СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО КРАСИТЕЛЯ ИЗ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ

Изобретение относится к области гистологических красителей растительного происхождения.

Известно несколько способов получения красителя из растительного сырья для гистологических целей: авт. свид. СССР N 1781259, кл. C09B 61/00, 1992; патент РФ 2078105, кл. C09B 61/00, 1997.

Первый метод заключается в том, что плоды воронца заостренного настаивают в 70%-ном спирте в течение 24-48 ч с последующей обработкой фильтрата ледяной уксусной кислотой, алюмокалиевыми квасцами и мочевиной при их соотношении 8-10:1-1,6:1,6-2,4 соответственно на 100 мл фильтрата.

Во втором случае в качестве растительного сырья используются плоды марены сердцелистной лесной, которые настаивают на 70%-ном этиловом спирте, а затем к 100 мл полученного раствора добавляют 8-10 мл соляной кислоты и 1-1,4 г медного купороса. Во всех вышеуказанных случаях получены ядерные красители, окрашивающие кариолемму, хроматин и ядрышко.

В собственных работах (Ишунина Т.А., Зык Е.И., Ряховская Д.В. Морфологические ведомости 2015, том 23, с. 93-96) получены цитоплазматические красители на основе водных настоев крапивы и плодов рябины обыкновенной с использованием в качестве протравы железного купороса.

Техническим результатом настоящего изобретения является расширение спектра гистологических красителей на основе доступного и нетоксичного растительного сырья Центрально-Черноземного района России. В отличие от указанных выше запатентованных ядерных красителей, предлагаемый способ позволяет получить стойкий многоразовый цитоплазматический краситель. От упомянутых ранее цитоплазматических красителей отличается источником растительного сырья, цветом, конкурирующим с известным красителем эозином, использованием другой протравы, отсутствием необходимости в добавлении едкого натра и спиртовой экстракцией красящих веществ, что позволяет длительно хранить спиртовой экстракт цветков до окрашивания.

Указанный технический результат достигается тем, что в качестве исходного сырья используются цветки зверобоя (Hypericum perforatum), которые настаивают на 90%-ном этиловом спирте. К 50 мл полученного раствора красно-коричневого (кирпичного) цвета непосредственно (за 5-10 минут) перед окрашиванием добавляют 1.5-2 грамма цинкового купороса. Изобретение поясняется фигурами.

Пример конкретного выполнения. Свежесрезанные цветки зверобоя заливают 90% спиртом и настаивают 1-2 недели. Через 4-5 дней после начала приготовления раствор в хорошо закрытой стеклянной емкости помещают в водяную баню, нагретую до 90° в течение 15-20 минут. Вода прикрывает до 75% высоты емкости. Спустя 3-4 дня сырье отжимают и получают почти непрозрачный спиртовой раствор красно-коричневого цвета. К 50 мл полученного раствора добавляют 1.5-2 грамма цинкового купороса и хорошо размешивают. Полученный краситель красно-коричневого цвета пригоден для окраски срезов после стандартной фиксации материала в 10% растворе формалина. При выдерживании срезов в течение 20-30 мин наблюдается интенсивное окрашивание цитоплазмы клеток (фиг. 1, фиг. 2, фиг. 3, фиг. 4). Красящий раствор можно использовать повторно.

Фиг. 1. Окрашивание срезов печени полученным красителем на основе экстракта цветков зверобоя продырявленного. Цитоплазма гепатоцитов и эритроцитов окрашивается в красно-коричневый цвет. Ув.х 40.

Фиг. 2. Окрашивание срезов печени полученным красителем на основе экстракта цветков зверобоя продырявленного. Цитоплазма гепатоцитов и эритроцитов окрашивается в красно-коричневый цвет. Ядра клеток не окрашиваются. Ув.х 900.

Фиг. 3. Окрашивание срезов печени полученным красителем на основе экстракта цветков зверобоя продырявленного. Цитоплазма гепатоцитов и эритроцитов окрашивается в красно-коричневый цвет. Ядра клеток не окрашиваются. Ув.х 400.

Фиг. 4. Окрашивание срезов миокарда полученным красителем на основе экстракта цветков зверобоя продырявленного. Цитоплазма кардиомиоцитов окрашивается в красно-коричневый цвет. дра клеток не окрашиваются. Ув.х 400.