Результат интеллектуальной деятельности: СРЕДСТВО ДЛЯ СНИЖЕНИЯ МУТАГЕННОГО ДЕЙСТВИЯ АЦЕТАТА СВИНЦА В ОРГАНИЗМЕ

Изобретение относится к области медицины, экологии, токсикологии, экспериментальной биологии и может быть использовано для защиты генома живых организмов от тяжелых металлов, в частности - мутагенной активности свинца и в качестве профилактического средства при наличии свинца в окружающей среде.

Известен способ профилактики и выведения свинца из организма путем добавления в рацион животных пробиотика - молочнокислой кормовой добавки (патент №2306700 от 20.12.2006, МПК A01K 67/02).

В известном способе добавление в рацион пробиотика повышает затраты на осуществление способа. Кроме того, пробиотик дают животным, уже содержащим в организме свинец.

Наиболее близким техническим решением является документ (RU 2381809 C2 от 20.02.2010 г, МПК A61K 36/48, A61K 36/254, A61K 36/484, A61K 36/41, A61P 43/00), в котором раскрыт способ антимутагенной защиты при попадании свинца в организм путем приема 70% спиртового раствора растений элеутерококка, солодки голой, радиолы розовой и 8-10% спиртового раствора зеленой массы клевера лугового.

В способе-прототипе не все используемые растения имеют широкое распространение, что усложняет техническое решение.

Технический результат - расширение использования средств растительного происхождения в качестве профилактического антимутагенного средства при попадании свинца в организм живых существ

Техническое решение достигается тем, что готовят настой из листьев, отвар из стеблей, отвар из корней амброзии полыннолистной. Сухое сырье для приготовления настоя и отваров используется в количестве 0,7 г на 100 мл воды. Минимальная дозировка 0,14 мл на 100 г питательной среды, максимальная - 0,28 мл на 100 г питательной среды.

Время воздействия настойки 7 суток (для млекопитающих - 0,14-0,28 мл на 100 г веса животного, однократно в течение 7 суток). Настойку цветочных кистей готовят в соотношении: 1 часть растертых цветочных кистей амброзии полыннолистной и 5 частей 40% спирта. Применяется минимальная дозировка 0,004 мл настоя на 100 г питательной среды и максимальная 0,008 мл настоя на 100 г питательной среды. Длительность применения 7 суток (для млекопитающих 0,004-0,008 мл настоя на 100 г веса, однократно в течение 7 суток).

Способ осуществляется следующим образом.

1. Настой из листьев амброзии полыннолистной:

0,7 г сухих листьев (собраны до цветения, высушены в тени, в проветриваемом помещении) заливается 100 мл кипятка, варится на водяной бане 15 минут, затем оставляется для медленного остывания. Фильтруется, отжимается. Полученный настой доводится дистиллированной водой до первоначального объема. Используется в минимальной дозировке 0,14 мл настоя на 100 г питательной среды и максимальной - 0,28 мл настоя на 100 г питательной среды. Время воздействия для каждой дозировки 7 суток.

2. Отвар из стеблей амброзии полыннолистной:

0,7 г сухих измельченных стеблей амброзии полыннолистной (собраны до цветения, высушены в тени, в проветриваемом помещении) заливается 100 мл кипятка, варится на водяной бане 30 минут, затем настаивается 1 час в термосе. Оставляется для медленного остывания. Фильтруется, отжимается. Полученный отвар доводится до первоначального объема дистиллированной водой. Используется в минимальной дозировке 0,14 мл на 100 г питательной среды и максимальной - 0,28 мл отвара на 100 г питательной среды. Время воздействия для каждой из дозировок 7 суток.

3. Отвар из корней амброзии полыннолистной:

0,7 г сухих измельченных корней амброзии полыннолистной (собраны до цветения, высушены в тени, в проветриваемом помещении) заливается 100 мл кипятка, варится на водяной бане 30 минут, затем настаивается 1 час в термосе. Оставляется для медленного остывания. Фильтруется, отжимается. Полученный отвар доводится до первоначального объема дистиллированной водой. Используется в минимальной дозировке 0,14 мл на 100 г питательной среды и максимальной - 0,28 мл отвара на 100 г питательной среды. Время воздействия для каждой из дозировок 7 суток.

4. Настойка цветочных кистей амброзии полыннолистной:

свежие цветочные кисти собранные в стадии бутонизации до пыления, растираются в ступке, заливаются 40% спиртом в соотношении 1:5 (одна часть растертых цветочных кистей и 5 частей спирта). Настаивается в темном месте при температуре 18-29°C в течение 10 дней, затем фильтруется. Используется настойка в минимальной дозировке 0,004 мл на 100 г питательной среды и в максимальной - 0,008 мл настойки на 100 г питательной среды. Время воздействия для каждой из дозировок 7 суток.

Полученные настой, отвар и настойка содержат комплекс биологически активных веществ амброзии полыннолистной, которые проявляют высокий антимутагенный эффект, снижая мутагенное действие ацетата свинца (Pb(СН₃СОО)₂) в организме животных и человека.

Заявляемое изобретение позволяет без дополнительного сырья, пищевых добавок получить извлечения функционального назначения с высокими лечебно-профилактическими свойствами, которые могут быть использованы для восстановления и защиты генома организмов при загрязнении тяжелыми металлами на примере ацетата свинца.

Достоинством является то, что извлечения приготовлены из доступного растительного сырья, без консервантов.

Показателем антимутагенной активности исследуемых извлечений является учет выхода доминантно-летальных мутаций Dr. melanagaster.

