ПРОИЗВОДНЫЕ (4-МЕТИЛСУЛЬФОНИЛАМИНОФЕНИЛ)-ХИНОЛИНА, ПОЛЕЗНЫЕ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ГЕПАТИТА С

Настоящее изобретение относится к ненуклеозидным соединениям, которые ингибируют РНК-зависимую РНК-полимеразу вируса HCV. Эти соединения полезны для лечения РНК-зависимой РНК-содержащей вирусной инфекции. Они особенно полезны в качестве ингибиторов полимеразы вируса гепатита С (HCV) NS5B, в качестве ингибиторов репликации HCV и для лечения инфекции вирусом гепатита С.

Вирус гепатита С является лидирующей в мире причиной хронического заболевания печени (Boyer, N. et al., J. Hepatol. 2000 32:98-112). Пациенты, инфицированные HCV, имеют риск развития цирроза печени и впоследствии гепатоцеллюлярной карциномы, и, следовательно, HCV является основным показанием для трансплантации печени.

HCV классифицируется как член семейства вирусов Flaviviridae, в которое входит род флавивирусов, пестивирусов и гепацивирусов, включающий вирусы гепатита С (Rice, С.М., Flaviviridae: The viruses and their replication. In: Fields Virology, Editors: B.N. Fields, D.М. Knipe and P.М. Howley, Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, Pa., Chapter 30, 931-959, 1996). HCV представляет собой оболочечный вирус, содержащий геном, представленный положительно-полярной однонитевой РНК приблизительно 9,4 т.п.н. Этот вирусный геном состоит из высококонсервативной нетранслируемой области (UTR) на 5′-конце, длинной открытой рамки считывания, кодирующей полипротеиновый предшественник из приблизительно 3011 аминокислот, и короткой UTR на 3′-конце.

В результате генетического анализа HCV было идентифицировано шесть основных генотипов, ДНК-последовательность которых различается более чем на 30%. Выявлено более 30 подтипов. В США приблизительно 70% инфицированных индивидуумов имеют инфекцию Типа 1а и 1b. Тип 1b является самым распространенным подтипом в Азии (X. Forns and J. Bukh, Clinics in Liver Disease 1999 3:693-716; J. Bukh et al., Semin. Liv. Dis. 1995 15:41-63). К сожалению, инфекция Типа 1 более устойчива к терапии, чем любой из генотипов типа 2 или 3 (N.N. Zein, Clin. Microbiol. Rev., 2000 13:223-235).

Вирусные структурные белки включают нуклеокапсидный коровый белок (С) и два оболочечных гликопротеина, Е1 и Е2. HCV также кодирует две протеазы, цинк-зависимую металлопротеиназу, кодируемую областью NS2-NS3, и сериновую протеазу, кодируемую областью NS3. Эти протеазы необходимы для расщепления конкретных участков полипротеина-предшественника на зрелые пептиды. Карбоксильная часть неструктурного белка 5, NS5B, содержит РНК-зависимую РНК-полимеразу. Функция остальных неструктурных белков, NS4A и NS4B, и функция NS5A (амино-концевая часть неструктурного белка 5) остаются неизвестными. Полагают, что большинство неструктурных белков, кодируемых РНК-геномом HCV, участвуют в репликации РНК.

В настоящее время для лечения HCV-инфекции имеется ограниченное количество терапевтических средств. Новые и уже существующие терапевтические подходы к лечению HCV-инфекции и ингибированию активности полимеразы HCV NS5B рассмотрены в R.G. Gish, Sem. Liver. Dis., 1999 19:5; Di Besceglie, A.M. and Bacon, B.R., Scientific American, October: 1999 80-85; G. Lake-Bakaar, Current and Future Therapy for Chronic Hepatitis С Virus Liver Disease, Curr. Drug Targ. Infect Dis. 2003 3(3):247-253; P. Hoffmann et al., Recent patent on experimental therapy for hepatitis С virus infection (1999-2002), Exp. Opin. Ther. Patents 2003 13(11):1707-1723; M.P. Walker et al., Promising Candidates for the treatment of hepatitis С virus, Exp. Opin. Investing. Drugs 2003 12(8): 1269-1280; S.-L. Tan et al., Hepatitis С Therapeutics: Current Status and Emerging Strategies, Nature Rev. Drug Discov. 2002 1:867-881; J.Z. Wu and Z. Hong, Targeting NS5B RNA-Dependent RNA Polymerase for Anti-HCV Chemotherapy, Curr. Drug Targ. - Infect. Dis. 2003 3(3):207-219.

