Результат интеллектуальной деятельности: Способ оценки эффективности стандартной терапии у больных нумулярной микробной экземой

Изобретение относится к области медицины, а именно дерматологии и клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки эффективности проводимой стандартной терапии больных нумулярной микробной экземой.

Реактивность организма на внедрение инфекционных агентов, включая бактерии, вирусы, грибы и паразиты зависит от состояния иммунной системы [Biagini Myers J.M. Eczema in erly life: genetics, the skin barrier and lessons lesrned from birth cohort studies / J.M. Biagini Myers, G.K. Khurana Hershey // J Pediatr. - 2010. №157(5). - P. 704-14]. Первичные иммунодефицитные состояния, а так же вторичные изменения приводят к слабому иммунному ответу на внедрение микробных агентов. Возникающая персистенция аллергенов усугубляет изначальную дисфункцию иммунной системы. Одним из клинических вариантов данного нарушения адаптационной иммунной реакции является микробная экзема [Bartlett A. Adult eczema // Nurs Stand. - 2010. №24. - P. 43-51]. Механизмы развития иммунных нарушений в организме в целом и непосредственно в коже больных нумулярной микробной экземой, метаболические нарушения, способствующие снижению активности факторов неспецифической защиты и их взаимосвязь с иммунной реактивностью на сегодняшний день изучены недостаточно [Потекаев Н.С. Экзема: ремарки к современным представлениям // Клин, дерматология и венерология. - 2009. - №1. - С. 67-73].

Нейтрофилы являются основными фагоцитирующими клетками, мигрирующими из центрального кровотока в очаги воспаления при проникновении патогенов, где преимущественно и реализуется их защитная функция [Ярилин А.А. Иммунология: Учебник / А.А. Ярилин //. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. - 752 с.].

В последние годы для нумулярной микробной экземы характерно тяжелое течение, частое рецидивирование, резистентность к стандартным методам лечения [Скрипкин Ю.К. Кожные и венерические болезни / Ю.К. Скрипкин, А.А. Кубанова, В.Г. Акимова. - М: ГЭОТАР-медиа. 2012. - 544 с.].

Наиболее близким аналогом изобретения является способ прогноза течения и оценки эффективности лечения атопического дерматита, который заключается в проведении клинического и лабораторного обследования пациентов с верифицированным атопическим дерматитом с определением содержания в сыворотке крови белка - лактоферрина (ЛФ) в мкг/мл, альфа-1-антитрипсина (a1-AT) в г/л, альфа-2-макроглобулина (а2-МГ) в г/л, далее вычисляют коэффициент К по определенной формуле и при его значениях от 6 до 15 прогнозируют легкую степень тяжести заболевания, а при 15 и более -среднюю и тяжелую степень тяжести заболевания, через месяц после лечения проводят повторное обследование с вычислением коэффициента К и при его снижении на 30% и более от его исходного значения лечение считают эффективным, прогнозируют длительную ремиссию, а при снижении коэффициента К менее 30% от его исходного значения лечение считают малоэффективным, прогнозируют короткий период ремиссии и высокий риск рецидива [патент RU 2603463, 2016 г.]. Недостатками данного способа являются несвоевременность оценки эффективности лечения и трудоемкость.

Задачей изобретения стала разработка способа оценки эффективности проводимой стандартной терапии у больных нумулярной микробной экземой.

Техническим результатом при использовании изобретения является повышение точности и своевременности оценки, упрощение исследования.

Предлагаемый способ оценки эффективности проводимой стандартной терапии у больных нумулярной микробной экземой осуществляется следующим образом. У больного нумулярной микробной экземой на 10-ый день терапии путем прокола скарификатором кожи в очаге воспаления (1-10 мм от края очага) выполняют забор 40-60 мкл капиллярной крови в капиллярную пробирку. В полученном материале определяют фагоцитарное число (ФЧ) и окислительно-восстановительноую активность нейтрофилов в тесте спонтанного восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест спонт.). При значениях ФЧ и НСТ-теста спонт. соответственно 5,0 и 5,0% и ниже эффективность лечения оценивают как низкую, а при 6,0 и 6,0% и выше соответственно - как высокую.

ФЧ - процент нейтрофилов с фагоцитированным материалом. Метод основан на способности нейтрофилов к поглощению различных корпускулярных агентов, которые находятся вместе с испытуемыми клетками. [Новиков Д.К. Оценка иммунного статуса / Д.К. Новиков, В.И. Новикова. - Москва; Витебск, 1996. - 281 с.].

