СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ЖИВОГО ОРГАНИЗМА К ЦИТОКИНУ

Изобретение относится к диагностике состояния живого организма, в частности его иммунной системы.

Известен способ определения чувствительности живого организма к цитокину, включающий определение количества МхА белка и активности интерферона в клетках живого организма (J. Interferon Cytokine Res., 1998, Dec., 18(12), р.р. 1019-1024).

Известен способ определения чувствительности живого организма к цитокину, включающий определение количества 2'5'-олигоаденилатсинтетазы в клетках живого организма в ответ на действие интерферона (J. Interferon Cytokine Res., 1998, Dec., 18(12), р.р. 1011-1018).

Известные способы недостаточно точны для определения чувствительности живого организма к α-, β- и γ-интерферонам и не могут быть использованы для определения чувствительности живого организма к другим цитокинам.

Технический результат от использования предлагаемого способа заключается в повышении точности определения чувствительности живого организма к α-, β- и γ- интерферонам и возможности определения чувствительности живого организма к другим цитокинам.

Под чувствительностью живого организма к цитокину понимается его способность обеспечивать иммуномодулирующую, противоинфекционную, противоопухолевую, радиопротекторную и иную активность цитокина.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе определения чувствительности живого организма к цитокину воздействуют на клетки крови цитокином, а затем индуктором этого цитокина с последующим измерением количества активного интерферона, выработанного клетками крови, и вычислением соотношения между этим количеством и количеством активного интерферона, выработанного клетками крови в результате воздействия на них только индуктором этого цитокина. Соотношение вычисляют как модуль разности или отношение указанных величин.

Определение чувствительности живого организма к цитокину необходимо для оценки состояния живого организма, в частности иммунной системы, а также для подбора пациенту наиболее эффективного лечебного препарата из различных препаратов, содержащих цитокины.

Способ определения чувствительности живого организма к цитокину осуществляют следующим образом. Берут кровь у пациента и помещают ее в несколько емкостей (по количеству исследуемых препаратов). Воздействуют на клетки крови в емкостях различными цитокинами в низкой концентрации (прайминг), а затем через определенные промежутки времени (от 1 мин до 6 ч) - индукторами этих цитокинов. Через 2-96 ч (в зависимости от использованного цитокина и его индуктора) измеряют количество активного интерферона, выработанного клетками крови, в каждой емкости. Затем измеряют количество активного интерферона, выработанного клетками крови в ответ на воздействие только индукторами соответствующих цитокинов, и вычисляют соотношение (модуль разности между измеренными величинами или их отношение). По величине вычисленного соотношения судят о степени чувствительности живого организма к цитокину (большей величине соотношения соответствует большая чувствительность).

Возможность достижения указанного технического результата подтверждается приведенными ниже примерами.

Пример 1. У больного X. с диагнозом аденома простаты исследовали расширенный ИФН статус. При этом определяли количество сывороточного ИФН (8 Ед/мл), спонтанно вырабатываемый ИФН (<2 Ед/мл), продукцию ИФН-α (16 Ед/мл), продукцию ИФН-γ(4 Ед/мл). Интерфероновый прайминг был использован для определения индивидуальной чувствительности к препаратам ИФН-α (Интрон А, Роферон А, Виллферон, Реаферон, Лейкинферон. Человеческий лейкоцитарный ИФН - ЧЛИ, Реальдирон) и ИФН-γ (Гаммаферон). Цитокиновый прайминг применяли для определения чувствительности к фактору некроза опухоли (ФНО), интерлейкинам (ИЛ-2, ИЛ-4). При исследовании чувствительности к цитокинам вычислялось соотношение между количеством активного интерферона (цитокина), выработанного клетками крови в результате воздействия на них индуктором этого интерферона (цитокина) с использованием прайминга, т.е. предварительного воздействия интерфероном (цитокином), и количеством активного интерферона, выработанного клетками крови в результате воздействия на них только индуктором этого интерферона (цитокина) - чувствительность к цитокину обозначена знаком "+", отсутствие чувствительности обозначено знаком "-". Полученные данные выражены в следующих показателях, указанных в виде отношения измеренных величин:
Интрон А= 128Ед/мл /16Ед/мл (+), Роферон А=16/16 (-), Виллферон=32/16 (+/-), Реаферон= 320/16 (+), Лейкинферон=64/16 (+), ЧЛИ=16/16 (-), Реальдирон= 128/16 (+), Гаммаферон=64/4 (+), ФНО=64/8 (+), ИЛ-2=8/8 (-), ИЛ-4=16/8 (+/-). Т. е. показано, что пациент чувствителен к Интрону А, Реаферону, Лейкинферону, Реальдирону, Гаммаферону, ФНО, умеренно чувствителен к Виллферону и ИЛ-4 и нечувствителен к Роферону А, ЧЛИ, ИЛ-2.

