×
25.08.2017
217.015.ab4f

Способ определения угрозы формирования гемической анемии у беременных на третьем триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции, подавляющей активность SH-групп в эритроцитах и приводящей к снижению оксигенации гемоглобина

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
№ охранного документа
0002612010
Дата охранного документа
01.03.2017
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования гемической анемии у беременных, перенесших обострение цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации. Для этого измеряют титр антител к цитомегаловирусу, содержание SH-групп в эритроцитах периферической крови, процентное содержание оксигемоглобина, и при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600, снижении в эритроцитах периферической крови SH-групп до 3,00±0,02 пикселей/ммк и снижении оксигемоглобина до 86,50±1,20% создается угроза формирования у беременных гемической анемии. Способ позволяет оценить угрозу формирования у беременной гемической анемии при простоте его исполнения. 2 ил.
Реферат Свернуть Развернуть

1. Цель изобретения - разработать способ, позволяющий выявить формирование угрозы развития гемической анемии у беременных на третьем триместре гестации в связи со снижением оксигенации гемоглобина при подавлении в эритроцитах активности SH-групп на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции.

2. Изобретение относится к медицине, а именно к разработке способа гистохимическим методом определять в эритроцитах содержание активности SH-групп с целью диагностировать по их снижению угрозу развития гемической анемии.

3. Раскрытие изобретения

В белковой молекуле среди боковых цепей аминокислотных остатков большая роль принадлежит SH-группам. Это объясняется их высокой химической реакционной способностью вступать в разнообразные реакции со многими типами соединений. Огромный интерес привлекает вопрос определения активности SH-групп в эритроцитах, поскольку нарушение их активности приводит к разрушению белково-липидных связей и активизации перекисного окисления, а также нарушению ферментативной активности. Наряду с этим привлекает внимание большое значение SH-групп для специфических функций ряда ферментов, гормонов и других биологически активных белков, способствующих выполнению метаболических процессов в организме [1, 2, 7, 8]. Снижение содержания SH-групп в глобине и геме приводит к нарушению оксигенации гемоглобина, что приводит к угрозе формирования анемии. В настоящее время установлено, что SH-группы играют важную роль во многих физиологических процессах: мышечном сокращении, регуляции проницаемости мембран, окислительном фосфорилировании [3, 4]. Многие реагенты могут оказывать блокирующее влияние на SH-группы [5]. Торможение активности ряда ферментов под влиянием реагентов на SH-группы обусловлено нарушением трехмерной структуры (конформации) этих ферментов. Такое нарушение может происходить либо в результате разрыва внутримолекулярных связей, в образовании которых вовлечены SH-группы, либо в результате деформирующего действия ингибитора, присоединяющегося к SH-группе на соседние участки макромолекулы белка. В роли ингибиторов на белковые молекулы белка клеточных мембран могут выступать антигены многих вирусов, поскольку они, сливаясь с мембраной клеток, в которую они проникают, вызывают нарушение конформации этих белков и подавляют активность SH-групп.

4. Новая техническая задача

Найти способ гистохимического определения SH-групп в эритроцитах, что позволяет определять цитофотометрическим методом их количественное содержание как в норме, так и различных патологических условиях.

5. Об активности SH-групп в эритроцитах биохимическим методом можно было судить только косвенно, так как при разрушении эритроцитов получается субстрат из многих белков. Выявляя наличие SH-групп гистохимическим методом, получается специфическая реакция, измерение которой доступно в каждом эритроците с последующим подсчетом цитофотометрическим методом. По мере снижения активности SH-групп в эритроцитах усиливается процесс нарушения конформации белков гемоглобина и снижения формирования оксигемоглобина.

6. Прототипами для данного изобретения могут служить работы Козловой H.М. [3], Нагиева Э.Р., Газимагомедовой М.М. [4] и Потапова В.Н. (патент РФ №2142135). Все эти исследования выполнены биохимическим методом после разрушения эритроцитов и определения в полученной смеси реакции на SH-группы, что конечно можно отнести к косвенным принципам определения активности SH-групп. В отличие от вышеприведенных прототипов мы прибегли к принципиально иным методам:

1. Содержание SH-групп в мембранах эритроцитов выявляли гистохимической реакцией по Барнетту-Зелигману [9].

