СТИМУЛЯТОР ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К CGRP

Область техники, к которой относится настоящее изобретение

Настоящее изобретение относится к стимулятору чувствительности к CGRP (пептиду, кодируемому геном кальцитонина).

Уровень техники настоящего изобретения

В коже формируется сосудистое сплетение, состоящее из трех слоев сосудистых лож, которые являются параллельными поверхности кожи. Данное сосудистое сплетение участвует в кожном кровообращении. Одна из основных функций кожного кровообращения заключается в регуляции температуры тела, и при холодовом воздействии или тепловом воздействии кровеносные сосуды кожи сужаются или расширяются и расслабляются, посредством этого вызывая изменение тока крови кожного кровообращения, и температура тела поддерживается подавлением или стимулированием тепловыделения телом. Кожное кровообращение также играет ключевую роль с точки зрения регуляции распределения системного тока крови, и на него влияет не только информация от центральных или периферических терморецепторов, но также информация от барорецепторов, волюморецепторов или хеморецепторов, или сосудодвигательный рефлекс, вызванный движением.

Кожное кровообращение подвергается изменениям, вызванным старением. Известно, что при старении структура кожного сосудистого сплетения или количество тока крови изменяются, и величина изменения тока крови в результате холодового или теплового воздействия снижается. Следовательно, может возникать проблема, что кровообращение в коже ухудшается при старении, и посредством этого метаболизм в коже в дальнейшем ослабляется.

Кожное кровообращение регулируется двухмерными системными механизмами, включая симпатическую нервную систему, и локальными механизмами, включая местные регуляторы. Аксональный рефлекс представляет собой один из локальных механизмов. Он представляет собой явление, при котором импульс, генерируемый в сенсорных нервах кожи стимулированием, передается в обратном направлении в другие части в процессе передачи импульса в центр, импульс высвобождает нейропептид из нервных окончаний, и кровеносные сосуды кожи расширяются. Данные нейропептиды представляют собой вещество P (SP) или пептид, кодируемый геном кальцитонина (CGRP).

CGRP представляет собой нейропептид, состоящий из 37 аминокислот, и он биосинтезируется тканеспецифическим селективным сплайсингом гена кальцитонина. CGRP широко распространен в центральной нервной системе и сенсорной периферической нервной системе, и проявляет свое действие посредством специфических рецепторов. Хорошо известно, что CGRP-рецепторы экспрессируются в сосудистых эндотелиальных клетках и клетках гладкой мускулатуры сосудов. В обоих типах данных клеток, когда CGRP связывается с рецептором на них, кровеносные сосуды расширяются, и ток крови усиливается. В сосудистых эндотелиальных клетках, когда CGRP связывается с CGRP-рецептором клетки, внутриклеточный цАМФ повышается как результат опосредованной G-белком активации аденилатциклазы. Повышение цАМФ вызывает активацию протеинкиназы A с последующей активацией eNOS, и посредством этого стимулируется синтез NO. Таким образом полученный NO воздействует на клетки гладкой мускулатуры сосудов, и K⁺ каналы открываются посредством опосредованной NO активацией внутриклеточного цГМФ. Посредством этого, гладкие мышцы сосудов расслабляются, кровеносные сосуды расширяются, и вследствие этого, ток крови усиливается. В случае когда CGRP связывается непосредственно с клетками гладкой мускулатуры сосудов, опосредованная G белком активация аденилатциклазы вызывает активацию протеинкиназы A, и K⁺ каналы открываются. Как результат, гладкая мускулатура сосудов также расслабляется, кровеносные сосуды расширяются, и ток крови усиливается.

Связь между CGRP и током крови является хорошо известной. Например, известно, что введение CGRP крысе увеличивает кожный ток крови (непатентная литература 1); кровяное давление CGRP-нокаутных мышей увеличивается (непатентная литература 2); кожный ток крови снижается у крысы, которой ввели нейтрализующее CGRP-антитело (непатентная литература 3); у пациентов, страдающих от болезни Рейно, которая, как считают, вызвана гиперсокращением периферических кровеносных сосудов, отсутствуют содержащие CGRP нервы в пальцах (непатентная литература 4); когда CGRP вводят внутривенно пациенту с болезнью Рейно, количество кожного тока крови в руке увеличивается (непатентная литература 5) и подобные.

Физиологическое действие CGRP включает, в добавление к расширяющему кровеносные сосуды действию, многие функции, такие как регуляция вещества P при воспалении, увеличение проницаемости сосудов, регуляция никотиноподобных рецепторов в нервно-мышечных синапсах, подавление гликогенеза и стимулирование гликолиза, стимулирование секреции панкреатических ферментов, подавление секреции желудочного сока, стимулирование сердцебиения, регуляция нервной активности, регуляция метаболизма кальция, стимулирование остеогенеза, секреции инсулина, повышение температуре тела и снижение потребляемой пищи. Кроме того, известно, что CGRP также участвует в противовоспалительном действии, опосредованном синтезом простагландинов, предварительном кондиционировании для ишемии/реперфузии, и беременности и родах, поскольку рецепторы экспрессируются в миометрии, матке и плаценте.

Ввиду описанного выше физиологического действия примеры применения CGRP или стимулятора чувствительности к CGRP включают стимулирование кровообращения, стимулирование тока крови, стимулирование заживления ран и лечение гипертензии, сердечной недостаточности, заболевания печени, вызванного ишемической реперфузией, почечной недостаточности, желудочно-кишечной язвы, сепсиса, остеопороза, аритмии, субарахноидального кровоизлияния, легочной гипертензии, гиперчувствительности замедленного типа, токсикоза при беременности и преждевременных родов и подобных. Кроме того, примеры применения CGRP-рецепторного антагониста включают лечение мигрени, гиперстезии и подобных. Действительно, многие соединения, являющиеся CGRP-рецепторными антагонистами, разрабатываются в качестве противомигренозных лекарственных средств.

Кроме того, также известно, что имеется связь между CGRP и пародонтозом. В непатентной литературе 6 сообщалось, что в случае воспаления включается большое количество сенсорных нервов, экспрессирующих CGRP, и CGRP проявляет противовоспалительные свойства за счет подавления синтеза H₂O₂ в макрофагах, подавляет презентацию антигена или подавляет деление лимфоцитов. Кроме того, сообщалось, что поскольку CGRP обладает активностью, способствующей пролиферации клеток пульпы человека, и ожидают, что он будет проявлять дентиногенез, опосредованный стимулированием экспрессии BMP-2, CGRP связан с образованием пульпы зубов (непатентная литература 7 и 8). Кроме того, поскольку CGRP обладает ингибирующим резорбцию кости действием (непатентная литература 9), примеры терапевтического применения CGRP или стимулятора чувствительности CGRP также включают пародонтоз.