Нами использована методика учета доминантных летальных мутаций (ДЛМ) П.Я. Шварцмана. Фиксировались ранние эмбриональные летали (РЭЛ), проявляющиеся визуально в форме яиц желтовато-белого цвета с непрозрачными уплотнениями, поздние эмбриональные летали (ПЭЛ), представленные желтыми, палевыми и коричневыми яйцами.

В эксперименте использована низкомутабельная линия Drosophila melanogaster Д-32. Для каждого варианта эксперимента обработке подвергались 50 самцов, которые скрещивались с 50 самками.

Результаты исследований представлены в таблице 1. Анализ материалов показал положительный эффект воздействия настоя цветочных кистей амброзии полыннолистной в минимальной концентрации 0,004 мл. Коэффициент плодовитости возрастает до 1,13 (вариант №3) по сравнению с негативным контролем (1). Отмечается самый максимальный коэффициент защиты 85,53%, а процент леталей самый низкий - 0,11% (негативный контроль 0,76%).

Позитивные результаты показали и другие части растения. Так, отвар стеблей в двух концентрациях 0,14 и 0,28 мл также снижает процент леталей в 3 раза (0,24%) (негативный контроль - 0,76%). Коэффициент плодовитости немного превышает контроль - 1,05. Коэффициент зашиты составил 68,42%.

Отвар корней амброзии показал антимутагенную защиту генома в пределах 19,74 - 25% (варианты 9,12)

При изучении модифицирующего эффекта ацетата свинца и амброзии полыннолистной наблюдается положительное воздействие извлечений из различных частей растения на различные показатели: процент леталей, коэффициент плодовитости, коэффициент защиты. Максимальный коэффициент защиты от воздействия Pb(II) наблюдается в предобработке настоем цветочных кистей 0,008 мл+Pb·10^-5M - 86,92%; отвар стеблей 0,28 мл+Pb·10^-5M - 84,23%; коэффициент плодовитости в этом эксперименте самый высокий - 1,78. Отвар корней показал вариацию коэффициента защиты от 20,38% в постобработке настоем 0,14 мл до 67,69% в предобработке при той же дозировке. В дозировке 0,28 мл на 100 г питательной среды наивысший коэффициент защиты генома в вариантах предобработки настоем. Положительное воздействие отмечается в экспериментах пред- и постобработки настоем листьев. Коэффициент плодовитости составил 1,29 в эксперименте Pb·10^-5M+лист 0,14 мл, коэффициент защиты 78,46, а в концентрации 0,28 мл он возрастает до 82,31%. Коэффициент плодовитости - 1,58. Эти данные свидетельствует о том, что наиболее активное действие амброзия полыннолистная оказывает в предобработке, снижая процент леталей. Возможно благодаря содержанию преобладающих компонентов в период бутонизации - куманина и пирувина. Амброзия полыннолистная содержит полифенольные соединения, представленные фенолкарбоновыми кислотами (феруловая, изоферуловая, кофейная, хлорогеновая, гликозид кофейной кислоты), кумаринами (скополетин, скополин, эскулетин, эскулин, умбеллиферон, изорамнетин, скиммин) и флавоноидами (яцеидин, кверцетин, изорамнетин, изорамнетина-3-рутинозид, кверцимеритрин, изокверцитрин, гликозиды ксантомикрола и 4,5-дигидрокси-3,6,7,8-тетраметоксифлавона).

Биологически активные вещества, содержащиеся в амброзии полыннолистной, обладают антимутагенной активностью, снижая мутагенную активность ацетата свинца.

Пример

1. Настой из листьев амброзии полыннолистной:

0,7 г сухих листьев (собрать до цветения, высушить в тени, в проветриваемом помещении) залить 100 мл кипятка, варить на водяной бане 15 минут, затем оставить для медленного остывания. Отфильтровать и отжать. Полученный настой довести дистиллированной водой до первоначального объема. Использовать в дозировке - 0,28 мл настоя на 100 г питательной среды в течение 7 суток.

2. Отвар из стеблей амброзии полыннолистной:

0,7 г сухих измельченных стеблей амброзии полыннолистной (собрать до цветения, высушить в тени, в проветриваемом помещении) залить 100 мл кипятка, варить на водяной бане 30 минут, затем настоять 1 час в термосе. Оставить для медленного остывания. Отфильтровать и отжать. Полученный отвар довести до первоначального объема дистиллированной водой. Использовать в дозе - 0,28 мл отвара на 100 г питательной среды в течение 7 суток.

3. Отвар из корней амброзии полыннолистной:

0,7 г сухих измельченных корней амброзии полыннолистной (собрать до цветения, высушить в тени, в проветриваемом помещении) залить 100 мл кипятка, варить на водяной бане 30 минут, затем настоять 1 час в термосе. Оставить для медленного остывания. Отфильтровать и отжать. Полученный отвар довести до первоначального объема дистиллированной водой. Использовать в дозировке 0,14 мл на 100 г питательной среды, в течение 7 суток.

4. Настойка цветочных кистей амброзии полыннолистной:

свежие цветочные кисти, собранные в стадии бутонизации до пыления, растереть в ступке, залить 40% спиртом в соотношении 1:5 (одна часть растертых цветочных кистей и 5 частей спирта). Настоять в темном месте при температуре 18-29°C в течение 10 дней, затем отфильтровать. Использовать настойку в дозировке 0,004 мл на 100 г питательной среды, в течение 7 суток.

Полученные настой, отвар и настойка содержат комплекс биологически активных веществ амброзии полыннолистной, которые проявляют высокий антимутагенный эффект и могут служить антимутагенным средством защиты генома для живых организмов от мутагенного воздействия.