Рибавирин (амид 1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-дигидрокси-5-гидроксиметил-тетрагидрофуран-2-ил)-1Н-[1,2,4]триазол-3-карбоновой кислоты; Virazole®) представляет собой синтетический, не-интерферон-индуцирующий противовирусный нуклеозидный аналог широкого спектра действия. Рибавирин обладает активностью in vitro против нескольких ДНК и РНК вирусов, включая Flaviviridae (Gary L. Davis. Gastroenterology 2000 118:S104-S114). Хотя при монотерапии рибавирин снижает уровни аминотрансферазы в сыворотке крови до нормального уровня у 40% пациентов, он не снижает уровни HCV-PHK в сыворотке крови. Рибавирин также проявляет значительную токсичность, и известно, что он вызывает анемию. Вирамидин является пролекарством рибавирина, которое превращается в рибавирин под действием аденозиндеаминазы в гепатоцитах (J.Z. Wu, Antivir. Chem. Chemother. 2006 17(1):33-9)

Интерфероны (IFN) доступны для лечения хронического гепатита в течение почти десяти лет. IFN являются гликопротеинами, которые продуцируются иммунными клетками в ответ на вирусную инфекцию. Известны два разных типа интерферона: тип 1 включает несколько интерферонов альфа и один интерферон бета; тип 2 включает интерферон гамма. Интерфероны типа 1 продуцируются в основном инфицированными клетками и защищают соседние клетки от de novo инфицирования. IFN ингибирует вирусную репликацию многих вирусов, включая HCV, и при использовании в качестве единственного средства для лечения гепатита С IFN снижает уровни HCV-PHK в сыворотке крови до недетектируемых уровней. Дополнительно, IFN нормализует уровни аминотрансферазы в сыворотке крови. К сожалению, эффекты IFN являются временными. Прекращение терапии приводит к 70% частоте рецидивов, и только в 10-15% случаев наблюдается продолжительный вирусологический ответ с нормальными уровнями аланинтрансферазы в сыворотке крови (Davis, Luke-Bakaar, см. выше).

Одним из ограничений ранней IFN-терапии был быстрый клиренс белка из крови. Химическая дериватизация IFN полиэтиленгликолем (PEG) дала в результате белки с существенно улучшенными фармакокинетическими свойствами. PEGASYS® представляет собой конъюгат интерферона α-2а и разветвленного моно-метокси-PEG с молекулярной массой 40 кДа, и PEG-INTRON® представляет собой конъюгат интерферона α-2b и моно-метокси-PEG с молекулярной массой 12 кДа (В.A. Luxon et al., Clin. Therap.2002 24(9): 13631383; A. Kozlowski and J.M. Harris, J. Control. Release 2001 72:217-224).

Комбинированная терапия HCV рибавирином и интерфероном-α в настоящее время является оптимальной терапией для HCV. Комбинирование рибавирина и PEG-IFN (см. ниже) приводит к продолжительному вирусологическому ответу (SVR) у 54-56% пациентов с типом 1 HCV. SVR достигает 80% для типа 2 и 3 HCV (Walker, см. выше). К сожалению, комбинированная терапия также вызывает побочные эффекты, создающие клинические проблемы. Депрессия, симптомы, подобные симптомам гриппа, и кожные реакции связаны с подкожным IFN-α, и гемолитическая анемия связана с длительным лечением рибавирином.

