ПРИМЕНЕНИЕ 6-ОКСИ-2,2,4-ТРИМЕТИЛ-1,2-ДИГИДРОХИНОЛИНА ИЛИ 6-ОКСИ-2,2,4-ТРИМЕТИЛ-1,2,3,4-ТЕТРАГИДРОХИНОЛИНА В КАЧЕСТВЕ ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНОГО ВЕЩЕСТВА

Изобретение относится к области медицины и фармакологии, а именно к применению 6-окси-2,2,4-триметил-1,2-дигидрохинолина или 6-окси-2,2,4-триметил-1,2,3,4-тетрагидрохинолина в качестве противотуберкулезных средств. Предлагаемые вещества обладают бактерицидным и бактериостатическим действием.

В настоящее время наблюдается значительный рост заболеваемости туберкулезом во всем мире. Это связано с появлением резистентных штаммов и заболеваний иммунной системы, включая СПИД.

Так по оценкам ВОЗ за период до 2002 года число вновь инфицированных туберкулезом достигло одного миллиарда человек, причем двести миллионов человек заболеют туберкулезом, а тридцать пять миллионов человек умрут от него, если не будут найдены новые и более эффективные средства его лечения.

Низкая эффективность используемых в настоящее время противотуберкулезных препаратов объясняется постоянным ростом количества больных с множественной лекарственной устойчивостью, вызванным появлением лекарственно-резистентных штаммов микобактерий.

Большинство лекарственных препаратов действуют неселективно, поэтому возникает необходимость ввода избыточного количества лекарственного вещества, что приводит к возникновению серьезных побочных проявлений в виде нарушения функций печени, почек, гемопоэза и т.д.

Противотуберкулезные фармацевтические препараты и методы лечения туберкулеза до настоящего времени практически не изменились, поэтому поиск, создание новых фармацевтических препаратов, обладающих антимикобактериальными свойствами и позволяющих повысить эффект стандартной химиотерапии остается весьма актуальным [Хоменко А.Г. Туберкулез. - М.: Медицина, 1992, 312 с.; Перельман М.И. О концепции Национальной российской программы борьбы с туберкулезом // Проблемы туберкулеза. - 2000. - №3 - с.51-55; Treatment of tuberculosis Guidelines for national programs. WHO; 1997].

Противотуберкулезные средства до настоящего времени основаны на изменении соотношений между уже известными действующими компонентами (антибиотики, синтетические препараты), а также на применении дополнительно к основной химиотерапии неспецифических препаратов растительного или животного сырья [RU №2211035].

Однако это не решает проблемы возникновения мультирезистентных штаммов, нефро-, нейро- и гепатотоксичности препаратов [Туберкулез, защита, контроль. Под ред. Б.Р.Блума. - М.: Медицина, - 2002].

Наиболее эффективным методом в лечении туберкулеза является химиотерапия, которая направлена на одного возбудителя, а именно на микобактерию туберкулеза, причем важнейшим фактором для выбора химиотерапии является устойчивость микобактерий к противотуберкулезным препаратам.

Противотуберкулезные препараты классифицируют:

препараты I ряда (основные антибактериальные препараты) или наиболее эффективные препараты, к которым относятся синтетический препарат изониазид (ГИНК) и его производные, антибиотик рифармицин, а также антибиотики умеренной эффективности, такие как стрептомицин, карамицин, флоримицин (виомицин);

препараты II ряда - препараты умеренной эффективности, такие как этамбутол этионамид, протионамид, этоксид, пиразинамид, тиоацетазон, канамицин, флоромицин.

Причем препараты I ряда, являющиеся основными химиотерапевтическими средствами для лечения разных форм туберкулеза, более активны, чем препараты II ряда по действию на микобактерии туберкулеза [Машковский М.Д. Лекарственные средства (пособие по фармакотерапии для врачей). Часть II. Издание восьмое, переработанное и дополненное. - М.: Медицина, 1997, - 560 с].

Известны соединения (вещества) 6-окси-2,2,4-триметил-1,2-дигидрохинолин и 6-окси-2,2,4-триметил-1,2,3,4-тетрагидрохинолин, которые являются высокоэффективными ингибиторами радикальных процессов [Иванов Ю.А. Дис.Канд. Хим. Наук; М., 1983].

Исходным продуктом для их получения служит доступное, дешевое сырье, причем сам процесс их синтеза одностадиен и малоотходен [Иванов Ю.А. Дис.Канд. Хим. Наук; М., 1983], а технология получения предложенных нами соединений была внедрена на Московском заводе химических реактивов им. П.Л.Войкова [Иванов Ю.А. Дис.Канд. Хим. Наук; М., 1983].

Известные вещества образуют π-комплексы с ионами тяжелых металлов [Давыдов В.В., Сокол В.И., Балебанова Е.В., Экивина Н.И., Иванов Ю.А., Порай-Кошиц М.А., Зайщев Б.Е. - Комплексообразование хлоридов Cu (II) и Fe (III) с 6-гидрокси-2,2,4-триметил-1,2-дигидрохинолином. Кристаллическая и молекулярная структура. - Координационная химия, 1994, том 20, №4, с.311-317], а также возможны и другие взаимообразования, что может обусловить их антибактериальные свойства.