Кровь (40 мкл) инкубируют с равным объемом суспензии латекса (диаметр частицы 1,49 мкм) фирмы «Биолайн» (Россия) при температуре 37°C в термостате суховоздушном ТС-80М-2 (Россия) 30 мин в лунках полистеролового круглодонного планшета, центрифугируют в центрифуге Biosan LMC- 300 (Литва) и ресуспендируют в 20 мкл фосфатнобуферного раствора (ФСБР). Переносят суспензию клеток на предметные стекла, фиксируют 96° этиловым спиртом и окрашивают 0,5% раствором нейтрального красного. Учет результата проводят в бинокулярном микроскопе Микмед-1 (Россия) под иммерсией (10×100) путем просматривания 200 клеток.

НСТ-тест спонт. свидетельствует о «метаболическом взрыве», возникающем в нейтрофиле в связи с фагоцитозом. Данный тест выявляет фагоцитирующие нейтрофилы и характеризует их ферментные системы, обеспечивающие выработку боокислителей с бактерицидным действием. НСТ-тест спонт. является информативным методом для оценки резистентности при изучении иммунного статуса. Принцип метода основан на способности нейтрофилов поглощать нитросиний тетразолий и восстанавливать его в гранулы нерастворимого диформазана синего цвета [Имельбаева Э.А. Методические указания к занятиям по иммунологии и серологии: Учебно-методическое пособие для специалистов по клинической и лабораторной диагностике / Э.А. Имельбаева, P.M. Хайруллина, Ю.А. Медведев. - Уфа, 2015. - 87 с.].

Для постановки реакции в лунки полистеролового круглодонного планшета к 40 мкл крови добавляют 40 мкл 0,1% раствора нитросинего тетразолия фирмы Sigma (НСТ-тест спонт.). Суспензии клеток инкубируют 30 мин, центрифугируют и ресуспендируют в 20 мкл ФСБР. Переносят суспензию клеток на предметные стекла, фиксируют 96° этиловым спиртом и окрашивают 0,5% раствором нейтрального красного. Учет результата проводят в бинокулярном микроскопе Микмед-1 (Россия) под иммерсией (10×100) путем просматривания 200 клеток и определения процента положительно прореагировавших клеток на 100 фагоцитов. В каждом мазке подсчитывают количество нейтрофилов, среди которых определяют процент клеток, содержащих включения диформазана.

Предлагаемым способом была проведена оценка эффективности стандартной терапии у 104 больных с нумулярной микробной экземой. Ретроспективный анализ параметров ФЧ и НСТ-теста спонт. показал достоверную эффективность терапии нумулярной микробной экземой при значениях ФЧ и НСТ-теста спонт. выше 6,0 и 6,0%, соответственно, и неэффективность терапии при ФЧ и НСТ-теста спонт. ниже 5,0 и 5,0% в капиллярной крови из очага воспаления на 10-ый день лечения (таблица).

Изобретение иллюстрируется следующими примерами:

Пример 1. Больной П., поступил на стационарное лечение в ГАУЗ Республиканский кожно-венерологический диспансер №1 с жалобами на высыпания на гладкой коже верхних и нижних конечностей, зуд. Возраст - 41 год. Болен в течение 7-ми лет. Обострение наблюдается в течение 2-х недель. Лечение по данному обострению дерматоза не получал. На коже верхних и нижних конечностей наблюдались множественные высыпания в виде характерных округлых бляшек от 1*1 см до 5*5 см с четкими границами, гиперемированные, умеренно инфильтрированные, с множественными серозными колодцами, пустулами и гнойными корками. До лечения индекс оценки тяжести микробной экземы (ИОТМЭ) составлял 19 баллов, что соответствовало средне-тяжелому течению данного дерматоза. При бактериологическом исследование с очагов высеян Staphylococcus epidermidis. Клинический диагноз - экзема микробная, нумулярная форма, распространенная, хроническая, обострение, средне-тяжелое течение. При поступлении до начала лечения в капиллярной крови из очага воспаления ФЧ составляло 4,5, а НСТ-тест спонт. 3,8%. Больному было назначено стандартное лечение:

1. раствор кальция глюконат 10% - 10.0 в/м №10 ч/д;

2. раствор натрия тиосульфат 30% - 10.0 в/в кап. на натрия хлориде 0.9%-200.0 №10 ч/д;

3. таблетки лоратадин 0.01 на ночь №20 дней;

4. капсулы доксициклин 100 мг I день 2 капс. одномоментно, II-Х день по 1 капе. *2 раза в день (в соответствии с результатами посева на чувствительность к антибиотикам);

5. капсулы ретинола ацетат 33000 ME по 2 капе, на ночь №20 дней;

6. наружно: мазь гидрокортизона 17-бутират* 2 раза в день №20 дней, мазь гентамициновая 0,1%*2 раза в день №10 дней (в соответствии с результатами посева на чувствительность к антибиотикам).

