СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО АНКСИОЛИТИЧЕСКИМ И АНТИДЕПРЕССИВНЫМ ДЕЙСТВИЕМ

Изобретение относится к области фармации и касается способа получения средства из растительного сырья, обладающего анксиолитическим и антидепрессивным действием.

Биологически активные соединения растительных видов семейства Lamiaceae обладают широким спектром биологической активности, включая действие на нервную систему (анксиолитическое, антиноцицептивное, антиконвульсантное) [1]. Химической особенностью видов рода Котовник, входящего в данное семейство, является их способность к накоплению отдельных соединений, обладающих анксиолитическим и антидепрессивным действием, в том числе производных лютеолина [2], розмариновой кислоты [3] и пулегона [4]. На территории Восточной Сибири широко распространен котовник многонадрезанный (Nepeta multifida L., синоним Schizonepeta multifida (L.) Briq.), в составе которого присутствуют указанные соединения. К настоящему времени не существует экстракционных препаратов из котовника многонадрезанного, обладающих анксиолитическим и антидепрессивным действием. Данный растительный вид входит в состав 10-компонентного средства «Таблетки для ума» в виде травы (необработанного сырья), что указывает на обедненный состав готового продукта [5]. Также известен способ получения 21-компонентного средства, содержащего котовник многонадрезанный, в виде жидкого экстракта на 20% этаноле, полученного в результате настаивания при комнатной температуре [6]. Использованный способ неинтенсивной экстракции растительного сырья и низкое содержание котовника многонадрезанного в общей растительной смеси свидетельствует о невысоком содержании действующих веществ в готовом продукте.

Задачей изобретения является создание суммарного растительного препарата, содержащего фенольные соединения и монотерпены, а также повышение анксиолитического и антидепрессивного действия средства за счет более высокого содержания действующих веществ.

Техническим результатом изобретения является повышенное анксиолитическое и антидепрессивное действие средства из надземной части котовника многонадрезанного, полученного заявленным способом.

Для достижения указанного технического результата измельченный растительный материал (траву котовника многонадрезанного) помещают в перегонную колбу аппарата для гидродистилляции, приливают воду в соотношении сырье : вода 1:(8-10) и нагревают до кипения в течение 30-40 мин. По истечении указанного времени начинается процесс отгонки эфирного масла, которое собирается в приемник в течение 60-80 мин. После этого смесь растительного сырья и воды из перегонной колбы фильтруют в сборник, промывая остаток растительного сырья на фильтре дополнительным объемом воды (10-12% от взятого на гидродистилляцию). Далее растительное сырье заливают 90% этанолом в соотношении сырье : экстрагент 1:(10-12) и подвергают смесь ультразвуковой обработке частотой 50 кГц при 70°С в течение 45-60 мин. Извлечение фильтруют в сборник, промывая остаток растительного сырья на фильтре дополнительным объемом 60% этанола (20-25% от взятого на этанольную экстракцию). Водное и спиртовое извлечения концентрируют в вакууме до 1/4-1/6 от первоначального объема. Сгущенные экстракты, полученные от водной и этанольной экстракций, объединяют, высушивают в вакуум-сушильном шкафу и измельчают на мельнице пропеллерного типа. После этого к измельченному сухому экстракту добавляют эфирное масло, полученное в результате гидродистилляции, и перемешивают на мельнице пропеллерного типа. Выход готового продукта (сухого экстракта) составляет 34.9-36.2% от массы растительного сырья.

Выявленные отличительные признаки позволяют сделать вывод о соответствии предлагаемого технологического решения критерию “новизна”.

Предложенный способ позволяет получить сухой экстракт (далее - средство) в виде рассыпчатого негигроскопичного порошка темно-коричневого цвета с горьким вкусом и выраженным специфическим запахом. Потеря массы при высушивании - 3-5%.

Способ иллюстрируется нижеследующими примерами.

