СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДОРАСТВОРИМЫХ СОЛЕВЫХ КОМПЛЕКСОВ ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТЫ (ВАРИАНТЫ)

Изобретения относятся к области биохимии, а именно к способам получения водорастворимых солевых комплексов (ассоциатов) гиалуроновой кислоты с d-металлами IV, V и VI периодов Периодической системы элементов Д.И.Менделеева, которые могут быть использованы в фармакологии и косметологии.

Гиалуроновая кислота является природно встречающимся полианионным линейным полисахаридом, входящим в состав внеклеточного основного вещества соединительной ткани позвоночных животных в виде соли и состоит из чередующихся остатков D-глюкуроновой кислоты и N-ацетил-D-глюкозамина. Аминосахар в молекуле соединен с D-глюкуроновой кислотой β-(1→4)-связью, а кислота с аминосахаром β-(1→3)-связью. Гиалуроновая кислота образует соли, называемые гиалуронатами, с различными неорганическими и органическими катионами, соединяется с различными белками. Растворы гиалуронатов обладают высокой вязкостью. Молекулярная масса выделенного из животной ткани гиалуроната обычно находится в пределах от 10⁵ до 10⁷ дальтон в зависимости от вида сырья, способов получения и очистки. Кислота обладает исключительно высоким гидродинамическим объемом, например одна молекула кислоты способна удерживать 200-500 молекул воды. В организме человека и животных гиалуроновая кислота существует в виде ее натриевой соли - гиалуроната натрия. Эмпирическая формула [(C₁₄H₂₀NO₁₁)Na]_n, где n=250-25000.

В тканях организма гиалуроновая кислота принимает участие в сложных, в том числе недостаточно изученных, физиологических процессах, например в первые сутки нормального заживления неосложненных ран в последних отмечается повышенная концентрация гиалуроновой кислоты [Goa K.I., Benfield P. Hyaluronic acid. A review of its pharmacology and use as a surgical aid in ophthalmology and its therapeutic potential in joint disease and wound healing // Drugs. - 1994. - V.47, №3, - p.536-566].

Известен способ получения композиции, содержащей кобальтовый комплекс гиалуроновой кислоты, согласно которому к раствору гиалуроната натрия добавляют раствор соответствующей соли, выдерживают при перемешивании и осаждают 3 объемными частями этанола [Описание изобретения к патенту США №5472950, Н Кл. 514/54, опубл. 05.12.1995].

Данный способ не может обеспечить после первичного осаждения этанолом удовлетворительную чистоту продукта - вместе с гиалуронатом всегда соосаждается избыток солей, содержащийся в растворе. Таким образом данным способом затруднительно получить однокомпонентные (или содержащие допустимое количество примесей) солевые комплексы гиалуроната.

Известен способ лечения трофических язв и пролежней цинковым комплексом гиалуроновой кислоты. Для этого получают комплекс гиалуроната с катионом четвертичного аммония в виде осадка, очищают его, растворяют в водном растворе цинковой соли и растворителя, частично смешивающегося с водой. Затем фазы разделяют, осаждают соответствующий ассоциат алканолом, осадок отделяют и промывают [Описание изобретения к патенту США №5554598, Н Кл. 514/54, опубл. 09.10.1996].

Данный способ отличается сложностью дальнейшей очистки продукта от избытка солей четвертичного аммония, катионов цинка и соответствующих анионов. При растворении ассоциатов, которые были получены способом осаждения четвертичными аммонийными солями, образуются опалесцирующие растворы, что ухудшает качество продукта и в итоге не позволяет получить полные соли гиалуроната.

Известен способ получения биологически активной композиции, при котором ассоциаты гиалуроновой кислоты с ионами Со²⁺ или Zn²⁺ в фармацевтически эффективном количестве смешивают с целевыми добавками [Описание изобретения к патенту РФ №2021304, МПК С 08 L 5/08, А 61 К 31/728, А 61 Р 17/02, опубл. 15.10.1994, Бюл. №19]. В изобретении описаны две типовые технологические схемы получения кобальтовых или цинковых ассоциатов гиалуроновой кислоты.

