Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ НЕРВНЫХ СТРУКТУР В ЗУБОЧЕЛЮСТНОЙ СИСТЕМЕ

Изобретение относится к области медицины, в частности к стоматологии, и может быть использовано в нейростоматологии для выявления нервных структур в зубочелюстной системе на нейрогистологическом уровне.

В распоряжении нейроморфологов имеется широкий выбор методик для выявления нервных структур в тканях [Рассказова Е.И. Методы импрегнации нейроплазмы разных периферических нервных волокон и окончаний / Е.И. Рассказова // Вопросы психиатрии. В кн. Научные работы института психиатрии. М., Медицина, - 1956. - С. 349-353].

Однако использование рекомендуемых прописей и условий на практике нередко не позволяют получить желаемого результата. Не является исключением выявление нервных компонентов в костных образованиях челюстно-лицевой области. Неполное выявление компонентов нервного аппарата частично объясняется биохимической индивидуальностью органов и тканей [Рассказова Е.И. Методы импрегнации нейроплазмы разных периферических нервных волокон и окончаний / Е.И. Рассказова // Вопросы психиатрии. В кн. Научные работы института психиатрии. М., Медицина, - 1956. - С. 349-353].

Одним из отрицательных моментов выявления нервных элементов в костной ткани является декальцинация во время фиксации изучаемых объектов и сам способ фиксации в конечном счете сводит на нет выявление нервных структур в зубах и челюстях из-за аутолиза их кислотами [Жаботинский Ю.М. Нормальная и патологическая морфология нейрона. Л.: Медицина, 1965. - 328 с.]. Декальцинации должна предшествовать хорошая, основательная фиксация. Для этих целей существуют различные смеси на основе формалина - жидкости Гели, Гейденгайна, Штиве, Флеминга, Делоне (1936), Шафера (1902), Эбнера и ряда других, в которых в качестве декальцинации используют различные кислоты, диапазон концентрации которых весьма вариабелен. Используют: трихлоруксусную, пикриновую, азотную, серную кислоты и их смеси в разных объемных сочетаниях. При этом многие авторы, предлагавшие свои методики, единодушны во мнении, что соляная и азотная кислоты как таковые для декальцинации не пригодны, так как полностью растворяют основные структурные компоненты костной ткани [Рассказова Е.И. Методы импрегнации нейроплазмы разных периферических нервных волокон и окончаний / Е.И. Рассказова // Вопросы психиатрии. В кн. Научные работы института психиатрии. М., Медицина, - 1956. - С.349-353].

Наиболее оптимальным вариантом для декальцинации является муравьиная кислота, которая особо рекомендуется для декальцинации зубов, так как она слабо влияет на окрашиваемость (Мураяма, 1937; Ричмен, Гельфанд и Хилл. 1946) [Пирс Э. Гистохимия. Теоретическая и прикладная. М., 1962; Лойд З., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы. М., «Мир», - 1982].

Однако эти методики дают в основном положительные результаты на предмет окраски структур костной ткани различными общегистологическими способами. Так, наиболее оптимальной окраской срезов декальцинированных зубов является метод Шморля: срезы окрашивают в течение 10-12 мин раствором тионина, затем споласкивают водой и переносят в концентрированный водный раствор пикриновой кислоты на 1,5-2 мин. Снова споласкивают в дистиллированной воде, затем дифференцируют в 70% спирте до прекращения отделения из срезов красителя (обычно 5-10 мин), обезвоживают в 96% спирте, карбол-ксилоле и монтируют на предметном стекле с заключением в бальзам. В результате окрашиваются одонтобласты с отростками и дентинные трубочки. [Р.П. Самусев / Основы клинической морфологии зубов // Самусев Р.П., Дмитриенко С.В., Краюшкин А.И. - М.: ООО «Издательский дом «Оникс 21 век»: ООО «Мир и Образование», 2002. - 268 с. (С. 30)].