В настоящее время идентифицировано несколько потенциальных молекулярных мишеней для разработки лекарственных средств в качестве анти-HCV терапевтических средств, включая, но не ограничивая ими, аутопротеазу NS2-NS3, протеазу NS3, геликазу NS3 и полимеразу NS5B. РНК-зависимая РНК-полимераза несомненно важна для репликации генома, представленного однонитевой положительно-полярной РНК. Этот фермент вызывает большой интерес у медицинских химиков.

Соединения по настоящему изобретению и их фармацевтически приемлемые соли также полезны в лечении и предупреждении вирусных инфекций, в частности инфекции вирусом гепатита С, и заболеваний у живых носителей вируса, когда их используют в комбинации друг с другом и с другими биологически активными агентами, включая, без ограничения, группу, состоящую из интерферона, пэгилированного интерферона, рибавирина, ингибиторов протеаз, ингибиторов полимераз, небольших интерферирующих РНК соединений, антисмысловых соединений, нуклеотидных аналогов, нуклеозидных аналогов, иммуноглобулинов, иммуномодуляторов, гепатопротективных агентов, противовоспалительных агентов, антибиотиков, противовирусных и противоинфекционных соединений. Такая комбинированная терапия может также предусматривать введение соединения по изобретению либо одновременно, либо последовательно с другими медицинскими агентами или потенцирующими средствами, такими как рибавирин и родственные соединения, амантадин и родственные соединения, различные интерфероны, такие как, например, интерферон-альфа, интерферон-бета, интерферон-гамма и т.п., а также альтернативные формы интерферонов, такие как пэгилированные интерфероны. Кроме того, комбинации рибавирина и интерферона можно вводить как дополнительную комбинированную терапию с по меньшей мере одним из соединений по настоящему изобретению.

Другие интерфероны, которые в настоящее время находятся в разработке, включают албинтерферон-α-2b (Albuferon), IFN-омега с DUROS, LOCTERON™ и интерферон-α-2b XL. По мере выхода на рынок этих и других интерферонов, ожидается их применение в комбинированной терапии с соединениями по настоящему изобретению.

Ингибиторы полимеразы HCV являются еще одной целью поиска лекарственных средств, и соединения, находящиеся в разработке, включают R-1626, R-7128, IDX184/IDX102, PF-868554 (Pfizer), VCH-759 (ViroChem), GS-9190 (Gilead), A-837093 и A-848837 (Abbot), MK-3281 (Merck), GSK949614 и GSK625433 (Glaxo), ANA598 (Anadys), VBY 708 (ViroBay).

Ингибиторы протеазы HCV NS3 также были идентифицированы как потенциально полезные для лечения HCV-инфекции. Ингибиторы протеазы, проходящие клинические испытания, включают VX-950 (Telaprevir, Vertex), SCH503034 (Broceprevir, Schering), TMC435350 (Tibotec/Medivir) и ITMN-191 (Intermune). Другие ингибиторы протеазы, находящиеся на ранних стадиях разработки, включают МК7009 (Merck), BMS-790052 (Bristol Myers Squibb), VBY-376 (Virobay), IDXSCA/IDXSCB (Idenix), BI12202 (Boehringer), VX-500 (Vertex), PHX1766 Phenomix).

Другие агенты для анти-НСV-терапии, находящиеся на стадии исследований, включают циклофилиновые ингибиторы, которые ингибируют связывание РНК с NS5b, нитразоксанид, целгосивир (Migenix), ингибитор α-глюкозидазы-1, ингибиторы каспазы, агонисты Toll-подобных рецепторов и иммуностимуляторы, такие как задаксин (SciClone).

В настоящее время не существует превентивного лечения инфекции вирусом гепатита С (HCV), и одобренные в настоящее время терапии, которые направлены только против HCV, ограничены. Разработка и создание новых фармацевтических соединений жизненно необходима.

Фраза, в которой объект указан в единственном числе, в данном описании относится к одному или более этим объектам. Например, ″соединение″ относится к одному или более соединениям или к по меньшей мере одному соединению. Как таковые, термин в единственном числе, термин ″один или более″ и термин ″по меньшей мере один″ могут быть использованы в данном описании взаимозаменяемым образом.