По одной схеме ассоциат, образованный из гиалуроната кислоты и соли четвертичного аммония в водной суспензии растворяют в смеси растворителей, содержащих водные растворы иона Со²⁺ или Zn²⁺ с н-бутанолом, после чего ассоциат осаждают с применением алканола или алканона, выделяют осадок из раствора и высушивают конечный продукт.

Данная схема отличается сложностью и требует использования большого количества химических ингредиентов, кроме этого она не позволяет получать полные соли гиалуроновой кислоты.

Наиболее близкой по совокупности существенных признаков первому заявляемому изобретению группы является другая, описанная в патенте РФ №2021304 схема получения водорастворимых ассоциатов, которая включает приготовление водного раствора соли металла (хлорида цинка или хлорида кобальта) и его смешивание с натриевой солью гиалуроновой кислоты, выдерживание смеси, ее механическое перемешивание, разбавление водой и последующую фильтрацию для выделения конечного продукта.

Полученный при использовании данной схемы конечный продукт отличается недостаточно стабильным качеством. Например, в отфильтрованном продукте будут встречаться низкомолекулярные фрагменты гиалуроновой кислоты, не вступившие в реакцию хлорид цинка или хлорид кобальта, хлорид натрия, натриевая соль гиалуроновой кислоты. В этом случае может потребоваться дополнительная очистка. Можно предположить, что получение декларируемого в изобретении технического результата возможно при строгом соблюдении количественных соотношений ингредиентов и последовательности технологических стадий, высокой чистоте химических реактивов, а также исходного гиалуроната натрия.

Задача, решаемая первым изобретением группы, заключается в разработке очередного способа получения высокочистых водорастворимых солевых комплексов гиалуроната с катионами металлов, преимущественно d-металлов IV, V и VI периодов Периодической системы элементов Д.И.Менделеева, для медицинских и косметологических целей, который отличается относительной простотой и небольшим временем протекания процесса.

Техническим результатом будет разработка достаточно простого способа получения высокочистых однокомпонентных водорастворимых солевых комплексов гиалуроновой кислоты, содержащих катионы d-металла, для медицинских и косметологических целей, включающие минимальное количество примесей добавляемых солей металлов и контролируемое количество выделившейся в процессе реакции соли натрия, которые отличаются небольшим временем протекания процессов и малыми затратами.

Для решения поставленной задачи в способе получения водорастворимых солевых комплексов гиалуроновой кислоты, включающем получение водного раствора соли d-металла IV, V и VI периодов Периодической системы и его смешивание с натриевой солью гиалуроновой кислоты, выдерживание смеси, ее перемешивание, разбавление водой и выделение конечного продукта, для смешивания используют количество водного раствора соли вышеуказанного d-металла, эквивалентное количеству карбоксильных групп натриевой соли гиалуроновой кислоты или лежащее в пределах от 0,95% до 1,10% от эквивалентного, после разбавления водой смесь раствора подвергают ультрафильтрации на разделительных мембранах с одновременной промывкой вначале водным раствором соли вышеуказанного d-металла, а потом деионизированной водой, после чего продукт концентрируют.

Кроме этого:

- после концентрирования продукт подвергают спиртоосаждению или лиофильной сушке;

- после концентрирования продукт подвергают стерильной фильтрации;

- после стерильной фильтрации продукт подвергают спиртоосаждению или лиофильной сушке.

Наиболее близкой по совокупности существенных признаков второму заявляемому изобретению группы также является описанная в патенте РФ №2021304 схема получения водорастворимых ассоциатов, которая включает приготовление водного раствора соли металла (хлорида цинка или хлорида кобальта) и его смешивание с натриевой солью гиалуроновой кислоты, выдерживание смеси, ее механическое перемешивание, разбавление водой и последующую фильтрацию для выделения конечного продукта.

Как упоминалось выше, полученный при использовании данной схемы конечный продукт отличается недостаточно стабильным качеством. В отфильтрованном продукте встречаются низкомолекулярные фрагменты гиалуроновой кислоты, не вступившие в реакцию хлорид цинка или хлорид кобальта, хлорид натрия, натриевая соль гиалуроновой кислоты. В качестве примесей могут оставаться соли металлов или четвертичные аммонийные соли. Наличие большого количества составляющих в конечном продукте не позволяет говорить о прогнозируемом фармакологическом и косметологическом действиях полученного многокомпонентного препарата на организм человека.