2. Эритроциты не разрушались во время выполняемой реакции, что подтверждается микрофотоснимками [фигура 1, 2].

3. После проведенной реакции остается препарат, на котором находятся эритроциты, и их можно фотографировать, а также цитофотометрическим методом определять количество продукта реакции на SH-группы цитофотометрическим методом в каждом отдельно взятом эритроците.

4. Используя эти возможности, предоставляется возможность судить об устойчивости мембран эритроцитов, а также изменении активности SH-групп в эритроцитах как в норме, так и различных патологических условиях.

5. В своем исследовании мы изучали действия цитомегаловируса на активность SH-групп в эритроцитах и отметили, что снижение их активности приводит к уменьшению активности SH-групп эритроцитов и нарушению оксигенации гемоглобина.

7. Осуществление изобретения

7.1. Исследования проводились на базе акушерского отделения ФГБУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» СО РАМН. Обследовано 20 рожениц в возрасте 18-25 лет с хронической цитомегаловирусной инфекцией в стадии обострения (основная группа) и 10 беременных без патологии (контрольная группа). Диагноз устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие IgM или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса авидности (65%), а также наличия ДНК к цитомегаловирусу (ЦМВ). Исследования проводились с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с учетом человека» с поправками 2008 г. и правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными приказом Министерства здравоохранении РФ №266 от 19.06.2003 г.

7.2. Верификация ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекса авидности осуществлялись методами ИФА на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (USA) с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), методами ПЦР на аппарате ДТ-96 (Россия) с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).

7.3. Монослойные мазки периферической крови приготовляли на центрифуге Stat-Sprin М 700-22 (USA).

8. Выявление SH-групп в эритроцитах.

8.1. SH-группы в эритроцитах периферической крови определяли гистохимическим методом [9] путем помещения эритроцитов в инкубационный раствор, взятых у беременных, перенесших обострение цитомегаловирусной инфекции, а также у здоровых, не болевших на всем протяжении гестации.

8.2. Приготовление инкубационного раствора и этапы проведения реакции.

Состав инкубационного раствора состоял из смеси: 1-25 мг дигидрокси-динафтилдисульфида в 15 мл абсолютного спирта и 2-35 мл ОДМ веронал-ацетатного буфера при рН 8,5. От этой смеси отбирают 500 мкл в пробирку и к ней добавляют 200 мкл цельной крови, взятой накануне у пациентов в пробирку с коагулянтом.

Инкубационный раствор с кровью выдерживают в термостате в течение 1 часа при температуре 56°. После инкубации пробирку извлекают из термостата и выдерживают в течение 10 мин при комнатной температуре. Центрифугируют, надосадочную жидкость убирают и осадок промывают в дистиллированной воде, а затем дважды 0,01% растворе уксусной кислоты. Затем дважды промывают осадок по 2 минуты в сменяемом 96° этиловом спирте, вслед за этим содержат 5 минут в эфире, а затем прополаскивают 96° спиртом и вслед за этим дистиллированной водой. В промытый осадок добавляют на 10 мин 1 мл раствора прочного синего (диазония), приготовленного путем растворения прочного синего - 1 мг/мл - в ОДМ фосфатном буфере рН 7,6-7,8. Центрифугируют, надосадочную жидкость убирают и в течение 2 мин промывают водопроводной водой, а потом дистиллированной. Реакция после этого - выполнена. Центрифугируют, прополаскивают дистиллированной водой, отбирают большую часть надосадочной жидкости, остальное взбалтывают, капли взвешенных эритроцитов наносят на предметное стекло и изготовляют монослойный мазок на центрифуге Diff Spin Slide Spinner M 700-722 (USA). Подсушивают и изучают под цифровым микроскопом, связанным с компьютером для изучения полученных данных по цитофотометрической программе «Scion» (USA), позволяющей определять автоматически количество продуктов реакции (в данном случае SH-групп) в каждом эритроците (фигура 1). В расчет брали 100 эритроцитов от каждого случая.

9. Содержание оксигемоглобина у пациентов определяли по методу Эвелина и Мэллой [6].