Пример 1. 39.59 кг цветков котовника многонадрезанного с влажностью 3.1% измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 2-3 мм. 39 кг измельченного сырья загружают в перегонную колбу аппарата для гидродистилляции вместимостью 450 л, приливают 312 л воды и нагревают до кипения в течение 30 мин. По истечении указанного времени начинается процесс отгонки эфирного масла, которое собирается в приемник в течение 60 мин. Получают 1.25 кг эфирного масла (3.2% от массы растительного сырья) с плотностью 1.100 г/см³. Смесь растительного сырья и воды из перегонной колбы фильтруют через сукно в сборник, промывая остаток растительного сырья на фильтре 31 л воды. В результате получено 232 л водного экстракта с плотностью 0.992 г/см³, который концентрируют в вакууме до объема 46.4 л (плотность концентрата 1.128 г/см³). Отгон воды объемом 181 л далее может быть повторно использован на стадиях гидродистилляции и экстракции растительного сырья. Растительное сырье после фильтрования переносят в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревателем и заливают 468 л 90% этанола. Полученную смесь перемешивают, вносят стержневой ультразвуковой процессор и обрабатывают смесь ультразвуком мощностью 50 кГц в импульсном режиме при температуре 70°С в течение 60 мин. После этого ультразвуковой процессор удаляют и смесь фильтруют через сукно в сборник, промывая остаток растительного сырья на фильтре 94 л 60% этанола. В результате получено 554 л этанольного экстракта с плотностью 0.899 г/см³, который концентрируют в вакууме до объема 92 л (плотность концентрата 1.034 г/см³). Отгон этанола объемом 462 л (плотность 0.850 г/см³) далее может быть повторно использован на стадии экстракции растительного сырья. Полученные концентраты после водной и этанольной экстракций объединяют (объем объединенного концентрата 135 л, плотность 1.067 г/см³), сушат в вакуум-сушильном шкафу при температуре 55°С и давлении 0.1 атм в течение 10 часов и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Получают 12.81 кг полупродукта, что составляет 32.8% от массы растительного сырья. Далее к полупродукту добавляют 1.25 кг эфирного масла, полученного методом гидродистилляции. Получают 14.06 кг готового продукта (средства), что составляет 36.0% от массы растительного сырья. Средство представляет собой рассыпчатый негигроскопичный порошок, темно-коричневого цвета, с горьким вкусом и выраженным специфическим запахом. Потеря массы при высушивании составляет 3.1%. Шрот растительного сырья массой 142 кг и влажностью 82.4% далее не используют и направляют в отвал.

Пример 2. 45.72 кг листьев котовника многонадрезанного с влажностью 4.6% измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 2-3 мм. 45 кг измельченного сырья загружают в перегонную колбу аппарата для гидродистилляции вместимостью 600 л, приливают 450 л воды и нагревают до кипения в течение 40 мин. По истечении указанного времени начинается процесс отгонки эфирного масла, которое собирается в приемник в течение 80 мин. Получают 0.32 кг эфирного масла (0.71% от массы растительного сырья) с плотностью 1.114 г/см³. Смесь растительного сырья и воды из перегонной колбы фильтруют через сукно в сборник, промывая остаток растительного сырья на фильтре 54 л воды. В результате получено 274 л водного экстракта с плотностью 0.998 г/см³, который концентрируют в вакууме до объема 68.5 л (плотность концентрата 1.122 г/см³). Отгон воды объемом 195 л далее может быть повторно использован на стадиях гидродистилляции и экстракции растительного сырья. Растительное сырье после фильтрования переносят в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревателем и заливают 450 л 90% этанола. Полученную смесь перемешивают, вносят стержневой ультразвуковой процессор и обрабатывают смесь ультразвуком мощностью 50 кГц в импульсном режиме при температуре 70°С в течение 45 мин. После этого ультразвуковой процессор удаляют и смесь фильтруют через сукно в сборник, промывая остаток растительного сырья на фильтре 112 л 60% этанола. В результате получено 562 л этанольного экстракта с плотностью 0.871 г/см³, который концентрируют в вакууме до объема 94 л (плотность концентрата 1.039 г/см³). Отгон этанола объемом 465 л (плотность 0.852 г/см³) далее может быть повторно использован на стадии экстракции растительного сырья. Полученные концентраты после водной и этанольной экстракций объединяют (объем объединенного концентрата 162.5 л, плотность 1.091 г/см³), сушат в вакуум-сушильном шкафу при температуре 55°С и давлении 0.1 атм в течение 10 часов и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Получают 15.98 кг полупродукта, что составляет 35.5% от массы растительного сырья. Далее к полупродукту добавляют 0.32 кг эфирного масла, полученного методом гидродистилляции. Получают 16.30 кг готового продукта (средства), что составляет 36.2% от массы растительного сырья. Средство представляет собой рассыпчатый негигроскопичный порошок, темно-коричневого цвета, с горьким вкусом и выраженным специфическим запахом. Потеря массы при высушивании составляет 3.6%. Шрот растительного сырья массой 158 кг и влажностью 81.8% далее не используют и направляют в отвал.