Задача, решаемая вторым изобретением группы, заключается в разработке очередного способа получения высокочистых водорастворимых солевых комплексов гиалуроната с катионами металлов, преимущественно d-металлов IV, V и VI периодов Периодической системы элементов Д.И.Менделеева, для медицинских и косметологических целей, который отличается относительной простотой и небольшим временем протекания процесса.

Техническим результатом будет разработка достаточно простого способа получения высокочистых, как правило двухкомпонентных водорастворимых солевых комплексов гиалуроновой кислоты, содержащих катионы какого-либо d-металла и катионы натрия, для медицинских и косметологических целей, включающие минимальное количество примесей добавляемых солей металлов и контролируемое количество выделившейся в процессе реакции соли натрия, которые отличаются небольшим временем протекания процессов и малыми затратами.

Для решения поставленной задачи в способе получения водорастворимых солевых комплексов гиалуроновой кислоты, включающем получение водного раствора соли d-металла IV, V и VI периодов Периодической системы и его смешивание с натриевой солью гиалуроновой кислоты, выдерживание смеси, ее перемешивание, разбавление водой и выделение конечного продукта, для смешивания используют количество водного раствора соли вышеуказанного d-металла, меньшее эквивалентного количества карбоксильных групп натриевой соли гиалуроновой кислоты, после разбавления водой смесь раствора подвергают ультрафильтрации на разделительных мембранах с одновременной промывкой деионизированной водой, после чего продукт концентрируют.

Кроме этого:

- после концентрирования продукт подвергают спиртоосаждению или лиофильной сушке;

- после концентрирования продукт подвергают стерильной фильтрации;

- после стерильной фильтрации продукт подвергают спиртоосаждению или лиофильной сушке.

Часть информации о действии, оказываемом на организм человека некоторыми d-металлами IV, V и VI периодов Периодической системы элементов в составе различных солей и комплексов, в том числе в составе солевых комплексов гиалуроновой кислоты, можно свести в таблицу «Биологическое действие d-металлов на организм» (см. табл.)

Суть изобретений группы заключается в том, что высокочистые однокомпонентные или многокомпонентные солевые комплексы d-металлов гиалуроновой кислоты для медицинских и косметологических целей, содержащие минимальное количество примесей, получаются достаточно простыми способами в течение небольших промежутков времени и с малыми затратами. Здесь и далее под термином «высокочистые однокомпонентные солевые комплексы» следует понимать практически чистые однокомпонентные солевые комплексы гиалуроновой кислоты, где процент замещения карбоксильных групп каким-либо d-металлом находится в пределах от 95% до 98% (или выше, если это оправдано экономически). У оставшихся карбоксильных групп остаются незамещенные катионы натрия, что никоим образом не влияет на качество получаемой соли гиалуроновой кислоты и ее физико-химические, фармакологические и косметологические свойства. Под термином «высокочистые многокомпонентные солевые комплексы» следует понимать, как правило, двухкомпонентные солевые комплексы какого-либо d-металла с гиалуронатом натрия, где процент замещения натрия на карбоксильных группах может быть произвольным, например 49% соли d-металла гиалуроновой кислоты и 48% натриевой соли (с поправкой на процессы гидролиза), или 90%+8%, или 8%+90% и т.д. в зависимости от требуемого фармакологического и (или) косметологического эффекта. Теоретически двухкомпонентный, например 95%+3% солевой комплекс гиалуроновой кислоты следует рассматривать как однокомпонентный, поскольку фармакологический и косметологический эффект будут определяться тем компонентом, который составляет 95%. Не исключено, что в некоторых случаях малое количество одного из компонентов солевого комплекса, например катионов серебра в качестве антибактериального агента или катионов платины в качестве противоопухолевого агента, также будет оказывать на живой организм необходимый эффект. Однако в этих случаях все же целесообразнее использовать натриевую соль гиалуроновой кислоты в сочетании со специальными препаратами, зарекомендовавшими себя на определенном фармакологическом и косметологическом эффекте, или исходить из соображений целесообразности. Что касается трехкомпонентных (или более) солевых комплексов d-металлов с гиалуронатом натрия, то их ожидаемые фармакологический и косметологический эффекты трудно поддаются прогнозированию. Как правило, в таком солевом комплексе в большей степени проявляются свойства всего лишь одного из входящих d-металлов.