10. Статистическая обработка проводилась параметрическим критерием Стьюдента.

В процессе исследования установлено, что обострение хронической цитомегаловирусной инфекции до титра антител к цитомегаловирусу 1:1600 на третьем триместре гестации приводит к снижению количества SH-групп в эритроцитах периферической крови у беременной на третьем триместре гестации до 3,0±0,02 пикселей/ммк2 (фигура 1); контроль - 18,00±0,35 пикселей/ммк2 (фигура 2). Это приводит к снижению оксигемоглобина у беременных на третьем триместре гестации до 86,50±1,2%, что создает угрозу формирования у беременной гемической анемии.

Литература

1. Ильин B.C., Титова Г.В. Химические факторы регуляции активности и биосинтеза ферментов. М.: Медицина. 1969. 360 с.

2. Кленова Н.А., Кленов P.O. Механизмы генерации пептидов эритроцитами человека // Вестник Сам ГУ Естеств. серия. 2006. №7(47). С. 75-79.

3. Козлова Н.М., Касько Л.П., Кутько А.Г., Петрович В.А., Сержан Т.А., Слобожанина Е.И. Активность ферментов антиоксидантной защиты и окисление мембранных белков в эритроцитах женщин при некоторых патологиях беременности // Институт биофизики и клеточной инженерии НАЛ Беларуси. 2010. С. 1-10.

4. Нагиев Э.Р., Газимагомедова М.М. Структурно-функциональное состояние мембран эритроцитов при остром отравлении метафосом и введении перфторана // Биомед. химия. 2003. Т. 49. №2. С. 138-144.

5. Потапов В.Н. Способ диагностики преморбидного состояния. Патент RU 2142135. Ин-т медицинской климатологии и восстановительное лечения СО РАМН.

6. Покровский А.А. Биохимические методы исследования. Справочник. М.: Медицина. 1969. 337 с.

7. Торчинский Ю.М. Сульфгидрильные и дисульфидные группы белков. М.: Наука. 1971. 228 с.

8. Baker B.R. Design of active site directed irreversible enzyme inhibitors. N.Y.J. wiley and Sons. 1967. P. 202.

9. Kiszely. Gyakorlati mikrotechnika ES HISZTOKEMIA. Medicina . Budapest. 1958. 399 p.

Способ оценки угрозы формирования гемической анемии у беременных на третьем триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции, включающий измерение титра антител к цитомегаловирусу, содержание SH-групп в эритроцитах периферической крови, процентное содержание оксигемоглобина, и при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600, снижении в эритроцитах периферической крови SH-групп до 3,00±0,02 пикселей/ммк и снижении оксигемоглобина до 86,50±1,20% создается угроза формирования у беременной гемической анемии.
Способ определения угрозы формирования гемической анемии у беременных на третьем триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции, подавляющей активность SH-групп в эритроцитах и приводящей к снижению оксигенации гемоглобина
Способ определения угрозы формирования гемической анемии у беременных на третьем триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции, подавляющей активность SH-групп в эритроцитах и приводящей к снижению оксигенации гемоглобина
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-10 из 105.
10.01.2013
№216.012.1a09

Способ прогнозирования течения беременности, учитывая интенсивность формирования плацентарных гормонов эстриола и прогестерона, изменяющийся в связи с обострением герпес-вирусной инфекции во время гестации

Изобретение относится к области медицины, а именно к прогностическим методам, и может быть использовано для прогнозирования течения беременности при обострении во время гестации герпес-вирусной инфекции. Сущность способа: при обострении в третьем триместре герпес-вирусной инфекции (титр...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002472157
Дата охранного документа: 10.01.2013
20.04.2013
№216.012.37d2

Способ выявления влияния герпес-вирусной инфекции на активность сквалендегидрогеназы на гистологических срезах плаценты при введении в инкубационный раствор содержимого герпесных пузырьков беременной

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для выявления влияния герпес-вирусной инфекции на активность сквалендегидрогеназы у беременных. Сущность способа: на гистологических срезах плаценты при введении в инкубационный раствор содержимого герпесных пузырьков проводят...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002479843
Дата охранного документа: 20.04.2013
20.05.2013
№216.012.4217