Вещество, способное стимулировать или подавлять чувствительность кожного кровообращения к CGRP, является пригодным для улучшения изменения кожного кровообращения, вызванного старением, как описано выше, или для предотвращения или лечения заболеваний или симптомов, описанных выше. Вещества, способные уменьшать чувствительность к CGRP, которые являются известными к настоящему времени, включают CGRP-рецепторный антагонист, анти-CGRP антитело, и водный экстракт ириса (патентная литература 1). Однако все еще желательно разработать другое вещество, которое может стимулировать или уменьшать чувствительность к CGRP, и которое является пригодным для регуляции кожного кровообращения или облегчения различных заболеваний.

Что касается определенных видов лигнанов, к настоящему времени описано, что лигнаны обладают ослабляющим клеточную адгезию действием, подавляют раковые метастазы и предотвращают и лечат артериосклероз (патентная литература 2); подавляющим NF-кB активацию действием, регуляцией генной экспрессии, действием против вируса иммунодефицита человека, предотвращают или облегчают воспаление, предотвращают или облегчают заболевания взрослых и подавляют раковые метастазы (патентная литература 3); и предотвращающим или лечащим пародонтоз действием (патентная литература 4). Кроме того, к настоящему времени сообщается, что подофиллотоксины, которые представляют один из видов лигнанов, являются цитотоксичными и обладают активностями, такими как активность, подавляющая заболевания печени, активность, ингибирующая 5-липооксигеназу, активность, подавляющая приток Ca в клетки, вызванный раздражением, двойная ингибирующая COX-2 и 5-липооксигеназу активность, антиангиогенная активность, противоопухолевая активность, антиоксидантная активность и противовирусная активность (непатентная литература 10-18).

Известно, что подофиллотоксины содержатся в продукте культивирования корней Linum flavum, Anthriscus sylvestris (бутень одуряющий, купырь лесной (shaku, yamaninjin)), Pulsatilla koreana (корейский прострел (отборная okinagusa)), или вида эрнандия или Hernandia nymphaeifolia рода эрнандия семейства эрнандевых (непатентная литература 10, 19 и 20). Непатентная литература 21 и 22 сообщает о расширяющем кровеносные сосуды действии или антигипертензивном действии растений рода Эрнандия или компонентов, содержащихся в них; однако эффективность растений не обязательно является четко известной. Кроме того, поскольку растения рода эрнандия также содержат другие компоненты в добавление к подофиллотоксинам, вклад подофиллотоксинов в эффективность растений рода эрнандия не является очевидным.

Список цитируемой литературы

Патентная литература

Патентная литература 1: Японский патент No.3093154

Патентная литература 2: JP 10-067656 A

Патентная литература 3: JP 10-175861 A

Патентная литература 4: JP 2005-162653 A

Непатентная литература

Непатентная литература 1: Nature 1988, 335: 164-167

Непатентная литература 2: Hypertension, 2000, 35: 470-475

Непатентная литература 3: Br J Pharmacol, 2008, 155: 1093-1103

Непатентная литература 4: Lancet, 1990, 336: 1530-1533

Непатентная литература 5: Lancet, 1989, 2 (8676): 1354-1357

Непатентная литература 6: Journal of Endodontics, 2008, 34 (7): 773-788

Непатентная литература 7: J Dent Res, 1995, 74: 1066-1071

Непатентная литература 8: J Endod, 1997, 23: 485-489

Непатентная литература 9: Calcif Tissue Int, 1987, 40: 149-154

Непатентная литература 10: Journal of Natural Products, 1986, 49 (3): 435-439

Непатентная литература 11: Yakugaku Zasshi, 1985, Volume 105 (2): 109-118

Непатентная литература 12: Planta Medica, 2007, 73 (13): 1331-1357

Непатентная литература 13: Archives of Toxicology, 2002, 75 (11): 695-702

Непатентная литература 14: Biol Pharm Bull, 2004, 27: 786-788

Непатентная литература 15: Planta Medica, 2002, 68: 271-274

Непатентная литература 16: Bioorganic и Medicinal Chemistry Letters, 2009, 19 (15): 4367-4371

Непатентная литература 17: Acta Horticulturae, 2003, 597: 191-198

Непатентная литература 18: Archiv der Pharmazie, 1994, 327 (3): 175-179

Непатентная литература 19: Bioorganic и Medicinal Chemistr, 2005, Volume 13 (21): 5892-5908

Непатентная литература 20: Planta Medica, 1996, 62: 528-533

Непатентная литература 21: Planta Medica, 2001, 67: 593-598

Непатентная литература 22: Records of Natural Products, 2009, 3 (1): 1-22

Сущность настоящего изобретения

Настоящее изобретение относится к применению лигнана, представленного следующей формулой (I), для получения стимулятора чувствительности к клеточному CGRP, улучшителя кожного кровообращения, стимулятора кровообращения или тока крови, улучшителя кожного метаболизма или стимулятора заживления ран:

В которой R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу.

Кроме того, настоящее изобретение относится к применению лигнана, представленного выше формулой (I), для стимулирования клеточной чувствительности к CGRP, улучшения кожного кровообращения, стимулирования кровообращения или тока крови, улучшения кожного метаболизма или стимулирования заживления ран.

Кроме того, настоящее изобретение относится к лигнану, представленному выше формулой (I), для применения в стимулировании клеточной чувствительности к CGRP, улучшении кожного кровообращения, стимулировании кровообращения или тока крови, улучшении кожного метаболизма или стимулировании заживления ран.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу стимулирования клеточной чувствительности к CGRP, улучшения кожного кровообращения, стимулирования кровообращения или тока крови, улучшения кожного метаболизма или стимулирования заживления ран у человека или млекопитающего, отличного от человека, причем способ включает введение лигнана, представленного выше формулой (I), человеку или млекопитающему, отличному от человека.

Краткое описание чертежей

Фигура 1 показывает стимулирование чувствительности к CGRP HCASMC, где A показывает соединение TD-1, и B показывает соединение TD-2. *:p<0,05, **:p<0,01 (относительно контроля, критерий Дуннетта, N=3).

Фигура 2 показывает стимулирование чувствительности к CGRP HCASMC соединениями TD-1 и TD-2, добавленными в различных условиях. *:p<0,05, **:p<0,01 (относительно контроля, критерий Дуннетта, N=3).

Подробное описание настоящего изобретения

В настоящем изобретении термин "нетерапевтический" представляет собой понятие, которое не включает медицинскую практику, то есть, практику излечивания, проводимую на человеческом теле лечением. Он представляет собой понятие.

В настоящем изобретении термин "улучшение" относится к облегчению заболевания или симптома, предотвращению или замедлению ухудшения заболевания или симптома, или купированию, предотвращению или замедлению развития заболевания или симптома.