Фраза ″как определено в данном описании выше″ относится к самому широкому определению для каждой группы, которое приведено в разделе описания ″Сущность изобретения″ или в самом широком пункте формулы изобретения. Во всех других воплощениях, приведенных ниже, заместители, которые могут присутствовать в каждом воплощении и которые однозначно не определены, остаются самыми широкими определениями, приведенными в разделе ″Сущность изобретения″.

Используемые в данном описании в переходной фразе или в главной части пункта формулы изобретения термины ″содержат(ит)″ и ″содержащий″ следует толковать как имеющие неограниченное значение. То есть эти термины следует понимать как синонимы фразам ″имеющий по меньшей мере″ или ″включающий по меньшей мере″. Используемый в контексте способа термин ″включающий″ означает, что способ включает по меньшей мере перечисленные стадии, но может включать дополнительные стадии. Используемый в отношении соединения или композиции термин ″содержащий″ означает, что соединение или композиция имеет по меньшей мере перечисленные признаки или компоненты, но может также иметь дополнительные признаки или компоненты.

Используемый в данном описании термин ″независимо″ указывает на то, что переменная применяется в любом одном случае независимо от присутствия или отсутствия переменной, имеющей такое же или другое определение, в одном и том же соединении. Так, в соединении, в котором радикал R″ встречается дважды и определен как ″независимо углерод или азот″, оба R″ могут представлять собой углерод, оба R″ могут представлять собой азот, или один R″ может представлять собой углерод, а другой R″ может представлять собой азот.

Когда любая переменная (например, R¹, R^4a, Ar, X¹ или Het) встречается более чем один раз в любой группировке или формуле, изображающей и описывающей соединения, используемые или заявленные в настоящем изобретении, ее определение при каждом появлении не зависит от определения в каждом другом случае. Комбинации заместителей и/или переменных также допустимы, только если такие соединения в результате являются стабильными соединениями.

Каждый символ ″*″ на конце связи или символ ″″ перечеркивающий связь, относится к точке присоединения функциональной группы или другой химической группировки к остатку молекулы, часть которой она составляет. Так, например:

MeC(=O)OR⁴, где или .

Связь, направленная в кольцевую систему (в отличие от связи, соединенной с конкретной вершиной), указывает на то, что связь может быть присоединена к любому подходящему кольцевому атому.

Используемый здесь термин ″возможный″ или ″возможно″ означает, что описанное далее событие или обстоятельство может, но не обязательно, иметь место, и что описание охватывает случаи, когда событие или обстоятельство имеет место, и случаи, когда такого события или обстоятельства нет. Например, ″возможно замещенный″ означает, что возможно замещенная группировка может содержать водород или заместитель.

Используемый здесь термин ″примерно″ означает приблизительно, порядка, ориентировочно или около. Используемый в сочетании с числовым диапазоном термин ″примерно″ варьирует этот диапазон, расширяя границы выше и ниже указанных числовых значений. Обычно термин ″примерно″ используется в данном описании для варьирования числового значения выше и ниже указанного значения с коэффициентом вариации 20%.

Указание в данном описании числового диапазона для переменной предназначено для того, чтобы показать, что изобретение можно осуществлять на практике с переменной, равной любому из значений в пределах этого диапазона. Так, в случае переменной, которая по сути дискретна, эта переменная может быть равна любому целому числу числового диапазона, включая конечные точки этого диапазона. Аналогично, в случае переменной, которая по сути является непрерывной, эта переменная может быть равна любому реальному значению числового диапазона, включая конечные точки этого диапазона. В качестве примера, переменная, которая описана как имеющая значения от 0 до 2, может быть равна 0, 1 или 2 для переменных, которые по сути дискретны, и может быть равна 0,0; 0,1; 0,01; 0,001 или любому другому реальному значению для переменных, которые по сути являются непрерывными.

