ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРИДАЗИНИЛАМИНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ИНГИБИТОРОВ ПИКОРНАВИРУСОВ

·Область техники

Настоящее изобретение относится к производным замещенного пиридазиниламина или к их фармацевтически приемлемым солям или гидратам, способу их получения, фармацевтическим композициям, их включающим, и к их применению в качестве ингибиторов пикорнавирусов для производства медикаментов для профилактики и/или лечения заболеваний, вызванных пикорнавирусами.

Уровень техники

Пикорнавирусы представляют собой мельчайшие известные РНК-вирусы животных, они включают 7 родов, то есть род риновирусов, род энтеровирусов, род афтовирусов, род кардиовирусов, род гепатовирусов и род двойных эховирусов и другие неклассифицированные пикорнавирусы. Пикорнавирусы могут вызывать многие заболевания, такие как респираторные заболевания, везикулярные стоматиты, менингит/энцефалит, полиомиелит, сердечно-сосудистые заболевания, геморрагический конъюнктивит, гепатит и так далее.

В последний период 1980-х годов в вирусологии наблюдалось значительное продвижение вперед. Было подробно описано несколько важных стадий в жизненном цикле вирусов, и многие молекулярные мишени нашли подтверждение. Кроме того, некоторые новые противовирусные лекарственные средства, появившиеся в последние годы, также содействовали быстрому развитию вирусологии. Ингибиторы пикорнавирусов как раз находятся в стадии активных научных исследований. Мишенью действия данных ингибиторов является вирусный белок 1 (VP1), который имеет относительно консервативную капсидную структуру и служит посредником процесса адгезии/декапсидации вируса. VP1 из вирусов различных серотипов являются высоко консервативными по структуре, но весьма важными для репликации вирусов. Следовательно, ингибиторы, действующие на данную мишень, с большой вероятностью можно рассматривать в качестве лекарственных средств против пикорнавирусов.

Сущность изобретения

Цель настоящего изобретения заключается в изыскании новых низкомолекулярных соединений, действующих на VP1, которые могут предотвращать адгезию/декапсидацию вирусов, что тем самым позволяет достичь цели профилактики и/или лечения заболеваний, вызванных пикорнавирусами.

Проведя исследования, авторы настоящего изобретения нашли, что соединения нижеследующей формулы I могут воздействовать на вирусный белок 1, блокируя тем самым адгезию и декапсидацию вирусов, так что они могут быть использованы для профилактики и/или лечения заболеваний, вызванных пикорнавирусами.

Следовательно, первый аспект настоящего изобретения относится к соединению формулы I или его фармацевтически приемлемой соли или гидрату

I

где X представляет собой C или N;

Y представляет собой O или S;

W представляет собой C или N;

R₁, R₂, R₃ каждый независимо представляет собой водород или галоген;

R₄, R₅, R₆ каждый независимо представляет собой водород, галоген, C₁-C₈-неразветвленный или разветвленный алкил, C₁-C₈-неразветвленный или разветвленный алкокси, нитро, циано, -COOR₇, -CH₂-O-R₈, -CH₂COOR₇ или -COR₇;

каждый R₇ независимо представляет собой водород или C₁-C₈-неразветвленный или разветвленный алкил;

R₈ представляет собой водород или циано.

Второй аспект настоящего изобретения относится к способу получения соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли или гидрата.

Третий аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей, по крайней мере, одно соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат и один или более фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.

Четвертый аспект настоящего изобретения относится к применению соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли или гидрата для получения лекарственного средства для профилактики и/или лечения заболеваний, связанных с инфекциями пикорнавирусами.

Пятый аспект настоящего изобретения относится к способу профилактики и/или лечения заболеваний, связанных с инфекциями пикорнавирусами, где указанный способ включает введение профилактически и/или терапевтически эффективного количества, по крайней мере, одного соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрата пациенту, нуждающемуся в нем.

В одном осуществлении настоящего изобретения последнее относится к соединению формулы I или его фармацевтически приемлемой соли или гидрату

I

где X представляет собой C или N;

Y представляет собой O или S;

W представляет собой C или N;

R₁, R₂, R₃ каждый независимо представляет собой водород или галоген;

R₄, R₅, R₆ каждый независимо представляет собой водород, галоген, C₁-C₈-неразветвленный или разветвленный алкил, C₁-C₈-неразветвленный или разветвленный алкокси, нитро, циано, -COOR₇, -CH₂-O-R₈, -CH₂COOR₇ или -COR₇;

каждый R₇ независимо представляет собой водород или C₁-C₈-неразветвленный или разветвленный алкил;

R₈ представляет собой водород или циано.

Согласно одному предпочтительному осуществлению настоящего изобретения соединение формулы I представляет собой соединение формулы II или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат

II

где Y представляет собой O или S;

W представляет собой C или N;

R₁, R₂, R₃ каждый независимо представляет собой водород или галоген;

R₄, R₅, R₆ каждый независимо представляет собой водород, галоген, C₁-C₈-неразветвленный или разветвленный алкил, C₁-C₈-неразветвленный или разветвленный алкокси, нитро, циано, -COOR₇, -CH₂-O-R₈, -CH₂COOR₇ или -COR₇;

каждый R₇ независимо представляет собой водород или C₁-C₈-неразветвленный или разветвленный алкил;

R₈ представляет собой водород или циано.

Согласно другому предпочтительному осуществлению настоящего изобретения соединение формулы I представляет собой соединение формулы III или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат

III

где W представляет собой C или N;

R₁, R₂, R₃ каждый независимо представляет собой водород или галоген;

R₄, R₅, R₆ каждый независимо представляет собой водород, галоген, C₁-C₈-неразветвленный или разветвленный алкил, C₁-C₈-неразветвленный или разветвленный алкокси, нитро, циано, -COOR₇, -CH₂-O-R₈, -CH₂COOR₇, -COR₇;

каждый R₇ независимо представляет собой водород или C₁-C₈-неразветвленный или разветвленный алкил;

R₈ представляет собой водород или циано.

Согласно другому предпочтительному осуществлению настоящего изобретения соединение формулы I представляет собой соединение формулы IV или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат

IV

где R₁, R₂, R₃ каждый независимо представляет собой водород или галоген;

R₄, R₅, R₆ каждый независимо представляет собой водород, галоген, C₁-C₈-неразветвленный или разветвленный алкил, C₁-C₈-неразветвленный или разветвленный алкокси, нитро, циано, -COOR₇, -CH₂-O-R₈, -CH₂COOR₇, -COR₇;

каждый R₇ независимо представляет собой водород или C₁-C₈-неразветвленный или разветвленный алкил;

R₈ представляет собой водород или циано.

Согласно другому предпочтительному осуществлению настоящего изобретения соединение формулы I представляет собой соединение формулы V или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат

V

где R₄, R₅, R₆ каждый независимо представляет собой водород, галоген, C₁-C₈-неразветвленный или разветвленный алкил, C₁-C₈-неразветвленный или разветвленный алкокси, нитро, циано, -COOR₇, -CH₂-O-R₈, -CH₂COOR₇ или -COR₇;

каждый R₇ независимо представляет собой водород или C₁-C₈-неразветвленный или разветвленный алкил;

R₈ представляет собой водород или циано.

