Результат интеллектуальной деятельности: МЕЧЕННЫЙ ТРИТИЕМ ПО ВСЕМ АМИНОКИСЛОТНЫМ ОСТАТКАМ 5-oxo-PRO-ARG-PRO

Изобретение относится к области органической химии и может найти применение в аналитической химии и биологических исследованиях.

При изучении физиологически активных соединений необходимы их меченые аналоги.

Известно, что замена атомов соединений на их меченые аналоги не приводит к изменению каких-либо свойств исходного соединения (Evans Е.А. - Tritium and its compounds London Butterworths, 1974, p. 48) [1].

Кроме того, показано, что реакции дейтерия и трития с веществами, нанесенными на поверхность катализатора, происходят с близкими скоростями и одинаковой селективностью, а отношение скоростей этих реакций приближается к единице (Золотарев Ю.А., Дадаян А.К., Кост Н.В., Воеводина М.Э., Соколов О.Ю., Козик B.C., Шрам С.И., Азев В.Н., Бочаров Э.В., Богачук А.П., Липкин В.М., Мясоедов Н.Ф. Количественный анализ пептида HLDF-6-амида и его метаболитов в тканях лабораторных животных с использованием их меченных тритием и дейтерием производных // Биоорганическая химия, 2015, том 41, №6, с. 644-656 и Zolotarev Yu. A., Dadayan А.К., Borisov Yu. A., Kozik V.S., Nazimov I.V., Ziganshin R.H., Bocharov E.V., Chizhov A.O., Myasoedov N.F. New Development in the Solid-State Isotope Exchange with Spillover Hydrogen in Organic Compounds // J. Phys. Chem. C. 2013. V. 117. P. 16878-16884) [2, 3].

Также в работе [1] показано, что в биологических исследованиях принципиально важную роль играет распределение трития в молекулах меченых препаратов. В работе подчеркивается, что при исследовании метаболизма лекарственных препаратов стабильность положения трития является одним из наиболее важных условий биологического эксперимента. Для каждого конкретного исследования требуется определенное распределение трития в молекулах меченых препаратов. Химически устойчивый связанный атом трития может стать подвижным при взаимодействии тритийсодержащего соединения с энзимом. В результате этого атом трития может быть потерян, несмотря на полную сохранность углеродного скелета молекулы. Если же тритий находится в другом фрагменте молекулы вещества или в молекулах вещества их несколько, то вероятность получения более достоверных данных значительно повышается. При этом важно не только распределение трития, но даже и его стереохимическая конформация. Например, показано, что конверсия холестерина-4-¹⁴С-7а-³Н в холевую кислоту в организме крысы in vivo ведет к потере, по меньшей мере, 93% трития из положения 7. Однако при использовании холестерина-4-¹⁴С-7β-³Н весь тритий оставался в холевой кислоте.

Известен 5-oxo-Pro-Arg-Pro формулы:

5-oxo-Pro-Arg-Pro - универсальный анксиолитик, проявляет гипогликемический эффект в организме животных, даже на фоне такой патологии, как метаболический синдром, снижает агрегацию тромбоцитов, восстанавливает нормальные значения показателей общего холестерина, липидного профиля даже при одновременном употреблении в пищу продуктов, приводящих к повышению уровня холестерина крови. Установлены антикоагулянтно-фибринолитические и антитромбоцитарные эффекты этого пептида, а также, что 5-oxo-Pro-Arg-Pro активен в отношении глутаматергических нейронов и будет вызывать биологические эффекты, связанные с изменением функциональной активности глутаматергической системы мозга (Глазова Н.Ю., Левицкая Н.Г., Андреева Л.А., Каменский А.А., Мясоедов Н.Ф. // Докл. АН физиология. 1999. Т 367. №1, С. 137-140 [4]).

Однако его аналог, меченный тритием по всем аминокислотным остаткам, не описан.

Техническим результатом, достигаемым настоящим изобретением, является расширение ассортимента меченых аналогов физиологически активных соединений.

Достигается указанный технический результат получением меченного тритием по всем аминокислотным остаткам 5-oxo-Pro-Arg-Pro формулы

Ниже приведен пример реализации изобретения.

Пример I.

Раствором 5 мг 5-oxo-Pro-Arg-Pro в 30 мкл воды пропитывали 50 мг 5% Pd/BaSO₄ и лиофилизировали.

В ампулу помещали 40 мг смеси, вакуумировали и заполняли газообразным тритием до давления 400 гПа. Реакцию вели при 190°С в течение 10 мин. Затем ампулу вакуумировали, катализатор удаляли на фильтре, вещество экстрагировали метанолом (5×2 мл). Экстракты упаривали, остаток растворяли в метаноле (3×1 мл) и вновь упаривали для удаления лабильного трития. Конечный метанольный раствор содержал 450 мКи пептида.

Меченный тритием 5-oxo-Pro-Arg-Pro очищали препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографией. После очистки радиохимическая чистота меченого 5-oxo-Pro-Arg-Pro - не менее 97-98%, выход - 75%, молярная радиоактивность - 60 Ки/ммоль (табл.).

Анализ реакционных смесей проводили на хроматографе Милихром-А02, длины волн (нм): 200, 210, 220, 230, 240, с использованием колонки ProntoSIL-120-5-C₁₈ AQ DB-2003 (2×75 мм, размер частиц 5 мкм), в градиенте метанол-буфер (0.2 М LiClO₄+0.005 М HClO₄, рН 2.24) в течение 12 мин при температуре 35°С. Анализ 5-oxo-Pro-Arg-Pro проводили, увеличивая концентрацию метанола с 1 до 30%. Скорость подачи элюента - 0.2 мл/мин, время удерживания 5-оксо-Pro-Arg-Pro - 8.11 мин.

Препаративное выделение меченого пептида проводили на колонке Kromasil 100 С18 (8×150 мм, 7 мкм), в градиенте метанола и 0.1% водной трифторуксусной кислоты в течение 30 мин, увеличивая концентрацию метанола с 0 до 50%. Скорость подачи элюента - 2 мл/мин, время удерживания 5-oxo-Pro-Arg-Pro - 20.9 мин.

Таким образом, получен меченный тритием по всем аминокислотным остаткам 5-охо-Pro-Arg-Pro.