×
08.03.2019
219.016.d4e6

Результат интеллектуальной деятельности: ШТАММ Streptomyces griseocarneus subsp. bleomycini ВКПМ-S887 - ПРОДУЦЕНТ БЛЕОМИЦИНА A И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА БЛЕОМИЦИНА A

Вид РИД

Изобретение

Аннотация: Изобретение относится к новому штамму - продуценту антибиотика блеомицина и его использованию в биосинтезе противоопухолевого антибиотика блеомицина А, эффективного при лечении плоскоклеточного рака и ряда других типов опухолей. Штамм-продуцент Streptomyces griseocarneus subsp. bleomycini ВКПМ-S887 получен в результате многоступенчатого мутагенного воздействия метилнитрозогуанидина, УФ-излучения и гамма-лучей Со на исходный штамм №1129 с последующим отбором мутантов на средах, содержащих аминоэтилцистеин, карбамоилцистеин, канаванин, метилтреонин в качестве селективных агентов. Полученный штамм №7-99 депонирован в ВКПМ под номером S887. Штамм по сравнению с исходным штаммом обладает более чем в 10 раз повышенной продуктивностью. Продуцируемый штаммом продукт представляет собой однокомпонентный антибиотик - содержание антибиотического комплекса в культуральной жидкости штамма по изобретению составляет 140 мкг монокомпонентного блеомицина А в 1 мл. Чистота целевого продукта достигается хроматографией элюата с КБ-2 на сорбенте "Стиросорб MN-200», на котором сорбируются только примеси. Высокая активность нового штамма ВКПМ-S887 определяет перспективность его использования для промышленного производства блеомицина A. 2 н.п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается нового штамма-продуцента противоопухолевого антибиотика блеомицина, широко используемого в терапии плоскоклеточного рака и ряда других типов опухолей.

Противоопухолевый антибиотик блеомицин, широко применяемый в медицинской практике (Bleocin, Nippon Kayaku, Japan и Blenoxan, Bristol Mayor׳s, USA) является смесью нескольких гликопептидных компонентов, наиболее терапевтически ценным из которых является блеомицин А2.

Известен штамм Streptoverticillium subsp. Bleomycini 1129 - продуцент антибиотического комплекса блеомицинов [1]. Недостатками данного штамма являются содержание в его культуральной жидкости нескольких близкородственных блеомицинов, что затрудняет выделение и очистку целевого антибиотика, а также низкая антибиотическая активность.

Сущность изобретения состоит в том, что получен новый штамм-продуцент однокомпонентного блеомицина А2 в результате многоступенчатого мутагенного воздействия метилнитрозогуанидина, УФ-излучения и гамма-лучей 60Со на исходный штамм №1129 с последующим отбором мутантов на средах, содержащих аминоэтилцистеин, карбамоилцистеин, канаванин, метилтреонин в качестве селективных агентов.

Полученный новый штамм депонирован в коллекции культур ФГУП ГосНИИгенетика под номером ВКПМ-S887.

Штамм ВКПМ-S887 обладает высокой продуктивностью однокомпонентного блеомицина А2 (140 мкг блеомицина А2 в 1 мл культуральной жидкости) и характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиологическими признаками.

Культурально-морфологические и физиологические признаки штамма ВКПМ-S887. Температура 37°C; длительность выращивания (7-21) сутки. Споровый посевной материал с десятидневной культуры штамма, выращенного на овсяном агаре. Цвет определен по таблице Бондарцева и Праузера (таблица):

Морфологические признаки. Гифы воздушного мицелия прямые или извилистые, цепочки спор прямые, расположены мутовчато, поверхность спор гладкая.

Физиолого-биохимические свойства. Аэроб растет при (24-37)°С; оптимум - 37°С, желатину разжижает. Молоко пептонизирует. Сахарозу инвертирует. Крахмал гидролизует. На клетчатке не растет. Восстанавливает нитраты до нитритов. Меланоидные пигменты не образует при росте на среде Треснера с лимонно-кислым железом. Отношение к углеводам: хорошо использует глюкозу, фруктозу, сахарозу, лактозу; умеренно - инозит, арабинозу, рафинозу, слабо - маннит; не использует ксилозу.

Антагонистические свойства. При испытании методом штриха на глюкозонитратном агаре №2 Гаузе штамм подавляет рост грамположительных бактерий Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Bacillus mycoides, Micrococcus luteus и грамотрицательных бактерий Bacterium paracoli, Commomonas terrigena, дрожжей Saccharomyces cerevisiae; не действует на Escherichia coli. Специфических вирулентных фагов не выявлено, лизиса в процессе ферментации не происходит.