Согласно настоящему изобретению соединение формулы I настоящего изобретения выбрано из следующих соединений или их фармацевтически приемлемых солей или гидратов:

4-{4-[2-(4-бутилфенокси)этил]пиперазин-1-ил}-3,6-дихлорпиридазин,

4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}фенилуксусной кислоты этиловый эфир,

3,6-дихлор-4-{4-[2-(2,6-диметилфеноксиэтил)]пиперазин-1-ил}пиридазин,

4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}фенилуксусной кислоты метиловый эфир,

1-(4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}фенил)бутан-1-он,

4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил-пиперазин-1-ил)этокси}бензойной кислоты метиловый эфир,

1-(4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}фенил)гептан-1-он,

4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил-пиперазин-1-ил)этокси}бензойной кислоты пропиловый эфир,

4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил-пиперазин-1-ил)этокси}фенилацетонитрил,

4-{4-[2-(4-бромфенокси)этил]пиперазин-1-ил}-3,6-дихлорпиридазин,

3,6-дихлор-4-{4-[2-(4-нитрофенокси)этил]пиперазин-1-ил}пиридазин,

3,6-дихлор-4-{4-[2-(4-метоксифенокси)этилпиперазин-1-ил]}пиридазин,

4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил-пиперазин-1-ил)этокси}бензойной кислоты изопропиловый эфир,

4-{4-[2-(4-бутоксифенокси)этил]пиперазин-1-ил}-3,6-дихлорпиридазин,

3,6-дихлор-4-{4-[2-(2-нитрофенокси)этил]пиперазин-1-ил}пиридазин,

3,6-дихлор-4-[4-(2-п-метилфеноксиэтил)пиперазин-1-ил]пиридазин,

3,6-дихлор-4-[4-(2-о-метилфеноксиэтил)пиперидин-1-ил]пиридазин,

1-(4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}фенил)этанон,

3,6-дихлор-4-{4-[2-(2,4-динитрофенил)этил]пиперазин-1-ил}пиридазин,

4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}бензонитрил,

3-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}бензойной кислоты метиловый эфир,

4-{4-[2-(4-трет-бутилфенокси)этил]пиперазин-1-ил}-3,6-дихлорпиридазин,

3,6-дихлор-4-{4-[2-(4-этоксифенокси)этил]пиперазин-1-ил}пиридазин,

4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}бензальдегид,

4-{2-[1-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперидин-4-ил]этокси}бензонитрил,

1-(4-{2-[1-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперидин-4-ил]этокси}фенил)этанон,

3,6-дихлор-4-{4-[2-(4-нитрофенил)этил]пиперидин-1-ил}пиридазин,

4-{2-[1-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперидин-4-ил]этокси}бензойной кислоты метиловый эфир,

4-{2-[1-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперидин-4-ил]этокси}бензойной кислоты этиловый эфир,

3,6-дихлор-4-{4-[2-(4-метоксифенокси)этил]пиперидин-1-ил}пиридазин,

6-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}никотиновой кислоты этиловый эфир; и

6-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}никотиновой кислоты метиловый эфир.

Согласно настоящему изобретению соединения настоящего изобретения получают согласно следующей реакционной схеме.

Соединение формулы VI реагирует с газообразным хлором при 100-140°C в присутствии хлорида трехвалентного железа в качестве катализатора с образованием соединения формулы VII, соединение формулы VII реагирует с соединением формулы VIII в присутствии карбоната натрия при температуре в диапазоне от комнатной температуры до 170°C в хлороформе, ацетоне, дихлорметане, N,N-диметилформамиде, N,N-диметилацетамиде (предпочтительно в N,N-диметилацетамиде) как растворителе с образованием соединения формулы IX, затем соединение формулы IX реагирует с соединением формулы X по реакции конденсации при температуре в диапазоне от 0°C до комнатной температуры в органическом растворителе, таком как хлороформ, дихлорметан, тетрагидрофуран и так далее (предпочтительно в тетрагидрофуране) с получением соединения формулы I.

Таким образом, способ получения соединения формулы I настоящего изобретения включает следующие стадии:

(i) взаимодействие соединения формулы VI с газообразным хлором в присутствии хлорида трехвалентного железа как катализатора с образованием соединения формулы VII,

VI

где R₁, R₂, R₃ имеют те же определения, что и вышеприведенная формула I;

VII

где R₁, R₂, R₃ имеют те же определения, что и вышеприведенная формула I;

(ii) взаимодействие соединения формулы VII с соединением формулы VIII с получением соединения формулы IX,

VIII

где X имеет те же определения, что и вышеприведенная формула I;

IX

где R₁, R₂, R₃ и X имеют те же определения, что и вышеприведенная формула I;

(iii) взаимодействие соединения формулы IX с дихлорсульфоксидом, затем с замещенным фенольным соединением формулы X в реакции конденсации,

X

где R₄, R₅, R₆, W и Y имеют те же определения, что и вышеприведенная формула I, с получением соединения формулы I,

I

где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, X, W и Y имеют те же определения, что и вышеприведенная формула I;

(iv) необязательно, соединение формулы I превращают в его фармацевтически приемлемую соль обработкой подходящими фармацевтически приемлемой кислотой или основанием.

Согласно настоящему изобретению термин “фармацевтически приемлемая соль”, использованный в настоящем изобретении, включает кислые соли, образованные соединением настоящего изобретения с фармацевтически приемлемой неорганической кислотой или органической кислотой, или щелочные соли, образованные соединением настоящего изобретения с фармацевтически приемлемым основанием, где кислые соли включают названные, но не ограничены ими: гидрохлориды, гидробромиды, гидроиодиды, нитраты, сульфаты, бисульфаты, фосфаты, бифосфаты, ацетаты, пропионаты, бутираты, оксалаты, триметилацетаты, адипаты, альгинаты, лактаты, цитраты, тартраты, сукцинаты, малеаты, фумараты, пикраты, аспартаты, глюконаты, бензоаты, метансульфонаты, этансульфонаты, бензолсульфонаты, п-метилбензолсульфонаты и памоаты; и щелочные соли включают названные, но не ограничены ими: аммонийные соли, соли щелочных металлов, такие как натриевые и калиевые соли, соли щелочно-земельных металлов, такие как кальциевые и магниевые соли, органические соли, такие как дициклогексиламиновые и N-метил-D-глюкозаминовые соли, а также аминокислотные соли, такие как аргининовые или лизиновые соли.

Согласно настоящему изобретению фармацевтическая композиция настоящего изобретения включает эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или гидрата и один или более подходящий фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. Фармацевтически приемлемые носители, пригодные для использования в фармацевтической композиции настоящего изобретения, включают названные, но не ограничены ими: иониты, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, сывороточный белок, такой как человеческий сывороточный белок, буферное вещество, такое как фосфат, глицерин, сорбиновую кислоту, сорбат калия, смесь частичных глицеридов насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли или электролиты, такие как протаминсульфат, динатрийгидрофосфат, калийгидрофосфат, хлорид натрия, соль цинка, коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, целлюлозные вещества, полиэтиленгликоль, натрийкарбоксиметилцеллюлозу, полиакрилат, пчелиный воск, блок-полимер полиэтилен-со-полиоксипропилен и ланолин.

