Результат интеллектуальной деятельности: Средство, улучшающее микроваскуляризацию в ткани головного мозга

Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии, и касается средств, улучшающих микроваскуляризацию в ткани головного мозга.

Известны средства, улучшающие микроваскуляризацию в ткани головного мозга: увеличивающие средний диаметр капилляров (Ноопепт) [1] и повышающие плотность капилляров (олмесартан, эналаприл) [1, 2].

Задачей изобретения является расширение арсенала средств, улучшающих микроваскуляризацию в ткани головного мозга.

Поставленная задача решается применением n-тирозола в качестве средства, улучшающего микроваскуляризацию в ткани головного мозга.

n-Тирозол обладает нейропротекторной, атиоксидантной кардиопротекторной и антигипоксической активностью [3, 4, 5], а также антиаритмическими, антитромбоцитарными, антитромботическими и антитромбогенными свойствами [6, 7, 8].

Использование n-тирозола в качестве средства, улучшающего микроваскуляризацию в ткани головного мозга, в литературе не описано.

Принципиально новым в предлагаемом изобретении является то, что в качестве средства, улучшающего микроваскуляризацию в ткани головного мозга, используют n-тирозол. Данный вид активности n-тирозола явным образом не вытекает для специалиста из уровня техники.

n-Тирозол можно использовать в комплексной терапии патологий, сопровождающихся нарушением микроваскуляризации в ткани головного мозга при расстройствах мозгового кровообращения.

Таким образом, данное техническое решение соответствует критериям изобретения: "новизна", "изобретательский уровень", "промышленная применимость".

Новые свойства препарата были найдены экспериментальным путем. Изобретение будет понятно из следующего описания.

Изучение микроваскуляризации сосудов в ткани головного мозга проводили на крысах SHR в период развития у них артериальной гипертензии.

Эксперименты проведены на животных категории SPF: 15 нормотензивных крысах линии Wistar-Kyoto (WKY) и 19 спонтанно гипертензивных крысах линии SITR. Крысы SHR (n=19) были рандомизированы на две группы - контрольную группу и опытную группу. Крысам SHR опытной группы вводили n-тирозол в дозе 50 мг/кг внутрижелудочно в 1% крахмальной слизи ежедневно в течение 6 недель. Крысы SHR контрольной группы и крысы WKY получали эквиобъемное количество крахмальной слизи по той же схеме. Крыс включали в эксперимент после достижения возраста 6 недель от рождения.

После окончания эксперимента животных подвергали эвтаназии в CO₂-камере. Микроциркуляторное русло коры головного мозга исследовали методом световой микроскопии. Для этого извлекали головной мозг и фиксировали в 10% нейтральном формалине. После фиксации выбирали участок в области затылочной коры больших полушарий, который затем обезвоживали в спиртах восходящей концентрации, заливали в парафин и изготавливали фронтальные срезы толщиной 5 мкм. Депарафинированые срезы окрашивали гематоксилином и эозином. На микроскопе Axio lab. 1 Carl Zeiss с помощью видеокамеры AxioCam ERc 5s на гистологическом препарате каждого животного фотографировали 25 последовательных полей зрения в зоне коры (увеличение 400х). В программе Image G измеряли диаметр всех капилляров, встречающихся на выполненных снимках, и определяли: плотность капиллярного русла (среднее число капилляров в расчете на 1 мм²), средний диаметр капилляров, а также структуру капиллярной сети. Для количественной оценки структуры капиллярной сети капилляры в соответствии с их диаметром распределяли на четыре интервальные группы в диапазонах: до 3 мкм, от 3 до 5 мкм, от 5 до 7 мкм и от 7 до 9 мкм. Микрососуды диаметром 10 мкм рассматриваются как артериолы [9].

Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакета статистических программ "Statistica 8.0". Данные представлены в виде M±m, где М - среднее значение, m - стандартная ошибка среднего значения. Для оценки достоверности межгрупповых различий использовали непараметрический критерий Mann-Whitney U test.

Результаты исследований представлены в примерах.