Соединения настоящего изобретения проявляют таутомерию. Таутомерные соединения могут существовать в виде двух или более способных к взаимному превращению веществ. Прототропные таутомеры образуются в результате миграции ковалентно связанного атома водорода между двумя атомами. Таутомеры обычно существуют в равновесии, и попытки выделить индивидуальные таутомеры обычно дают смесь, химические и физические свойства которой согласуются с соединениями смеси. Положение равновесия зависит от химических характеристик в молекуле. Например, во многих алифатических альдегидах и кетонах, таких как ацетальдегид, кетонная форма преобладает, тогда как в фенолах преобладает енольная форма. Самые распространенные прототропные таутомеры включают кето/енольные таутомеры , амид/имидные таутомеры и амидиновые таутомеры . Последние два особенно часто встречаются в гетероарильных и гетероциклических кольцах, и настоящее изобретение охватывает все таутомерные формы соединений.

Соединения настоящего изобретения могут содержать кислотный или основной центр, и подходящие соли образуются с кислотами или основаниями, которые могут образовывать нетоксичные соли, обладающие сходной противовирусной активностью. Примеры солей неорганических кислот включают соли гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, хлорид, бромид, йодид, сульфат, бисульфат, нитрат, фосфат, гидрофосфат. Примеры солей органических кислот включают ацетат, фумарат, памоат, аспартат, безилат, карбонат, бикарбонат, камзилат, D и L-лактат, D и L-тартрат, эзилат, мезилат, малонат, оротат, глуцептат, метилсульфат, стеарат, глюкурунат, 2-напсилат, тозилат, гибензат, никотинат, изетионат, малат, малеат, цитрат, глюконат, сукцинат, сахарат, бензоат, эзилат и памоат (см. обзор по подходящим солям в Berge et al, J. Pharm. Sci., 1977 66:1-19 и G.S. Paulekuhn et al. J. Med. Chem. 2007 50:6665).

Технические и научные термины, использованные в данном описании, имеют значение, обычно понятное специалистом в области, к которой относится настоящее изобретение, если не дано иное определение. В данном описании дается ссылка на различные методологии и вещества, известные специалистам в данной области. Стандартные источники информации, в которых изложены общие принципы фармакологии, включают Goodman and Gilman′s The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th Ed., McGraw Hill Companies Inc., New York (2001). Исходные вещества и реагенты, использованные для получения этих соединений, обычно либо доступны от коммерческих поставщиков, таких как Aldrich Chemical Co., либо получены способами, известными специалистам в данной области, по методикам, изложенным в источниках информации. Вещества, реагенты и т.п., упомянутые в нижеследующем описании и в примерах, доступны из коммерческих источников, если не указано иное. Общие методики синтеза описаны в научной литературе, например в Fieser and Fieser′s Reagents for Organic Synthesis; Wiley & Sons: New York, Volumes 1-21; R.C. LaRock, Comprehensive Organic Transformations, 2nd edition Wiley-VCH, New York 1999; Comprehensive Organic Synthesis, B. Trost and I. Fleming (Eds.) vol.1-9 Pergamon, Oxford, 1991; Comprehensive Heterocyclic Chemistry, A.R. Katritzky and C.W. Rees (Eds) Pergamon, Oxford 1984, vol.1-9; Comprehensive Heterocyclic Chemistry II, A.R. Katritzky and C.W. Rees (Eds) Pergamon, Oxford 1996, vol.1-11; и Organic Reactions, Wiley & Sons: New York, 1991, Volumes 1-40, и они известны специалистам в данной области.

В другом воплощении настоящего изобретения предложена композиция, содержащая соединение формулы I, где R¹, R², R³, R⁴ R^4a, R^4b, R^4c, R⁵, R^a, R^b, R^c, R^d, R^e, R^f, R^g и n такие, как определено в данном описании выше, с по меньшей мере одним фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом.

Используемый здесь термин ″алкил″, без какого-либо дополнительного ограничения, один или в комбинации с другими группами, означает насыщенный одновалентный углеводородный остаток, имеющий неразветвленную или разветвленную цепь, содержащий от 1 до 10 атомов углерода. В данном описании ″C_1-6 алкил″ относится к алкилу, содержащему от 1 до 6 атомов углерода. Примеры алкильных групп включают, но не ограничены ими, низшие алкильные группы, метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, неопентил, гексил и октил. Любая связь углерод-водород может быть заменена связью углерод-дейтерий с отступлением от объема изобретения.