В настоящем изобретении термин "предотвращение" относится к предотвращению или задержке возникновения заболевания или симптома у индивида, или снижению риска возникновения заболевания или симптома у индивида.

В настоящем изобретении "стимулирование клеточной чувствительности к CGRP" обозначает стимулирование любой клеточной активности, вызванной CGRP. Когда CGRP связывается с CGRP-рецептором клетки, цАМФ в клетки увеличивается посредством опосредованной G-белком активации аденилатциклазы. Как результат повышения цАМФ, например, в клетках гладкой мускулатуры сосудов, K⁺ каналы открываются посредством активации протеинкиназы A. Как результат, клетки гладкой мускулатуры сосудов расслабляются, кровеносные сосуды расширяются, и ток крови увеличивается. Или же, в клетках эндотелия сосудов, eNOS активируется посредством активации протеинкиназы A, и стимулируется синтез NO. Кроме того, таким образом полученный NO воздействует на клетки гладкой мускулатуры сосудов, и K⁺ каналы открываются посредством опосредованной NO активации цГМФ в клетках. Как результат, клетки гладкой мускулатуры сосудов расслабляются, кровеносные сосуды расширяются, и ток крови увеличивается. Стимулятор клеточной чувствительности к CGRP по настоящему изобретению может стимулировать серию данных процессов в клетках, которые вызваны CGRP. Примеры действия стимулятора чувствительности к CGRP настоящего изобретения включают стимулирование связывания CGRP и его рецептора, увеличение активности G-белка, увеличение активности аденилатциклазы, увеличение внутриклеточного цАМФ, увеличение активности протеинкиназы A, усиление синтеза NO или активности цГМФ и стимулирование открытия K⁺ каналов. Предпочтительно "клеточную чувствительность к CGRP" можно определить, применяя величину увеличения внутриклеточного цАМФ, вызванного CGRP, в качестве коэффициента. Следовательно, Стимулятор чувствительности к CGRP настоящего изобретения предпочтительно стимулирует увеличение внутриклеточного цАМФ, вызванного CGRP.

"Клетка", для которой стимулируют чувствительность к CGRP в настоящем изобретении, конкретно не ограничена, при условии, что она представляет собой клетку, которая экспрессирует CGRP рецептор, или клетку, содержащую CGRP рецептор. Предпочтительные примеры клетки включают клетку гладкой мускулатуры сосудов, клетку эндотелия сосудов, фибробласт, остеобласт, амелобласт и одонтобласт, и более предпочтительные примеры включают клетку гладкой мускулатуры сосудов и клетку эндотелия сосудов. Альтернативно "клетка" может представлять собой клеточный дебрис или клеточную фракцию любой из клеток, перечисленных выше, или может также представлять собой ткань, содержащую любую из клеток, перечисленных выше, или продукт культивирования, полученный из любой из клеток, перечисленных выше.

Настоящее изобретение относится к обеспечению стимулятора клеточной чувствительности к CGRP.

Изобретатели настоящего изобретения провели исследование на материале, который способен стимулировать клеточную чувствительность к CGRP, и обнаружили, что лигнан, имеющий конкретную структуру, обладает действием, стимулирующим чувствительность к CGRP.

Настоящее изобретение относится к стимулятору чувствительности к CGRP, который способен стимулировать клеточную чувствительность к CGRP. Стимулятор чувствительности к CGRP является пригодным для облегчения изменения в кожном кровообращении, вызванного, например, старением, или для предотвращения или лечения различных заболеваний или симптомов, связанных с CGRP.

Стимулятор клеточной чувствительности к CGRP по настоящему изобретению включает лигнан, представленный следующей формулой (I), в качестве активного ингредиента:

В формуле (I) R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу. Алкокси-группа для R₁-R₄ предпочтительно представляет собой линейную или разветвленную группу, содержащую 1-10 атомов углерода, и ее примеры включают метокси-группу, этокси-группу, н-пропилокси-группу, изопропилокси-группу, н-бутилокси-группу, втор-бутилокси-группу, трет-бутилокси-группу, пентилокси-группу, гексилокси-группу, гептилокси-группу, октилокси-группу, нонилокси-группу, децилокси-группу и подобные. Алкокси-группа предпочтительно представляет собой алкокси-группу, содержащую 1-3 атомов углерода, более предпочтительно метокси-группу.

Лигнан, представленный выше формулой (I) (в настоящем изобретении далее называемый лигнаном формулы (I)), можно экстрагировать, например, из Thujopsis dolabrata (в основном из листьев и веток). Экстракцию осуществляют, подвергая Thujopsis dolabrata или его высушенный порошок экстракционной обработке обычно при 3°C-70°C, применяя воду, органический растворитель (например, петролейный эфир, н-гексан, циклогексан, тетрахлорид углерода, толуол, бензол, дихлорметан, хлороформ, диэтиловый эфир, этилацетат, бутанол, ацетон, пропанол, этанол, метанол, пиридин, полиэтиленгликоль, пропиленгликоль, бутиленгликоль или подобный), или их смесь (например, водный спирт).

Предпочтительный пример экстракции лигнана формулы (I) из сырого материала Thujopsis dolabrata может представлять собой способ погружения 100 г продукта сухого измельчения Thujopsis dolabrata в 1 литр этанола, экстрагирования в течение 7 дней при периодическом перемешивании при комнатной температуре, фильтрования таким образом полученного экстракта, выдерживания фильтрата в течение 3 дней при 5°C и затем снова фильтрования фильтрата с получением надосадочной жидкости. Затем остаток, полученный отгонкой растворителя из таким образом полученного экстракта, растворяют в растворителе, таком как метанол, этанол или этилацетат при необходимости; раствор подвергают колоночной хроматографии, применяя, например, гидрофильный полимер, такой как AMBERLITE XAD-2, DIAION HP-20 или TSK GEL HW-40; Sephadex, такой как SEPHADEX LH-20; силикагель для обращено-фазовой системы или силикагель; или целлюлозу в качестве носителя, и применяя, например, воду, метанол, этанол, этилацетат, хлороформ, дихлорметан, гексан, ацетон или бензол в качестве элюирующего растворителя; и полученные растворы фракционируют, например, тонкослойной хроматографией, обнаруживая требуемый компонент. Таким образом, можно получить требуемое вещество. Кроме того, необязательно требуемое вещество можно также очистить перекристаллизацией, применяя подходящий растворитель, такой как бензол, эфир, гексан, ацетон, метанол, этанол или вода.

Кроме того, лигнан формулы (I) можно получить способами, описанными в литературе (например, JP10-175861 A, Natural Product Report, 183-205, 1995 и подобных), и источник конкретно не ограничен. Альтернативно лигнан формулы (I) можно приобрести, например, у Quality Phytochemicals, 2Daybiochem, BOC Sciences, или Jamson PharmaChem Technology.

