Результат интеллектуальной деятельности: Способ обработки предметных стекол с зеркальным покрытием

Изобретение относится к медицине, лабораторным исследованиям и может быть использовано для обработки предметных стекол с зеркальным покрытием для культивирования и изучения культур клеток in vitro с помощью микроскопа МИМ - 340 (ОАО «ПО «УОМЗ»).

Отличительной особенностью проведения исследований на лазерном микроскопе МИМ-340 с длинноходовым предметным столом является использование стекол с зеркальным покрытием. Стекла, входящие в комплектность микроскопа, не являются стерильными. Для культивирования и исследования клеточных культур в динамике in vitro необходимо использование только стерильных стекол.

Известен способ подготовки предметных стекол для цитологических исследований путем погружения их в водный раствор хромокалиевых квасцов и агарозы, обезжиривание и двухкратную сушку [1]. Данный способ не применим для культивирования и дальнейшего исследования на стеклах клеточных культур in vitro, так как не обеспечивает достаточной стерильности стекол после обработки адгезивами.

Согласно приказу МЗ СССР №770 от 10.06.1985 «Стерилизация и дезинфекция изделий медицинского назначения» ОСТ - 42-21-2-85 обработку изделий для медицинских целей, в том числе из стекла, проводят в три этапа: дезинфекцию осуществляют путем кипячения в течение 30 минут; предстерилизационную очистку проводят с применением моющего комплекса, в состав которого входит перекись водорода, с последующей механической мойкой и сушкой; стерилизацию осуществляют либо паровую в автоклаве при температуре 132°, давлении 2 атм в течение 20 мин для изделий из стекла; либо воздушную в сухожаровом шкафу при температуре 160° в течение 150 минут; либо химическую с применением 6% Н₂О₂ [2]. Данный способ взят нами за прототип.

Для обработки предметных стекол с зеркальным покрытием данный способ не применим, так как условия выполнения его этапов могут привести к нарушению целостности зеркального покрытия.

Целью изобретения является разработка способа обработки предметных стекол с зеркальным покрытием для культивирования и дальнейшего исследования клеточных культур в динамике in vitro.

Эта цель достигается тем, что дезинфекцию выполняют путем погружения стекол в вертикальном положении в емкость с 70% этиловым спиртом на 30 минут; предстерилизационную очистку проводят путем погружения стекол в вертикальном положении в емкость с дистиллированной водой объемом до 200 мл, в которой предварительно растворяют 5 г моющего средства; при исходной температуре раствора 30°С стекла выдерживают в нем в течение 30 минут, после чего каждое стекло моют в этом растворе с помощью стерильных ватных тампонов; ополаскивают стекла под проточной водой в течение трех минут, затем ополаскивают стекла дистиллированной водой в течение пяти минут; сушат в вертикальном положении в ламинарном шкафу при комнатной температуре до полного исчезновения влаги. Стерилизацию выполняют ультрафиолетовым облучением в ламинарном шкафу в течение 30 минут; затем каждое стекло заворачивают в стерильный материал и помещают в стерильную чашку Петри, которую герметично закрывают.

При данном способе используют щадящие этапы обработки стекол, которые не приводят к повреждению их зеркального покрытия и делают возможным культивирование и дальнейшее исследование клеточных культур в динамике in vitro на этих стеклах.

Способ стерилизации предметных стекол с зеркальным покрытием осуществляют следующим образом. Дезинфекцию выполняют путем погружения стекол в вертикальном положении в емкость с 70% этиловым спиртом на 30 минут. Предстерилизационную очистку проводят путем погружения стекол в вертикальном положении в емкость с дистиллированной водой объемом до 200 мл, в которой предварительно растворяют 5 г моющего средства. При исходной температуре раствора 30°С стекла выдерживают в нем в течение 30 минут, после чего каждое стекло моют в этом растворе с помощью стерильных ватных тампонов. Ополаскивают стекла под проточной водой в течение трех минут, затем ополаскивают стекла дистиллированной водой в течение пяти минут. Сушат стекла в вертикальном положении в ламинарном шкафу при температуре не более 22°С до полного исчезновения влаги. Стерилизацию выполняют ультрафиолетовым облучением в ламинарном шкафу в течение 30 минут. Затем каждое стекло заворачивают в стерильный материал и помещают в стерильную чашку Петри, которую герметично закрывают.

Перед использованием стекол проводят их проверку на стерильность. Со стекла удаляют стерильный материал и заливают его в чашке Петри культуральной средой, содержащей сыворотку плодов коровы. Помещают чашку Петри на 24 часа в термостат при температуре 37°С. При сохранении стерильности стекла цвет и прозрачность среды не меняются.

На основании проведенных нами исследований, при обработке предметных стекол с зеркальным покрытием по заявляемому способу, их стерильность сохраняется в течение пяти суток. Нарушений зеркального покрытия стекол при этом не наблюдали.

Использование способа иллюстрируется примером. После обработки стекол по заявляемому способу и их проверки на стерильность, стекла поместили в соответствующие по размерам культуральные чашки Петри. Культуру фибробластоподобных клеток сняли со дна культурального флакона стандартным способом и высеяли на подготовленные стекла, после чего их залили полной ростовой средой. Чашки герметично закрыли и установили в СО₂-инкубатор в условиях постоянной влажности и температуры. Культивирование фибробластоподобных клеток на стеклах с зеркальным покрытием проходило без каких-либо патологических отклонений, что позволило в динамике in vitro изучать особенности данных клеток с помощью микроскопа МИМ-340 с длинноходовым предметным столом.

Данный способ можно применять в работе научных исследовательских центров, занимающихся клеточными технологиями и использующими для исследований предметные стекла с зеркальным покрытием.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

1. Патент «Способ подготовки предметных стекол для цитологических исследований». Авторы: Надыров Э.А.; Никонович С.Н. (21) а 20060985, (22) 2006.10.09, (43) 2008.06.30, (71) Заявитель: Учреждение образования "Гомельский государственный медицинский университет" (BY).

2. Приказ МЗ СССР №770 от 10.06.1985 «Стерилизация и дезинфекция изделий медицинского назначения» ОСТ - 42-21-2-85.