Результат интеллектуальной деятельности: Аморфная форма производного тиоколхицина

Настоящее изобретение относится к аморфной форме производного тиоколхицина, IDN 5404, к способу ее получения и ее фармацевтическим композициям.

IDN 5404, имеющий следующую формулу (I), представляет собой N-дезацетилтиоколхициноидное производное:

IDN 5404 действует как агент, разрушающий сосуды, который представляет собой класс соединений, способных вызывать быстрый коллапс и некроз сосудистых структур. Поскольку эндотелиальные клетки опухолей являются незрелыми, они гораздо более чувствительны к воздействию агентов, разрушающих сосуды, чем эндотелиальные клетки нормальной ткани. IDN 5404 является полезным в лечении солидных опухолей, особенно в комбинации с другими цитотоксическими агентами.

IDN 5404 раскрыт в ЕР 1263719. В соответствии с процедурой, описанной в примере 2 в ЕР 1263719, продукт (Tiocol 54) сначала кристаллизуют в EtOAc (в виде сольвата EtOAc), затем дополнительно очищают посредством колоночной хроматографии (элюент: этилацетат/гексан, или альтернативно СН₂Cl₂/EtOH). В патенте не описан способ, которым продукт в конечном счете выделяют из раствора, и форма конечного продукта. Обычно, продукты, подвергающиеся очистке посредством колоночной хроматографии, выделяют просто путем выпаривания растворителя досуха. Обычно с помощью этого способа получают аморфные вещества. Вследствие высокой нерастворимости и тенденции IDN 5404 к сокристаллизации с растворителями, при концентрировании из двух описанных систем элюирования получали IDN 5404 или в виде сольвата EtOAc, или в виде сольвата ЕtOH в кристаллической форме.

Кристаллическая форма, полученная этим способом, может содержать остатки токсичных растворителей, используемых в синтетическом процессе, таких как дихлорметан и гексан, и он имеет очень низкую растворимость.

Объектом настоящего изобретения является аморфное соединение формулы (I):

имеющее картину XRPD (порошковая рентгеновская дифракция), показанную на Фиг. 1.

Аморфное соединение, как определено выше, дополнительно характеризуется по меньшей мере одной из следующих характеристик:

- профиль DSC (дифференциальная сканирующая калориметрия) отличается переходом в стеклообразное состояние с началом при 186,9°С и окончанием при 194,5°С, зарегистрированным с линейной скоростью нагрева 10°С/мин;

- профиль TG/DTA (термогравиметрия/дифференциальный термический анализ) отличается эндотермическим сигналом между 185,4°С и 195,4°С, зарегистрированным с линейной скоростью нагрева 10°С/мин.

Аморфное соединение по настоящему изобретению может быть получено способом, включающим стадии:

а) растворения неочищенного соединения формулы (I) в DMSO;

б) удаления возможных остаточных растворителей, происходящих из синтетического процесса, путем нагревания раствора при 65°С в вакууме;

в) осаждение аморфного соединения формулы (I) путем добавления по каплям раствора, полученного на стадии б), к воде при температуре 20-25°С при перемешивании.

На стадии (а) предпочтительно используют от 1 л до 8 л DMSO (диметилсульфоксид) на 1 кг IDN 5404.

На стадии (в) предпочтительно используют от 8 л до 64 л воды на 1 кг IDN 5404.

Аморфное соединение формулы (I), как оно определено выше, является более растворимым в воде, чем другие кристаллические формы, и оно является химически и физически стабильным. Эти свойства позволяют изготовить твердые формы, содержащие соединение по изобретению.

Кроме того, соединение, полученное способом, указанным выше, не содержит никакого токсического растворителя, используемого в ходе синтетического процесса, такого как дихлорметан и гексан.

Единственным остаточным растворителем, присутствующим в аморфном веществе, является DMSO, который представляет собой растворитель 3 класса (низкая токсичность).

Определенная выше аморфная форма не является сольватированной формой, в отличие от кристаллических форм, определенных посредством полиморфного скрининга, все из которых являются сольватированными формами.

Аморфная форма IDN 5404 обладает полезными свойствами при получении фармацевтических композиций, такими как повышенная растворимость, улучшенная биодоступность, легкость химической обработки и/или легкость изготовления в виде фармацевтической композиции.

Другим объектом настоящего изобретения, следовательно, является фармацевтическая композиция, содержащая аморфное соединение формулы (I), как определено выше, и фармацевтически приемлемый разбавитель и/или носитель.

Фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель выбирают с учетом предполагаемого способа введения и стандартной фармацевтической практики. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению предпочтительно вводят перорально или парентерально.