Соединения настоящего изобретения представляют собой группу сильных ингибиторов пикорнавирусов, отличающуюся тем, что могут не только предотвращать, но и излечивать заболевания, вызванные пикорнавирусами. Указанные пикорнавирусы представляют собой риновирусы и энтеровирусы. Заболевания, вызываемые пикорнавирусами, в настоящем изобретении включают названные, но не ограничены ими: респираторные заболевания, везикулярные стоматиты, менингит/энцефалит, полиомиелит, сердечно-сосудистые заболевания, геморрагический конъюнктивит, гепатит и так далее.

Указанные респираторные заболевания включают названные, но не ограничены ими: простуду (летнюю простуду), фарингит, тонзиллит и круп. Данные заболевания обычно вызываются риновирусами семейств пикорнавирусов.

Согласно настоящему изобретению фармацевтическая композиция настоящего изобретения может быть использована для введения любым из следующих способов: пероральным введением, пульверизационной ингаляцией, ректальным введением, назальным введением, трансбуккальным введением, вагинальным введением, местным введением, парентеральным введением, таким как подкожная, внутривенная, внутримышечная, внутрибрюшинная, подоболочечная, внутрижелудочковая, внутригрудинная и внутричерепная инъекция или инфузия, или введением через эксплантированный резервуар, предпочтительно пероральным введением, внутрибрюшинным или внутривенным введением. Кроме того, в целях эффективного лечения соединениями настоящего изобретения заболеваний центральной нервной системы предпочтительным является внутрижелудочковое введение для преодоления возможной низкой скорости проникновения через гемоэнцефалический барьер.

При пероральном введении соединение настоящего изобретения может быть обработано для формирования любой подходящей лекарственной формы для перорального введения, которая включает названные, но не ограничена ими: таблетки, капсулы, водные растворы или водные суспензии; где носители, использованные в таблетках, обычно включают лактозу и кукурузный крахмал, кроме того, смазывающие вещества, такие как стеарат магния; разбавители, использованные в капсулах, обычно включают лактозу и сухой кукурузный крахмал; и в случае водных суспензий активные компоненты обычно смешивают с подходящими эмульгаторами и суспендирующими агентами. Если необходимо, вышеуказанные пероральные лекарственные формы могут далее включать подсластители, ароматизаторы или красители.

При ректальном введении соединение настоящего изобретения может быть обработано для формирования суппозитория, который получают смешением лекарственного средства с подходящим не вызывающим раздражения эксципиентом, где эксципиент присутствует в твердой форме при комнатной температуре и плавится при ректальной температуре с тем, чтобы высвободить лекарственное средство. Данный эксципиент включает какао-масло, пчелиный воск и полиэтиленгликоль.

При местном введении, особенно для лечения заболеваний пораженных поверхностей или органов, таких как глазные, кожные заболевания или неврогенное поражение нижнего отдела кишечника, которые могут быть легко доступны для местного введения, на основе соединения настоящего изобретения могут быть получены различные лекарственные формы, как необходимо для различных пораженных поверхностей или органов, которые подробно описаны ниже.

При местном введении на глаза соединение настоящего изобретения может быть обработано для формирования тонкодисперсной суспензии или раствора, где использованный носитель представляет собой изотонический стерильный физиологический раствор с определенным pH, и к нему может быть добавлен или не добавлен консервант, такой как хлорбензилалкоксид. Кроме того, в случае применения на глаза соединение может образовывать мазь, такую как вазелиновая мазь.

При местном введении на кожу соединение настоящего изобретения может быть обработано для формирования подходящих мазей, лосьонов или кремов, где активный компонент суспендирован или растворен в одном или нескольких носителях. Здесь носители, использованные в мазях, включают названные, но не ограничены ими: минеральное масло, жидкий парафин, белый вазелин, пропиленгликоль, полиоксиэтилен, полиоксипропилен, эмульгированный воск и воду; носители, использованные в лосьонах или кремах, включают названные, но не ограничены ими: минеральное масло, сорбитанмоностеарат, твин 60, цетиловый сложноэфирный воск, гексадеценол, 2-октилдодеканол, бензиловый спирт и воду.

При местном введении в нижний отдел кишечника соединение настоящего изобретения может быть обработано для формирования вышеуказанного ректального суппозитория или подходящих клизм и, кроме того, также могут быть использованы местные трансдермальные пластыри.

Соединение настоящего изобретения также может быть использовано для введения в форме стерильных инъекций, включающих стерильные водные инъекции или жидкости, содержащие суспензию масла, или стерильные растворы для инъекций, где использованные носители и растворители включают воду, раствор Рингера и изотонический хлорид натрия. Кроме того, в качестве растворителя или суспендирующей среды также может быть использовано стерилизованное нелетучее масло, такое как моноглицериды или диглицериды.

Кроме того, необходимо принять во внимание, что конкретные дозировка и применение в случае разных пациентов зависят от многих факторов, таких как возраст, масса тела, пол, состояние здоровья, состояние питания, действующая сила соединения, время введения, скорость метаболизма, тяжесть заболевания и субъективное мнение врача при постановке диагноза и лечении. Предпочтительная дозировка составляет 0,01-100 мг/кг массы тела/день.

Краткое описание чертежей

Фиг.1 и фиг.2 отдельно иллюстрируют активность соединения настоящего изобретения против пикорнавирусов в in vitro моделях в условиях профилактического и терапевтического введения.

Фиг.3 иллюстрирует результаты ex vivo противориновирусного уровня соединения примера 31 настоящего изобретения.

Конкретные модели осуществления изобретения

Следующие примеры представляют собой предпочтительные осуществления, демонстрирующие настоящее изобретение, но никоим образом не предполагается, что они ограничивают настоящее изобретение.

Температуры плавления соединений измеряли, используя детектор температуры плавления RY-1, причем измеряли неисправленную температуру. Спектры ¹H-ЯМР измеряли, используя ядерно-магнитно-резонансный спектрометр JNM-ECA-400 (Japan Electronic, Inc.). Масс-спектры измеряли, используя масс-спектрометр VG-ZabSpec. Все использованные в реакциях растворители предварительно обрабатывали по стандартным методикам, если не оговорено обратное.

Исходные материалы, использованные в реакциях, за исключением 3,6-дихлорпиридазина, который был приобретен у Nanjing Tianzunzezhong Chemical Agents Company, представляли собой стандартные реактивы и приобретались у общеизвестных поставщиков химических реактивов.

Пример 1: 4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}фенилуксусной кислоты метиловый эфир

1.1. 3,4,6-трихлорпиридазин

В сухую трехгорлую колбу, снабженную обратным холодильником и трубкой для пропускания газа (соединенной с предохранительной склянкой), помещали 3,6-дихлорпиридазина (Nanjingtianzunzezhong Chemical Agents) и безводный трихлорид алюминия, реагенты нагревали, используя внешний источник тепла, до 120°C до расплавления, пропускали газообразный Cl₂ при этой температуре в течение 3 часов, затем реакцию останавливали, охлаждали до комнатной температуры, добавляли трихлорметан для растворения продукта, трихлорметановый раствор дважды промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, водную фазу дважды экстрагировали трихлорметаном, все трихлорметановые растворы объединяли и высушивали над безводным сульфатом натрия, затем после удаления трихлорметана выпариванием в вакууме использовали перегонку при пониженном давлении и собирали фракцию, кипящую при 110-114°C/8 мм Hg или 128-129°C/18 мм Hg, застывавшую в белое твердое вещество в колбе-приемнике. Выход: 55%, т.пл. 57-58°C.

