×
13.02.2018
218.016.2505

Способ оценки гемостимулирующей активности пантов марала

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к фармакологии, фармакогнозии. Способ оценки гемостимулирующей активности пантов марала, включающий изучение его влияния на колониеобразующую активность стволовых клеток-предшественников костного мозга мыши in vitro, отличается тем, что готовят водное извлечение из пантов марала путем выдерживания одной части пантов в трех частях воды деионизированной на водяной бане с обратным холодильником при 80°С в течение одного часа, при этом активность сырья считается достаточной, если извлечение, полученное из этого сырья, стимулирует рост колоний не менее чем в 1,5 раза по сравнению с группой контроля. 2 ил., 1 табл.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к фармакологии, фармакогнозии.

В настоящее время оценка качества пантов марала (далее - ПМ) как сырья достаточно затруднена. Существуют ГОСТы для оценки качества консервированных ПМ [1, 2]. При консервации теряется значительная часть биологически активных веществ [3]. Однако не разработана соответствующая документация для оценки качества неконсервированных (сырых, замороженных) ПМ.

Известен способ стандартизации сырых ПМ [5], он заключается в визуальной оценке качества пантов по количеству отростков, толщине охвата ствола, признакам окостенения, цвету и натянутости кожи самого панта. Недостатки: оценка внешнего вида не может дать полное и объективное представление о качестве ПМ, а также их биологической активности, поскольку не оцениваются действующие вещества и величина их биологического эффекта.

В «Руководстве по проведению доклинических исследований лекарственных средств» Миронов А.Н. М., 2012. Ч. I. Глава 49. С. 759 [4] (прототип) описаны культуральные методы оценки гемостимулирующей активности фармакологических веществ, недостатком которых являются необходимость использования цитостатика, а также исследование содержания различных видов стволовых кроветворных клеток, что является достаточно сложной задачей, необходимой лишь в доклинических исследованиях лекарственных средств.

Задачей, решаемой настоящим изобретением, является расширение арсенала способов оценки биологической активности пантов марала, в частности их гемостимулирующей активности.

Известно, что ПМ обладают способностью стимулировать кроветворение [7]. Известно, что ПМ содержат группы веществ, способных стимулировать процессы пролиферации и дифференцировки стволовых клеток [7].

При добавлении водного извлечения из ПМ к культуре клеток костного мозга мыши активные вещества, входящие в состав этого извлечения, стимулируют процесс колониеобразования клеток. Активность сырья (ПМ) считается достаточной, если извлечение, полученное из этого сырья, стимулирует рост колоний не менее чем в 1,5 раза по сравнению с группой контроля.

Способ основан на способности биологически активных веществ, содержащихся в ПМ, стимулировать процесс колониеобразования кроветворных стволовых клеток костного мозга мыши in vitro. Предлагаемым способом оценивается активность суммы биологически активных веществ из пантов марала, продуктов и препаратов, получаемых из этого сырья, в отношении изменения количества колоний гемопоэтических клеток. В качестве экстрагента используется вода деионизированная, поскольку для экспериментов на культуре клеток необходимы именно водные растворы веществ. Сырьем служат свежезамороженные панты марала.

Изобретение поясняется фигурами.

Фиг. 1 - схема забора образца панта марала, где 1 - средняя часть панта.

Фиг. 2 - схема засевания планшета, где ряды с 1 по 11- опытные, ряд 12 - контрольный.

Для забора пробы используется средняя часть панта марала (фиг. 1), от которой отпиливают пластинку массой 2 г. Измельчают ПМ до размера 0,5×0,5 см, выдерживают в течение 1 часа на водяной бане с обратным холодильником при 80°С в соотношении сырье / экстрагент - 1/3. После извлечение процеживают через тройной слой марли, охлаждают до комнатной температуры, центрифугируют при 3000 оборотов в течение 10 мин, фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм и используют для исследования.

Для оценки гемостимулирующей активности in vitro используются белые лабораторные мыши либо мыши линии СВА. Бедренную кость мыши извлекают в стерильных условиях, после чего костный мозг асептически эксплантируют и суспендируют в среде RPMI-1640. Количество клеток доводят до 2×105 на 1 мл питательной среды следующего состава: 80% RPMI-1640, 20% эмбриональной телячьей сыворотки, 280 мг/мл L-глютамина, 50 мг/л гентамицина. Засевают (фиг. 2) 96-луночные планшеты, по 200 мкл среды в каждую лунку, после чего добавляют по 10 мкл извлечения из ПМ. Каждый ряд планшета соответствует определенному извлечению. Также засевается контрольный ряд, где вместо изучаемых извлечений в лунки добавляется по 10 мкл воды в качестве контроля растворителя. Таким образом в 1 планшете можно проанализировать 11 проб пантов марала.

Планшеты культивируются в инкубаторе в течение 7 суток при 5% СO2, 100% влажности. После производят подсчет числа колоний и кластеров (колония - скопление клеток количеством 40 и более; кластер - скопление от 20-40 клеток), статистическую обработку проводят с использованием критерия Манна - Уитни. Разница сравниваемых средних считается достоверной, если показатель достоверности р<0,05.