Термин "парентеральный", при использовании в данном описании изобретения, включает подкожные инъекции, внутривенные, внутримышечные инъекции или инфузионные методы.

Аморфная форма по настоящему изобретению может быть изготовлена в виде традиционных лекарственных форм, таких как, например, таблетки, пилюли, суспензии, эмульсии, гранулы, капсулы и инъекционные препараты.

Предпочтительными лекарственными формами для соединений по настоящему изобретению являются инъекционные препараты. Соединение формулы (I), как определено выше, может быть использовано отдельно или в комбинации с цитотоксическим агентом для лечения солидных опухолей.

Пример 1

Неочищенный IDN 5404 (1 кг) растворяли в DMSO (8 л). Раствор нагревали при 65°С и выдерживали в вакууме в течение 2-х часов с целью полного удаления растворителей, оставшихся от синтетического процесса. Раствор по каплям добавляли к воде (64 л) при 20-25°С при перемешивании, вызывая осаждение IDN 5404 в виде аморфного твердого вещества. Полученное вещество фильтровали и сушили в вакууме с получением количественного выхода IDN 5404.

Характеристика аморфной формы:

Порошковая рентгеновская дифракция (X-RPD)

Картину X-RPD регистрировали на дифрактометре Bruker D2-Phaser. Генератор рентгеновского излучения работал при 30 кВ и 10 мА, используя линию CuKα в качестве источника излучения. Образец помещали на подходящую щель, и облучаемая длина составляла 10 мм. Данные собирали от 2 до 50 градусов 2-тета с размером шага 0,02 град. 2-тета и временем подсчета на шаг 3 сек. Картина порошковой рентгеновской дифракции аморфного вещества (Фиг. 1) показывает отсутствие дифракционных пиков и широкий шум, типичный для аморфного образца.

Дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC)

Анализ проводили, используя систему Mettler DSC1. Тепловой поток регистрировали от 30 до 300°С с линейной скоростью нагрева (10°С/мин) в токе азота 50 мл/мин. Для измерения использовали примерно 5 мг порошка в закрытом алюминиевом тигле (объем 40 мкл) с маленьким отверстием.

Профиль DSC (Фиг. 2) отличается широким эндотермическим сигналом с максимумом примерно при 100°С вследствие высвобождения влаги и переходом в стеклообразное состояние с началом при 186,9°С и окончанием при 194,5°С.

Инфракрасная спектроскопия на основе преобразования Фурье (FTIR)

Инфракрасный спектр регистрировали в режиме нарушенного полного внутреннего отражения (ATR) с использованием спектрометра на основе преобразования Фурье Perkin Elmer Spectrum One, оснащенного дополнительным оборудованием Specac ATR Golden Gate. Спектр представляет собой результат накопления и преобразования 16 наложенных сканограмм в области спектра 4000-550 см^-1 at а re.

Спектр FTIR-ATR показан на Фиг. 3 (спектральный диапазон 4000-550 см^-1). На нем показаны частоты поглощения при 3286, 2936, 2836, 1669, 1606, 1535, 1484, 1403, 1347, 1320, 1283, 1235, 1194, 1135, 1093, 1019, 983, 922, 841, 795, 777, 575 см^-1 ±2 см^-1.

Термогравометрия (TG) и дифференциальный термический анализ (DТА)

Анализ выполняли, используя одновременную систему Seiko TG/DTA7200 с использованием открытых алюминиевых чашек (объем 40 мкл). Сигналы TG/DT регистрировали от 30 до 300°С с линейной скоростью нагрева (10°С/мин) в токе азота 200 мл/мин. Для измерения использовали примерно 10 мг порошка.

Профиль TG/DTA (Фиг. 4) отличается широким эндотермическим пиком с максимумом примерно при 60°С вследствие высвобождения остаточной влаги (потеря массы при 100°С=1,55%) и эндотермическим сигналом между 185,4°С и 195,4°С, который можно отнести к переходу в стеклообразное состояние, после чего немедленно следовало экзотермическое разложение.

Пример 2 (сравнительный)

Неочищенный IDN 5404 (500 мг) очищали посредством флэш-хроматографии, используя в качестве элюента AcOEt-гексан 7:3. Фракции, содержащие IDN 5404, объединяли, и растворитель удаляли досуха. IDN 5404 (310 мг) получали в виде кристаллического желтого твердого вещества со следующими характеристиками.

Продукт анализировали посредством GC (газовая хроматография) для определения остаточных органических растворителей: содержание AcOEt составляет 11,1% (22 млн^-1 гексана), вследствие чего предположили, что продукт мог представлять собой сольват AcOEt.