Пример 3. 40.6 кг травы котовника многонадрезанного с влажностью 4.3% измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 2-3 мм. 40 кг измельченного сырья загружают в перегонную колбу аппарата для гидродистилляции вместимостью 600 л, приливают 360 л воды и нагревают до кипения в течение 35 мин. По истечении указанного времени начинается процесс отгонки эфирного масла, которое собирается в приемник в течение 70 мин. Получают 0.74 кг эфирного масла (1.84% от массы растительного сырья) с плотностью 1.102 г/см³. Смесь растительного сырья и воды из перегонной колбы фильтруют через сукно в сборник, промывая остаток растительного сырья на фильтре 40 л воды. В результате получено 220 л водного экстракта с плотностью 0.995 г/см³, который концентрируют в вакууме до объема 45 л (плотность концентрата 1.125 г/см³). Отгон воды объемом 172 л далее может быть повторно использован на стадиях гидродистилляции и экстракции растительного сырья. Растительное сырье после фильтрования переносят в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревателем и заливают 440 л 90% этанола. Полученную смесь перемешивают, вносят стержневой ультразвуковой процессор и обрабатывают смесь ультразвуком мощностью 50 кГц в импульсном режиме при температуре 70°С в течение 50 мин. После этого ультразвуковой процессор удаляют и смесь фильтруют через сукно в сборник, промывая остаток растительного сырья на фильтре 97 л 60% этанола. В результате получено 532 л этанольного экстракта с плотностью 0.882 г/см³, который концентрируют в вакууме до объема 89 л (плотность концентрата 1.035 г/см³). Отгон этанола объемом 441 л (плотность 0.851 г/см³) далее может быть повторно использован на стадии экстракции растительного сырья. Полученные концентраты после водной и этанольной экстракций объединяют (объем объединенного концентрата 134 л, плотность 1.065 г/см³), сушат в вакуум-сушильном шкафу при температуре 55°С и давлении 0.1 атм в течение 10 часов и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Получают 13.20 кг полупродукта, что составляет 35.5% от массы растительного сырья. Далее к полупродукту добавляют 0.74 кг эфирного масла, полученного методом гидродистилляции. Получают 13.94 кг готового продукта (средства), что составляет 34.9% от массы растительного сырья. Средство представляет собой рассыпчатый негигроскопичный порошок, темно-коричневого цвета, с горьким вкусом и выраженным специфическим запахом. Потеря массы при высушивании составляет 3.8%. Шрот растительного сырья массой 134 кг и влажностью 80.6% далее не используют и направляют в отвал.