Известные вещества обладают антибактериальными свойствами.

Задачей, решаемой изобретением, является создание химиотерапевтического противотуберкулезного вещества бактерицидного и бактериостатического действия.

Технический результат в предлагаемом изобретении достигают применением 6-окси-2,2,4-триметил-1,2-дигидрохинолина или 6-окси-2,2,4-триметил-1,2,3,4-тетрагидрохинолина, в качестве противотуберкулезного вещества.

На основании проведенной авторами проработки материалов периодической и патентной литературы по использованию противотуберкулезных средств, обладающих достаточной эффективностью и универсальностью воздействия на возбудитель туберкулеза, применение 6-окси-2,2,4-триметил-1,2-дигидрохинолина и 6-окси-2,2,4-триметил-1,2,3,4-тетрагидрохинолина в качестве противотуберкулезного вещества неизвестно, что и определяет новизну предложенного изобретения.

Исходя из вышеизложенного, можно сделать вывод, что применение известного вещества по новому назначению, а именно как эффективное противотуберкулезное вещество, позволит повысить эффективность лечения больных туберкулезом, а также препятствовать распространению эпидемии туберкулеза во всем мире.

Для доказательства, что известное вещество обладает высокоэффективным противотуберкулезным действием, были проведены микробиологические исследования, при которых изучали эффективность лечения экспериментального туберкулеза с учетом изменения бактериальной популяции, определяли бактериостатическую и бактерицидную активность предлагаемого вещества в сравнении с традиционно применяемыми в настоящее время препаратами.

Изучение бактериостатической и бактерицидной активности соединений (веществ) в опытах in vitro в связи с выраженной специфичностью многих лекарственных средств по отношению к M.tuberculosis, испытание веществ на бактериостатическую активность проводили с использованием чувствительных к основным противотуберкулезным препаратам лабораторных тест-штаммов M.tuberculosisH₃₇ Rv, Academia [Министерство здравоохранения Российской Федерации. Департамент контроля качества, эффективности и безопасности лекарственных средств. Научный центр экспертизы и государственного контроля лекарственных средств. Фармакологический Государственный Комитет. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М.: Издание и оригинал-макет подготовлены ЗАО «Информационно-издательское агентство «Ремедиум», 2000, - 398 с.].

Изучение бактериостатической активности нового фармакологического вещества проводили в сравнении с гомологичным противотуберкулезным препаратом феназидом, обладающим выраженным противотуберкулезным действием «in vitro» на культуре лабораторного тест-штамма M.tuberculosis H₃₇Rv из Музея культур МНПЦБТ с использованием жидкой питательной среды Middlebrook 7Н9.

Были приготовлены растворы методом разведения изучаемых соединений и феназида. Испытуемые химические соединения и феназид растворяли в диметилсульфоксиде.

Первый раствор. Навеску вещества в количестве 10 мг растворяли в 10 мл растворителя. Полученная концентрация соответствует 1000 мкг/мл.

Второй раствор. К 1 мл первого раствора добавляли 9 мл жидкой питательной среды Middlebrook7H9. Полученная концентрация равна 100 мкг/мл.

- Для получения растворов серийных разведений изучаемых соединений брали ряд пробирок. В первую наливали по 4 мл раствора второго разведения вещества, а в остальные 9 пробирок наливали по 2 мл питательной среды и делали последовательный перенос по 2 мл жидкости из каждой пробирки в последующую, начиная с первой.

Из последней пробирки 2 мл жидкости удаляли.

Таким образом, получили конечные концентрации исследуемых препаратов в питательной среде 100; 50; 25; 12.5; 6.25; 3.125; 1.562; 0.781; 0.390; 0.195 мкг/мл;

- в каждом ряду ставили контрольную пробирку с 2 мл питательной среды без препарата;

- во все пробирки вносили по 0.2 мл бактериальной суспензии трехнедельной культуры микобактерий туберкулеза, выращенных на плотной питательной среде Левенштейна-Йенсена, приготовленной по пятому стандарту мутности;

- посевы инкубировали в термостате при 37°С в течение семи дней;

- проводили бактериоскопическое исследование мазков, приготовленных из осадка и окрашенных по Цилю-Нильсену.

Оценку проводили по количеству микобактерий туберкулеза в полях зрения и интенсивности «косообразования». Результаты исследования представлены в таблице.

Московский Научно-технический Центр Борьбы с туберкулезом (МНТЦБТ) сделал заключение о возможности применения химических соединений: 6-окси-2,2,4-триметил-1,2-дигидрохинолина и 6-окси-2,2,4-триметил-1,2,3,4-тетрагидрохинолина в качестве противотуберкулезного вещества.

Было обнаружено, что 6-окси-2,2,4-триметил-1,2-дигидрохинолин и 6-окси-2,2,4-триметил-1,2,3,4-тетрагидрохинолин обладают бактерицидной и бактериостатической активностью в отношении лабораторного тест-штамма M.tuberculosis Н37 Rv из Музея МНТЦБТ в концентрациях 100; 50; 25; 12.5 и 6.25 мкг/мл и является высокоэффективным противотуберкулезным веществом.