Штамм ВКПМ-S887 поясняется следующим примером:

Пример 1. Споровым материалом с мицелием культуры Streptomyces griseocarneus subsp. bleomycini ВКПМ-S887, выращенной в течение (7-10) суток на овсяной агаровой среде, засевают питательную среду (100 мл в колбах Эрленмейера, объемом 750 мл) и выращивают (18-24) часа при 37°С на качалке при (220-240) об/мин. Состав посевной среды, %:

Глюкоза 1,0
Соевая мука 1,5
Глицерин 3,0
Натрий хлористый 0,3
Мел 0,5
Вода Водопроводная
рН до стерилизации 6,8

Выросшим мицелием в количестве (3-5) % засевают питательную среду (100 мл в колбах Эрленмейера, объемом 750 мл) следующего состава, %;

Глицерин 1,0
Соевая мука 2,0
Кукурузный экстракт 0,5
Цинк сернокислый 0,1
Калий фосфорнокислый двузамещенный 0,3
Вода Водопроводная
рН до стерилизации 6,8

Ферментацию проводят на качалке при (200-220) об/мин, 28°С в течение 144 час. Антибиотическую активность культуральной жидкости определяют методом тонкослойной хроматографии с биологическим проявлением по Bacillus subtilis ATCC 6633. Содержание блеомицина А2 в культуральной жидкости продуцента к концу ферментации составляет 140 мкг/мл.

Преимуществом заявленного штамма по сравнению с прототипом является более чем в 10 раз повышенная продуктивность и однокомпонентность антибиотика, а именно, содержание многокомпонентного антибиотического комплекса в культуральной жидкости штамма-прототипа 10 мкг/мл, в заявленном штамме 140 мкг монокомпонентного блеомицина А2 в 1 мл. Высокая активность нового штамма Streptomyces griseocarneus subsp. bleomycini ВКПМ-S887 определяет перспективность его использования для создания нового лекарственного препарата блеомицина на основе промышленного производства блеомицина A2.

Блеомицин выделяют из культуральной жидкости, полученной в результате биосинтеза штамма-продуцента ВКПМ-S887, сорбцией на карбоксильной смоле КБ-2 в солевой форме. Смолу промывают 0,5 М раствором уксусной кислоты и антибиотик десорбируют 0,25 н. раствором соляной кислоты. После повторной сорбции на карбоксильном катионите КБ-2 в солевой форме блеомицин элюируют 0,15-молярным водным буферным раствором уксуснокислого аммония с рН 6,5 и проводят дальнейшую очистку на сорбенте "Стиросорб MN-200». Полученный таким образом раствор антибиотика обеззоливают, концентрируют и блеомицин А2 осаждают ацетоном из водно-метанольного раствора при рН (4,0-4,5) в форме гидрохлорида. Общий выход блеомицина А2 не менее 70%.

Блеомицин А2, полученный на основе биосинтеза нового мутантного штамма Streptomyces griseocarneus subsp. bleomycini ВКПМ-S887, представляет собой белый порошок, хорошо растворимый в воде, метаноле, ограниченно - в этаноле и не растворим в других органических растворителях. По физико-химическим свойствам, антибактериальной и противоопухолевой активности и токсичности полностью соответствует стандартному образцу блеомицина А2. Брутто-формула: C55H84N17O21S3·4НС1. Мол. масса 1561 а.е.м.

УФ-спектр: λmax (вода)нм=243; 290.

Мол. масса основания (метод MALDI-TOF-MS)=1417 (М+2Н) и 1439 (M+Na++H);

Культурально-морфологические признаки штамма
Агаровая среда Рост воздушного мицелия* Цвет мицелия Растворимый
Воздушного Субстратного Пигмент
№1 Гаузе ++ Белый (Д3) до розоватого (Г2) Бесцветный Нет
Овсяная +++ Белый (Д3) Бесцветный Нет
Чапека +++ Белый (Д3), До розоватого (Г3) Бесцветный Нет
Глюкозо-аспарагиновая +++ Белый (Д3) до розоватого (Г3) Бесцветный Нет
Линденбайна (глицерин-нитратная) ++ Белый (Д3) Бесцветный Нет
Глюкозо-нитратная №2 Гаузе ++ Белый (Д3) Бесцветный Нет
Треснера (с пептоном и лимонно-кислым железом) Меланоидные пигменты не образуются
*/+++ - хороший; ++ - умеренный;

ЛИТЕРАТУРА

1. SU, авторское свидетельство, №563818.

Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 11-20 из 31.
20.01.2018
№218.016.0fbc

