Способ нормализации активности каталазы тромбоцитов у новорожденных телят с дефицитом железа

Изобретение относится к биологии и ветеринарии.

Ближайшим аналогом заявляемого является способ, описанный в: Киперман Я.В. Тромбоцитарная активность у телят в фазу новорожденности. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Чебоксары, 2010. - 19 с. В данном источнике содержится информация о возможности нормализовать активность каталазы тромбоцитов у новорожденных телят с железодефицитной анемией. Прототип, также как и заявленный способ, включает ферроглюкин и крезацин, но применяемые по иной схеме. При этом в заявленном способе используется гамавит, не применяемый в прототипе. Главным недостатком прототипа является достижение эффекта только при его достаточно длительном использовании - не менее 10 суток, что не может считаться удовлетворительным. Практическое животноводство нуждается в способе, способном в более короткие сроки оптимизировать активность каталазы тромбоцитов, что положительно сказывалось бы на многих функциях этих форменных элементов крови у новорожденных телят с дефицитом железа. В этой связи заявленный способ намного более предпочтителен, т.к. в нем за счет суммации эффектов ферроглюкина, крезацина и гамавита достигается новое качество коррекции активности каталазы тромбоцитов новорожденных телят с дефицитом железа - ее активность нормализуется всего за 4 суток.

В литературе имеются рекомендации по назначению ферроглюкина для коррекции железодефицитной анемии (Внутренние незаразные болезни сельскохозяйственных животных. Под ред. В.М. Данилевского. М.: «Агропромиздат», 1991. - 576 с.). В качестве эффективных стимуляторов жизнедеятельности растущего организма в современной ветеринарии применяется крезацин - производное ароксиалкилкарбоновых кислот. Он представляет собой белый кристаллический порошок, хорошо растворимый в воде, со слабым специфическим запахом, сладковато-горьковатого вкуса. Крезацин проявляет эффективное стимулирующее действие на живые организмы, повышает выживаемость животных в неблагоприятных и экстремальных условиях, стимулируя или нормализуя жизненные процессы (Байматов В.Н., Латыпов М.М. Влияние крезацина на состояние птицы. Ветеринария, 2006, №11, с. 49-51). В литературе имеются рекомендации по назначению гамавита для оптимизации роста и улучшения обменных процессов (Деева А.В., Салахова З.А., Лобова Т.П. и др. Повышение сохранности и продуктивности поросят при использовании фоспренила и гамавита // Ветеринария. - 2006. - №4. - С. 13-15).

Однако, никогда ранее лечебный комплекс, состоящий из ферроглюкина, крезацина и гамавита, не применялся у новорожденных телят с дефицитом железа с целью нормализации активности каталазы кровяных пластинок.

Целью изобретения является устранение нарушений активности каталазы тромбоцитов у новорожденных телят с дефицитом железа.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что для коррекции активности каталазы тромбоцитов новорожденным телятам с дефицитом железа назначается ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 4 суток, крезацин 5 мг/кг в сутки, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина, включив его в схему выпаивания на 4 суток и гамавит внутримышечно один раз в сутки утром 0,05 мл/кг на 4 суток, начиная одновременно с ферроглюкином и крезацином.

Способ позволяет нормализовать активность каталазы тромбоцитов у новорожденных телят с дефицитом железа на следующие сутки после завершения коррекции, переводя ее на уровень, соответствующий таковому для здоровых новорожденных телят. У пролеченных таким образом животных в последующем отмечается стабильно нормальное состояние активности каталазы тромбоцитов, что позволяет у новорожденных телят с дефицитом железа понижать тромбоцитарную активность, тем самым способствуя стойкой оптимизации микроциркуляции и минимизации риска тромботических осложнений, увеличивая привесы, ускоряя рост и развитие животных и снижая падеж.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом. Кровь берут из вены в количестве 5,0 мл через толстую иглу самотеком в пробирку. В качестве консерванта используют 5% раствор трилона-Б из расчета 0,5 мл консерванта на 5,0 мл цельной крови. Затем кровь с консервантом осторожно и тщательно перемешивают и для осаждения эритроцитов и лейкоцитов центрифугируют при 1000 об/мин в течение 10 мин. Надосадочный слой, который содержит основную массу тромбоцитов, отсасывают в отдельную пробирку и центрифугируют при 1000 об/мин в течение 10 мин. При этом оставшиеся в надосадочном слое эритроциты и лейкоциты оказываются в осадке. Осадок удаляют, а супернатант помещают в отдельную пробирку и центрифугируют при 2200 об/мин в течение 15 мин. В результате получают осадок, состоящий из одних тромбоцитов. Выход тромбоцитов составляет около 0,6×10⁹ клеток из 5,0 мл цельной крови. Полученные тромбоциты отмывают следующим образом. Надосадочную жидкость после третьего центрифугирования удаляют, а к осадку тромбоцитов добавляют 6,0 мл 0,85% раствора натрия хлорида, приготовленного на 2,7% растворе трилона Б. Осадок кровяных пластинок осторожно перемешивают и центрифугируют при 2200 об/мин в течение 10 мин. Затем супернатант удаляют, а к осадку вновь добавляют физиологический раствор на трилоне Б в количестве 6,0 мл. Следует отметить, что выделение и отмывание тромбоцитов проводят при комнатной температуре. В каждом конкретном случае количество тромбоцитов подсчитывается в камере Горяинова.