1.2. 2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этанол

В круглодонную колбу объемом 50 мл помещали 9,18 г (0,05 моль) 3,4,6-трихлорпиридазина, 5,30 г (0,05 моль) безводного карбоната натрия и 20 мл N,N-диметилацетамида (DMA), реагенты перемешивали при комнатной температуре, затем медленно по каплям прибавляли 6,54 г (0,05 моль) 2-(пиперазин-1-ил)этанола (растворенного в 10 мл DMA), смесь перемешивали в течение ночи, фильтровали на следующий день. Добавляли 100 мл дистиллированной воды к оставшейся на фильтре массе и перемешивали, затем снова фильтровали и получали 10,20 г белого твердого вещества, выход: 73,6%, т.пл. 139-141°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) ч/млн: 2,57 (уш., 1H), 2,66~2,68 (т, 2H, J=5,12 Гц), 2,73~2,76 (т, 4H, J=4,76 Гц), 3,36~3,38 (т, 4H, J=4,52 Гц), 3,68~3,71 (т, 2H, J=5,04 Гц), 6,88 (с, 1H). 13C-ЯМР(400 МГЦ, ДМОС-д₆) ч/млн: 155,14, 149,43, 148,70, 116,64, 60,00, 58,49, 52,44, 48,90.

EI-MC m/e: 276,1 [M⁺, 100], 280 {[M+4]⁺, 100}, 245,0, 207,1, 175,1, 100,1, 70,1.

1.3. 4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}фенилуксусной кислоты метиловый эфир

В сухую трехгорлую колбу объемом 50 мл помещали 1,1085 г (0,004 моль) полученного авторами 2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этанола, 0,54 г (0,003 моль) этилового эфира п-гидроксибензойной кислоты и 1,224 г трифенилфосфина и вливали в колбу 15 мл безводного тетрагидрофурана при охлаждении ледяной баней и в защитной атмосфере газообразного азота, затем по каплям в колбу прибавляли 0,7 мл диэтилазодиформиата (DEAD), растворенного в 5 мл безводного тетрагидрофурана. После прибавления по каплям температуру повышали до комнатной температуры, и взбалтывание продолжали в течение ночи. На следующий день растворитель удаляли, используя роторный испаритель, остаток выливали в 100 мл воды, продукт экстрагировали три раза, используя 150 мл дихлорметана, экстракционные растворы объединяли, сушили над безводным Na₂SO₄, концентрировали и разделяли, используя колоночную хроматографию (элюент - петролейный эфир:этилацетат:метанол=10:1:0,5), и получали 0,56 г 4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}фенилуксусной кислоты метилового эфира в виде белого твердого вещества. Выход: 32,9%, т.пл. 84-86°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) ч/млн: 2,64~2,67 (м, 4H), 2,75~2,78 (т, 2H, J=5,6 Гц), 3,32~3,34 (м, 4H), 3,60 (c, 5H), 4,08~4,11 (т, 2H, J=5,6 Гц), 6,89~6,91 (д, 2H, J=8,7 Гц), 7,16~7,18 (д, 2H, J=8,7 Гц), 7,40 (c, 1H).

EI-MC m/e: 424[М⁺], 259, 245, 202, 175, 70,0.

Тем же способом, что и использованный в 1.3, получали следующие соединения, используя различные реагенты, то есть различные замещенные фенольные соединения вместо этилового эфира п-гидроксибензойной кислоты, использованного в 1.3.

Пример 2: 4-{4-[2-(4-бутилфенокси)этил]пиперазин-1-ил}-3,6-дихлорпиридазин.

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли 4-бутилфенол. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 35%, т.пл. 83-84°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) ч/млн: 0,90~0,94 (т, 3H, J=7,3 Гц), 1,33~1,37 (м, 2H), 1,53~1,58 (м, 2H), 2,53~2,57 (т, 2H, J=7,8 Гц), 2,78~2,80 (т, 4H, J=4,5 Гц), 2,88~2,91 (т, 2H, J=5,3 Гц), 3,35~3,37 (т, 4H, J=4,5 Гц), 4,11~4,14(т, 2H, J=5,3 Гц), 6,85 (c, 1H), 6,82~6,84 (дд, 2H, J=8,4 Гц), 7,09~7,11 (дд, 2H, J=8,7 Гц).

EI-MC m/e: 408,0[М⁺], 259,0, 245,0, 201,9, 175,0, 70,0.

Пример 3: 4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}фенилуксусной кислоты этиловый эфир

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли этиловый эфир 4-гидроксибензойной кислоты. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 32%, т.пл. 128-130°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) ч/млн: 1,29~1,32 (т, 3H, J=7 Гц), 2,65~2,68 (т, 4H, J=4,8 Гц), 2,79~2,82 (т, 2H, J=5,6 Гц), 3,32~3,34 (т, 4H, J=5 Гц), 4,19~4,22 (т, 2H, J=5,6 Гц), 4,25~4,30 (кв., 2H, J=7,3 Гц), 7,06~7,08 (дд, 2H, J=8,7 Гц), 7,89~7,92 (дд, 2H, J=8,7 Гц).

EI-MC m/e: 424[М⁺], 259,0, 245,0, 201,9, 175,0, 70,0.

Пример 4: 3,6-дихлор-4-{4-[2-(2,6-диметилфеноксиэтил)]пиперазин-1-ил}пиридазин

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли 2,6-диметилфенол. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 38,5%, т.пл. 94-96°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃): ч/млн: 2,29 (c, 6H), 2,83 (уш.c, 4H), 2,90 (уш.c, 2H), 3,41 (уш.c, 4H, J=4,5 Гц), 2,88~2,91 (т, 2H, J=5,3 Гц), 3,35~3,37 (т, 4H), 3,94 (уш.c, 2H), 6,89 (c, 1H), 6,91-6,95 (м, 1H), 7,01~7,03 (д, 2H, J=7,3 Гц).

EI-MC m/e: 380[М⁺], 258,9, 247,0, 201,9, 175,0 91,0, 70,0.

Пример 5: соединение mcl040720 1-(4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}фенил)бутан-1-он.

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли 1-(4-гидроксифенил)бутан-1-он. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 41,5%, т.пл. 140-141°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) ч/млн: 0,98~1,02 (т, 3H, J=7,4 Гц), 1,71~1,79 (м, 2H), 2,80~2,81 (м, 4H), 2,88~2,94 (м, 4H), 3,36~3,38 (м, 4H), 4,20~4,22 (т, 2H, J=5,3 Гц), 6,86 (c, 1H), 6,93~6,96 (дд, 2H, J=8,7 Гц), 7,93~7,96 (дд, 2H, J=8,7 Гц).

EI-MC m/e: 422,0 [М⁺], 258,9, 244,9, 201,9, 175,0, 121,0, 70,0.

