Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОСОМАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ

Изобретение относится к области прикладной биотехнологии и может быть использовано для приготовления косметических средств на основе липосомальных препаратов, содержащих различные сочетания компонентов лизата галобактерий Halobacterium halobium, со стабильными защитными, стимулирующими и восстановительными свойствами.

Из уровня техники известен способ получения липосомальных препаратов путем смешивания раствора липидов в органическом растворителе с раствором биологически активного вещества (RU 2217129 C1, A61K 9/127, 2003). Однако из-за особенностей технологического процесса биологически активные компоненты в полученных липосомальных препаратах при использовании последних в косметических процедурах не в полной мере проявляют свои положительные свойства и могут вызывать побочные эффекты.

Изобретение направлено на создание технологически простого способа получения липосомальных препаратов с эффективным защитным, стимулирующим и восстановительным действием на кожу без побочных реакций.

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что в способе получения липосомальных препаратов путем смешивания раствора липидов в органическом растворителе с раствором биологически активного вещества, согласно изобретению в качестве биологически активного вещества вводят водный раствор лизата галобактерий Halobacterium salinarum с образованием липосомальной везикулы.

Кроме того, перед введением водного раствора лизата галобактерий Halobacterium salinarum из него удаляют некоторые компоненты и/или вводят биологически активные добавки, не входящие в состав лизата.

Предпочтительно, чтобы перед введением водного раствора лизата галобактерий Halobacterium salinarum из него удаляли не содержащие бактериородопсин фрагменты мембраны, фрагменты клеточных стенок и денатурированный белок.

Использование водного раствора лизата галобактерий Halobacterium salinarum (H. Salinarum), в клеточные мембраны (пурпурные мембраны) которых встроен бактериородопсин - биологически активный светочувствительный белок (М.В.Гусев, Л.А.Минеева. Микробиология, издательство московского университета, 1992, глава 18), обеспечивает при технологической простоте процесса высокую эффективность воздействия на кожу полученных в соответствии с изобретением липосомальных препаратов в виде гомогенной суспензии липосомальных везикул с липидной оболочкой, поскольку заключенные в липидную оболочку, состоящую преимущественно из нейтральных и отрицательно заряженных фосфолипидов, биологически активные компоненты лизата галобактерий H.Salinarum (белок бактериородопсин, каротиноиды, различные витамины, а также нуклеиновые кислоты, ликопин, сквален, макро- и микроэлементы) при косметических процедурах активно проникают в глубь кожного покрова, обуславливая эффективное проявление защитных, стимулирующих и восстановительных свойств, и не вызывают отрицательных иммунных реакций организма (например, в виде раздражения кожи) на чужеродные компоненты (белки). Кроме того, антиоксиданты и мембранные белки, входящие в состав лизата, стабилизируют липосомы, а липосомальные везикулы, соответственно, предотвращают разрушение компонентов лизата иммунной системой.

Заявленный способ осуществляется следующим образом.

Раствор фосфолипидов (индивидуальные фосфолипиды или их смеси, полученные из растительного, животного или биотехнологического сырья) в органическом растворителе (этаноле, бензоле, гексане, метаноле, хлороформе, эфире и т.п.) с концентрацией не менее 0,5% вводят в водный раствор лизата галобактерий Halobacterium salinarum, имеющий концентрацию до 40% (преимущественно 2,0÷20%), при соотношении не более 1:7 и интенсивно перемешивают до получения липосомального препарата в виде однородной (гетерогенной) суспензии липосомальных везикул.

Пример 1.

В 35 мл водного раствора лизата, приготовленного путем перемешивания с обработкой ультразвуком смеси 2 г влажной клеточной массы галобактерий Н. Salinarum и 100 мл 0,001% водного раствора ДНКазы до полного разрушения клеток Н.Salinarum, вводят 5 мл раствора липидов в этаноле, содержащего 450 мг фосфатидилхолина и холестерина в соотношении 2:1, и перемешивают до образования однородной суспензии липосомальных везикул.

Пример 2.

В 40 мл водного раствора лизата, приготовленного путем перемешивания с периодической обработкой ультразвуком смеси 2 г влажной клеточной массы галобактерий Н.Salinarum и 100 мл 0,001% водного раствора ДНКазы до полного разрушения клеток Н.Salinarum и последующего удаления не содержащих бактериородопсин фрагментов мембраны, фрагментов клеточных стенок и денатурированного белка осаждением в поле силы тяжести, вводят 5 мл раствора липидов в этаноле, содержащего 450 мг фосфатидилхолина и холестерина в соотношении 2:1, и перемешивают до образования однородной суспензии липосомальных везикул.