Как раскрыто в примерах, описанных ниже, лигнан формулы (I) обладает способностью значительно стимулировать клеточную чувствительность к CGRP. Следовательно, лигнан является пригодным в качестве стимулятора клеточной чувствительности к CGRP. Кроме того, лигнан может проявлять эффекты, такие как улучшение кожного кровообращения и стимулирование образование зубной пульпы, посредством действия, усиливающего чувствительность к CGRP, и как результат, лигнан является пригодным для улучшения кожного метаболизма, стимулирования кровообращения, стимулирования тока крови, стимулирования заживления ран или предотвращения и/или облегчения заболеваний, таких как гипертония, сердечная недостаточность, заболевание печени, вызванное ишемической реперфузией, почечная недостаточность, желудочно-кишечное изъязвление, септицемия, остеопороз, аритмия, субарахноидальное кровоизлияние, легочная гипертензия, гиперчувствительность замедленного типа, пародонтоз, токсикоз при беременности и преждевременные роды.

Иначе говоря, лигнан формулы (I) можно применять для стимулирования клеточной чувствительности к CGRP. Альтернативно лигнан формулы (I) можно применять для улучшения кожного кровообращения или улучшения кожного метаболизма, для стимулирования кровообращения или тока крови или для стимулирования заживления ран. Снова, альтернативно, лигнан формулы (I) можно применять для предотвращения и/или облегчения заболеваний, таких как гипертония, сердечная недостаточность, заболевание печени, вызванное ишемической реперфузией, почечная недостаточность, желудочно-кишечное изъязвление, септицемия, остеопороз, аритмия, субарахноидальное кровоизлияние, легочная гипертензия, гиперчувствительность замедленного типа, пародонтоз, токсикоз при беременности и преждевременные роды. Соответствующее применение может представлять собой применение на человеке или животном, отличном от человека, или применение in vitro, например, на ткани, органе, клетке и подобном, полученных из человека или животного, отличного от человека.

Кроме того, применение лигнана формулы (I) по настоящему изобретению может представлять собой терапевтическое применение, или может представлять собой нетерапевтическое применение. В настоящем изобретении нетерапевтическое применение лигнана формулы (I) может представлять собой, например, применение лигнана формулы (I) не в медицинской практике, но для улучшения кожного кровообращения, стимулирования кровообращения или тока крови или улучшения кожного метаболизма с целью поддержать или улучшить здоровье, или для улучшения кожного метаболизма или стимулирования заживления ран в косметических или эстетических целях. Кроме того, например, нетерапевтическое применение лигнана формулы (I) может обеспечивать лигнан формулы (I) с намерением применять лигнан формулы (I) не в медицинской практике, но для того чтобы получить эффекты, такие как улучшение кожного кровообращения, стимулирование кровообращения или тока крови, улучшение кожного метаболизма и стимулирование заживления ран, с целью поддержать или улучшить здоровье или с косметическими или эстетическими целями при обнаружении данных эффектов.

Следовательно, один вариант осуществления настоящего изобретения относится к стимулятору клеточной чувствительности к CGRP, содержащему лигнан формулы (I) в качестве активного ингредиента. Стимулятор чувствительности к CGRP можно применять для стимулирования клеточной чувствительности к CGRP, и оно основано на усиливающей чувствительность к CGRP активности, стимулятор чувствительности к CGRP можно применять для улучшения кожного кровообращения или улучшения кожного метаболизма, для стимулирования кровообращения или тока крови, для стимулирования заживления ран или для предотвращения и/или облегчения заболеваний, таких как гипертония, сердечная недостаточность, заболевание печени, вызванное ишемической реперфузией, почечная недостаточность, желудочно-кишечное изъязвление, септицемия, остеопороз, аритмия, субарахноидальное кровоизлияние, легочная гипертензия, гиперчувствительность замедленного типа, пародонтоз, токсикоз при беременности и преждевременные роды. Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения стимулятор чувствительности к CGRP по существу состоит из лигнана формулы (I). Предпочтительно стимулятор чувствительности к CGRP применяют для улучшения кожного кровообращения или улучшения кожного метаболизма, для стимулирования кровообращения или тока крови или для заживления ран.

Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к усилителю кожного кровообращения, содержащему лигнан формулы (I) в качестве активного ингредиента. Еще другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к усилителю кожного метаболизма, содержащему лигнан формулы (I) в качестве активного ингредиента. Предпочтительно стимулятор кожного метаболизма представляет собой агент для облегчения ослабления кожного метаболизма, вызванного, например, старением. Данный агент согласно примерному варианту осуществления по существу состоит из лигнана формулы (I).

Кроме того, другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к усилителю кровообращения или тока крови, содержащему лигнан формулы (I) в качестве активного ингредиента. Кроме того, другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к стимулятору заживления ран, содержащему лигнан формулы (I) в качестве активного ингредиента. Кроме того, еще другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к агенту для предотвращения и/или облегчения заболеваний, таких как гипертония, сердечная недостаточность, заболевание печени, вызванное ишемической реперфузией, почечная недостаточность, желудочно-кишечное изъязвление, септицемия, остеопороз, аритмия, субарахноидальное кровоизлияние, легочная гипертензия, гиперчувствительность замедленного типа, пародонтоз, токсикоз при беременности и преждевременные роды, причем агент содержит лигнан формулы (I) в качестве активного ингредиента. Согласно примерному варианту осуществления данный агент по существу состоит из лигнана формулы (I).

Кроме того, другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к применению лигнана формулы (I) для получения стимулятора клеточной чувствительности к CGRP. Еще другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к применению лигнана формулы (I) для получения усилителя кожного кровообращения, стимулятора кровообращения, стимулятора тока крови, стимулятора заживления ран или агента для предотвращения и/или облегчения заболеваний, таких как гипертония, сердечная недостаточность, заболевание печени, вызванное ишемической реперфузией, почечная недостаточность, желудочно-кишечное изъязвление, септицемия, остеопороз, аритмия, субарахноидальное кровоизлияние, легочная гипертензия, гиперчувствительность замедленного типа, пародонтоз, токсикоз при беременности и преждевременные роды. Предпочтительно соответствующий стимулятор кожного метаболизма представляет собой агент для облегчения ослабления кожного метаболизма, вызванного, например, старением. Согласно примерному варианту осуществления улучшающее кожное кровообращение действие, стимулирующее кровообращение или ток крови действие, стимулирующее заживление ран действие, или предотвращающее и/или облегчающее приведенные выше заболевания действие агента, описанного выше, вызвано усилением клеточной чувствительности к CGRP.