Химический состав средства

На предварительно этапе исследования нами был изучен химический состав средства с применением метода ВЭЖХ-УФ [7]. Идентификацию соединений проводили по данным хроматографической подвижности, спектров поглощения, спектральных отношений и метода добавок. В результате в трех образцах средства, полученных из цветков, листьев и травы котовника многонадрезанного, было установлено присутствие шести флавоноидов - лютеолин-7-О-рутинозида, лютеолин-7-О-глюкуронида, лютеолин-7-О-глюкозида, апигенин-7-О-рутинозида, апигенин-7-О-глюкуронида, апигенин-7-О-глюкозида, и четырех фенилпропаноидов - 3-О-кофеилхинной кислоты, розмариновой кислоты, сальвианоловых кислот А и В. Также в сухом экстракте было выявлено присутствие пулегона - основного компонента эфирного масла. Все упомянутые соединения были ранее обнаружены в растительных видах рода Котовник [8].

Таблица 1

Химический состав средства, мг/г

С использованием метода количественной ВЭЖХ-УФ было показано, что лютеолин-7-О-глюкуронид, розмариновая кислота и пулегон являются доминирующими компонентами, содержание которых в сухих экстрактах составило 35.70-40.17, 54.21-57.98 и 19.63-62.23 мг/г соответственно (таблица 1).

Количественный анализ и показатели качества средства

Для осуществления химической стандартизации средства разработаны методика количественного анализа лютеолин-7-О-глюкуронида, розмариновой кислоты и пулегона в средстве методом ВЭЖХ-УФ.

Методика количественного анализа лютеолин-7-О-глюкуронида, розмариновой кислоты и пулегона в средстве методом ВЭЖХ. Испытуемый раствор. 20 мг средства помещают в пластиковую пробирку типа Эппендорф вместимостью 2 мл, прибавляют 1 мл 70% этанола и растворяют в ультразвуковой ванне при 30°С в течение 15 мин. Охлаждают и центрифугируют при 3000 об/мин 10 мин. Надосадочную жидкость фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0.45 мкм.

Раствор сравнения. 1 мг лютеолин-7-О-глюкуронида, 1 мг розмариновой кислоты и 1 мг пулегона растворяют в метаноле и доводят до объема 5 мл этим же растворителем.

Условия хроматографирования:

- колонка длиной 75 мм и внутренним диаметром 2 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным для хроматографии с размером частиц 5 мкм;

- температура: 35°С;

- подвижная фаза:

-- подвижная фаза А: 21 г/л лития перхлората раствор в 1 г/л кислоте перхлорной;

-- подвижная фаза В: ацетонитрил;

- спектрофотометрический детектор, длина волны 210 нм;

- время уравновешивания системы: 3 мин перед каждым вводом (5% В);

- объем вводимой пробы: 1 мкл.

- программа градиентного режима элюирования представлена в таблице 2.

Таблица 2

Программа градиентного режима элюирования

Результаты: на хроматограмме должно быть три основных пика, совпадающих по подвижности с веществами в растворе сравнения (лютеолин-7-О-глюкуронид, розмариновая кислота, пулегон).

Порядок выхода пиков раствора сравнения: лютеолин-7-О-глюкуронид → розмариновая кислота → пулегон.

Пригодность хроматографической системы. Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия: разрешение между пиками лютеолин-7-О-глюкуронида и розмариновой кислоты не менее 2.

Расчет: содержание соединения в средстве в процентах (X) вычисляют по формуле:

,

где S - площадь пика соединения в исследуемом растворе; m - масса навески средства, г; S_S - площадь пика соединения в растворе сравнения; m_S - масса навески соединения, г.

Метрологический анализ разработанных методик показал, что относительная ошибка определения лютеолин-7-О-глюкуронида, розмариновой кислоты и пулегона методом ВЭЖХ не превышает 2% (таблица 3). Полученные результаты свидетельствуют об удовлетворительных валидационных параметрах методик, что указывает на возможность их использования в практике фармакопейного анализа для определения показателей качества разработанного средства.