Штамм amycolatopsis orientalis - продуцент антибиотика диметилванкомицина и способ получения антибиотика

Заявлена группа изобретений, которая может быть использована при производстве антибактериального антибиотика диметилванкомицина сульфата, эффективного при лечении инфекций, вызываемых грамположительными возбудителями, в том числе метициллинустойчивыми и анаэробами. Предлагается штамм...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002633511
Дата охранного документа: 12.10.2017
14.11.2018
№218.016.9ce0

Вращающийся парашют

Изобретение относится к вращающимся парашютам. Купол парашюта состоит из центральной части круглой формы, к которой с противоположных сторон прикреплены две лопасти и полотнища для укладки лопастей. Лопасти соединены между собой гибкими связями и уложены на нижнюю кромку центральной части вдоль...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002672222
Дата охранного документа: 12.11.2018
01.03.2019
№219.016.cc28

Производные антибиотика группы ауреоловой кислоты оливомицина 1, обладающие противоопухолевой активностью, и способ их получения

Изобретение относится к обладающим противоопухолевой активностью производным антибиотика группы ауреоловой кислоты оливомицина I, соответствующим структурной формуле, приведенной ниже, в которых R представляет собой водород, С-С-циклоалкил или C-C-алкил с прямой или разветвленной углеводородной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002350621
Дата охранного документа: 27.03.2009
08.03.2019
№219.016.d4ac

Штамм streptomyces roseolus вкпм s-1082 - продуцент линкомицина и способ получения линкомицина

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медицинской промышленности при производстве антибактериального антибиотика линкомицина гидрохлорида, эффективного при лечении инфекций, вызываемых грамположительными возбудителями, в том числе метициллинустойчивыми, и некоторыми...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002391396
Дата охранного документа: 10.06.2010
08.03.2019
№219.016.d4e4

Штамм nonomuraea roseoviolacea subsp. carminata (actinomadura carminata) - продуцент антибиотика карминомицина и способ получения карминомицина

Штамм Nonomuraea roseoviolacea subsp carminata (Actinomadura carminata) BKIIM-S1081 получен в результате многоступенчатого мутагенного воздействия нитрозометилбиуретка, метилнитрозогуанидина и гамма-лучей Co на исходный штамм № ВКПМ S-806 с последующим отбором мутантов на средах, содержащих...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002355757
Дата охранного документа: 20.05.2009
08.03.2019
№219.016.d4ea

Штамм streptomyces griseocarneus subsp. bleomycini вкпм-s1086 - продуцент блеомицетина и способ получения антибиотика блеомицетина

Изобретение относится к новому штамму-продуценту антибиотика блеомицетина и его использованию в биосинтезе противоопухолевого антибиотика блеомицетина гидрохлорида, используемого при лечении плоскоклеточного рака. Штамм-продуцент Streptomyces griseocarneus subsp. bleomycini ВКПМ-S1086 получен в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002358008
Дата охранного документа: 10.06.2009
15.03.2019
№219.016.e075

Штамм amycolatopsis fructiferi subsp. ristomycini - продуцент антибиотика ристомицина

Штамм Amycolatopsis fructiferi subsp. ristomycini 8765 получен в результате мутантного преобразования свойств штамма Proactinomyces fructiferi var. ristomycini 5339 в результате последовательного трехступенчатого воздействия метилнитрозогуанидина, ультрафиолетовых и гамма-лучей Со на исходный...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002392325
Дата охранного документа: 20.06.2010
22.03.2019
№219.016.ec39

Вращающийся парашют

Изобретение относится к вращающимся парашютам. Купол парашюта состоит из центральной части, к которой с противоположных сторон прикреплены лопасти и полотнища для укладки лопастей. Центральная часть имеет тормозное полотнище, которое имеет возможность перемещения по стропам от купола к коушу...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002682686
Дата охранного документа: 20.03.2019
29.03.2019
№219.016.eccb

Вращающийся парашют

Изобретение относится к вращающимся парашютам. Купол парашюта состоит из центральной части круглой, квадратной или многоугольной формы, к которой прикреплены диаметрально противоположные парные лопасти. Парные лопасти располагаются под разными углами по отношению к плоскости перпендикулярной к...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002682959
Дата охранного документа: 22.03.2019
29.03.2019
№219.016.ece4

Вращающийся парашют

Купол вращающегося парашюта состоит из центральной части, к которой прикреплены две, три, четыре или более лопасти. Центральная часть купола имеет профилированные щели, расположенные у нижней кромки по радиусу к полюсу купола перед и за креплением лопастей к центральной части. Изобретение...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002682947
Дата охранного документа: 22.03.2019
+ добавить свой РИД