Лигнан формулы (I) можно применять для получения, например, композиции, лекарственного средства, препарата общего воздействия, косметического продукта, пищевого и питьевого продукта и подобных, которые предназначены для стимулирования клеточной чувствительности к CGRP, для улучшения кожного кровообращения или улучшения кожного метаболизма, для стимулирования кровообращения или тока крови, для стимулирования заживления ран или для предотвращения и/или облегчения заболеваний, таких как гипертония, сердечная недостаточность, заболевание печени, вызванное ишемической реперфузией, почечная недостаточность, желудочно-кишечное изъязвление, септицемия, остеопороз, аритмия, субарахноидальное кровоизлияние, легочная гипертензия, гиперчувствительность замедленного типа, пародонтоз, токсикоз при беременности и преждевременные роды. Соответствующие композиция, лекарственное средство, препарат общего воздействия, косметический продукт, пищевой и питьевой продукт, например, также включены в объем настоящего изобретения.

Композицию, лекарственное средство, препарат общего воздействия, косметический продукт, пищевой и питьевой продукт, например, можно получить или применять на человеке или животном, отличном от человека. Лигнан формулы (I) можно вводить, например, в композицию, лекарственное средство, препарат общего воздействия, косметический продукт, пищевой и питьевой продукт и подобный, и он может служить в качестве активного ингредиента для стимулирования клеточной чувствительности к CGRP, для улучшения кожного кровообращения или улучшения кожного метаболизма, для стимулирования кровообращения или тока крови, для стимулирования заживления ран или для предотвращения и/или облегчения заболеваний, таких как гипертония, сердечная недостаточность, заболевание печени, вызванное ишемической реперфузией, почечная недостаточность, желудочно-кишечное изъязвление, септицемия, остеопороз, аритмия, субарахноидальное кровоизлияние, легочная гипертензия, гиперчувствительность замедленного типа, пародонтоз, токсикоз при беременности и преждевременные роды.

Лекарственное средство или препарат общего воздействия содержит лигнан формулы (I) в качестве активного ингредиента. Лекарственное средство или препарат общего воздействия можно вводить в любой форме для введения. Введение можно осуществлять перорально или парентерально. Примеры лекарственной формы для перорального введения включают твердые формы для введения, такие как таблетка, таблетка с покрытием, гранула, порошок и капсула; и жидкие формы для введения, такие как эликсир, сироп и суспензия. Примеры лекарственной формы для парентерального введения включают инъекцию, вливание, трансдермальный препарат, трансмукозальный препарат, трансназальный препарат, энтеральный препарат, ингаляцию, суппозиторий, болюс и пластырь.

Лекарственное средство или препарат общего воздействия могут содержать только лигнан формулы (I), или могут содержать лигнан формулы (I) в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем. Примеры данного носителя включают вспомогательное вещество, пленкообразующее вещество, связующее вещество, наполнитель, разрыхлитель, смазывающий агент, разбавитель, регулятор осмотического давления, регулирующий рН агент, диспергатор, эмульгатор, антисептик, стабилизатор, антиоксидант, краситель, поглотитель ультрафиолетовых лучей, увлажнитель, загуститель, усилитель активности, противовоспалительное средство, дезинфицирующее средство, ароматизатор, вкусовой агент и ароматизирующий агент. Кроме того, соответствующее лекарственное средство или препарат общего воздействия может содержать другие активные ингредиенты или фармакологические компоненты при условии, что усиливающая чувствительность к CGRP активность лигнана формулы (I) не исчезает.

Лекарственное средство или препарат общего воздействия можно получить из лигнана формулы (I), или смешением лигнана формулы (I) с носителем, описанным выше, и/или другим активным ингредиентом или фармакологическим компонентом, при необходимости, общепринятым способом. Содержание лигнана формулы (I) в лекарственном средстве или препарате общего воздействия предпочтительно доводят до 0,001%-100% по массе, более предпочтительно доводят до 0,002%-100% по массе, даже более предпочтительно доводят до 0,005%-100% по массе, даже более предпочтительно доводят до 0,01%-100% по массе, даже более предпочтительно доводят до 0,05%-100% по массе.

Пищевой и питьевой продукт содержит лигнан формулы (I) в качестве активного ингредиента. Пищевой и питьевой продукт можно разработать исходя из намерений, например, стимулирования чувствительности к CGRP, улучшения кожного кровообращения, стимулирования кровообращения или тока крови, улучшения кожного метаболизма, заживления ран и подобных, и можно получить в виде пищевого и питьевого продукта, функционального пищевого и питьевого продукта, продукта диетического питания, пищевого и питьевого продукта для пациентов или пищевого и питьевого продукта для специфического здорового применения, с этикеткой с информацией о продукте, при необходимости. Данные пищевые и питьевые продукты можно отличить от обычных пищевых и питьевых продуктов по этикетке.

Примеры формы пищевого и питьевого продукта включает различные пищевые продукты, такие как хлеб, кексы, лапша, кондитерские изделия, желе, замороженные продукты, мороженое, молочные продукты, супы, пищевые масла и приправы; а также такие же формы, как описанные выше препараты для перорального введения (например, таблетки, капсулы, гранулы, порошки и сиропы), корм для домашнего скота и корм для домашних животных. Примеры форм питьевого продукта включают фруктовые соки, газированные напитки, чайные напитки, напитки на основе воды, спортивные напитки, молочные напитки, алкогольные и безалкогольные напитки. Питьевые продукты можно получить в виде упакованных питьевых продуктов, заполненных в контейнеры для упаковки.

Для того чтобы получить пищевые и питьевые продукты различных форм, как описано выше, можно применять только лигнан формулы (I), или лигнан формулы (I) можно применять в подходящей комбинации, например, с другими материалами для пищевых и питьевых продуктов, растворителем, смягчающим агентом, маслом, эмульгатором, антисептиком, ароматизатором, стабилизатором, красителем, антиоксидантом, увлажнителем, загустителем и подобным. Содержание лигнана формулы (I), например, в пищевых и питьевых продуктах предпочтительно доводят до 0,00001%-100% по массе, более предпочтительно доводят до 0,00002%-75% по массе, даже более предпочтительно доводят до 0,00005%-50% по массе, даже более предпочтительно доводят до 0,0001%-30% по массе, даже более предпочтительно доводят до 0,0002%-10% по массе.