В общем случае способ получения водорастворимых солевых комплексов гиалуроновой кислоты включает получение водного раствора соли металла, преимущественно одного из d-металлов IV, V и VI периодов Периодической системы элементов Д.И.Менделеева, и его смешивание с натриевой солью гиалуроновой кислоты, выдерживание смеси, ее перемешивание, разбавление водой и выделение конечного продукта. Данные способы основаны на высоких комплексообразующих способностях d-металлов и на смещении химического равновесия в результате вымывания катионов натрия в ходе ультрафильтрации на разделительных мембранах.

Для получения однокомпонентных солевых комплексов гиалуроновой кислоты для смешивания используют количество водного раствора соли металла, эквивалентное количеству карбоксильных групп натриевой соли гиалуроновой кислоты или лежащее в пределах от 0,95 до 1,10 от эквивалентного, после разбавления водой смесь раствора подвергают ультрафильтрации на разделительных мембранах с одновременной промывкой вначале водным раствором соли получаемого металла, а после деионизированной водой, при этом используют мембраны с определенным диаметром (размером) пор, позволяющим освобождаться от молекул полимеров, с молекулярной массой ниже установленного предела и избытка неорганических солей и задерживать в растворе концентрата молекулы с определенной молекулярной массой, после чего прекращается добавление деионизированной воды в систему, оставшиеся молекулы воды проходят через мембрану, в результате чего уменьшается объем и повышается концентрация раствора готового продукта.

Количество карбоксильных групп гиалуроната натрия может быть вычислено по известной формуле исходя из массы навески гиалуроната натрия. Количество дисахаридных единиц n рассчитывается по формуле

n=m/М,

где m - масса навески гиалуроната натрия;

М - молярная масса дисахаридной единицы гиалуроната натрия (равна 401,22 г/моль).

Количество дисахаридных единиц гиалуроната натрия в навеске и будет равно количеству карбоксильных групп, что дает возможность рассчитать необходимое количество и массу соли d-металла для замещения натрия на карбоксильных группах. Например, в 1,00 грамме гиалуроната натрия будет следующее количество карбоксильных групп:

n=1,00/401,22=0,00249 моль.

В зависимости от валентности d-металла он может присоединить различное количество карбоксильных групп. Например, на две карбоксильные группы в гиалуронате приходится один катион двухвалентного металла, следовательно, необходимо взять 1/2 от 0,00249 моль карбоксильных групп соли двухвалентного d-металла для теоретического 100% замещения натрия на карбоксильных группах. Для одновалентного d-металла необходимо взять 0,00249 моль его соли и т.д. На практике замещение получится в пределах от 95% до 98% карбоксильных групп.

При использовании количества водного раствора соли металла выше эквивалентного количества карбоксильных групп натриевой соли гиалуроновой кислоты, например 150% от эквивалентного получается полная соль гиалуроновой кислоты, в которой, например, 97,5% карбоксильных групп заняты катионом d-металла. Избыток солей будет вымыт в процессе ультрафильтрации, однако добавление такого количества соли нецелесообразно, т.к. приводит к перерасходу химических реагентов.

Для получения, например, двухкомпонентных солевых комплексов гиалуроновой кислоты для смешивания используют водный раствор с количеством соли металла меньше эквивалентного количества карбоксильных групп натриевой соли гиалуроновой кислоты, после разбавления водой смесь подвергают ультрафильтрации на разделительных мембранах с одновременной промывкой деионизированной водой, при этом, как и в предыдущем случае, используют мембраны с определенным диаметром (размером) пор, позволяющим освобождаться от молекул полимеров, с молекулярной массой ниже установленного предела и избытка неорганических солей, и задерживать в растворе концентрата молекулы с определенной молекулярной массой, после чего прекращается добавление деионизированной воды в систему, оставшиеся молекулы воды проходят через мембрану, в результате чего уменьшается объем и повышается концентрация раствора готового продукта.