Пример 6: 4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил-пиперазин-1-ил)этокси}бензойной кислоты метиловый эфир

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли метиловый эфир 4-гидроксибензойной кислоты. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 45%, т.пл. 138-140°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) ч/млн: 1,29~1,32 (т, 3H, J=7 Гц), 2,65~2,68 (т, 4H, J=4,8 Гц), 2,79~2,82 (т, 2H, J=5,6 Гц), 3,32~3,34 (т, 4H, J=5 Гц), 4,19~4,22 (т, 2H, J=5,6 Гц), 4,25~4,30 (кв., 2H, J=7,3 Гц), 7,06~7,08 (дд, 2H, J=9 Гц), 7,40 (c, 1H), 7,90-7,92 (дд, 2H, J=9 Гц).

EI-MC m/e: 410 [М⁺], 379, 259,0, 247,0, 175,1, 202,0, 92,0, 70,1.

Пример 7: 1-(4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}фенил)

гептан-1-он.

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли 1-(4-гидроксифенил)гептан-1-он. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 43,5%, т.пл. 113-115°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃): ч/млн: 0,87~0,91 (т, 3H, J=6,7 Гц), 1,29~1,40 (м, 6H), 1,68~1,76 (м, 2H), 2,89~2,93 (м, 8H), 3,36~3,38 (м, 4H), 4,20~4,22 (т, 2H, J=5,32 Гц), 6,86 (c, 1H), 6,94~6,96 (дд, 2H, J=9 Гц), 7,93~7,96 (дд, 2H, J=9 Гц).

EI-MC m/e: 464,0[М⁺], 258,9, 244,9, 201,8, 175,0, 70,0.

Пример 8: 4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил-пиперазин-1-ил)этокси]бензойной кислоты пропиловый эфир

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли пропиловый эфир 4-гидроксибензойной кислоты. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 47%, т.пл. 139-141°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) ч/млн: 0,94~0,98 (т, 3H, J=7,3 Гц), 1,68-1,73 (м, 2H), 2,65~2,68 (т, 4H, J=4,8 Гц), 2,79~2,82 (т, 2H, J=5,6 Гц), 3,33~3,35 (т, 4H, J=5 Гц), 4,17~4,22 (м, 4Н), 7,06~7,08 (дд, 2H, J=9 Гц), 7,40 (c, 1H), 7,90~7,92 (дд, 2H, J=9 Гц).

EI-MC m/e: 438,1 [М⁺], 379, 259,0, 245,0, 175,1, 202,0, 70,1.

Пример 9: 4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил-пиперазин-1-ил)этокси]

фенилацетонитрил

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли 4-гидроксифенилацетонитрил. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 45,5%, т.пл. 137-139°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDC1₃) ч/млн: 2,78-2,8l (т, 4H, J=4,5 Гц), 2,89~2,92 (т, 2H, J=5,3 Гц), 3,36~3,38 (т, 4H, J=4,8 Гц), 3,70 (c, 2H), 4,13~4,16 (т, 2H, J=5,3 Гц), 6,86 (c, 1H), 6,91~6,93 (м, 2H), 7,24~7,26 (м, 2H).

EI-MC m/e: 391,0 [М⁺], 259,0, 247,0, 201,9, 175,1, 77,0, 70,0.

Пример 10: 4-{4-[2-(4-бромфенокси)этил]пиперазин-1-ил}-3,6-дихлорпиридазин

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли 4-бромфенол. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 43%, т.пл. 124-126°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) ч/млн: 2,80 (уш.c, 4H), 2,91 (уш.c, 2H), 3,37 (уш.c, 4H), 4,12 (уш.c, 2H), 6,78~6,82 (м, 2H), 6,86 (c, 1H), 7,37~7,4l (м, 2H).

EI-MC m/e: 431,9[М⁺], 259,0, 245,0, 201,9, 175,0, 91,0, 70,1.

Пример 11: 3,6-дихлор-4-{4-[2-(4-нитрофенокси)этил]пиперазин-1-ил}пиридазин

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли 4-нитрофенол. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 41%, т.пл. 128-129°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) ч/млн: 2,66~2,68 (м, 4H), 2,81~2,83 (т, 2H, J=5,6 Гц), 3,33~3,35 (м, 4H), 4,27~4,30 (т, 2H, J=5,6 Гц), 7,17~7,20 (д, 2H, J=9 Гц), 7,40 (c, 1H), 8,20~8,22 (д, 2H, J=9 Гц).

EI-MC m/e: 397,0 [М⁺], 259,0, 245,0, 201,9, 175,0, 70,0.

Пример 12: 3,6-дихлор-4-{4-[2-(4-метоксифенокси)этилпиперазин-1-ил]}пиридазин

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли 4-метоксифенол. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 42,5%, т.пл. 138-140°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) ч/млн: 2,79 (уш.c, 4H), 2,87~2,90 (т, 2H, J=5,3 Гц), 3,36~3,38 (м, 4H), 3,78 (c, 3H), 4,09~4,11 (т, 2H, J=5,3 Гц), 6,83~6,89 (м, 5H).

EI-MC m/e: 382,1 [М⁺], 259,0, 245,0, 202,0, 175,1, 70,1.

Пример 13: 4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)-пиперазин-1-ил]этокси}бензойной кислоты изопропиловый эфир

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли изопропиловый эфир 4-гидроксибензойной кислоты. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 52%, т.пл. 135-137°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) ч/млн: 1,29-1,31 (д, 6H, J=6,2 Гц) 2,65~2,68 (м, 4H), 2,79~2,81 (т, 2H, J=5,6 Гц), 3,33~3,34 (м, 4H), 4,18~4,2l (т, 2H, J=5,6 Гц), 5,06~5,13 (м, 1H), 7,05~7,07 (дд, 2H, J=9 Гц), 7,40 (c, 1H), 7,90~7,92 (дд, 2H, J=9 Гц).

EI-MC m/e: 381 [М⁺], 346,0, 258,0, 229,9, 175,9, 124,0, 109,0.

Пример 14: 4-{4-[2-(4-бутоксифенокси)этил]пиперазин-1-ил}-3,6-дихлорпиридазин.

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли 4-бутоксифенол. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 40,5%, т.пл. 135-136°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) ч/млн: 0,94~0,99 (т, 3H, J=7,7 Гц), 1,47~1,51 (м, 2H), 1,73~1,76 (м, 2H), 2,83 (уш.c, 4H), 2,90 (уш.c, 2H), 3,39 (уш.c, 4H), 3,90~3,93 (т, 2H, J=6,4 Гц), 4,11~4,12 (т, 2H, J=5 Гц), 6,84~6,85 (м, 4H), 6,86 (c, 1H).

EI-MC m/e: 424,1 [М⁺], 259,0, 245,0, 201,9, 175,1, 110,0, 70,1.

Пример 15: 3,6-дихлор-4-{4-[2-(2-нитрофенокси)этил]пиперазин-1-ил}пиридазин.

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли 2-нитрофенол. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 46,5%, т.пл. 125-126°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) ч/млн: 2,78~2,81 (т, 4H, J=4,5 Гц), 2,89~2,92 (т, 2H, J=5,3 Гц), 3,36~3,38 (т, 4H, J=4,8 Гц), 3,70 (c, 2H), 4,13~4,16 (т, 2H, J=5,3 Гц), 6,86 (c, 1H), 6,91~6,93 (м, 2H), 7,24~7,26 (м, 2H).