Косметический продукт содержит лигнан формулы (I) в качестве активного ингредиента. Косметический продукт может содержать только лигнан формулы (I), или может содержать лигнан формулы (I) в комбинации с косметически приемлемым носителем. Примеры данного носителя включают вспомогательное вещество, пленкообразующее вещество, связующее вещество, наполнитель, разрыхлитель, смазывающий агент, разбавитель, регулятор осмотического давления, регулирующий рН агент, диспергатор, эмульгатор, антисептик, стабилизатор, антиоксидант, краситель, поглотитель ультрафиолетовых лучей, увлажнитель, загуститель, усилитель активности, противовоспалительное средство, дезинфицирующее средство, ароматизатор, вкусовой агент и ароматизирующий агент. Косметический продукт может также содержать другие активные ингредиенты или косметические компоненты, например, увлажнитель, агент для осветления кожи, агент, защищающий от ультрафиолетовых лучей, активатор клеток, моющее средство, кератолитическое средство и компоненты для макияжа (например, основу под макияж, тональный крем, пудру, пудру для тела, румяна, губную помаду, тени для век, карандаш для бровей, тушь для ресниц и подобные) при условии, что усиливающая чувствительность к CGRP активность лигнана формулы (I) не исчезает. Примеры формы косметического продукта включают любые формы, которые можно применять в качестве косметического продукта, такие как крем, эмульсии, лосьон, суспензия, гель, порошок, упаковка, лист, пластырь, карандаш и брусок.

Косметический продукт можно получить из лигнана формулы (I) или смешением лигнана формулы (I) с носителем, описанным выше, и/или другими активными ингредиентами или косметическими компонентами, при необходимости, общепринятым способом. Содержание лигнана формулы (I) в косметическом продукте предпочтительно доводят до 0,00001%-100% по массе, более предпочтительно доводят до 0,00002%-75% по массе, даже более предпочтительно доводят до 0,00005%-50% по массе, даже более предпочтительно доводят до 0,0001%-30% по массе, даже более предпочтительно доводят до 0,0002%-10% по массе.

Альтернативно лигнан формулы (I) можно вводить в эффективном количестве нуждающемуся животному или в количестве, требуемом для стимулирования чувствительности к CGRP, улучшения кожного кровообращения или улучшения кожного метаболизма, стимулирования кровообращения или тока крови, стимулирования заживления ран или предотвращения и/или облегчения заболеваний, таких как гипертония, сердечная недостаточность, заболевание печени, вызванное ишемической реперфузией, почечная недостаточность, желудочно-кишечное изъязвление, септицемия, остеопороз, аритмия, субарахноидальное кровоизлияние, легочная гипертензия, гиперчувствительность замедленного типа, пародонтоз, токсикоз при беременности и преждевременные роды. Согласно одному варианту осуществления введение осуществляют нетерапевтически с намерением, например, улучшить кожное кровообращение, улучшить кожный метаболизм, стимулировать кровообращение или ток крови, стимулировать заживление ран или подобным с целью поддержания или улучшения здоровья или с косметическими или эстетическими целями.

Субъект, которому будут осуществлять введение, может представлять собой животное, нуждающееся в или для которого требуется улучшение кожного кровообращения или улучшение кожного метаболизма, и предпочтительно животное, нуждающееся в или для которого требуется эффект облегчения ослабления кожного метаболизма, вызванного, например, старением. С другой стороны, примеры субъекта, которому будут осуществлять введение, включают животное, нуждающееся в или для которого требуется стимулирование кровообращение или стимулирование заживления ран, животное, нуждающееся в или для которого требуется стимулирование образования зубной пульпы, и животное, страдающее от, животное, подозреваемое в наличии, или животное, подвергаемое риску заболевания, такого как гипертония, сердечная недостаточность, заболевание печени, вызванное ишемической реперфузией, почечная недостаточность, желудочно-кишечное изъязвление, септицемия, остеопороз, аритмия, субарахноидальное кровоизлияние, легочная гипертензия, гиперчувствительность замедленного типа, пародонтоз, токсикоз при беременности или преждевременные роды. Предпочтительный пример субъекта, которому будут осуществлять введение, может представлять собой животное, нуждающееся в или для которого требуется улучшение кожного кровообращения или улучшение кожного метаболизма, стимулирование кровообращения или тока крови или заживление ран. Животное предпочтительно представляет собой человека или животное, отличное от человека, более предпочтительно человека.

Предпочтительное вводимое количество может изменяться в зависимости от состояния субъекта или других факторов. Доза, путь и интервал введения и количество или интервал приема может подходящим образом определить специалист в данной области техники. Например, в случае перорального введения человеку, вводимое количество предпочтительно составляет, что касается лигнана формулы (I), 1 мкг/день-6000 мг/день, более предпочтительно 10 мкг/день-5000 мг/день, даже более предпочтительно 100 мкг/день-4000 мг/день, даже более предпочтительно 500 мкг/день-3000 мг/день для взрослого. Альтернативно, в случае трансдермального введения человеку вводимое количество предпочтительно составляет, что касается лигнана формулы (I), 0,001 мкг/день-6000 мг/день, более предпочтительно 0,002 мкг/день-5000 мг/день, даже более предпочтительно 0,005 мкг/день-4000 мг/день, даже более предпочтительно 0,01 мкг/день-3000 мг/день, для взрослого.

Субъект, которому осуществляют введение, может представлять собой ткань, орган или клетку, полученную из животного, или продукт культивирования или их фракцию. Ткань, орган, клетка или ее фракция представляет собой встречающуюся в природе, биологически модифицированную или биоинженерную ткань, орган, клетку или ее фракцию, каждая их которых экспрессирует CGRP рецептор или содержит CGRP рецептор. Следовательно, настоящее изобретение также относится к способу усиления чувствительности к CGRP в ткани, органе или клетке, или продукте культивирования или их фракции. Настоящий способ включает, например, стадию выращивания клетки, которая содержит CGRP рецептор и для которой желательно усилить чувствительность к CGRP, в присутствии лигнана формулы (I). Когда клетка представляет собой продукт культуры клеток, концентрация лигнана формулы (I), которую будут добавлять, составляет 0,00001 мкМ-1000 мкМ, предпочтительно 0,00002 мкМ-500 мкМ и более предпочтительно 0,00005 мкМ-200 мкМ. Момент времени добавления лигнана формулы (I) может быть перед стимулированием CGRP и/или в момент стимулирования CGRP.

Настоящее изобретение также включает следующее применение или способ в качестве примерных вариантов осуществления. Однако не предполагается, что настоящее изобретение ограничивается данными примерными вариантами осуществления.

(1) стимулятор клеточной чувствительности к CGRP, содержащий в качестве активного ингредиента лигнан, представленный выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу.

(2) стимулятор, как описано в пункте (1), где R₁ предпочтительно представляет собой атом водорода или алкокси-группу, содержащую 1-3 атомов углерода; и каждый R₂, R₃ и R₄ предпочтительно представляет собой метокси-группу.

(3) стимулятор, как описано в пункте (1) или (2), где клетка предпочтительно представляет собой клетку гладкой мускулатуры сосудов.