Пример 2. Больной А с диагнозом острый вирусный гепатит С (ОВГС), подтвержденный определением серологических маркеров (анти-HCV IgG, анти-HCV IgM, a/core-HCV IgG), а также анализом уровня РНК ВГС (положительный) с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). По показаниям расширенного ИФН статуса оптимальными препаратами для лечения являлись Реаферон и Интрон А. С помощью метода ИФА определяли in vitro способность к продукции цитокинов под действием препаратов ИФН. Выявлено, что Реаферон снижал продукцию ИЛ-1β, ИЛ-4 и ИЛ-6 in vitro. Также in vitro показано, что Интрон А снижал продукцию ИЛ-1β и ИЛ-6 и повышал выработку ИЛ-4 и ИФН-α. Т.е. по нашим данным Интрон А был более предпочтителен для лечения данного пациента. Уже через 14 дней лечения у больного отмечено восстановление показателей иммунного и ИФН статусов, через 1 месяц лечения наблюдалась нормализация биохимических показателей (ACT, АЛТ, билирубин, тимоловая проба), анти-HCV IgG, анти-HCV IgM, a/core-HCV IgG, а также благоприятная динамика клинических данных - уменьшение размеров печени, снижение выраженности интоксикационного синдрома. Через 3 месяца лечения не обнаружено присутствия РНК ВГС.

Обследование пациента, леченного Интроном А без предварительного определения чувствительности и подбора препарата, показало: наличие РНК ВГС через 6 месяцев лечения, нормализация иммунного и ИФН статусов, а также биохимических показателей лишь через 3 месяца лечения.

Пример 3. Больной Б. с диагнозом острый хламидиоз, подтвержденным культуральным методом "золотой стандарт". Предварительное исследование показало целесообразность применения в комплексном лечении Реаферона и Иммунала на фоне 1 месяца приема антибиотиков. Через 20 дней и через 3 месяца после лечения методом "золотой стандарт" хламидии не обнаруживались.

В отличие от этого пациента у другого больного с острым хламидиозом после одного курса антибиотиков и Реаферона, применяемого без предварительного определения чувствительности к иммуномодулирующим препаратам, были обнаружены хламидии.

Пример 4. Больной В. с верифицированным диагнозом рассеянный склероз (PC) в стадии обострения. Перед началом лечения была выявлена чувствительность к Бетаферону и Реаферону. Проведен курс Бетаферона. Затем в стадии ремиссии пациент применял Реаферон. Отмечено выраженное улучшение клинического состояния больного в более короткие сроки, а также увеличение времени ремиссии по сравнению с пациентами, получавшими лечение без подбора препаратов.

Пример 5. Больному Г. с меланомой кожи применяли в процессе лечения Гаммаферон и ИЛ-2 после предварительной оценки чувствительности к этим и другим иммуномодулирующим препаратам. После курса лечения отмечено значительное клиническое улучшение состояния пациента, повышение до нормы показателей иммунного и ИФН статусов, нормализация клинического и биохимического анализов крови. Метастазов в течение 1 года наблюдения не выявлено.