МОДЕЛЬ ИШЕМИИ СПИННОГО МОЗГА У ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может использоваться при выполнении научных работ по ишемии спинного мозга.

Аналоги изобретения

Экспериментальная модель ишемии спинного мозга у крыс при окклюзии брюшной аорты ниже почечных артерий. (Г.В. Пономарев, А.А. Шмонин, К.Т. Алиев, Т.Д. Власов Е.В. Мельникова, Д.Г. Смолко, А.А. Скоромец).

Критика аналогов

Однако известные модели создания ишемии спинного мозга имеют недостатки, выявленные в ходе экспериментов: возникновение нарушения кровоснабжения кишечника, возникновение коллатерального кровоснабжения спинного мозга, в результате чего необходимы повторные оперативные вмешательства.

Прототип изобретения

Экспериментальная модель ишемии спинного мозга у крыс при окклюзии брюшной аорты ниже почечных артерий: Г.В. Пономарев, А.А. Шмонин К.Т. Алиев, Т.Д. Власов Е.В. Мельникова, Д.Г. Смолко, А.А. Скоромец (журнал Трансляционная медицина, август 2014, стр. 40-45.).

По прототипу эксперименты проводили в соответствии с «Руководством по уходу и использованию лабораторных животных» (публикация Национального института здоровья №85-23, США) и «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» под общей редакцией Р.У. Хабриева (2005). Опыты выполнены на 12 крысах-самцах линии Wistar массой 200-250 г. Все оперативные вмешательства проведены в экспериментальной операционной с соблюдением правил асептики и антисептики под общей анестезией хлоралгидратом (450 мг/кг), введенным внутрибрюшинно. Экспериментальные животные были поделены на две экспериментальные группы. К первой (контрольной) отнесены ложнооперированные крысы, которым производили выделение брюшного отдела аорты без ее окклюзии (n=6); у второй (опытной) проводили пережатие инфраренального отдела брюшной аорты без реперфузии (n=6). Для моделирования ишемии пояснично-крестцовых сегментов спинного мозга у анестезированных животных выполняли лапаротомию, выделяли инфраренальный отдел брюшной аорты, которую перевязывали шовной шелковой нитью. Операционная рана ушивалась. Животные помещались по одному в клетку. Неврологический дефицит оценивали через 48 часов по шкале Тарлова. Спустя 48 часов после перевязки брюшной аорты медицинской иглой пунктировали левый желудочек сердца и вводили 4-процентный раствор параформальдегида на фосфатном буфере с целью фиксации спинного мозга. Затем послойно препарировали мягкие ткани поясничного отдела и выделяли позвоночник. После ляминэктомии и пересечения спинномозговых корешков извлекали из позвоночного канала спинной мозг. Затем его заливали парафином (или целлулоидином) и после застывания проводили на микротоме срезы пояснично-крестцовых сегментов (L2-S4) толщиной 5 мкм и окрашивали тионином по методике Ниссля. Далее под световым микроскопом при увеличении ×100, ×400 подсчитывали число нейронов нормохромных, гиперхромных сморщенных и несморщенных и гипохромных клеток-теней. Статистическую обработку результатов проводили с помощью программы «Statistica 6,0». Для сравнения двух независимых выборок был использован непараметрический теста Манна-Уитни. Различия считались значимыми при р<0,01.

Критика прототипа

Возникновение нарушения кровоснабжения кишечника, возникновение коллатерального кровоснабжения, в результате чего необходимы повторные оперативные вмешательства.

Цель изобретения - устранение возникновения коллатерального кровоснабжения без ишемизации кишечника.

Сущность изобретения

Сущность предлагаемой экспериментальной модели заключается в следующем:

эксперимент проводят на лабораторных животных (крысы).

Подготовка:

1) Производилась выборка животных по возрасту и полу.

2) Животные взвешивались и рассчитывалась доза наркозного препарата (пропофол).

3) Введение наркозного препарата.

4) Спустя 30 минут контроль глубины наркоза путем болевых рефлексов.

5) Подготовка операционного поля.

Ход операции:

1) Срединная лапаротомия.

2) Доступ к брюшной части аорты и нижней полой вене.

3) Выделение брюшной части аорты и нижней полой вены.

4) Наложение лигатур ниже места отхождения почечных артерий.

5) Разрушение коллатералей.

6) Перевязка нижней полой вены ниже почечных сосудов, снятие лигатур и проверка гемостаза.

7) Ушивание раны.

Послеоперационный период:

1) Проверка возникновения пареза или паралича нижних конечностей.

2) Повторное вскрытие.

3) Введение в левый желудочек 1,0 мл бриллиантовой сини.

4) Через пять минут введение раствора бриллиантовой сини с формальдегидом 10% в объеме 2,0 мл.

5) Извлечение спинного мозга.

6) Изучение макропрепарата, окраска и срезы.

Пример конкретного способа создания модели

В ходе проверки модели ишемии использовались 6 лабораторных животных. У трех крыс на первые сутки возник паралич нижних конечностей. К третьим суткам у всех животных этой группы наблюдались парезы и параличи в нижних конечностях. В результате у всех лабораторных животных на макропрепарате наблюдалось окрашивание позвоночного столба и спинного мозга выше уровня манипуляции.

Признаки изобретения, отличительные от прототипа

Предлагаемая в качестве изобретения модель создания ишемии спинного мозга:

- отсутствие перевязки и перерезки брюшной части аорты,

- введение препаратов внутрибрюшинно,

- перевязка нижней полой вены,

- венозная перегрузка нижних конечностей,

- повышение венозного давления в системе позвоночных коллатералей между нижней и верхней полой венами,

- разрушение коллатералей.

Положительный эффект изобретения

Получение стойкой ишемии у лабораторных животных, введение препаратов внутрибрюшинно, снижение травматизма животных во время операций, возможность более длительного наблюдения. Отсутствие ишемизации кишечникаи нижних конечностей, отсутствие нарушения кровоснабжения брыжеечных вен.

Источники информаций, принятых во внимание

1. Трансляционная медицина, август 2014, стр. 40-45. – прототип.

2. «Руководство по уходу и использованию лабораторных животных» (публикация Национального института здоровья №85-23, США).

3. «Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» под общей редакцией Р.У. Хабриева (2005).