Пример 3.

В 40 мл водного раствора лизата, приготовленного ресуспензированием в 39 мл дистиллированной воды 3 г пурпурных мембран, осажденных центрофугированием при 50000g из промежуточного лизата, полученного путем перемешивания с периодической обработкой ультразвуком смеси 5 г влажной клеточной массы галобактерий Н.Salinarum и 100 мл 0,001% водного раствора ДНКазы до полного разрушения клеток Н. Salinarum и последующего удаления не содержащих бактериородопсин фрагментов мембраны, фрагментов клеточных стенок и денатурированного белка осаждением в поле силы тяжести, вводят 5 мл раствора липидов в этаноле, содержащего 450 мг фосфатидилхолина и холестерина в соотношении 2:1, и перемешивают до образования однородной суспензии липосомальных везикул.

Пример 4.

В 45 мл супернатанта, содержащего в основном каратиноиды, приготовленного из лизата, полученного путем помещения 7 г влажной клеточной массы H.salinarum в 100 мл 0,001% водного раствора ДНКазы при постоянном перемешивании и периодической обработке ультразвуком до полного разрушения клеток H.salinarum с последующим осаждением в поле силы тяжести клеточных мембран, в том числе содержащих бактериородопсин, клеточных стенок и денатурированных белков, вводят 5 мл раствора липидов в этаноле, содержащего 500 мг фосфатидилхолина и холестерина в соотношении 2:1, и перемешивают до образования однородной суспензии липосомальных везикул.

Пример 5.

В 40 мл водного раствора лизата, приготовленного путем перемешивания с периодической обработкой ультразвуком смеси 2 г влажной клеточной массы галобактерий Н.Salinarum и 100 мл 0,001% водного раствора ДНКазы до полного разрушения клеток Н.Salinarum и последующего удаления не содержащих бактериородопсин фрагментов мембраны, фрагментов клеточных стенок и денатурированного белка осаждением в поле силы тяжести, в который дополнительно введен витамин В₁₂ в количестве 0,4 г, вводят 5 мл раствора липидов в этаноле, содержащего 450 мг фосфатидилхолина и холестерина в соотношении 2:1, и перемешивают до образования однородной суспензии липосомальных везикул.

Для определения эффективности действия липосомальные препараты, введенные в нейтральный гель в концентрации 10÷15%, наносили 1 раз в день в течение 1 месяца на участок кожи предплечья пациентам различного возраста. В результате процедур обработанные участки кожи выглядели более гладкими и здоровыми, чем аналогичный участок кожи предплечья на другой руке. Кожа стала более эластичной, нормализовался баланс липидов на поверхности кожи, раздражений не наблюдалось.

При использовании липосомальных препаратов по примеру 1, у которых значение индекса окисленности, характеризующего степень перекисного окисления липидов, составляет 0,59 и рН 7,35, антиоксидантный эффект возрос на 10÷12%, а степень увлажнения увеличилась на 5÷6%.

При использовании липосомальных препаратов по примеру 2, у которых значение индекса окисленности, характеризующего степень перекисного окисления липидов, составляет 0,57 и рН 7,42, антиоксидантный эффект возрос на 11÷13%, а степень увлажнения увеличилась на 5÷7%.

При использовании липосомальных препаратов по примеру 3, у которых значение индекса окисленности, характеризующего степень перекисного окисления липидов, составляет 0,55 и рН 7,45, антиоксидантный эффект возрос на 13÷14%, а степень увлажнения увеличилась на 6÷8%.

При использовании липосомальных препаратов по примеру 4, у которых значение индекса окисленности, характеризующего степень перекисного окисления липидов, составляет 0,47 и рН 7,39, антиоксидантный эффект возрос на 14÷15%, а степень увлажнения увеличилась на 7÷8%.

При использовании липосомальных препаратов по примеру 5, у которых значение индекса окисленности, характеризующего степень перекисного окисления липидов, составляет 0,57 и рН 7,42, антиоксидантный эффект возрос на 11÷13%, а степень увлажнения увеличилась на 5÷6%.