В процессе лечения отмечалось обратное развитие воспалительных явлений в очагах. На 10-ый день проводимой терапии содержание ФЧ составляло 7,1, НСТ-тест спонт. 7,8%. в капиллярной крови из очага воспаления. К моменту выписки из стационара (20-ый день лечения) гиперемия, инфильтрация и мокнутие разрешились, корки отпали, на месте разрешившихся очагов сохранялась поствоспалительная пигментация.

Таким образом, у данного больного на 10-ый день лечения значения ФЧ и НСТ-тест спонт. были выше 6,0 и 6,0%, что соответствовало клинической эффективности проводимой терапии нумулярной микробной экземы.

Пример 2. Больная К., поступила на стационарное лечение в ГАУЗ Республиканский кожно-венерологический диспансер №1 с жалобами на высыпания на гладкой коже верхних и нижних конечностей, зуд. Возраст - 42 года. Считает себя больной в течение 5-ти лет. Обострение наблюдается в течение 1,5 недель. Лечение по данному обострению дерматоза не получала. На коже верхних и нижних конечностей наблюдались множественные высыпания в виде характерных округлых бляшек от 1*1 см до 5*5 см с четкими границами, гиперемированные, инфильтрированные, с множественными серозными колодцами, пустулами и гнойными корками. До лечения ИОТМЭ составлял 19 баллов, что соответствовало средне-тяжелому течению данного дерматоза. При бактериологическом исследование с очагов высеян Staphylococcus epidermidis. Клинический диагноз - экзема микробная, нумулярная форма, распространенная, хроническая, обострение, средне-тяжелое течение. При поступлении до начала лечения в капиллярной крови из очага воспаления ФЧ составляло 4,8, НСТ-тест спонт. 4,8%. Больной было назначено стандартное лечение:

1. раствор кальция глюконат 10% - 10.0 в/м №10 ч/д;

2. раствор натрия тиосульфат 30% - 10.0 в/в кап.на натрия хлориде 0.9% - 200.0 №10 ч/д;

3. таблетки лоратадин 0.01 на ночь №20 дней;

4. капсулы доксициклин 100 мг I день 2 капс. одномоментно, II-Х день по 1 капе. *2 раза в день (в соответствии с результатами посева на чувствительность к антибиотикам);

5. капсулы ретинола ацетат 33000 ME по 2 капе, на ночь №20 дней;

6. наружно: мазь гидрокортизона 17-бутират* 2 раза в день №20 дней, мазь гентамициновая 0,1%*2 раза в день №10 дней (в соответствии с результатами посева на чувствительность к антибиотикам).

В процессе лечения воспалительные явления в очагах продолжали прогрессировать: гиперемия и серозные колодцы на поверхности очагов сохранялись, инфильтрация усиливалась. На 10-ый день терапии ИОТМЭ составил 30 баллов, что соответствовало переходу средне-тяжелого течения заболевания в тяжелое течение. На 10-ый день проводимой терапии содержание ФЧ составляло 3,7, НСТ-тест спонт. 3,4%. в капиллярной крови из очага воспаления. К стандартному лечению дополнительно был назначен иммуномодулятор. К моменту выписки из стационара (30-ый день лечения) гиперемия, инфильтрация значительно уменьшились, мокнутие разрешилось, корки отпали, на месте разрешившихся очагов сохранялась поствоспалительная пигментация.

Таким образом, у данной больной на 10-ый день лечения значения ФЧ и НСТ-тест спонт. были ниже 5,0 и 5,0%, что соответствовало низкой клинической эффективности проводимой терапии нумулярной микробной экземы и привело к необходимости коррекции схемы лечения, а также пролонгированию курса стационарного лечения.

Как видно из приведенных примеров, результаты определения ФЧ и НСТ-теста спонт. в капиллярной крови из очага воспаления на 10-ый день лечения позволяют оценивать эффективность проводимой стандартной терапии.

Авторами в научно-медицинской и патентной литературе не было обнаружено сведений об использовании определения ФЧ и НСТ-теста спонт. в капиллярной крови из очага воспаления у больных нумулярной микробной экземой на 10-ый день лечения для ранней оценки эффективности стандартной терапии, проводимой больным нумулярной микробной экземой. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию патентоспособности «новизна».

Исследованиями авторов была впервые доказана возможность ранней оценки эффективности стандартной терапии нумулярной микробной экземы предлагаемым способом. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».

Предлагаемый способ легко воспроизводим в условиях лаборатории стационара. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию патентоспособности «промышленная применимость».

*Различия с показателями на этапе «до лечения» достоверно (р<0,01)