Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВИТАМИНА В ПУТЕМ ИОННОГО ОБМЕНА

Известны способы получения витамина В₁₂ путем ионного обмена, например пропусканием кислого нативного раствора после обработки щавелевой кислотой через колонку, заполненную катеонитом в Н-форме, с последующей десорбцией кислым этанолом, нейтрализацией и упариванием под вакуумом. Указанные способы связаны с расходом больших количеств дефицитных органических растворителей на экстракционных стадиях и не обеспечивают высокого выхода и необходимой степени чистоты препарата ввиду того, что водородные формы смол поглощают витамин В₁₂ мало избирательно.

В предлагаемом изобретении с целью устранения экстракционных стадий, повышения выхода и качества целевого продукта неочищенный раствор витамина нейтрализуют до рН 7, пропускают через последовательно соединенные колонны с солевыми формами сульфокатионитов, например КУ-2 (или СДВ-3) и СБС-2, промывают, переводят в цианкобаламин и десорбируют, например водно-ацетоновой смесью или горячей водой. Дальнейшее выделение препарата ведут известными приемами.

Способ основан на различии сорбционных свойств солевых форм сульфосмол КУ-2 (или СДВ-3), с одной стороны, и сульфосмолы СБС-2, с другой; первые не способны поглощать витамин В₁₂, в то время как вторая обладает по отношению к нему большой сорбционной емкостью. В то же время способность к поглощению большей части других веществ у указанных смол примерно одинакова. В результате оказывается возможным поглотить большую часть примесей на смоле КУ-2 (или СДВ-3). Витамин В₁₂ десорбируется на смоле СБС-2 и после десорбции оказывается настолько чистым, что отпадает необходимость использовать экстракционные стадии.

Для получения витамина В₁₂ биомассу пропионовокислых бактерий заливают 10-15-кратным количеством воды, перемешивают до получения однородной массы, добавляют алюмокалиевые квасцы (3,5% от веса биомассы) и роданистый аммоний (10% от веса биомассы), доводят рН да 4-4,5, нагревают смесь до 80-95°С, выдерживая ее при этой температуре в течение 30 мин при перемешивании, охлаждают и дают отстояться. Гидролизат отделяют декантацией, а биомассу подвергают повторному гидролизу. После декантирования второго гидролизата биомассу отжимают на фильтрпрессе, гидролизаты объединяют и доводят рН раствора до 7. Затем гидролизат пропускают через последовательно соединенные колонны, заполненные солевой, например натриевой формой смол КУ-2 (или СДВ-3) и СБС-2 Соотношение между количеством смол КУ-2 и СБС-2 должно быть не меньше чем 5:1 (по весу). Практически используемая емкость смолы СБС-2 составляет 1,5-2 мг витамина на 1 г смолы. Так как сорбция витамина идет главным образом в верхних слоях смолы СБС-2, ее лучше размещать в двух-трех последовательно соединенных колоннах. По окончании сорбции смолу СБС-2 промывают водой, затем 0,1 н. раствором буры (или другим буферным раствором с рН 9,0-9,2) и снова водой. После этого смолу в колонне заливают 0,1%-ным раствором цианистого натрия и выдерживают в течение 3 ч для перевода витамина В₁₂ в форму цианкобаламина. Десорбцию витамина можно проводить водно-ацетоновой смесью (60% ацетона по объему) либо дистиллированной водой, нагретой до 90-98°С. Полученные элюаты, содержащие 200-500 мкг витамина на 1 мл, фильтруют через слои окиси алюминия на нутч-фильтре, упаривают при остаточном давлении 10-20 мм рт.ст. до концентрации 5-7 мг витамина на 1 мл, еще раз фильтруют и кристаллизуют при добавлении к концентрату 15-20-кратного избытка ацетона. Кристаллы промывают чистым ацетоном и высушивают в вакуум-эксикаторе над пятиокисью фосфора.