EI-MC m/e: 391,0 [М⁺], 259,0, 247,0, 201,9, 175,1, 77,0, 70,0.

Пример 16: 3,6-дихлор-4-[4-(2-п-метилфеноксиэтил)пиперазин-1-ил]пиридазин.

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли 4-метилфенол. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 42%, т.пл. 95-96°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) ч/млн: 2,23 (c, 3H), 2,64~2,66 (м, 4H), 2,74~2,77 (т, 2H, J=5,7 Гц), 3,32-3,34 (м, 4H), 4,05~4,08 (т, 2H, J=5,7 Гц), 6,83~6,85 (дд, 2H, J=8,4 Гц), 7,09~7,11 (дд, 2H, J=8,4 Гц), 7,40 (c, 1H).

EI-MC m/e: 438,2 [М⁺], 379,1, 259,1, 245,1, 175,1, 70,1.

Пример 17: 3,6-дихлор-4-[4-(2-о-метилфеноксиэтил)пиперидин-1-ил]пиридазин

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли 2-метилфенол. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 48,5%, т.пл. 106-108°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) ч/млн: 2,13 (c, 3H), 2,67~2,69 (т, 4H, J=4,5 Гц), 2,79~2,8l (т, 2H, J=5,6 Гц), 3,31~3,33 (т, 4H, J=4,5 Гц), 4,07~4,10 (т, 2H, J=5,6 Гц), 6,80~6,84 (м, 1H), 6,89~6,91 (д, 1H, J=8,1 Гц), 7,10~7,14 (м, 2H), 7,29 (c, 1H).

EI-MC m/e: 366,1 [М⁺], 259,0, 245,0, 202,0, 175,1, 91,0, 70,0.

Пример 18: 1-(4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}

фенил)этанон.

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли 1-(4-гидроксифенил)этанон. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 47,5%, т.пл. 115-117°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) ч/млн: 2,50~2,52 (т, 3H, J=5,6 Гц), 2,65~2,68 (м, 4H), 2,79~2,82 (т, 2H, J=5,9 Гц), 3,33~3,35 (м, 4H), 4,20~4,23 (т, 2H, J=5,9 Гц), 7,06~7,08 (дд, 2H, J=9 Гц), 7,4 (c, 1H), 7,92~7,94 (дд, 2H, J=8,7 Гц).

EI-MC m/e: 394,0[М⁺], 259,0, 247,0, 201,9, 175,0, 70,0.

Пример 19: 3,6-дихлор-4-{4-[2-(2,4-динитрофенил)этил]пиперазин-1-ил}пиридазин.

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли 2,4-динитрофенол. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 41,5%, т.пл. 145-146°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) ч/млн: 2,84 (уш.c, 4H), 3,01 (уш.c, 4H), 4,40 (уш.c, 4H), 6,87 (c, 1H), 7,23~7,25 (д, 1H, J=9,2 Гц), 8,44~8,47 (дд, 2H, J₁=9,2 Гц, J₂=2,8 Гц), 8,77-8,78 (д, 1H, J=2,5 Гц).

EI-MC m/e: 443,1 [М⁺], 427,1, 338,3, 245,1, 177,1, 95,1, 83,1, 68,1.

Пример 20: 4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}бензонитрил.

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли 4-гидроксибензонитрил. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 43,5%, т.пл. 175-177°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) ч/млн: 2,64~2,67 (м, 4H), 2,78~2,81 (т, 2H, J=5,6 Гц), 3,32~3,35 (м, 4H), 4,20~4,23 (т, 2H, J=5,6 Гц), 7,13~7,15 (дд, 2H, J=9 Гц), 7,40 (c, 1H), 7,76~7,79 (дд, 2H, J=9 Гц).

EI-MC m/e: 377 [М⁺], 245, 230, 201,9, 175,1, 119,0, 70,0.

Пример 21: 3-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}бензойной кислоты метиловый эфир

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли метиловый эфир 3-гидроксибензойной кислоты. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 52,5%, т.пл. 105-107°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) ч/млн: 2,13 (c, 3H), 2,80~2,82 (т, 4H, J=4,5 Гц), 2,91~2,94 (т, 2H, J=5,3 Гц), 3,36~3,38 (т, 4H, J=4,5 Гц), 3,92 (c, 3H), 4,18~4,21 (т, 2H, J=5,6 Гц), 6,86 (c, 1H), 7,11~7,14 (м, 1H), 7,34~7,38 (т, 1H, J=7,9 Гц), 7,58~7,59 (м, 1H), 7,64~7,66 (д, 1H, J=7,8 Гц).

EI-MC m/e: 409,9 [М⁺], 378,9, 244,9, 201,9, 175,0, 120,9, 77,0, 70,0.

Пример 22: 4-{4-[2-(4-трет-бутилфенокси)этил]пиперазин-1-ил}-3,6-

дихлорпиридазин

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли 4-трет-бутилфенол. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 49%, т.пл. 97-99°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) ч/млн: 1,30 (c, 9H), 2,78-2,80 (м, 4H), 2,88~2,9l (т, 2H, J=5,6 Гц), 3,35~3,37 (м, 4H), 4,12~4,15 (т, 2H, J=5,6 Гц), 6,85~6,87 (дд, 2H, J=9 Гц), 6,86 (c, 1H), 7,30~7,32 (дд, 2H, J=9 Гц).

EI-MC m/e: 408,0 [М⁺], 244,9, 259,0, 175,0, 91,0, 70,0.

Пример 23: 3,6-дихлор-4-{4-[2-(4-этоксифенокси)этил]пиперазин-1-ил}пиридазин.

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли 4-этоксифенол. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 54,5%, т.пл. 93-95°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) ч/млн: 1,38~1,42 (т, 3H, J=7 Гц), 3,07 (уш.c, 6H), 3,53 (уш.c, 4H), 3,96~4,01 (т, 2H, J=7 Гц), 6,85~6,92 (м, 5H).

EI-MC m/e: 396,1 [М⁺], 259,0, 245,0, 202,0, 175,1, 109,0, 70,1.

Пример 24: 4-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}бензальдегид.

Данное соединение получали способом 1.3, где вместо использованного в нем фенола применяли 4-гидроксибензальдегид. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 52,5%, т.пл. 110-112°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) ч/млн: 2,81 (уш.c, 4H), 2,95 (уш.c, 2H), 3,38 (уш.c, 4Н), 4,24 (уш.c, 2H), 7,02~7,04 (дд, 2H, J=8,7 Гц), 7,85~7,87 (дд, 2H, J=8,7 Гц), 9,9 (c, 1H).

EI-MC m/e: 380,0[М⁺], 245,0, 229,9, 201,9, 175,0, 70,0.