Таблица 3

Метрологические характеристики методик количественного анализа

, мг/г S2 Sx ±Δ, % E, % Лютеолин-7-О-глюкуронид. ВЭЖХ (n = 5, P = 0.95, tP,f = 2.78) 38.11 0.32 0.25 0.70 1.84 Розмариновая кислота. ВЭЖХ (n = 5, P = 0.95, tP,f = 2.78) 55.63 0.46 0.30 0.85 1.52 Пулегон. ВЭЖХ (n = 5, P = 0.95, tP,f = 2.78) 37.14 0.35 0.26 0.73 1.97

По данным проведенных исследований определены общие показатели качества средства, обобщенные в таблице 4. Для стандартизации средства было предложено определение внешнего вида, подлинности (присутствие изопулегона), потери в массе при высушивании, золы сульфатной, тяжелых металлов, количественное определение лютеолин-7-О-глюкуронида, розмариновой кислоты и пулегона (ВЭЖХ) и микробиологической чистоты.

Таблица 4

Показатели качества средства

Предлагаемый способ, по сравнению с известным, позволяет получить препарат постоянного состава с более выраженной активностью за счет более высокого содержания действующих веществ (фенольных соединений и монотерпеноидов).

Рассчитать экономическую целесообразность предлагаемого способа в настоящее время не представляется возможным, однако вышеуказанные преимущества в сочетании с простой схемой получения способствуют рациональному использованию лекарственного растительного сырья и определяют перспективность внедрения данного способа в фармацевтическую промышленность.

Фармакотерапевтические свойства средства.

Исследования выполнены на белых крысах линии Wistar с исходной массой 180-200 г. Содержание животных соответствовало «Правилам лабораторной практики» (GLP) и Приказу МЗ РФ № 708Н от 23.08.2010 г. «Об утверждении правил лабораторной практики». Перед началом экспериментов животные, отвечающие критериям включения в эксперимент, распределялись на группы с учетом пола, возраста, массы и принципа рандомизации. Экспериментальную работу осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР №755 от 12.08.77 г.), «Правилами, принятыми в Европейской конвенции по защите позвоночных животных (Страсбург, 1986). Средство в дозах 50, 100, 200 и 300 мг/кг и валерианы экстракт (препарат сравнения; Дальхимфарм) в дозе 120 мг/кг, вводили животным внутрижелудочно в форме водного раствора в объеме 10 мл/кг один раз в сутки в течение в течение 7 дней, последний раз за 30 мин до тестирования. Анксиолитическое действие средства исследовали согласно методическим указаниям [9] в тестах «приподнятый крестообразный лабиринт», «светлая/темная камера», «конфликтная ситуация в варианте Vogel», антидепрессивное действие - в тесте «поведенческого отчаяния по Порсолту». Статистическая обработка полученных результатов проводилась с помощью пакета программ «Biostat-2006» с использованием t-критерия Стьюдента. Различия между сравниваемыми группами считали статистически значимыми при р ≤ 0.05.

Анксиолитическое действие средства в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт». Для проведения исследований животных помещали на центральную площадку приподнятого крестообразного лабиринта и в течение 5 мин регистрировали следующие показатели: время пребывания животных в открытых и закрытых рукавах, а также на центральной площадке, количество заходов в открытые и закрытые рукава, число свещиваний и вертикальных стоек, а также количество актов дефекации. Результаты тестирования животных в приподнятом крестообразном лабиринте показали, что контрольные животные предпочитают большую часть времени проводить в закрытых рукавах, чем открытых (таблица 5). Курсовое введение животным средства в дозах 100, 200 и 300 мг/кг и валерианы экстракта в дозе 120 мг/кг подавляло у крыс чувство страха открытого пространства, в результате чего количество заходов в открытые рукава установки в данных группах увеличилось в 6.0, 8.0, 4.0 и 7.0 раза, а время, проведенное в них в 7.2, 13.3, 1.9 и 12.3 раза, соответственно по сравнению с показателями контрольных животных. У животных данных опытных групп отмечалось статистически значимое увеличение времени нахождения на центральной площадке лабиринта по сравнению с контролем.

