исключением S.typhi №1196, рост которой зарегистрирован до 10-6 и S.enteritidis до 10-7), в то же время на магниевой среде рост S.typhi №1196 и S.enteritidis в изучаемых разведениях отсутствовал, a S.paratyphi В росла только лишь до разведения 10-7.
Пример №6.
Эффективность накопления сальмонелл на двух средах исследовали на примере следующих тест-штаммов: S.typhi №1196, S.paratyphi В №8006, S.typhimurium №9640, S.typhimurium, S.anatum, S.enteritidis. Посев микроорганизмов проводился в магниевую и опытную среды в виде микробной взвеси, приготовленной по стандартному образцу мутности ОСО 42-28-85 П 2005 года выпуска, из разведении от 10-3 до 10-8 с последующим пересевом на мясопептонный агар.
Сравнение эффективности накопления сальмонелл, выросших при инкубации на опытной и магниевой средах, представлены в табл.3.
Полученные данные свидетельствуют, что эффективность накопления тест-штамма S.paratyphi В №8006 на опытной среде в 103 раза, S.enteritidis в 104 раза, S.typhi №1196, S.typhimurium №9640, S.anatum, S.typhimurium в 10 раз выше, чем на магниевой.
Пример №7.
Была изучена возможность практического использования среды накопления для выделения сальмонелл из воды поверхностных водоемов с различной степенью загрязнения. Количественное определение сальмонелл проводили путем посева воды в двух параллельных рядах в объемах: 100 мл, 10 мл, 1 мл, 0,1 мл и т.д., в зависимости от степени биологического загрязнения изучаемого водного объекта.
Результаты представлены в табл.4.
Всего было исследовано 35 проб воды р. Дон. С помощью опытной среды сальмонеллы обнаружены в 88,6% (31 проба) со средним индексом 447,0±107,0 микр. кл./л и в 65,7% (23 пробы) - при посеве в магниевую среду, при этом средний индекс составил 17,5±3,6 микр. кл./л. Различия между количественным содержанием сальмонелл существенны и достоверны (t=4,01; р<0,001).
На изучаемом участке водоема с помощью опытной среды выделено 135 культур сальмонелл 36-ти сероваров, из них группы В - 105 культур, группы C - 11, D - 5, E - 14. Из магниевой среды выделено всего лишь 49 культур 18-ти сероваров, из которых сальмонеллы группы В представлены 40 культурами, группы С, D, Е - 5, 0,4 культурами, соответственно. Результаты представлены в табл.5.
Пример №8.
При исследовании хозяйственно-бытовых сточных вод (табл.4) изучены 22 пробы. Сальмонеллы обнаружены в 100% проб со средним индексом 1162,8±263,0 микр. кл./л при использовании опытной среды, в то время на магниевой - в 81,8% (18) проб со средним индексом 66,9±16,7 микр. кл./л. Различия между количественным содержанием сальмонелл существенны и статистически достоверны (t=4,16; р<0,001).
При использовании опытной и магниевой сред выделено 126 и 57 культур 26-ти и 16-ти сероваров сальмонелл, соответственно. При этом с использованием опытной среды было выделено 92 культуры сальмонелл группы В и 46 - с применением магниевой среды, тогда как группы С - 16 и 4, группы D - 3 и 4, группы Е - 15 и 3, соответственно. Результаты представлены в табл.6.
Натурные исследования показали преимущество использования предлагаемой жидкой слабоингибиторной питательной среды накопления при выделении сальмонелл из воды различной степени биологического загрязнения, что позволяет адекватно оценивать степень потенциальной эпидемической опасности водных объектов.
|
|
|