При использовании количества соли d-металла в водном растворе ниже эквивалентного количества карбоксильных групп натриевой соли гиалуроновой кислоты, например 50% от эквивалентного, получается двухкомпонентный солевой комплекс гиалуроновой кислоты, в которой теоретически 50% карбоксильных групп заняты катионом d-металла, а 50% катионом натрия.

В обоих перечисленных случаях концентрированный продукт может быть подвержен стерилизационной фильтрации для удаления возможной патогенной микрофлоры, что требуется для случаев использования полученного раствора в виде готовой к употреблению инъекционной формы. В общем случае получаемые в процессе реализации вышеупомянутых технических решений концентрированные одно- или многокомпонентные солевые комплексы гиалуроновой кислоты приобретают товарный вид после спиртоосаждения или лиофильной сушки. В этом виде продукт герметично упаковывается, стерилизуется (при необходимости) и поступает на реализацию.

Существует особая зависимость между соотношением натриевых катионов и катионов d-металлов IV, V и VI периодов Периодической системы элементов в молекуле гиалуроната. Очевидно, что чем большее количество катионов натрия на карбоксильных группах молекулы гиалуроната замещены на биологически активный металл из d-группы, тем больше биологическая активность молекулы гиалуроната. Получая молекулы гиалуроната с различным содержанием биологически активного металла из d-группы, можно получать различные по биологической активности препараты гиалуроната. Например, однокомпонентные солевые комплексы гиалуроната цинка, а также меди, кобальта, серебра и т.д. обладают более выраженными, востребованными, как в фармакологии, так и в косметологии, бактерицидными свойствами по сравнению с двухкомпонентными комплексами, например, теоретическими 50%+50% (или 80%+20% и др.) от количества карбоксильных групп гиалуроната.

Двухкомпонентные солевые комплексы гиалуроновой кислоты имеют преимущества по сравнению с однокомпонентными солевыми комплексами в случаях, например, когда используемый неорганический катион, например кобальт, проявляет острое токсическое действие на организм. Получая двухкомпонентный солевой комплекс гиалуроновой кислоты, содержащий катионы натрия и минимальное количество, например 5% или 10% от количества карбоксильных групп, катионов токсичного d-металла, например хрома, снижают или нейтрализуют это токсическое воздействие. Например, использование двухкомпонентного солевого комплекса гиалуроновой кислоты, содержащего катионы натрия и, например, 10% от количества карбоксильных групп, катионов цинка, помимо восстановления эластичности кожи способствует формированию косметического рубца в результате, например, различных повреждений кожного покрова, что более предпочтительно по сравнению с применением косметических форм, содержащих преимущественно цинковый компонент.

Особенно важно снижение токсичного эффекта за счет минимального введения d-металла, когда препараты используют, например, как инъекционные. Так, например, можно предположить, что препараты платины как противоопухолевые агенты, вводимые внутрь организма, лучше использовать в виде двухкомпонентных солевых комплексов, содержащих катионы натрия и минимальное содержание катионов платины, например 1-5%, или 5-10% от общего количества карбоксильных групп гиалуроната натрия - абсолютно совместимого с организмом (за редким исключением - в зависимости от естественной аллергической реакции организма) полисахарида.

Водорастворимые ассоциаты гиалуроната и катионов, например, цинка или меди получают путем добавления солей (предпочтительно хлоридов или других) меди и цинка в раствор гиалуроната натрия с последующей ультрафильтрацией на разделительных мембранах, исключающих выход гиалуроната в зависимости от его молекулярной массы. Цинк и медь выбраны из других d-металлов по причине наиболее известного применения в фармакологии и косметологии различных неорганических препаратов с их содержанием и существующего потребительского спроса.