Определения, приведенные здесь, применимы к формулировкам химически релевантных комбинаций, таких как ″гетероалкиларил″, ″галогеноалкилгетероарил″, ″арилалкилгетероциклил″, ″алкилкарбонил″, ″алкоксиалкил″ и т.п. Если термин ″алкил″ использован в качестве суффикса после другого термина, как в ″фенилалкиле″ или ″гидроксиалкиле″, то это означает, что алкильная группа, как она определена выше, замещена одним или двумя заместителями, выбранными из другой конкретно указанной группы. Так, например, ″фенилалкил″ относится к алкильной группе, имеющей от одного до двух фенильных заместителей, и поэтому включает бензил, фенилэтил и бифенил. ″Алкиламиноалкил″ представляет собой алкильную группу, имеющую от одного до двух заместителей, представляющих собой алкиламино. ″Гидроксиалкил″ включает 2-гидроксиэтил, 2-гидроксипропил, 1-(гидроксиметил)-2-метилпропил, 2-гидроксибутил, 2,3-дигидроксибутил, 2-(гидроксиметил), 3-гидроксипропил и т.д. Соответственно, используемый здесь термин ″гидроксиалкил″ использован для определения подгруппы гетероалкильных групп, которые определены ниже. Термин (ар)алкил относится либо к незамещенному алкилу, либо к аралкильной группе. Термин (гетеро)арил или (гетеро)арил относится либо к арильной, либо к гетероарильной группе.

Используемый здесь термин ″алкилен″ означает двухвалентный насыщенный линейный углеводородный радикал из 1-10 атомов углерода (например, (СН₂)_n) или разветвленный насыщенный двухвалентный углеводородный радикал из 2-10 атомов углерода (например, -СНМе- или -CH₂CH(i-Pr)СН₂-), если не указано иное. С_0-4 алкилен относится к линейному или разветвленному двухвалентному углеводородному радикалу, содержащему 1-4 атомов углерода или в случае С₀ алкиленовый радикал опущен. За исключением метилена, открытые валентности алкиленовой группы не присоединены к одному и тому же атому. Примеры алкиленовых радикалов включают, но не ограничены ими, метилен, этилен, пропилен, 2-метил-пропилен, 1,1-диметил-этилен, бутилен, 2-этилбутилен.

Используемый здесь термин ″алкокси″ означает -O-алкильную группу, где алкил такой, как определено выше, такой как метокси, этокси, н-пропилокси, изопропилокси, н-бутилокси, изобутилокси, трет-бутилокси, пентилокси, гексилокси, включая их изомеры. Используемый здесь термин ″низший алкокси″ означает алкоксигруппу с ″низшей алкильной″ группой, как она определена выше. Используемый здесь термин ″C_1-10 алкокси″ относится к -O-алкилу, где алкил представляет собой C_1-10 алкил.

Используемый здесь термин ″галогеноалкил″ означает алкильную группу с неразветвленной или разветвленной цепью, как определено выше, где 1, 2, 3 или более атомов водорода замещены галогеном. Примерами являются 1-фторметил, 1-хлорметил, 1-бромметил, 1-йодметил, дифторметил, трифторметил, трихлорметил, 1-фторэтил, 1-хлорэтил, 2-фторэтил, 2-хлорэтил, 2-бромэтил, 2,2-дихлорэтил, 3-бромпропил или 2,2,2-трифторэтил. Используемый здесь термин ″фторалкил″ относится к галогеноалкильной группировке, где фтор представляет собой галоген.

Используемый здесь термин ″ацил″ (или ″алканоил″) означает группу формулы -C(=O)R, где R представляет собой водород или низший алкил, как он определен здесь. Используемый здесь термин ″алкилкарбонил″ означает группу формулы C(=O)R, где R представляет собой алкил, как он определен в данном описании. Используемый здесь термин ″C_1-6 ацил″ или ″алканоил″ относится к группе -C(=O)R, содержащей от 1 до 6 атомов углерода. C₁ ацильной группой является формильная группа, где R=Н, и С₆ ацильная группа относится к гексаноилу, когда алкильная цепь является неразветвленной. Используемый здесь термин ″арилкарбонил″ или ″ароил″ означает группу формулы C(=O)R, где R представляет собой арильную группу. Используемый здесь термин ″бензоил″ относится к ″арилкарбонильной″ или ″ароильной″ группе, где R представляет собой фенил.