Способ диагностики повреждающего действия nk(cd)-лимфоцитов на плаценту беременных, перенесших герпес-вирусную инфекцию, увеличивающего число ядер синцитиотрофобласта в состоянии апоптоза

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения наличия повреждений синцитиотрофобласта плаценты у беременных с герпес-вирусной инфекцией. Для этого в периферической крови беременных определяют количество NK(СD)-лимфоцитов, при...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002482489
Дата охранного документа: 20.05.2013
20.06.2013
№216.012.4dd3

Способ оценки действия герпес-вирусной инфекции на устойчивость мембран эритроцитов новорожденных от матерей, перенесших в третьем триместре беременности обострение герпес-вирусной инфекции

Изобретение относится к области медицины и может найти применение для оценки действия герпес-вирусной инфекции на устойчивость мембран эритроцитов новорожденных от матерей, перенесших в третьем триместре беременности обострение герпес-вирусной инфекции. Сущность способа: в периферической крови...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002485505
Дата охранного документа: 20.06.2013
20.06.2013
№216.012.4de2

Способ определения подавления переноса липидов с помощью липидпереносящих белков h-fabp через фетоплацентарный барьер у беременных, перенесших в третьем триместре гестации герпес-вирусную инфекцию

Изобретение относится к области медицины и применяется для определения подавления переноса липидов через фетоплацентарный барьер у беременных, перенесших в третьем триместре гестации герпес-вирусную инфекцию. Сущность способа: в гомогенате плаценты определяют липидпереносящие белки H-FABP. При...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002485520
Дата охранного документа: 20.06.2013
20.06.2013
№216.012.4de3

Способ оценки влияния герпес-вирусной инфекции беременной на проникновение повышенного количества арахидоновой кислоты в пуповинную кровь новорожденного

Настоящее изобретение относится к области медицины и описывает способ оценки влияния герпес-вирусной инфекции на проникновение арахидоновой кислоты в пуповинную кровь новорожденного от матерей, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции в период гестации, характеризующийся тем, что в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002485521
Дата охранного документа: 20.06.2013
20.07.2013
№216.012.57e8

Способ оценки действия герпес-вирусной инфекции на устойчивость мембран эритроцитов новорожденных от матерей, перенесших в третьем триместре беременности обострение герпес-вирусной инфекции

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу оценки устойчивости мембран эритроцитов новорожденного на фоне обострения у беременной герпес-вирусной инфекции в третьем триместре беременности. Способ осуществляется следующим образом: в периферической крови новорожденного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002488112
Дата охранного документа: 20.07.2013
10.09.2013
№216.012.68cf

Способ прогнозирования внутриутробного инфицирования плода у женщин с гриппом а(h3n2) во втором триместре беременности при анемическом синдроме

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и перинатологии, и касается способа прогнозирования внутриутробного инфицирования плода у женщин с гриппом А(Н3N2) во втором триместре беременности при анемическом синдроме. Сущность изобретения состоит в том, что определяют содержание...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002492478
Дата охранного документа: 10.09.2013
10.09.2013
№216.012.68d9

Способ прогнозирования летального исхода у новорожденных при церебральной ишемии тяжелой степени

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии и неонатологии, и может быть использовано при прогнозировании летального исхода у новорожденных при церебральной ишемии тяжелой степени. Сущность способа: в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата исследуют...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002492488
Дата охранного документа: 10.09.2013
10.09.2013
№216.012.68da

Способ доклинической диагностики степени тяжести респираторного дистресс-синдрома при внутриутробном гриппе a(н3n2) у недоношенных новорожденных

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии и неонатологии, и может быть использовано для доклинической диагностики респираторного дистресс-синдрома различной степени тяжести у недоношенных новорожденных при внутриутробном гриппе A(H3N2). Сущность способа: исследуют концентрацию...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002492489
Дата охранного документа: 10.09.2013
Показаны записи 1-10 из 81.
27.08.2014
№216.012.ee55

Способ определения глутатиона в эритроцитах периферической крови

Изобретение относится к области медицины, а именно к методам медицинской диагностики, и может быть использовано в лабораторно-диагностической практике для определения глутатиона в эритроцитах периферической крови как в норме, так и при патологических состояниях организма, в том числе анемии....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002526832
Дата охранного документа: 27.08.2014
10.11.2014
№216.013.03e1