После промывки деионизированной водой на установке ультрафильтрации раствор осаждают этиловым спиртом с получением осадка ассоциата гиалуроната меди или цинка. Сухое вещество можно также получить лиофильной сушкой либо раствор используют непосредственно после стерилизационной фильтрации через мембраны с порами 0,20-0,45 мкм. Способ получения однокомпонентного солевого комплекса гиалуроната цинка заключается в следующем. К гиалуронату натрия в водной среде добавляют эквивалентное количество, по карбоксильным группам, хлорида цинка. Раствор выдерживают при перемешивании сутки для полного прохождения реакции комплексообразования, затем разбавляют и начинают промывать 0,07% раствором хлорида цинка на установке ультрафильтрации с порами мембраны, предотвращающими выход гиалуроната, для удаления избытка катионов натрия и смещения химического равновесия в сторону образования гиалуроната цинка. Затем раствор промывают деионизированной водой для удаления избытка катионов цинка, хлорид-ионов и катионов натрия. Раствор концентрируют и фильтруют на мембранах с порами 0,20-0,45 мкм для того, чтобы отделить возможные привнесенные извне составляющие, например патогенную микрофлору, в результате чего получается готовый для применения раствор, либо осаждают этанолом с последующей сушкой или сушат лиофильно. Данный способ позволяет получать беспримесные образцы гиалуроната, карбоксильные группы которого практически полностью - на 95% и выше - насыщены катионами цинка и содержащие менее 5% катионов натрия.

Химический состав полученной соли: [(C₁₄H₂₀NO₁₁)Zn]_n.

Способ получения двухкомпонентного цинко-натриевого солевого комплекса гиалуроната заключается в следующем. К гиалуронату натрия в водной среде добавляют необходимое количество, например не более 95% от эквивалентного по карбоксильным группам, хлорида цинка в растворе. Раствор выдерживают при перемешивании сутки для полного прохождения реакции комплексообразования, затем разбавляют и начинают промывать деионизированной водой на установке ультрафильтрации с порами, предотвращающими выход гиалуроната. За счет естественных процессов вымывания металлов получается, например, соль с количеством карбоксильных групп, содержащих катионы цинка, равным примерно 90%. Далее раствор концентрируют и фильтруют на мембранах с порами 0,2-0,45 мкм, либо осаждают этанолом с последующей сушкой, или сушат лиофильно. Данный способ позволяет получать беспримесные образцы двухкомпонентной соли гиалуроната, карбоксильные группы которой частично насыщены катионами цинка и содержащие незамещенные катионы натрия.

Химический состав полученной соли: [(C₁₄H₂₀NO₁₁)Zn_xNa_n-x]_n. Способ получения однокомпонентного солевого комплекса гиалуроната меди заключается в следующем. К гиалуронату натрия в водной среде добавляют эквивалентное количество, по карбоксильным группам, хлорида меди. Раствор выдерживают при перемешивании сутки для полного прохождения реакции комплексообразования, затем разбавляют и начинают промывать 0,07% раствором хлорида меди на установке ультрафильтрации с порами мембраны, предотвращающими выход гиалуроната, для удаления избытка катионов натрия и смещения химического равновесия в сторону образования гиалуроната меди. Затем раствор промывают деионизированной водой для удаления избытка катионов меди, хлорид-ионов и катионов натрия. Раствор концентрируют, фильтруют на мембранах с порами 0,20-0,45 мкм, либо осаждают этанолом с последующей сушкой, или сушат лиофильно. Данный способ позволяет получать беспримесные образцы гиалуроната, карбоксильные группы которого практически полностью насыщены катионами меди и не содержащие катионов натрия на карбоксильных группах.

Химический состав полученной соли: [(С₁₄H₂₀NO₁₁)Cu]_n.

Способ получения двухкомпонентного медно-натриевого солевого комплекса гиалуроната заключается в следующем. К гиалуронату натрия в водной среде добавляют необходимое количество, например не более 95% от эквивалентного по карбоксильным группам, хлорида меди в растворе. Раствор выдерживают при перемешивании сутки для полного прохождения реакции комплексообразования, затем разбавляют и начинают промывать деионизированной водой на установке ультрафильтрации с порами мембраны, предотвращающими выход гиалуроната. За счет естественных процессов вымывания металлов получается, например, соль с количеством карбоксильных групп, содержащих катионы меди, равным примерно 89%. Раствор концентрируют, фильтруют на мембранах с порами 0,20-0,45 мкм, либо осаждают этанолом с последующей сушкой, или сушат лиофильно. Данный способ позволяет получать беспримесные образцы гиалуроната, карбоксильные группы которого частично насыщены катионами меди и содержащие незамещенные катионы натрия.