В качестве же метода выявления нервных образований данный способ фиксации мало пригоден из-за высокой концентрации входящих в состав фиксирующих жидкостей кислот, которые растворяют миелированные и немиелированные компоненты нервных элементов. Так, согласно методике Мираяма (1937) необходимо применять концентрированную муравьиную кислоту, разбавляя в равном количестве 70° спирта, а по методу Ричмена, Гельфанда и Хила (1946) используют 100 мл муравьиной и 80 мл соляной кислоты на 1 литр дистиллированной воды [Пирс Э. Гистохимия. Теоретическая и прикладная. М., 1962; Лойд З., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы. М., «Мир», - 1982].

Данные методики пригодны только для общегистологической окраски, но не для выявления нервных структур из-за побочного действия соляной кислоты.

Согласно методике деКастро, в качестве фиксации и декальцинации используется азотная кислота [К.Г. Таюшев Руководство по лабораторной нейрогистологической технике / Таюшев К.Г. - СПб, 2005. - С. 68]. По данной методике приводится:

1. Фиксация и одновременная декальцинация: абсолютный этанол - 50 мл, хлоралгидрат - 5,0 г, дистиллированная вода 50 мл, азотная кислота - 2-4 мл (в зависимости от плотности костной ткани от 4 до 10 суток). Если ткань очень плотная, количество азотной кислоты можно увеличить от 4 до 7 мл, окончание фиксации определяется по цвету объекта: он становится полупрозрачным, молочным.

2. Промывание в проточной воде - 1 сут.

3. 96% этанол - 50 мл, аммиак - 1 сут.

4. 1,5% раствор нитрата серебра (можно прибавить пиридина по 1 капле на 1 мл раствора) - 7-10 сут. В термостате при температуре 37°С.

5. Восстановление: пирогаллол - 1 мл, нейтральный формалин - 10 мл, дистиллированная вода - 90 мл на сут.

6. Быстрое проведение через спирты, проводка и заливка в целлоидин.

7. Приготовление срезов и гистологических препаратов.

Однако данным способом затруднительно выявление в полном объеме нервных структур в костной ткани челюстей, особенно в зубах.

Техническим результатом изобретения является определение оптимальной концентрации декальцинирующе-фиксирующей смеси для более полного выявления структуры нервного аппарата в зубочелюстной системе человека и животных.

Технический результат достигается составом и концентрацией фиксирующей смеси на основе муравьиной кислоты и хлоралгидрата, и концентрацией азотнокислого серебра.

Предлагаемый способ заключается в следующем.

Объект зубной или челюстной ткани фиксируют в течение 3-5 суток в смеси следующего состава: концентрированная муравьиная кислота - 3,5 мл, хлоралгидрат - 3,5 г, 96% этиловый спирт - 50 мл, дистиллированная вода - 100 мл. Смесь меняют в течение суток 2-3 раза.

Далее объект промывают в водопроводной воде - 24 часа и помещают в смесь следующего состава: 50 мл 96° спирта с аммиаком (50 мл спирта и 5-6 капель аммиачного спирта) на 30-60 мин в зависимости от величины объекта.

Затем объект промывают в дистиллированной воде 20-30 минут и осуществляют импрегнацию в 5% растворе нитрата серебра в термостате при температуре 37° в течение 5-7 суток, пока кусочки не приобретут светло-коричневый оттенок.

После термостата объект промывают в дистиллированной воде 10 минут с последующим восстановлением в течении 24 часов в смеси состава: пирогалловая кислота - 1 гр, формалин - 10 мл, дистиллированная вода - 90 мл.

Далее проводят промывку дистиллированной водой 10-15 минут и традиционную проводку через спирты, ксилол, заливку в целлоидин, резку на микротоме и бальзамирование.

Применение в качестве декальцинирующего компонента муравьиной кислоты в составе фиксирующей смеси на фоне хлоралгидрата явилось новым решением, способствующим упрощению порядка проводки исследуемого объекта через нейрохимические реактивы, повышению качества получаемых нейрогистологических препаратов, определенных сегментов зубочелюстной системы на светооптическом уровне.