Пример 1. У нормотензивных крыс WKY средний диаметр и средняя плотность капилляров составила 4,8±0,1 мкм и 156±10 капилляров/мм² соответственно. У крыс WKY количество капилляров диаметром 0-3 мкм составило 23±4 капилляров/мм², диаметром 3-5 мкм - 103±9 капилляров/мм², диаметром 5-7 мкм - 29±4 капилляров/мм², диаметром 7-9 мкм - 2±1 капилляров/мм² (табл. 1, 2).

Пример 2. У крыс SHR контрольной группы наблюдалось достоверное уменьшение среднего диаметра капилляров (на 21%), средней плотности капиллярного русла (на 29%), количества капилляров с диаметром 3-5 мкм (на 37%) и 5-7 мкм (на 45%) по сравнению с WKY того же возраста (табл. 1, 2).

Пример 3. У крыс SHR опытной группы, получавших n-тирозол, по сравнению с контрольными крысами SHR наблюдалось увеличение среднего диаметра капилляров (на 8%), плотности капиллярной сети (на 39%), доли проходимых для эритроцитов капилляров диаметром 3-5 мкм (на 43%) и 5-7 мкм (на 69%) (табл. 1, 2).

Таким образом, n-тирозол при курсовом введении улучшает микроваскуляризацию в ткани головного мозга, что проявляется в увеличении среднего диаметра капилляров, плотности капиллярной сети и доли проходимых для эритроцитов капилляров.

Примечание. * - p<0,05 по сравнению со значениями у крыс линии WKY;

⁺ - p<0,05 по сравнению со значениями в контроле.

Примечание. * - p<0,05 по сравнению со значениями у крыс линии WKY;

⁺ - p<0,05 по сравнению со значениями в контроле.

Литература

1. Баласанян М.Г., Африкян Ш.Г., Топчян А.В. Влияние Ноопепта на морфофункциональное состояние капиллярной системы коры большого мозга крыс // Эксперим. и клин, фармакол. 2015. Т. 78, №5. С. 3-7.

2. Estato V., Obadia N., Carvalho-Tavares J., Freitas F.S. Blockade of the renin angiotensin system improves cerebral microcirculatory perfusion in diabetic hypertensive rats // Micro vase Res. 2013. Vol. 87. P. 41-49.

3. Bu Y., Rho S., Kim J., Kim M., Lee D., Kim S., Choi S., Kim H. Neuroprotective effect of tyrosol on transient focal cerebral ischemia in rats // Neuroscience Letters. 2007. Vol. 414. P. 218-221.

4. Смольякова В.И., Чернышева Г.А., Плотников М.Б., Алиев О.И., Краснов Е.А. Антиоксидантные и кардиопротекторные эффекты n-тирозола при ишемии миокарда с реперфузией у крыс // Кардиология. 2010. Т. 50, №3. С. 47-49.

5. Смольякова В.П., Плотников М.Б., Чернышева Г.А., Голубева И.В., Краснов Е.А. Антигипоксическая активность n-тирозола // Фармакология - практическому здравоохранению: Матер. III Съезда фармакологов России. Психофармакология и биологическая наркология. 2007. Т. 7. С. 1955.

6. Чернышева Г.А., Плотников М.Б., Смольякова В.П., Голубева И.В., Алиев О.И., Толстикова Т.Г., Крысин А.П., Сорокина И.В. Антиаритмическая активность n-тирозола в условиях острой ишемии и реперфузии миокарда // Бюл. эксперим. биол. и мед. 2007. Т. 143, №6. С. 631-633.

7. Плоников М.Б., Смольякова В.И., Маслов М.Ю., Чернышева Г.А., Толстиков Г.А., Толстикова Т.Г., Крысин А.П., Сорокин И.Ю. Влияние тирозола на агрегацию тромбоцитов // X Росс. Национ. Конгресс «Человек и лекарство». Тез. докл. М, 2003. С. 648.

8. Смольякова В.И., Черкашина И.В., Чернышева Г.А., Плотников М.Б. Влияние n-тирозола на тромбообразование у крыс с моделью артериального тромбоза // Химия и технология растительных веществ: Тез. докл. IV Всероссийской научной конференции. Сыктывкар. 2006. С. 295.

9. Francois-Dainville Е., Buchweitz Е., Weiss H.R. Effect of hypoxia on percent of arteriolar and capillary beds perfused in the rat brain // J. Appl. Physiol. 1986. Vol. 60, N 1. P. 280-288.