Способ оценки угрозы самопроизвольного выкидыша при обострении цитомегаловирусной инфекции на ранних этапах гестации, приводящей к снижению содержания прогестерона в периферической крови

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы гибели эмбриона при обострении цитомегаловирусной инфекции на ранних этапах гестации. Для этого при обострении цитомегаловирусной инфекции у беременной в периферической крови определяют титр...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002532391
Дата охранного документа: 10.11.2014
20.11.2014
№216.013.072c

Способ определения гистидина в эритроцитах периферической крови, позволяющий определять степень оксигенации гемоглобина

Изобретение касается способа выявления гистидина в эритроцитах периферической крови. Способ осуществляют путем приготовления инкубационного раствора №1, состоящего из раствора 500 мг сульфаниловой кислоты в 50 мл 1 М HCl, и раствора №2, состоящего из 125 мг NaNO в 2,5 мл дистиллированной воды....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002533237
Дата охранного документа: 20.11.2014
10.12.2014
№216.013.0e2e

Способ оценки формирования гипоксии в третьем триместре гестации при снижении уровня рн и оксигемоглобина, вызванных обострением цитомегаловирусной инфекции

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для оценки угрозы формирования гипоксии в третьем триместре гестации. Способ включает: определение в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу, уровня рН крови и содержания оксигемоглобина на биохимическом...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002535047
Дата охранного документа: 10.12.2014
10.12.2014
№216.013.0e36

Способ оценки нарушения оксигенации гемоглобина в эритроцитах периферической крови беременных на третьем триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции

Изобретение относится к области медицины, в частности к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования гипоксии у беременных с обострением цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Сущность способа: определяют титр антител к цитомегаловирусу,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002535055
Дата охранного документа: 10.12.2014
20.12.2014
№216.013.12cc

Способ оценки индуцирующего действия обострения цитомегаловирусной инфекции у беременной на третьем триместре гестации на содержание метгемоглобина и оксигенацию гемоглобина в периферической крови новорожденного

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на содержание метгемоглобина и оксигемоглобина в эритроцитах новорожденного. Для этого в периферической крови новорожденного при обострении у...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002536235
Дата охранного документа: 20.12.2014
27.12.2014
№216.013.163f

Способ оценки нарушения микровязкости мембран эритроцитов периферической крови беременных на третьем триместре гестации, при обострении цитомегаловирусной инфекции

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для оценки устойчивости мембран эритроцитов периферической крови у беременных с цитомегаловирусной инфекцией на третьем триместре гестации. Способ характеризуется тем, что определяют титр антител к цитомегаловирусу, коэффициент...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002537119
Дата охранного документа: 27.12.2014
27.12.2014
№216.013.167c

Способ оценки ингибирующего действия цитомегаловирусной инфекции на активность карбоангидразы в эритроцитах периферической крови беременных

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования гемической гипоксии у беременных при обострении цитомегаловирусной инфекции. Для этого при обострении у беременной цитомегаловирусной инфекции в периферической крови измеряют титр...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002537180
Дата охранного документа: 27.12.2014
10.02.2015
№216.013.230c

Способ оценки нарушения оксигенации гемоглобина при снижении микровязкости мембран эритроцитов периферической крови беременных на третьем триместре гестации и обострении цитомегаловирусной инфекции

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для оценки угрозы формирования гипоксии у беременных с обострением цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Сущность способа: в периферической крови определяют титр антител к цитомегаловирусу, микровязкость...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002540425
Дата охранного документа: 10.02.2015
10.02.2015
№216.013.25fb

Способ оценки угрозы гибели эмбриона при обострении цитомегаловирусной инфекции на ранних этапах гестации, приводящей к снижению содержания кортизола в периферической крови

Изобретение относится к области медицины, а именно к проблеме создания новых способов диагностики угрозы гибели эмбриона при цитомегаловирусной инфекции. Выполняют измерение у беременной в момент обострения заболевания в периферической крови титра антител IgG к цитомегаловирусу и уровня...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002541176
Дата охранного документа: 10.02.2015
+ добавить свой РИД