Согласно «Руководству по проведению доклинических исследований» [4] критерием достаточности гемостимулирующей активности является превышение количества колоний в исследуемых образцах не менее чем в 1,5 раза по сравнению с контролем. В связи с этим был взят этот критерий качества сырья и достаточности биологической активности: сырье считается качественным, если полученное извлечение будет стимулировать рост гемопоэтических колоний в исследуемом планшете не менее чем в 1,5 раза по сравнению с контролем. При этом превышение роста колоний на каждые 10% по сравнению с контролем принято за 1 колоние-стимулирующую единицу действия (КЕД).

Результаты эксперимента представлены в таблице 1.

Количество колоний и кластеров в исследуемой группе составило 300% по сравнению с контролем. В результате извлечение имеет активность, равную 20 КЕД. Поскольку для приготовления извлечения использовали 2 г ПМ, содержание единиц действия в 1 г сырья будет следующим: извлечение, полученное в результате настаивания в течение 1 часа, имеет активность, равную 10 КЕД.

Источники информации

1. ГОСТ 4227-76 «Панты марала и изюбра консервированные. Технические условия». М.: Госстандарт, 1976.

2. ГОСТ 3573-76 «Панты пятнистого оленя консервированные. Технические условия». М.: Госстандарт, 1976.

3. Луницын В.Г. Продукция пантового оленеводства: (способы консервирования, переработка, использование): монография / В.Г. Луницын, Н.А. Фролов. Рос. акад. с/х. наук, Сиб. отд-ние Всерос. науч.-исслед. ин-т пантового оленеводства. - Барнаул: Азбука, 2006. - 270 с.

4. Миронов А.Н. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. М., 2012. Ч. I. Глава 49. С. 759.

5. Павлова А.В. Научное и практическое обоснование рационального использования продукции мараловодства в условиях Тувы: дис. - Барнаул: Алт. гос. аграр. ун-т, 2000.

6. Патент РФ №2009125095/15, 30.06.2009. Дыгай A.M., Скурихин Е.Г., Першина О.В., Андреева Т.В., Хмелевская Е.С. Способ определения эффективности гемостимуляторов при цитостатической миелосупрессии // Патент России №2421720. 2011.

7. Deer antler base as a traditional Chinese medicine: A review of its traditional uses, chemistry and pharmacology / Feifei Wu, Huaqiang Li, Liji Jin // Journal of Ethnopharmacology. - 2013. - №145. - P. 403-415.

Способ оценки гемостимулирующей активности пантов марала, включающий изучение его влияния на колониеобразующую активность стволовых клеток-предшественников костного мозга мыши in vitro, отличающийся тем, что готовят водное извлечение из пантов марала путем выдерживания одной части пантов в трех частях воды деионизированной на водяной бане с обратным холодильником при 80°C в течение одного часа, при этом активность сырья считается достаточной, если извлечение, полученное из этого сырья, стимулирует рост колоний не менее чем в 1,5 раза по сравнению с группой контроля.
Способ оценки гемостимулирующей активности пантов марала
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-8 из 8.
20.06.2013
№216.012.4b2c

Средство, обладающее мочегонным действием

Предложено лекарственное средство мочегонного действия группы акваретиков, 4-нитро-фенил-O-D-глюкопиранозид. Средство может быть использовано для лечения застойных явлений в большом и малом круге кровообращения, обусловленных сердечной недостаточностью, так как усиливает выделение воды,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002484826
Дата охранного документа: 20.06.2013
20.07.2013
№216.012.565a

Средство, обладающее мочегонным действием

Предложено лекарственное средство мочегонного действия группы акваретиков Фенил-α-О-D-глюкопиранозид. Средство может быть использовано для лечения застойных явлений в большом и малом круге кровообращения, обусловленных сердечной недостаточностью, так как усиливает выделение воды, способствуя...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002487714
Дата охранного документа: 20.07.2013
10.12.2013
№216.012.87a5

Средство, обладающее мочегонным действием

Изобретение относится к фармакологии, а именно к применению 2-нафтил-О-D-глюкопиранозида в качестве средства, обладающего мочегонным действием, обладающего высокой диуретической и низкой салуретической активностью. 1 табл., 1 пр.
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002500407
Дата охранного документа: 10.12.2013
27.05.2014
№216.012.c87d

Средство, обладающее мочегонным действием

Изобретение относится к фармакологии, а именно к применению П-метил-фенил-O-D-глюкопиранозида в качестве средства, обладающего мочегонным действием, обладающего высокой диуретической и низкой салуретической активностью. 1 табл., 1 пр.
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002517091
Дата охранного документа: 27.05.2014
10.07.2014
№216.012.dcb7

Способ получения средства, обладающего гепатопротекторным действием

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения средства, обладающего гепатопротекторным действием. Способ получения средства, обладающего гепатопротекторным действием, путем экстракции измельченных столбиков с рыльцами кукурузы спиртом этиловым методом...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002522281
Дата охранного документа: 10.07.2014
13.01.2017
№217.015.8dfb

