Применение производного бета-морфолинопропиоамидоксима в качестве противодиабетического средства

Изобретение относится к медицинской химии, а именно к фармакологии, к производному бета-морфолинопропиоамидоксима, обладающему многофункциональным противодиабетическим и противотуберкулезным действием.

Из используемых в настоящее время противодиабетических средств наиболее близким по применению является метформин (N,N-диметилимиддикарбоимид диамид и в виде гидрохлорида) - лекарственное средство при лечении диабета II, используемое в медицинской практике [Машковский М.Д. Лекарственные средства. Пособие для врачей. 14-е издание. Москва. ООО «Новая волна», Издатель СБ. Дивов. - 2002. - Том 2. - С. 23.]; оно входит в список важнейших лекарственных препаратов Всемирной организации здравоохранения [WHO Model List of Essential Medicines, 16^th edition, World Health Organization, p. 24. Retrieved on 22 December 2010.].

Токсичность гидрохлорида метформина, определенная как острая подкожная токсичность на мышах LD₅₀, в соответствии с [SAFETY DATA SHEET Metformin (hydrochloride) Revision: 05/16/2015. Supersedes Revision: 01/09/2014 Cayman Chemicals.] составляет 225 мг/кг.

Недостатками прототипа является высокая острая токсичноть и недостаточно высокая противодиабетическая активность.

Задача данного изобретения - расширение арсенала высокоактивных, малотоксичных лекарственных средств путем разработки препарата с противодиабетическим действием, дополнительно обладающим противотуберкулезным действием.

Технический результат изобретения заключается в установлении на модели стрептозотоцинового диабета у мышей у гидрохлорида О-пара-толуоил-β-(морфолин-1-ил)пропиоамидоксима, испытанного под шифром TBD-12 с LD₅₀ 1371 мг/кг, более высокой по сравнению с метформином in vivo противодиабетической активности (в 1,2 раза) (таблица 1) и снижении острой токсичности (в 6,1 раз):

TBD-12 проявил высокую in vivo противотуберкулезную активность на чувствительных и многолекарственноустойчивых штаммах М. tuberculosis. Его физико-химические и противотуберкулезные свойства описаны в патенте РК: Пат. №12701 РК. Гидрохлорид О-пара-толуоил-β-морфолинопропиоамидоксима в качестве соединения с противотуберкулезной активностью. / Каюкова Л.А., Пралиев К.Д., Жумадильдаева И.С, Агзамова Р.А., Бисмилда В.Л., Пичхадзе Г.М., Есетова К.У.; опубл. 14.07.06, Бюл. №7. Впервые предлагается использовать гидрохлорид О-пара-толуоил-β-морфолинопропиоамидоксима в качестве соединения с противодиабетической активностью.

Пример. Противодиабетическую активность гидрохлорида О-пара-толуоил-β-морфолинопропиоамидоксима изучали в ЧУ «National Laboratory Astana» Назарбаев Университет. Стрептозотоциновый сахарный диабет вызывали путем однократного внутрибрюшинного введения стрептозотоцина (Sigma, США) в дозе 150 мг/кг массы тела мышей. Возникновение сахарного диабета контролировалось по динамике глюкозы крови, взятой из хвостовой вены до введения стрептозотоцина и через 3 дня после его введения. Уровень глюкозы определяли на приборе для измерения уровня глюкозы крови «Gamma Mini» (Gamma, Великобритания).

В эксперимент отбирали животных с содержанием глюкозы выше 15 мМоль/л. Экспериментальных животных распределяли по группам:

1) контрольная группа животных: животные, не получающие в качестве лечения активное вещество;

2) группа сравнения: животные, получающие в качестве лечения метформин в дозе 300 мг/кг;

3) исследуемая группа: животные, получающие в качестве лечения исследуемый образец TBD-12 в дозе 300 мг/кг.

Объем каждой исследуемой группы составил не менее 6 животных с уровнем глюкозы выше 15 мМоль/л. Исследуемый объект TBD-12 изучали в дозе 300 мг/кг при внутрибрюшинном пути введения. Контрольные животные (мыши с моделью стрептозотоцинового сахарного диабета, не получающие в качестве лечения активное вещество) получали эквиобъемное количество физиологического раствора внутрибрюшинно. Препаратом сравнения служил метформин в дозе 300 мг/кг веса мышей, который вводили внутрижелудочно с помощью зонда.

Исследуемые объекты в опытных группах животных и в группе сравнения и физиологический раствор в контрольной группе начинали вводить животным со сформировавшейся гипергликемией через 3 суток после введения стрептозотоцина на протяжении 5 суток ежедневно однократно.

Через 24 часа после последнего введения исследуемых объектов и физиологического раствора определяли уровень глюкозы в периферической крови, взятой из хвостовой вены мышей.

Статистическая обработка результатов проводилась с использованием программы «Ехсеl». Полученные результаты представлены в виде «среднее значение ± стандартная ошибка среднего значения». Достоверными считались различия при достигнутом уровне значимости р <0,05 [Лакин, Г.Ф. Биометрия. / М: Высш. школа., 1980. - 293 с].

Результаты исследований. Исследования противодиабетической активности образца TBD-12 проведены на 18 белых беспородных половозрелых мышах-самцах средней массой 20-25 г. Животных содержали в виварии в стандартных условиях. Результаты исследования противодиабетической активности образца TBD-12 приведены в таблице.

Содержание глюкозы в периферической крови у интактных мышей до начала эксперимента составило 6,4±0,3 мМоль/л, что укладывается в пределы физиологической нормы для данного вида лабораторных животных. Через 3 суток после введения стрептозотоцина у мышей определяли уровень глюкозы в крови, взятой из хвостовой вены мышей. В эксперимент отбирали животных с содержанием глюкозы выше 15 ммоль/л, в каждую группу было отобрано не менее 6 животных. В результате рандомизации животных по группам содержание глюкозы в крови в контрольной группе составило 21,9±1,5 мМоль/л; в группе сравнения - 21,7±1,7 мМоль/л; в исследуемой группе, получавшей TBD-12 в дозе 300 мг/кг - 21,3±1,7 мМоль/л.

Через 5 суток в контрольной группе животных содержание глюкозы в периферической крови составило 28,4±1,6 мМоль/л, что свидетельствует о стойкой гипергликемии, и ее дальнейшем прогрессировании.

В группе сравнения содержание глюкозы после 5 суток введения метформина составило 12,6±2,1 мМоль/л, что значительно ниже показателей до лечения (21,7±1,7 мМоль/л) и что служит подтверждением наличия гипогликемических свойств метформина. В процентном выражении гипогликемическое действие метформина составило 41,9%.

В исследуемой группе, получавшей образец TBD-12 в дозе 300 мг/кг, содержание глюкозы после 5 суток введения составило 10,7±1,5 мМоль/л, что статистически значимо ниже показателя до лечения исследуемым объектом (21,3±1,7 мМоль/л).

Таким образом, образец TBD-12 в дозе 300 мг/кг в условиях данной экспериментальной модели способствует снижению уровня глюкозы на 49,8%.