Таблица 5

Влияние средства и валерианы экстракта на поведение белых крыс в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт»

Примечание: * - различия статистически значимы при р≤0.05 между данными контрольной и опытной групп; n - число животных в группе.

Применение испытуемого средства в дозе 50 мг/кг не вызывало значимых изменений количества заходов в открытые и закрытые рукава лабиринта, при этом у животных первой опытной группы отмечалась тенденция к увеличению времени проведения в открытых рукавах установки. Проведенные исследования показали, что использование средства и валерианы экстракта вызывает увеличение общей двигательной активности животных в данном тесте (таблица 5). Так у животных, получавших средство в дозах 100, 200 и 300 мг/кг и валерианы экстракт в дозе 120 мг/кг, количество заходов в закрытые рукава лабиринта увеличилось на 50, 58, 33 и 42% по сравнению с показателем контрольных животных.

Вертикальная активность у животных на фоне введения средства в дозах 100 и 300 мг/кг повысилась в 1.6 раза, при применении испытуемого средства в дозе 200 мг/кг и валерианы экстракта - в 1.9 раза по отношению к контролю. В опытных групп отмечались свешивания животных с установки, тогда как в контрольной группе ни одно животное не выполняло данное действие. Увеличение исследовательской активности и понижение чувства страха и тревоги у животных опытных групп можно объяснить снижением у них уровня эмоциональности (таблица 5). Так, у животных опытных групп количество актов дефекаций было ниже такового показателя контрольных животных в среднем в 1.6 раза. Таким образом, средство в диапазоне доз 100-300 мг/кг оказывает выраженное анксиолитическое действие в условиях ненаказуемого поведения, увеличивая количество заходов и время пребывания животных в открытых рукавах приподнятого крестообразного лабиринта. Данный эффект сопоставим с таковым у препарата сравнения - валерианы экстрактом.

Анксиолитическое действие средства в тесте «светлая/темная камера». Результаты тестирования животных в тесте «светлая/темная камера» показали, что контрольные животные предпочитают большую часть времени проводить в темном отсеке установки (таблица 6). Курсовое введение животным средства в дозах 50, 100 и 200 мг/кг угнетало чувство страха и тревоги, о чем свидетельствовало увеличение количества переходов между камерами на 69, 54 и 62% и времени пребывания животных в светлом отсеке установки на 56, 58 и 88% соответственно по сравнению с таковыми показателями животных контрольной группы (таблица 6). Таким образом, средство в диапазоне доз 50-200 мг/кг оказывает выраженное анксиолитическое действие в условиях ненаказуемого поведения, увеличивая количество переходов и время пребывания в светлом отсеке «светлой/темной» камеры. Данный эффект сопоставим с таковым у препарата сравнения - валерианы экстрактом.

Таблица 6

Влияние средства и валерианы экстракта на поведение белых крыс в тесте «светлая/темная камера»

Примечание: * - различия статистически значимы при р≤0.05 между данными контрольной и опытной групп; n - число животных в группе.

Анксиолитическое действие средства в тесте «конфликтная ситуация по Vogel». Конфликтную ситуацию создавали, сталкивая питьевую и оборонительную мотивации, путем подавления болевым электрическим раздражителем питьевого рефлекса при потреблении крысами воды из чашки. Об анксиолитическом влиянии средства судили по числу наказуемых взятий воды животным за 3 мин нахождения в камере. Установлено, что курсовое введение животным средства в диапазоне доз 100-300 мг/кг устраняло чувство тревоги и страха, увеличивая число наказуемых взятий воды в среднем в 3.3 раза по сравнению с таковым показателем у контрольных животных (таблица 7).