(4) Стимулятор кожного кровообращения, содержащий в качестве активного ингредиента соединение, представленное выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу.

(5) стимулятор кровообращения или тока крови, содержащий в качестве активного ингредиента соединение, представленное выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу.

(6) стимулятор кожного метаболизма, содержащий в качестве активного ингредиента соединение, представленное выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу.

(7) стимулятор заживления ран, содержащий в качестве активного ингредиента соединение, представленное выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу.

(8) усилитель или стимулятор, как описано по любому из пунктов (4)-(7), где R₁ предпочтительно представляет собой атом водорода или алкокси-группу, содержащую 1-3 атомов углерода; и каждый R₂, R₃ и R₄ предпочтительно представляет собой метокси-группу.

(9) способ стимулирования клеточной чувствительности к CGRP, причем способ включает стадию выращивания клетки, которая содержит CGRP рецептор и для которой желательно стимулировать чувствительность к CGRP, в присутствии стимулятора чувствительности к CGRP, как описано в любом из пунктов (1)-(3).

(10) способ, как описано в пункте (9), где клетка предпочтительно представляет собой клетку гладкой мускулатуры сосудов.

(11) применение лигнана, представленного выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу, для стимулирования клеточной чувствительности к CGRP.

(12) применение, описанное в пункте (11), где R₁ предпочтительно представляет собой атом водорода или алкокси-группу, содержащую 1-3 атомов углерода; и каждый R₂, R₃ и R₄ предпочтительно представляет собой метокси-группу.

(13) применение, описанное в пункте (11) или (12), где клетка предпочтительно представляет собой клетку гладкой мускулатуры сосудов.

(14) применение лигнана, представленного выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу, для улучшения кожного кровообращения.

(15) применение лигнана, представленного выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу, для стимулирования кровообращения или тока крови.

(16) применение лигнана, представленного выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу, для улучшения кожного метаболизма.

(17) применение лигнана, представленного выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу, для стимулирования заживления ран.

(18) применение, как описано по любому из пунктов (14)-(17), где R₁ предпочтительно представляет собой атом водорода или алкокси-группу, содержащую 1-3 атомов углерода; и каждый R₂, R₃ и R₄ предпочтительно представляет собой метокси-группу.

(19) применение, как описано по любому из пунктов (11)-(18), где применение предпочтительно представляет собой нетерапевтическое применение.

(20) применение, как описано по любому из пунктов (11)-(19), где лигнан, представленный выше формулой (I), предпочтительно применяют для перорального введения человеку во вводимом количестве 1 мкг/день - 6000 мг/день для взрослого.

(21) применение лигнана, представленного выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу, для получения стимулятора клеточной чувствительности к CGRP.

(22) применение, как описано в пункте (21), где R₁ предпочтительно представляет собой атом водорода или алкокси-группу, содержащую 1-3 атомов углерода; и каждый R₂, R₃ и R₄ предпочтительно представляет собой метокси-группу.

(23) применение, как описано в пункте (21) или (22), где клетка предпочтительно представляет собой клетку гладкой мускулатуры сосудов.

(24) применение лигнана, представленного выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу, для получения стимулятора кожного кровообращения.

(25) применение лигнана, представленного выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу, для получения стимулятора кровообращения или тока крови.

(26) применение лигнана, представленного выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу, для получения стимулятора кожного метаболизма.

(27) применение лигнана, представленного выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу, для получения стимулятора заживления ран.

(28) применение, как описано по любому из пунктов (24)-(27), где R₁ предпочтительно представляет собой атом водорода или алкокси-группу, содержащую 1-3 атомов углерода; и каждый R₂, R₃ и R₄ предпочтительно представляет собой метокси-группу.

(29) применение лигнана, представленного выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу, для получения функционального пищевого продукта или продукта диетического питания для стимулирования клеточной чувствительности к CGRP, усиления кожного кровообращения, стимулирования кровообращения или тока крови, усиления кожного метаболизма или стимулирования заживления ран.

(30) применение, как описано по любому из пунктов (21)-(29), где стимулятор, усилитель или пищевой продукт предпочтительно вводят перорально человеку во вводимом количестве 1 мкг/день-6000 мг/день, что касается лигнана, представленного выше формулой (I), для взрослого.

(31) способ стимулирования чувствительности к CGRP в клетках человека или млекопитающего, отличного от человека; причем способ включает введение лигнана, представленного выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу, человеку или млекопитающему, отличному от человека, нуждающемуся или для которого требуется стимулирование чувствительности к CGRP.

(32) способ, как описано в пункте (31), где R₁ предпочтительно представляет собой атом водорода или алкокси-группу, содержащую 1-3 атомов углерода; и каждый R₂, R₃ и R₄ предпочтительно представляет собой метокси-группу.

(33) способ, как описано в пункте (31) или (32), где клетка представляет собой клетку гладкой мускулатуры сосудов.

(34) способ улучшения кожного кровообращения у человека или млекопитающего, отличного от человека; причем способ включает введение лигнана, представленного выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу, человеку или млекопитающему, отличному от человека, нуждающемуся или для которого требуется улучшение кожного кровообращения.

(35) способ стимулирования кровообращение или тока крови у человека или млекопитающего, отличного от человека; причем способ включает введение лигнана, представленного выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу, человеку или млекопитающему, отличному от человека или для которого требуется стимулирование кровообращения или тока крови.

(36) способ улучшения кожного метаболизма у человека или млекопитающего, отличного от человека; причем способ включает введение лигнана, представленного выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу, человеку или млекопитающему, отличному от человека, нуждающемуся или для которого требуется улучшение кожного метаболизма.

(37) способ стимулирования заживление ран у человека или млекопитающего, отличного от человека; причем способ включает введение лигнана, представленного выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу, человеку или млекопитающему, отличному от человека, нуждающемуся или для которого требуется заживление ран.

(38) способ, как описано по любому из пунктов (34)-(37), где R₁ предпочтительно представляет собой атом водорода или алкокси-группу, содержащую 1-3 атомов углерода; и каждый R₂, R₃ и R₄ предпочтительно представляет собой метокси-группу.

(39) способ, как описано по любому из пунктов (31)-(38), где способ предпочтительно представляет собой нетерапевтический способ.

(40) Способ, описанный по любому из пунктов (31)-(39), где лигнан, представленный выше формулой (I), предпочтительно перорально вводят человеку во вводимом количестве 1 мкг/день - 6000 мг/день для взрослого.

(41) лигнан, представленный выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу, для применения в стимулировании клеточной чувствительности к CGRP.

