Вид РИД
Изобретение
ОБЪЕКТ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Предлагаемое изобретение представляет собой инновационный косметический продукт со свойствами репарации ДНК клеток кожи, которые были повреждены в результате воздействия на кожу УФ-излучения; продукт может применяться в сфере красоты, косметологии, а также в дерматологических центрах.
ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
На сегодняшний день существуют различные признанные препараты, репарирующие ДНК клеток кожи, с содержанием разных типов активных ингредиентов, однако еще не было признанных препаратов, включающих в себя фосфолипидные однослойные липосомы с такими активными компонентами, как: аминокислоты, соли цинка и ферменты, репарирующие ДНК клеток кожи.
На сегодняшний день наиболее близким документом является патент ЕР 0707844, описывающий продукт для репарации клеточных ДНК после воздействия УФ-излучения, содержащий в качестве активных ингредиентов витамины и полипептидные комплексы, тирозин или его производные, гликопротеины с ионами меди, цинка или магний, а также ферменты, репарирующие ДНК клеток кожи.
В описываемом в упомянутом патенте продукте, в дополнение к инкорпорированию фотолиазы, используются производные тирозина, витамины в комплексе с белком и форксолином, что отличает его от продукта, описываемого в настоящей спецификации.
Кроме того, различные активные ингредиенты инкапсулируются в одну и ту же липосому, что отличает препарат от описываемого здесь изобретения, в котором каждый активный ингредиент инкапсулируется в липосомы отдельно, что обеспечивает большую стабильность каждой липосомы и, как результат, конечного продукта.
Не существует известных продуктов, репарирующих клеточные ДНК после воздействия УФ-излучения, с характеристиками, совпадающими с настоящим изобретением.
Фосфатидилхолин, входящий в состав липосом, - это лецитин с чистотой >94%, в то время как чистота лецитина для упомянутого выше патента составляет >25%.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Предлагаемый в рамках данного изобретения продукт представляет собой липосомное косметическое средство, в липосомы которого в качестве активных ингредиентов инкорпорирована смесь аминокислот: аргинин, глицин, пролин, фенилаланин, цистеин, серии, тирозин, глутамин, метионин, а также соли цинка (хлорид, глюконат, хлоргидрат, и т.п.), в дополнение к другим репаративным ферментам, таким как арабидопсис (Arabidopsis thaliana), экстракт планктона, лизат фермента бифидобактерий, лизат микрококков.
Наличие метаболических путей объясняет инкорпорирование в изобретение перечисленных ниже аминокислот, несмотря на то, что они не включены в формулу:
Серин: является предшественником цистеина и глицина.
Тирозин: его предшественником является фенилаланин. Он является продуктом гидроксилирования фенилаланина.
Метионин: промежуточный продукт синтеза цистеина. Цистеин получает атом серы из метионина.
Глутамин: синтезируется в результате химической реакции между ионами глутамина и аммония; глутамин может превращаться в глутамат, и пролин формируется из пента-карбонатной цепи глутаминовой кислоты.
В результате воздействия на кожу солнечного УФ-излучения повреждаются ДНК клеток кожи. Помимо других способов, для оценки данных повреждений могут использоваться димеры тимина и цитозина, производящиеся в цепи клеточной ДНК.
ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫЙ ВАРИАНТ ВОПЛОЩЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В качестве предпочтительного варианта воплощения предлагается липосомный косметический продукт в разных косметических формах, таких как раствор, сыворотка, эмульсия, суспензия и т.д., в котором в одном из вариантов различные компоненты могут находиться в приведенных ниже пропорциях активных ингредиентов и липосом (см. таблицу).
ОПИСАНИЕ ИЗОБРАЖЕНИЙ
В качестве дополнения к изображениям и для лучшего понимания характеристик изобретения к данной спецификации в качестве неотъемлемой составной части прилагается ряд изображений.
Часть включенных в данную спецификацию изображений соотносится с испытаниями данных типов продуктов на зародышах рыбы вида оризия, продемонстрировавших нам наличие способности продукта к репарации ДНК клеток кожи.
В то же время мы увидим, как механизм действия, заключающийся в упомянутой репарации ДНК клеток кожи, соотносится с активацией экспрессии белков Р53 и Р21 (будет измеряться с помощью количественной ПЦР (кПЦР)).
На данных рисунках в графической форме отображается следующая информация:
На Рис. 1 приведена диаграмма воздействия УФ-излучения на цепи ДНК, а также изображение образования тиминовых димеров между двумя ветвями одной спирали ДНК.
На Рис. 2 представлена диаграмма повреждений ДНК в контрольный момент времени 0 и через 15 минут. Исследование выполняется с использованием НЕОБРАБОТАННЫХ образцов, у которых повреждения ДНК (время = 0) усиливаются, но клетки используют собственные эндогенные механизмы для репарации данных повреждений, и в момент времени 15' уровень ТД сходен с контрольным.
На Рис. 3 показано изменение экспрессии гистона Н2Ах и уровень тиминовых димеров с учетом контрольного времени 0 и через 15 минут. Однако мы знаем, что фосфорилированный Н2Ах действует как ловушка для ферментных соединений для репарации ДНК. Результаты во временных точках t = 0 и t 15' не являются статистически значимыми.
На Рис 4 отображаются изменения клеток в фазах клеточного цикла G0-G1, G2-M и S во временной точке 0 и через 15 минут. Обработка НЕ вызывает статистически значимых изменений распределения клеток в фазах клеточного цикла, которые могут повлиять на результат.
На Рис. 5 показан уровень ТД в контрольном случае (включает в себя использование базового крема без активных ингредиентов), случае Е: включает в себя базовый крем с репаративными ферментами, Z: базовый крем с аминокислотами и солью Zn, и E+Z: базовый крем с репаративными ферментами + аминокислоты + соль Zn. Сочетание E+Z снижает уровень ТД на 36% по сравнению с контрольным.
КЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ
С целью определения эффективности предлагаемого в качестве изобретения продукта проводятся клинические исследования, в ходе которых используется 3 косметических состава Е, Z и E+Z. Проводится исследование in vitro на 4-х дневных зародышах рыб на элеутеро-эмбриональной стадии.
Из трех используемых в исследовании продуктов: продукт Е содержит набор липосом с репаративными ферментами (арабидопсис (Arabidopsis thaliana), экстракт планктона, лизат фермента бифидобактерий, лизат микрококков), продукт Z содержит набор липосом с аминокислотами (аргинин, глицин, пролин, фенилаланин, цистеин) и хлорид цинка, а продукт E+Z содержит набор липосом с ферментами, указанными для продукта Е, плюс AK и Zn продукта Z.
В первую очередь анализировалась возможная токсичность для образцов и время лечение, которое необходимо использовать в рамках исследования.
Подготавливаются контрольные образцы без облучения, с облучением и без лечения, с облучением и лечением после облучения. Продукты наносятся на зародыши до или после облучения с целью определить возможную репарацию ДНК после вызванных повреждений.
С этой целью проводится анализ на наличие тиминовых димеров, поскольку УФ-излучение вызывает формирование пиримидиновых димеров в ДНК, которые можно зафиксировать при помощи антител, специфичных к данным димерам (тимин и цитозин). Используя специфичные антитела, мы оценим увеличение