Химический состав полученной соли: [(C₁₄H₂₀NO₁₁)Cu_xNa_n-x]_n.

Таким же образом получают соли, например, золота, кобальта, серебра и других d-металлов IV, V и VI периодов Периодической системы.

Характеристики гиалуроната натрия, используемого в примерах для получения солевых ассоциатов гиалуроната с цинком и медью:

- средняя молекулярная масса 1500000;

- содержание протеина не более 0,05 мас.% от сухого вещества;

- вязкость 2% раствора гиалуроната натрия 1450 мПа·с;

- содержание гиалуроната натрия 98,53%;

- рН водного раствора 6,5.

Изобретения более подробно иллюстрируются нижеследующими примерами.

Пример 1. Получение однокомпонентного солевого комплекса гиалуроната цинка.

10,0 г гиалуроната натрия растворяют в 900 мл деионизированной воды с получением 1,1% раствора. Готовят 90,0 мл 1,9% раствора хлорида цинка. Затем медленно при перемешивании вливают раствор хлорида цинка в раствор гиалуроната натрия. Раствор при комнатной температуре перемешивают в течение суток, по истечении которых смесь разбавляют деионизированной водой до 10 л. Раствор подвергают ультрафильтрации на разделительных мембранах с порами 0,03 мкм, медленно добавляя, по мере выхода раствора через мембраны, 0,07% раствор хлорида цинка объемом 5,0 л. Затем раствор промывают деионизированной водой объемом 10 л. Далее раствор концентрируют до объема 3,5 л. Данный раствор осаждают 3 объемами высокочистого 95% этанола. Осадок собирают на стеклянном фильтре и сушат при температуре 60°С при пониженном давлении. В результате получается комплекс гиалуроната цинка массой 10,0 г. Выход продукта составляет 93%.

Пример 2. Получение однокомпонентного солевого комплекса гиалуроната меди.

10,0 г гиалуроната натрия растворяют в 900 мл деионизированной воды с получением 1,1% раствора. Готовят 90,0 мл 1,8% раствора хлорида меди. Затем медленно при перемешивании вливают раствор хлорида меди в раствор гиалуроната натрия. Раствор при комнатной температуре перемешивают в течение суток, по истечении которых смесь разбавляют деионизированной водой до 10 л. Раствор подвергают ультрафильтрации на разделительных мембранах с порами 0,03 мкм, медленно добавляя, по мере выхода раствора через мембраны, 0,07% раствор хлорида меди объемом 5,0 л. Затем раствор промывают деионизированной водой объемом 10 л. Далее раствор концентрируют до объема 3,5 л. Данный раствор осаждают 3 объемами высокочистого 95% этанола. Осадок собирают на стеклянном фильтре и сушат при температуре 60°С при пониженном давлении. В результате получается комплекс гиалуроната меди массой 10,0 г. Выход продукта составляет 93%.

Пример 3. Получение двухкомпонентного солевого комплекса гиалуроната, карбоксильные группы в котором на 50% замещены катионами цинка.

10,0 г гиалуроната натрия растворяют в 900 мл деионизированной воды с получением 1,1% раствора. Готовят 90,0 мл 1,0% раствора хлорида цинка. Затем медленно при перемешивании вливают раствор хлорида цинка в раствор гиалуроната натрия. Раствор при комнатной температуре перемешивают в течение суток, по истечении которых смесь разбавляют деионизированной водой до 10 л. Раствор подвергают ультрафильтрации на разделительных мембранах с порами 0,03 мкм, медленно добавляя, по мере выхода раствора через мембраны, деионизированную воду объемом 10 л. Далее раствор концентрируют до объема 3,5 л. Данный раствор осаждают 3 объемами высокочистого 95% этанола. Осадок собирают на стеклянном фильтре и сушат при температуре 60°С при пониженном давлении. В результате получается 9,7 г двухкомпонентного комплекса гиалуроната цинка, составляющего примерно 58% от общей массы, и гиалуроната натрия, составляющего примерно 35%. Таким образом, выход продукта составляет 93%.