Пример 25: 4-{2-[1-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперидин-4-ил]этокси}бензонитрил

25.1: 2-[1-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперидин-4-ил]этанол

В круглодонную колбу объемом 50 мл помещали 9,18 г (0,05 моль) 3,4,6-трихлорпиридазина, 5,30 г (0,05 моль) безводного карбоната натрия и 20 мл N,N-диметилацетамида (DMA), реагенты перемешивали при комнатной температуре, затем медленно по каплям прибавляли 6,54 г (0,05 моль) 2-(пиперидин-4-ил)этанола (растворенного в 10 мл DMA), после прибавления по каплям смесь взбалтывали в течение ночи, на следующий день реакционную жидкость выливали в 100 мл дистиллированной воды, продукт экстрагировали трижды, используя дихлорметан в суммарном объеме 200 мл, экстракционные растворы объединяли, высушивали над безводным Na₂SO₄, концентрировали и разделяли, используя колоночную хроматографию (элюент - петролейный эфир:ацетон=10:3), получали 6 г 2-[1-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперидин-4-ил]этанола, выход: 43,6%.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) ч/млн: 1,21~1,31 (м, 2H), 1,39~1,43 (м, 2H), 1,59~1,67 (м, 1H), 1,76-1,79 (дшир.c, 2H), 2,82~2,88 (дт, 2H, J=11 Гц), 3,45~3,49 (м, 2H), 3,70-3,73 (дшир.c, 2H), 4,40-4,42 (т, 1H, J=5 Гц), 7,35 (c, 1H).

25.2: 4-{2-[1-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперидин-4-ил]этокси}бензонитрил

В сухую трехгорлую колбу объемом 50 мл помещали 0,554 г (0,002 моль) полученного авторами 2-[1-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперидин-4-ил]этанола, 0,20 г (0,002 моль) п-гидроксибензонитрила, 0,612 г трифенилфосфина, и вливали в колбу 15 мл безводного тетрагидрофурана при охлаждении ледяной баней и в защитной атмосфере газообразного азота, затем по каплям в колбу прибавляли 0,35 мл диэтилазодиформиата (DEAD), растворенного в 5 мл безводного тетрагидрофурана. После прибавления по каплям температуру повышали до комнатной температуры, и взбалтывание продолжали в течение ночи. На следующий день растворитель удаляли, используя роторный испаритель, остаток выливали в 100 мл воды, продукт экстрагировали три раза, используя в сумме 150 мл дихлорметана, экстракционные растворы объединяли, сушили над безводным Na₂SO₄, концентрировали и разделяли, используя колоночную хроматографию (элюент - петролейный эфир:этилацетат:метанол=10:1:0,5), и получали 0,26 г 4-{2-[1-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперидин-4-ил]этокси}бензонитрила в виде белого твердого вещества. Выход: 34,0%, т.пл. 138-139°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) ч/млн: 1,49~1,55 (м, 2H), 1,83~1,86 (м, 3H), 1,91~1,94 (дшир.c, 2H), 2,82~2,87 (дт, 2H, J=11,4 Гц), 3,76~3,79 (дшир.c, 2H), 4,08~4,11 (т, 2H, J=5,8 Гц), 6,85 (c, 1H), 6,94~6,96 (д, 2H, J=8,8 Гц), 7,58~7,61 (д, 2H, J=8,8 Гц), 7,40 (c, 1H).

EI-MC m/e: 376 [М⁺], 258, 244, 228, 176, 119, 112.

Пример 26: 1-(4-{2-[1-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперидин-4-ил]этокси}

фенил)этанон

Данное соединение получали способом 25.2, где вместо использованного в нем фенола применяли 1-(4-гидроксифенил)этанон. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 42,5%, т.пл. 99-100°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) ч/млн: 1,49~1,52 (м, 2H), 1,84~1,86 (м, 3H), 1,92~1,95 (м, 2H), 2,57 (c, 3H), 2,81~2,88 (м, 2H), 3,76~3,79 (м, 2H), 4,11~4,14 (т, 2H, J=5,9 Гц), 6,85 (c, 1H), 6,92~6,95 (м, 2H), 7,93~7,96 (м, 2H).

EI-MC m/e: 393,0 [М⁺], 378,0, 358,0, 258,0, 227,9, 201,9, 175,9, 121,0, 77,0.

Пример 27: соединение 3,6-дихлор-4-{4-[2-(4-нитрофенил)этил]пиперидин-1-ил}

пиридазин

Данное соединение получали способом 25.2, где вместо использованного в нем фенола применяли 4-нитрофенол. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 30,5%, т.пл. 162-164°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) ч/млн: 1,47~1,56 (м, 2H), 1,82~1,94 (м, 5H), 2,81~2,87 (м, 2H), 3,76~3,79 (м, 2H), 4,11~4,14 (т, 2H, J=5,9 Гц), 6,85 (c, 1H), 6,93~6,97 (м, 2H), 8,18~8,22 (м, 2H).

EI-MC m/e: 396 [М⁺], 258, 228, 244, 176, 109, 67.

Пример 28: 4-{2-[1-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперидин-4-ил]этокси}бензойной кислоты метиловый эфир

Данное соединение получали способом 25.2, где вместо использованного в нем фенола применяли метиловый эфир 4-гидроксибензойной кислоты. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 36,5%, т.пл. 115-117°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) ч/млн: 1,32~1,40 (м, 2H), 1,75 (уш.c, 3H), 1,83~1,86 (д, 2H, J=12,3 Гц), 2,85~2,91 (м, 2H), 3,72~3,75 (д, 2H, J=12,3 Гц), 4,12~4,15 (т, 2H, J=6,2 Гц), 7,05~7,07 (дд, 2H, J=8,7 Гц), 7,36 (c, 1H), 7,90~7,92 (дд, 2H, J=8,7 Гц).

EI-MC m/e: 409,0[М⁺], 374,1, 258,0, 228,0, 175,9, 121,0.

Пример 29: 4-{2-[1-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперидин-4-ил]этокси}бензойной кислоты этиловый эфир

Данное соединение получали способом 25.2, где вместо использованного в нем фенола применяли этиловый эфир 4-гидроксибензойной кислоты. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 26,5%, т.пл. 153-155°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-д₆) ч/млн: 1,16~1,19 (т, 3H, J=7 Гц), 1,23~1,40 (м, 3H), 1,75~1,76 (уш.c, 2H), 1,83~1,86 (д, 2H, J=12,3 Гц), 2,85~2,91 (дт, 2H, J=12,3 Гц), 3,72~3,76 (д, 2H, J=12,3 Гц), 4,12~4,15 (т, 2H, J=6,2 Гц), 4,24~4,30 (кв., 2H, J=7 Гц), 7,05~7,07 (дд, 2H, J=9 Гц), 7,36 (c, 1H), 7,90~7,92 (дд, 2H, J=9 Гц).

EI-MC m/e: 423 [М⁺], 379,0, 351,0, 257,9, 227,9, 175,9, 120,9.

Пример 30: 3,6-дихлор-4-{4-[2-(4-метоксифенокси)этил]пиперидин-1-ил}пиридазин

Данное соединение получали способом 25.2, где вместо использованного в нем фенола применяли 4-метоксифенол. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 37,5%, т.пл. 119-120°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) ч/млн: 1,44~1,53 (м, 2H), 1,77~1,82 (м, 3H), 1,91~1,94 (д, 2H, J=12,3 Гц), 2,81~2,87 (м, 2H), 3,75~3,77 (д, 2H, J=9,8 Гц), 3,77 (c, 3H), 3,98~4,01 (т, 2H, J=5,6 Гц), 6,83~6,85 (м, 5H).

EI-MC m/e: 381 [М⁺], 346, 258, 229,9, 201,9, 175,9, 124,0, 109,0.