Комбинированный способ обработки сплавов ванадия

Изобретение относится к обработке ванадиевых сплавов, легированных элементами IVB группы, содержащих элементы замещения Cr, W и элементы внедрения С, О, N в количестве не менее 0,04 мас.%. Способ включает гомогенизирующий отжиг заготовки сплава, многократную термомеханическую обработку,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002605015
Дата охранного документа: 20.12.2016
26.08.2017
№217.015.db03

Способ получения заготовок сплавов ванадия

Изобретение относится к области радиационного материаловедения и может быть использовано в технологических циклах получения полуфабрикатов сплавов на основе ванадия. Способ получения заготовок сплавов ванадия включает гомогенизацию слитка, формирование заготовки путем нагрева и выдавливания...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002623848
Дата охранного документа: 29.06.2017
04.04.2018
№218.016.30d0

Способ обработки заготовок ванадиевых сплавов

Изобретение относится к металлургии, а именно к области радиационного материаловедения, и может быть использовано в технологических циклах получения полуфабрикатов сплавов на основе ванадия, легированных элементами Периодической системы элементов. Способ обработки заготовок ванадиевых сплавов...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002644832
Дата охранного документа: 14.02.2018
Показаны записи 1-9 из 9.
13.01.2017
№217.015.74c5

Безопасный экстракционно-флуориметрический способ определения селена в воде

Изобретение относится к аналитической химии и касается способа определения селена в воде. Сущность способа заключается в том, что к анализируемому раствору добавляют 0,4 мл раствора 3%-ного щелочного борогидрида натрия восстановителя, закрывают пробкой, встряхивают и оставляют на 5 мин для...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002597769
Дата охранного документа: 20.09.2016
25.08.2017
№217.015.bad9

Люминесцирующие металлсодержащие полимеризуемые композиции и способ их получения

Изобретение относится к химии и технологии материалов, преобразующих электромагнитное излучение, и используется для получения люминесцирующих и избирательно поглощающих электромагнитное излучение металлсодержащих полимерных композиций для светотехники, опто- и микроэлектроники. Основой...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002615701
Дата охранного документа: 06.04.2017
26.08.2017
№217.015.eda4

Индикатор для обнаружения повышенной концентрации аммиака в воздухе рабочей зоны

Изобретение относится к устройствам для выявления утечек аммиака и может быть использовано в областях химической и холодильной промышленностей, в сфере производства удобрений и аммиака, а также для контроля воздушной среды в производственных помещениях. Индикатор представляет собой основу...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002628883
Дата охранного документа: 22.08.2017
29.12.2017
№217.015.f6d1

Способ пластической деформации металлов и сплавов

Изобретение относится к области пластической обработки металлов, таких как алюминий и его сплавы, и может быть использовано в различных областях промышленности и науки для глубокого формования металлических материалов. Способ пластической деформации алюминия и его сплавов включает механическое...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002639278
Дата охранного документа: 20.12.2017
29.12.2017
№217.015.f79d

Способ получения линимента на березовых почках

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу получения линимента на березовых почках. Способ получения линимента на березовых почках, включающий подготовку свиного жира, закладку березовых почек и свиного жира в емкость и воздействие на смесь жира и почек...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002639571
Дата охранного документа: 21.12.2017
29.12.2017
№217.015.f90b

Дефектоскоп для сварных швов

Изобретение относится к методам неразрушающего контроля и позволяет обнаруживать дефекты малых размеров и глубокого залегания в сварных швах, соединяющих, преимущественно, неферромагнитные материалы. Дефектоскоп для сварных швов включает в себя аппаратную и программную части. Дефектоскоп...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002639592
Дата охранного документа: 21.12.2017
29.12.2017
№217.015.fb66

Способ концентрирования микроэлементов

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано в практике аналитических, агрохимических, медицинских лабораторий. Осуществляют концентрирование микроэлементов для последующего аналитического определения путем соосаждения с диантипирилметаном, образующим в системе вода -...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002640337
Дата охранного документа: 27.12.2017
13.02.2018
№218.016.24a1

Мембранный экстрактор

Изобретение относится к экстракторам системы жидкость-жидкость для применения в биотехнологической, фармацевтической, химической, пищевой промышленности, и, в частности, может быть использовано для ускорения выделения целевых продуктов метаболизма микроорганизмов, например антибиотиков из...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002642641
Дата охранного документа: 25.01.2018
04.04.2018
№218.016.3134

Способ определения иодид-ионов катодной вольтамперометрией

Изобретение относится к области аналитической химии. Способ определения йодид-ионов катодной вольтамперометрией проводят на серебряном электроде в фоновом растворе 0,1 М ацетата натрия, выдерживая потенциал электролиза в диапазоне потенциалов (-0,15±0,05) В при скорости развертки 20 мВ/с - 50...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002645003
Дата охранного документа: 15.02.2018
+ добавить свой РИД