Последующая оценка активности каталазы осуществляется следующим способом. Принцип метода состоит в том, что каталаза разрушает субстрат Н₂О₂, а оставшуюся не разрушенной часть перекиси водорода измеряют с помощью молибдата натрия. Как известно, для молибдена характерно образование при взаимодействии с перекисью водорода перекисных соединений состава Na₂МоO₆, которые имеют желтую окраску. Интенсивность окраски образующихся перекисных соединений молибдена зависит от количества перекиси водорода в растворе, т.е. от активности каталазы в пробе.

Реагенты.

(1) 0,3% водный раствор перекиси водорода (1 мл концентрированного раствора перекиси водорода доводят дистиллированной водой до 100 мл).

(2) 4% водный раствор молибдата натрия.

В приведенной ниже таблице содержится описание методики.

В таблице приведено описание методики.

Раствор молибдата добавляют к каждой пробе по отдельности и сразу же после перемешивания реакционной смеси измеряют экстинкцию при 410 нм против дистиллированной воды. Экстинкция холостой пробы около 0,350. Чем больше в пробе каталазы, тем меньше перекиси водорода остается не разрушенной и тем меньше образуется перекисей молибдата. Результат оценивают по степени разрушения перекиси водорода каталазой или степени блокирования образования конечных продуктов перекисей молибдата и выражают в процентах. Расчет проводят по формуле:

где Е_{х. пр} и Е_{исс. пр} - экстинкция соответственно холостой и исследуемой проб. С помощью калибровочной кривой, построенной для стандартных растворов каталазы (схема), оценивают активность каталазы в пробе на основании рассчитанного процента разрушения перекиси водорода. Активность каталазы относят к концентрации тромбоцитов (в МЕ/10⁹ тромбоцитов) в исследуемой взвеси тромбоцитов.

На схеме по оси абсцисс схемы отложена активность каталазы в МЕ/10⁹ тромбоцитов, по оси ординат - блокирование реакции в %. Нормативные значения активности каталазы тромбоцитов новорожденных телят составляют 9100,0-9400,0 МЕ/10⁹ тромбоцитов.

При дефиците железа у новорожденных телят весьма часто происходит понижение активности каталазы тромбоцитов. При установлении этого новорожденному теленку с дефицитом железа необходимо назначать лечение ферроглюкином по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 4 суток, крезацином 5 мг/кг в сутки, начиная применять его одновременно с первой инъекцией ферроглюкина, включив его в схему выпаивания на 4 суток и гамавитом внутримышечно один раз в сутки утром 0,05 мл/кг на 4 суток, начиная одновременно с ферроглюкином и крезацином.

Заявляемый способ был апробирован на более чем 120 новорожденных телятах с дефицитом железа и явлениями анемии с достижением через 4 суток проведенного лечения нормализации у них активности каталазы тромбоцитов.

Пример 1. У новорожденного теленка №7 с дефицитом железа и анемией было выявлено нарушение эритропоэза за счет снижения уровня содержания железа в его организме (сывороточное железо 12,4 мкмоль/л, сидероциты 1,4%), при количестве гемоглобина у него 79,0 г/л, эритроцитов - 3,6×10¹²/л.

При обследовании у теленка было выявлено ослабление в тромбоцитах активности каталазы до 4700,0 МЕ/10⁹ тромбоцитов. Теленку был назначен ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 4 суток, крезацин 5 мг/кг в сутки, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина, включив его в схему выпаивания на 4 суток и гамавит внутримышечно один раз в сутки утром 0,05 мл/кг на 4 суток, начиная одновременно с ферроглюкином и крезацином.

Теленок находился под постоянным наблюдением с ежедневным контролем активности каталазы тромбоцитов.

На следующие сутки после окончания лечения у теленка достигнута нормализация в его крови сывороточного железа 22,4 мкмоль/л, сидероцитов 8,2%, количества гемоглобина 120,0 г/л, эритроцитов - 5,0×10¹²/л при достижении нормализации активности каталазы тромбоцитов (9200,0 МЕ/10⁹ тромбоцитов), что обеспечивало ослабление риска активации агрегационных свойств тромбоцитов и развития у животных тромбозов в будущем.

Пример 2. У новорожденного теленка №12 с дефицитом железа и анемией было выявлено нарушение эритропоэза за счет снижения уровня содержания железа в его организме (сывороточное железо 12,6 мкмоль/л, сидероциты 1,5%), при количестве гемоглобина у него 81,0 г/л, эритроцитов - 3,5×10¹²/л.

При обследовании у теленка было выявлено ослабление в тромбоцитах активности каталазы до 4600,0 МЕ/10⁹ тромбоцитов. Теленку был назначен ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 4 суток, крезацин 5 мг/кг в сутки, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина, включив его в схему выпаивания на 4 суток и гамавит внутримышечно один раз в сутки утром 0,05 мл/кг на 4 суток, начиная одновременно с ферроглюкином и крезацином.

Теленок находился под постоянным наблюдением с ежедневным контролем активности каталазы тромбоцитов.

На следующие сутки после окончания лечения у теленка достигнута нормализация в его крови сывороточного железа 23,6 мкмоль/л, сидероцитов 8,3%, количества гемоглобина 122,0 г/л, эритроцитов - 5,1×10¹²/л при нормализации активности каталазы тромбоцитов (9300,0 МЕ/10⁹ тромбоцитов), что обеспечивало ослабление риска активации агрегационных свойств тромбоцитов и развития у животных тромбозов в будущем.

Использование предлагаемого способа коррекции активности каталазы тромбоцитов у новорожденных телят с дефицитом железа в биологии и ветеринарии поможет избежать многих сосудистых осложнений и оптимизировать микроциркуляцию и трофику тканей у животных, оздоровить поголовье, снизить падеж, ускорить рост и развитие телят, увеличить их ежесуточные привесы.