Пример 4. Получение двухкомпонентного солевого комплекса гиалуроната, карбоксильные группы которого на 80% замещены катионами меди.

10,0 г гиалуроната натрия растворяют в 900 мл деионизированной воды с получением 1,1% раствора. Готовят 90,0 мл 1,5% раствора хлорида меди. Затем медленно при перемешивании вливают раствор хлорида меди в раствор гиалуроната натрия. Раствор при комнатной температуре перемешивают в течение суток, по истечении которых смесь разбавляют деионизированной водой до 10 л. Раствор подвергают ультрафильтрации на разделительных мембранах с порами 0,03 мкм, медленно добавляя, по мере выхода раствора через мембраны, деионизированную воду объемом 10 л. Далее раствор концентрируют до объема 3,5 л. Данный раствор осаждают 3 объемами высокочистого 95% этанола. Осадок собирают на стеклянном фильтре и сушат при температуре 60°С при пониженном давлении. В результате получается 9,9 г двухкомпонентного комплекса гиалуроната меди, составляющего примерно 80% от общей массы, и гиалуроната натрия, составляющего примерно 13%. Как видно, выход продукта составляет 93%.

Пример 5. Получение 1,0% стерильного раствора однокомпонентного солевого комплекса гиалуроната цинка.

10,0 г гиалуроната натрия растворяют в 900 мл деионизированной воды с получением 1,1% раствора. Готовят 90,0 мл 1,9% раствора хлорида цинка. Затем медленно при перемешивании вливают раствор хлорида цинка в раствор гиалуроната натрия. Раствор при комнатной температуре перемешивают в течение суток, по истечении которых смесь разбавляют деионизированной водой до 10 л. Раствор подвергают ультрафильтрации на разделительных мембранах с порами 0,03 мкм, медленно добавляя, по мере выхода раствора через мембраны, 0,07% раствор хлорида цинка объемом 5,0 л. Затем раствор промывают деионизированной водой объемом 10 л. Далее раствор концентрируют до объема 990 мл. Затем раствор фильтруют в асептических условиях через мембрану с порами 0,45 мкм при давлении 2-4 атм. Получают 1,0% прозрачный стерильный раствор полной соли гиалуроната цинка.

Пример 6. Получение 0,5% стерильного раствора однокомпонентного солевого комплекса гиалуроната меди.

10,0 г гиалуроната натрия растворяют в 900 мл деионизированной воды с получением 1,1% раствора. Готовят 90,0 мл 1,8% раствора хлорида меди. Затем медленно при перемешивании вливают раствор хлорида меди в раствор гиалуроната натрия. Раствор при комнатной температуре перемешивают в течение суток, по истечении которых смесь разбавляют деионизированной водой до 10 л. Раствор подвергают ультрафильтрации на разделительных мембранах с порами 0,03 мкм, медленно добавляя, по мере выхода раствора через мембраны, 0,07% раствор хлорида меди объемом 5,0 л. Затем раствор промывают деионизированной водой объемом 10 л. Далее раствор конденсируют до объема 1980 мл. Затем раствор фильтруют в асептических условиях через мембрану с порами 0,45 мкм при давлении 2-4 атм. Получают 0,5% прозрачный стерильный раствор полной соли гиалуроната меди.

Примеры 7-10. Получение разнообразных однокомпонентных и двухкомпонентных солевых комплексов гиалуроната меди или цинка соответствует способам, указанным в примерах 1-4, за исключением того, что после ультрафильтрации раствора на разделительных мембранах он сразу же поступает на лиофильную сушку. Выход продукта составляет 93,4%.

Таким образом, в результате использования изобретений возможно достаточно простыми способами получить высокочистые однокомпонентные солевые комплексы гиалуроновой кислоты, содержащие катионы какого-либо d-металла, или, как правило, двухкомпонентные солевые комплексы гиалуроновой кислоты, содержащие помимо катионов какого-либо d-металла также и катионы натрия, для медицинских и косметологических целей, включающие минимальное количество примесей добавляемых солей металлов и контролируемое количество выделившейся в процессе реакции соли натрия, которые отличаются небольшим временем протекания процессов и малыми затратами.