Результат интеллектуальной деятельности: Способ обездвиживания лабораторно культивируемых личинок паразитических нематод подотряда стронгилята

Изобретение относится к ветеринарной гельминтологии и предназначено для диагностических исследований фекалий рогатого скота на наличие круглых гельминтов в личиночной стадии развития и их идентификации.

Известны методы обездвиживания культивированных личинок путем нагревания предметного стекла или добавления к нативному препарату химических реагентов, таких как формалин (и содержащая формалин жидкость Барбагалло), йод (и содержащий йод раствор Люголя), жидкость Флемминга (1. ГОСТ Р 54627-2011. Национальный стандарт Российской Федерации. Животные сельскохозяйственные жвачные: Методы лабораторной диагностики гельминтозов. - Введен впервые 01.01.2013. - М.: Национальные стандарты, 2013. - С. 10; 2. Шустрова М.В., Белова Л.М., Лоскот В.И., Гаврилова Н.А., Токарев А.Н., Кузнецов Ю.Е. Прижизненная диагностика гельминтозов животных. – СПб.: Изд-во СПбГАВМ, 2010. - С. 33; 3. Скрябин К.И. Гельминтозы крупного рогатого скота и его молодняка / К.И. Скрябин, Р.-Эд. С. Шульц. - М.: Сельхозгиз, 1937. - С. 676).

Недостатками этих методов являются:

1. Деформация морфологических структур и гибель личинок, что делает последних непригодными для фотосъемки и последующей идентификации или проведения дифференциальной ларвоскопии (См. Поляков П.А. Прижизненная дифференциальная диагностика стронгилятозов пищеварительного тракта жвачных по инвазионным личинкам: автореф. дис. … канд. вет. наук. - М., 1953. - С. 4).

2. Обездвиживание личинок в искривленном или скрученном состоянии, что существенно затрудняет изучение их морфологии и оценку размеров.

3. Необходимость готовить отдельный препарат для проведения дифференциальной ларвоскопии и иных исследований, где требуются живые подвижные личинки, что увеличивает расход материала и трудозатраты (см. 1. ГОСТ Р 54627-2011. Национальный стандарт Российской Федерации. Животные сельскохозяйственные жвачные: Методы лабораторной диагностики гельминтозов. - Введен впервые 01.01.2013. - М.: Национальные стандарты, 2013. - С. 10; 2. Самойловская Н.А., Горохов В.В., Малахова Е.И. Методы эпизоотологического обследования на стронгилятозы лосей на особо охраняемых природных территориях // Российский паразитологический журнал. - 2013. №1. - С. 113-119).

Поэтому была необходима разработка такого способа обездвиживания личинок, который: а) не нарушал бы их морфологии; б) не вызывал гибели; в) фиксировал бы их в распрямленном состоянии; что позволило бы осуществлять фотосъемку личинок и использовать их для дальнейших исследований.

Техническим результатом изобретения является возможность выполнения фотосъемки культивированных личинок стронгилят с последующим использованием этих же личинок для дифференциальной ларвоскопии.

Технический результат достигается путем помещения на предметное стекло личинок, а под него - полиэтиленового пакетика с зип-лок замком, предварительно наполненного водой, замороженной до образования льда, и последующего фотографирования обездвиженных личинок.

Сущность способа поясняется графиками, представленными на фигурах 1 и 2, где на фиг. 1 представлена зависимость количества обездвиженных личинок паразитических нематод подотряда стронгилята от времени экспозиции под предметным стеклом пакетика с зип-лок замком, наполненного замороженной водой, а на фиг. 2 представлена зависимость количества личинок паразитических нематод подотряда стронгилята, возобновивших подвижность, от времени экспозиции на предметном стекле после того, как из-под него убрали пакетик с зип-лок замком, наполненный замороженной водой.

Способ реализуется следующим образом. В полиэтиленовый пакетик (5×8 см) с зип-лок (zip-lock) замком набирают 10 мл воды (для этой цели можно использовать шприц без иглы). Пакетик аккуратно закрывают так, чтобы внутри не оставалось воздуха. Помещают пакетик с водой в морозильную камеру на ровную горизонтальную поверхность с тем, чтобы вода замерзла в виде тонкой пластины льда. Хранят в таком состоянии до проведения ларвоскопии. При необходимости осуществления фотосъемки личинок пакетик извлекают из морозильной камеры и выдерживают непродолжительное время (около 1 мин) до начала таяния льда. Помещают пакетик под предметное стекло. Осуществляют микроскопию и фотографирование личинок (без использования покровного стекла). Обездвиживание личинок наступает не позднее, чем через 30 секунд после помещения пакетика под предметное стекло, что представлено на графике фиг. 1. После удаления пакетика подвижность личинок начинает возобновляться не позднее, чем через 30 секунд, что представлено на графике фиг. 2. Опыты показали, что личинки переносят многократное охлаждение, что позволяет производить дифференциальную ларвоскопию.

Полезность предлагаемого способа заключается в следующем.

1. Сохраняются морфологические структуры личинок, что позволяет производить корректную идентификацию.

2. Обездвиживание личинок происходит в распрямленном состоянии, что облегчает изучение их морфологии и оценку размеров.

3. Сохраняется жизнеспособность и подвижность личинок после удаления пакетика, что позволяет использовать тот же препарат для дальнейшей дифференциальной ларвоскопии и означает экономию исследуемого материала и трудозатрат.

4. Доступность компонентов, т.к. используются полиэтиленовые пакетики с зип-лок замком и вода.

5. Экологичность, т.к. предлагаемый способ позволяет избежать использования токсичных реактивов.

6. Экономичность, т.к. стоимость пакетика с зип-лок замком намного ниже стоимости химических реактивов (например, стоимость жидкости Барбагалло, объемом 100 мл, составляет 500 рублей) и один пакетик можно использовать многократно.