Таблица 7

Влияние средства и валерианы экстракта на поведение белых крыс в тесте «конфликтная ситуация по Vogel» (А) и тесте «поведенческого отчаяния по Порсолту» (Б)

Примечание: * - различия статистически значимы при р ≤ 0.05 между данными контрольной и опытной групп; n - число животных в группе.

У животных, получавших средство в дозе 50 мг/кг и препарат сравнения валерианы экстракт, данный показатель повысился по отношению к контролю в 2.0 раза. Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что введение животным средства в диапазоне доз 50-300 мг/кг оказывает выраженное анксиолитическое действие в условиях наказуемого поведения, достоверно увеличивая количество взятий воды в методике «конфликтная ситуация по Vogel». При этом средство в дозах 100-300 мг/кг по эффективности превосходит валерианы экстракт.

Антидепрессивное действие средства в тесте «поведенческого отчаяния по Порсолту». Антидепрессивное действие средства исследовали в тесте «поведенческого отчаяния по Порсолту». Определяли время иммобилизации животных в течение 6 мин. Установлено, что введение крысам средства в дозах 50, 100 и 200 мг/кг снижает время иммобилизации животных в тесте «поведенческого отчаяния» на 17, 34 и 25% соответственно по сравнению с аналогичным показателем животных контрольной группы (таблица 7). Использование валерианы экстракта не оказывало влияние на поведение животных в данном тесте. Таким образом, полученные данные позволяют заключить, что средство во всех исследуемых дозах оказывает антидепрессивное действие, превосходящее таковое препарата сравнения.

Источники информации

1. Carović-Stanko K., Petek M., Grdiša M., Šatović Z. Medicinal plants of the family Lamiaceae as functional foods // Czech Journal of Food Sciences. - 2016. - Vol. 34. - P. 377-390. doi: 10.17221/504/2015-CJFS.

2. Trivellini A., Lucchesini M., Maggini R., Mosadegh H., Salomè T. Lamiaceae phenols as multifaceted compounds: bioactivity, industrial prospects and role of “positive-stress” // Industrial Crops and Products. - 2016. - Vol. 83. - P. 241-254. doi: 10.1016/j.indcrop.2015.12.039.

3. Takeda H., Tsuji M., Inazu M., Matsumiya T. Rosmarinic acid and caffeic acid produce antidepressive-like effect in forced swimming test in mice // European Journal of Pharmacology. - 2002. - Vol. 449. - P. 261-267. doi: 10.1016/S0014-2999(02)02037-X.

4. de Sousa D.P., Nóbrega F.F., de Lima M.R., de Almeida R.N. Pharmacological activity of (R)-(+)-pulegone, a chemical constituent of essential oils // Zeitschrift für Naturforschung C. - 2011. - Vol. 66. - P. 353-359. PMID: 21950159.

5. Патент на изобретение RU(11)2429001(13)C1. Средство «Таблетки для ума». Опубликовано: 20.09.2011. Бюл. № 26. - прототип.

6. Патент на изобретение RU(11)2199334(13)C1. Средство "Прасковья". Опубликовано: 27.02.2003. Бюл. № 6. - прототип.

7. Olennikov D.N., Kashchenko N.I., Chirikova N.K. A novel HPLC-assisted method for investigation of the Fe²⁺-chelating activity of flavonoids and plant extracts // Molecules. - 2014. - Vol. 19. - P. 18296-18316. doi: 10.3390/molecules191118296.

8. Süntar I., Nabavi S.M., Barreca D., Fischer N., Efferth T. Pharmacological and chemical features of Nepeta L. genus: Its importance as a therapeutic agent // Phytotherapy Research. - 2018. - Vol. 32. - P. 185-198. doi: 10.1002/ptr.5946.

9. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / Под ред. А.Н. Миронова. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.