Анализ TG/DTA и XRPD осуществляли в тех же условиях, что и в Примере 1.

Профиль TG/DTA для IDN5404 (сольват AcOEt) представлен на Фиг. 5.

Анализ показывает DT-профили, характеризующиеся двумя интенсивными и не полностью разрешенными эндотермическими пиками с началом примерно при 208°С и с двумя максимумами, соответственно, при 221,3°С и 231,2°С.

Эти пики, которые можно отнести к высвобождению кристаллизационного растворителя с последующим плавлением, связаны с потерей массы 5,94% от 200°С до 240°С.

TG-Профиль также показывает постепенную потерю массы примерно 3,1% от 30 до 200°С, с последующей резкой потерей массы, совпадающей с первым эндотермическим пиком.

Общая потеря массы от 30°С до 240°С составляет 9,0%.

XRPD-Дифрактограмма для IDN5404 (сольват AcOEt) представлена на Фиг. 6.

Дифрактограмма характеризуется интенсивными дифракционными пиками и резким профилем пиков, что указывает на высокую кристалличность; картина XRPD указывает на явные отражения, выраженные как значения градусов 2-тета, при: 5,6 - 10,2 - 10,5 - 11,1 - 13,3 - 14,4 - 14,7 - 17,5 - 17,9 - 18,5 - 18,9 - 19,4 - 20,0 - 20,8 - 21,6 - 22,2 - 22,4 - 22,6 - 23,4 - 25,2 - 25,5 - 25,9 - 26,7 - 27,8 - 28,5 - 29,1 - 29,7 - 30,8 - 31,2 - 32,1.

Пример 3 (сравнительный)

Неочищенный IDN 5404 (500 мг) очищали посредством флэш-хроматографии, используя в качестве элюента CH₂Cl₂-EtOH 95:5. Фракции, содержащие IDN 5404, объединяли и растворитель удаляли досуха. IDN 5404 (315 мг) получали в виде кристаллического желтого твердого вещества со следующими характеристиками:

Продукт анализировали посредством GC для определения остаточных органических растворителей: содержание EtOH составляет 10,7% (269 млн^-1 CH₂Cl₂), вследствие чего предположили, что продукт мог представлять собой сольват EtOH.

Анализ TG/DTA и XRPD осуществляли с тех же условиях, что и в Примере 1.

Профиль TG/DTA для IDN5404 (сольват EtOH) представлен на Фиг. 7.

Анализ показывает профили DT, характеризующиеся эндотермическим пиком с началом примерно при 198°С и с максимумом при 210,6°С.

Этот пик, который можно отнести к плавлению с высвобождением кристаллизационного растворителя, связан с потерей массы 5,34% от 195°С до 230°С.

TG-Профиль также показывал постепенную потерю массы примерно 6,7% от 30 до 195°С.

Общая потеря массы от 30°С до 230°С составляет 12,1%.

Дифрактограмма XRPD для IDN5404 (сольват ЕtOH) представлена на Фиг. 8.

Дифрактограмма характеризуется интенсивными пиками дифракции и острым профилем пиков, что указывает на высокую кристалличность; картина XRPD указывает на явные отражения, выраженные как значения градусов 2-тета, при: 6,3 - 10,4 - 10,6 - 11,2 - 12,5 - 13,3 - 14,4 - 14,8 - 16,9 - 17,8 - 18,8 - 19,3 - 19,7 - 20,3 - 20,9 - 21,8 - 22,5 - 23,0 - 23,3 - 24,9 - 25,5 - 26,0 - 27,1 - 27,9 - 28,9 - 29,4 - 29,7 - 32,2.

Данные по стабильности

Было обнаружено, что аморфная форма соединения (I) является химически стабильной при 25±2°С/60±5% относительной влажности в течение по меньшей мере трех лет и при 40±2°С/75±5% относительной влажности в течение по меньшей мере 6 месяцев, поскольку никакая примесь не выделялась из исходного значения Т₀. Анализы осуществляли посредством HPLC (высокоэффективная жидкостная хроматография).

Также было обнаружено, что аморфная форма соединения (I) является физически стабильной при 25±2°С/60±5% относительной влажности в течение по меньшей мере трех лет и при 40±2°С/75±5% относительной влажности в течение по меньшей мере 6 месяцев, так как она сохраняла характерные свойства, указанные на Фиг. 1-4.

Кристаллический IDN 5404, полученный в Примере 2, показывал вариацию химического состава в 7% через один месяц при 40±2°С/75±5% относительной влажности.

Кристаллический IDN 5404, полученный в Примере 3, показывал вариацию химического состава в 4,1% через один месяц при 40±2°С/75±5% относительной влажности.