Пример 31: соединение mcl040709 6-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}никотиновой кислоты этиловый эфир

31.1. Этиловый эфир 6-гидроксиникотиновой кислоты

В трехгорлую колбу объемом 100 мл помещали 0,84 г (0,006 моль) 6-гидроксиникотиновой кислоты, 30 мл безводного этанола, медленно по каплям прибавляли 3 мл концентрированной серной кислоты, кипятили в течение ночи, выпаривали в вакууме для удаления избытка этанола, остаток выливали в воду, продукт экстрагировали этилацетатом, экстракт промывали насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, высушивали безводным сульфатом натрия и концентрировали, получая 0,8 г этилового эфира 6-гидроксиникотиновой кислоты. Выход: 80%, т.пл. 138-139°C.

31.2. 6-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}никотиновой кислоты этиловый эфир

В сухую трехгорлую колбу объемом 50 мл помещали 0,554 г (0,002 моль) полученного авторами 2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этанола, 0,28 г (0,002 моль) этилового эфира 6-гидроксиникотиновой кислоты, 0,612 г трифенилфосфина и вливали в колбу 15 мл безводного тетрагидрофурана при охлаждении ледяной баней и в защитной атмосфере газообразного азота, затем по каплям в колбу прибавляли 0,35 мл диэтилазодиформиата (DEAD), растворенного в 5 мл безводного тетрагидрофурана, после прибавления по каплям температуру повышали до комнатной температуры, и взбалтывание продолжали в течение ночи. На следующий день растворитель удаляли выпариванием, используя роторный испаритель, остаток выливали в 100 мл воды, продукт экстрагировали три раза, используя в сумме 150 мл дихлорметана, экстракционные растворы объединяли, сушили над безводным Na₂SO₄, концентрировали и разделяли колоночной хроматографией (элюент - петролейный эфир:этилацетат:метанол=10:5:0,5), получая 0,32 г 6-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}никотиновой кислоты этилового эфира в виде белого твердого вещества. Выход: 42,3%, т.пл. 140-141°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) ч/млн: 1,37~1,41 (т, 3H, J=7,3 Гц), 2,79 (уш.c, 4H), 2,91 (уш.c, 2H), 3,36 (уш.c, 4H), 4,35~4,40 (кв., 2H, J=7,3 Гц), 4,57 (уш.c, 2H), 6,78~6,80 (д, 2H, J=8,7 Гц), 6,86 (c, 1H), 8,16~8,18 (дд, 1H, J₁=8,7 Гц, J₂=2,2 Гц).

EI-MC m/e: 425 [М⁺], 258, 244,9, 223, 194,0, 175,0, 82,0, 70,0.

Пример 32: 6-{2-[4-(3,6-дихлорпиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил]этокси}никотиновой кислоты метиловый эфир

Данное соединение получали способом 31.2, где вместо использованного в нем фенола применяли метиловый эфир 6-гидроксиникотиновой кислоты. Названное соединение получали в виде белого твердого вещества, выход: 36,5%, т.пл. 145-146°C.

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) ч/млн: 2,65~2,66 (м, 4H), 2,77~2,80 (т, 2H, J=5,6 Гц), 3,33~3,34 (м, 4H), 4,48~4,51 (т, 2H, J=5,6 Гц), 6,94~6,96 (д, 1H, J=8,7 Гц), 7,38 (c, 1H), 8,15~8,18 (м, 1H), 8,74~8,75 (д, 1H, J=2,2 Гц).

EI-MC m/e: 411,1 [М⁺], 376,1, 258,1, 245,1, 223,1, 202,1, 180,1, 82,1, 70,1.

Пример 33: Активность против пикорнавируса соединения настоящего изобретения в in vitro моделях

Экспериментальные материалы:

Клетки HeLa (хранящиеся в лаборатории авторов)

Риновирус-3 (HRV-3) (ATCC: VR-1113)

Большеухие кролики (предоставлены Center of Laboratory Animals of the Military Medical Science Academy of the PLA)

Профилактическое введение:

Принцип: лекарственное средство и вирус предварительно смешивали и инкубировали, чтобы блокировать декапсидацию вирусов и их инвазию в клетки.

Способы: лекарственное средство в концентрации 100 нг/мл помещали в 12-луночный планшет, затем добавляли дозу вирусов с величиной TCID₅₀, равной примерно 100, спустя 0,5 ч в каждую ячейку добавляли 500000 клеток и инкубировали при 33°C. Через три дня, когда контрольная группа показала 100%-ный цитопатический эффект (CPE), наблюдали эффекты лекарственного средства предупреждать фагоцитоз клеток и выражали их как степень защиты клеток (%). Результаты профилактического введения показывали, что различные соединения обеспечивали различную степень защитного эффекта по предупреждению фагоцитоза клеток; причем соединения примеров 4, 13, 31 и 32 проявляли лучшие эффекты (см. фиг.1).

Терапевтическое введение:

Цель: дальнейший скрининг для выявления лекарственных средств, которые обнаруживали лучшие эффекты при профилактическом введении.

Способы: 500000 клеток добавляли в каждую ячейку, инкубировали при 33°C в течение ночи для сцепления, затем добавляли дозу вирусов с величиной TCID₅₀, равной примерно 100, через 0,5 ч культурную среду удаляли абсорбцией, лекарственное средство добавляли в 12-луночный планшет в концентрации 100 нг/мл, суммарный объем реакционной системы составлял 2 мл. Через три дня, когда вирусная контрольная группа показала 100%, цитофагоцитоз (CPE), наблюдали эффекты лекарственного средства предупреждать фагоцитоз клеток. Результаты показывали, что различные соединения обеспечивали различные степени защиты клеток от фагоцитоза; причем соединения примера 31 проявляли лучшие эффекты (см. фиг.2).

Предварительные результаты по определению ex vivo уровня при скрининге противориновирусных лекарств

Подготовка трахеального кольца: кроликов умерщвляли внутривенной инъекцией сверхдозы фенобарбитала натрия, затем извлекали трахею, ткани и эпителиальные клетки, связанные с трахеей, отделяли, затем трахею делили на кольца шириной 6-8 мм.

Способ терапии лекарственным средством: трахеальные кольца помещали в питательную среду 1640+2%FCS, в это же время добавляли лекарственное средство (окончательная концентрация: 100 мкг/мл) и риновирус (окончательная концентрация: 106), инкубировали при 33°C в течение 90 мин, затем инкубировали при 23°C в течение 24 ч. Концентрация 10 мкг/мл не показывает значимых терапевтических эффектов.

Измерение констрикционной и дилатационной силы: трахеальные кольца подвешивали на треугольной опоре, доводили их до равновесной температуры 37°C в 20-мл бане для органов Havard, подвергали воздействию 10^-7-10^-3 M Ach (ацетилхолина), и при каждой концентрации регистрировали максимальную констрикционную или максимальную дилатационную силу, результаты приведены в таблице 1 и на фиг.3.

Как показано на фиг.3, Ach (ацетилхолин) мог вызывать усиление напряжения гладкой мускулатуры зависимым от дозировки образом, риновирус мог повысить амплитуду усиления напряжения гладкой мускулатуры трахеи, индуцированного Ach, тогда как соединение примера 31, очевидно, могло ингибировать избыточное увеличение Ach-индуцированного напряжения гладкой мускулатуры трахеи, вызванное риновирусом.