(42) лигнан, как описано в пункте (41), где R₁ предпочтительно представляет собой атом водорода или алкокси-группу, содержащую 1-3 атомов углерода; и каждый R₂, R₃ и R₄ предпочтительно представляет собой метокси-группу.

(43) лигнан, как описано в пункте (41) или (42), где клетка предпочтительно представляет собой клетку гладкой мускулатуры сосудов.

(44) лигнан, представленный выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу, для применения в улучшении кожного кровообращения.

(45) лигнан, представленный выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу, для применения в стимулировании кровообращения или тока крови.

(46) лигнан, представленный выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу, для применения в улучшении кожного метаболизма.

(47) лигнан, представленный выше формулой (I), где R₁ представляет собой атом водорода или алкокси-группу; и каждый R₂, R₃ и R₄, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой алкокси-группу, для применения в стимулировании заживления ран.

(48) лигнан, как описано по любому из пунктов (44)-(47), где R₁ предпочтительно представляет собой атом водорода или алкокси-группу, содержащую 1-3 атомов углерода; и каждый R₂, R₃ и R₄ предпочтительно представляет собой метокси-группу.

(49) лигнан, как описано по любому из пунктов (41)-(48), где лигнан предпочтительно вводят перорально человеку во вводимом количестве 1 мкг/день - 6000 мг/день для взрослого.

(50) что касается пунктов (1)-(49), лигнан, представленный выше формулой (I), предпочтительно представляет собой один или оба из соединений, описанных ниже:

Примеры

В настоящем описании далее настоящее изобретение будет описано более конкретно посредством примеров.

Пример 1

Исследовали влияние лигнана на стимулирование клеточной чувствительности к CGRP.

1. Способ

(1) Клеточная культура

Нормальные клетки гладких мышц коронарной артерии человека (HCASMC; Kurabo Industries, Ltd., cell lot #01272) выращивали в питательной среде (продукт, полученный добавлением 25 мл FBS, 0,5 мл hEGF, 0,5 мл hFGF-B, 0,5 мл инсулина и 0,5 мл антибактериального агента к 500 мл базальной среды HuMedia-SB2; Kurabo Industries, Ltd). 0,025% трипсин/0,01% EDTA применяли для пересева.

(2) Получение клеток

Нормальные клетки гладких мышц коронарной артерии человека (HCASMC) засевали в 48-луночный планшет, применяя питательную среду при плотности 4000 клеток/см², и на следующей день, среду заменяли средой для дифференциации (продукт, полученный добавлением 5 мл FBS, 0,5 мл гепарина и 0,5 мл антибактериального агента к 500 мл базальной среды HuMedia-SB2; Kurabo Industries, Ltd). Среду заменяли каждые два дня, и клетки выращивали в течение 7 дней, с последующим измерением чувствительности к CGRP.

(3) Измерение чувствительности к CGRP

Клетки промывали дважды базальной средой (HuMedia-SB2; Kurabo Industries, Ltd.), содержащей ингибиторы фосфодиэстераз (PDI), IBMX (3-изобутил-1-метилксантин, 500 мкМ, Sigma-Aldrich Co.), Ro-20-1724 (100 мкМ; Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), и лигнановое соединение, показанное ниже, при заранее определенной концентрации. 200 мкл той же среды дополнительно добавляли к клеткам, и клетки выдерживали при 37°C в течение 60 минут, позволяя ингибиторам проникнуть в клетки. Среду удаляли, добавляли к клеткам базальную среду, содержащую лигнановое соединение, показанное ниже, при той же концентрации, 0,5 нМ CGRP и PDI, и клетки выдерживали при 37°C в течение 15 минут. Прекращение реакции осуществляли добавлением лизирующего буфера, прилагаемого к набору для цАМФ EIA анализа (цАМФ EIA (неацетилированный); GE Healthcare Biosciences Corp.) к клеткам, и внутриклеточную цАМФ концентрацию ([цАМФ]i) измеряли согласно способу, описанному в руководстве. Способность стимулировать чувствительность к CGRP получали, применяя [цАМФ]i, полученную при стимулировании только 0,5 нМ CGRP в качестве стандарта (контроля), и процент [цАМФ]i представлен в виде коэффициента увеличения.

(4) Испытуемое соединение

Следующие лигнановые соединения TD-1 и TD-2 применяли в испытании. Данные соединения получали, следуя способу, основанному на способе, описанном в JP 10-175861 A. Продукт сухого измельчения Thujopsis dolabrata (180 г) погружали в 1 л этанола, и экстракцию осуществляли в течение 7 дней при комнатной температуре при периодическом перемешивании смеси. Таким образом полученный экстракт фильтровали, фильтрат оставляли на 3 дня при 5°C и затем фильтрат снова фильтровали, получая надосадочную жидкость. Затем остаток (2,4 г), полученный отгонкой растворителя, подвергали колоночной хроматографии на силикагеле (гексан:этилацетат, CHCl₃:CH₃OH, H₂O:CH₃OH) и высокоэффективной жидкостной хроматографии (YMC-ODS, S-10, полученной YMC Co., Ltd.) и, таким образом, получали соединения (выход: TD-1 21 мг, TD-2 25 мг).

2. Результаты

Результаты измерения чувствительности к CGRP представлены на фигурах 1, A и B. Коэффициент увеличения 100% соответствует 1189,3 фемтомоль/лунка [цАМФ]i. Соединения TD-1 и TD-2 значительно стимулировали клеточную чувствительность к CGRP зависящим от концентрации способом (критерий Дуннетта, N=3).

Пример 2

Клеточную чувствительность к CGRP исследовали, изменяя условия добавления соединений различными способами.

1. Способ

HCASMC (Kurabo Industries, Ltd., cell lot #01272) получали в тех же условиях, как клетки, применяемые в примере 1. После этого, ингибиторы фосфодиэстераз (PDI), испытуемое соединение (TD-1 или TD-2, 100 нМ) и/или CGRP (0,5 нМ) добавляли к продукту культивирования в условиях, описанных в таблице 1, и клетки выдерживали. После этого, измеряли клеточную чувствительность к CGRP тем же способом, как в примере 1.

2. Результаты

Результаты измерения чувствительности к CGRP представлены на фигуре 2. Коэффициент усиления 100% соответствует 1189,3 фемтомоль/лунка [цАМФ]i. Когда испытуемое соединение добавляли одновременно со стимулированием CGRP, коэффициент усиления увеличивался (условия 2 и 3). С другой стороны, коэффициент усиления был значительно меньшим в отсутствие CGRP (условия 4). Следовательно, было обнаружено, что воздействие, вызываемое испытуемым соединением, не являлось воздействием соединения, замещающего CGRP (например, CGRP-рецепторный агонист), но было воздействием соединения, стимулирующим серию реакций, вызванных связыванием CGRP и его рецептора.