Используемый здесь термин ″алкилсульфонил″ и ″арилсульфонил″ означает группу формулы -S(=O)₂R, где R представляет собой алкил или арил соответственно, и алкил и арил такие, как определено в данном описании. Используемый здесь термин ″C_1-3 алкилсульфониламидо″ относится к группе RSO₂NH-, где R представляет собой C_1-3 алкильную группу, как она определена в данном описании. Термины ″C_1-6 галогеноалкилсульфонил″, ″С_3-7 циклоалкилсульфонил″, ″С_3-7 циклоалкил-С_1-3 алкил-сульфонил″ или ″C_1-6 алкокси-C_1-6 алкилсульфонил″ относятся к соединению S(=O)₂R, где R представляет собой C_1-6 галогеноалкил, С_3-7 циклоалкил, С_3-7 циклоалкил-С_1-3 алкил и C_1-6 алкокси-C_1-6 алкил соответственно.

Используемые здесь термины ″алкилсульфониламидо″ и ″арилсульфониламидо″ означают группу формулы -NR′S(=O)₂R, где R представляет собой алкил или арил соответственно, R′ представляет собой водород или C_1-3 алкил, и алкил и арил такие, как определено в данном описании. Термин ″сульфониламино″ может быть использован как префикс, тогда как ″сульфониламид″ является соответствующим суффиксом.

Используемый здесь термин ″циклоалкил″ означает насыщенное карбоциклическое кольцо, содержащее от 3 до 8 атомов углерода, т.е. циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил или цикпооктил. ″С_3-7 циклоалкил″ здесь относится к циклоалкилу, содержащему от 3 до 7 атомов углерода в карбоциклическом кольце.

Используемый здесь термин ″циклоалкилалкил″ относится к радикалу R′R″-, где R′ представляет собой циклоалкильный радикал, как он определен в данном описании, и R″ представляет собой алкиленовый радикал, как он определен в данном описании, с условием, что точка присоединения циклоалкилалкильной группировки будет находиться на алкиленовом радикале. Примеры циклоалкилалкильных радикалов включают, но не ограничены ими, циклопропилметил, циклогексилметил, циклопентилэтил. С_3-7 циклоалкил-C_1-3 алкил относится к радикалу R′R″, где R′ представляет собой С_3-7 циклоалкил, и R″ представляет собой C_1-3 алкилен, как он определен в данном описании.

Используемый здесь термин ″галоген″ или ″галогено″ означает фтор, хлор, бром или йод.

Используемые здесь термины ″гидроксиалкил″ и ″алкоксиалкил″ означают алкильный радикал, как определен в данном описании, где от одного до трех атомов водорода на разных атомах углерода заменен/заменены гидроксильными или алкоксигруппами соответственно. C_1-3 алкокси-С_1-6алкильная группировка относится к С_1-6 алкильному заместителю, в котором от 1 до 3 атомов водорода заменены C_1-3алкокси, и точкой присоединения алкокси является атом кислорода.

Используемые здесь термины ″алкоксикарбонил″ и ″арилоксикарбонил″ означают группу формулы -C(=O)OR, где R представляет собой алкил или арил соответственно, и алкил и арил такие, как определено в данном описании.

Используемый здесь термин ″циано″ относится к атому углерода, связанному с атомом азота через тройную связь, т.е. -С≡N. Используемый здесь термин ″нитро″ относится к группе -NO₂. Используемый здесь термин ″карбокси″ относится к группе -CO₂H.

Термин ″оксо″ относится к атому кислорода с двойной связью (=O), т.е. к карбонильной группе.

Используемый здесь термин ″ацил″ (или ″алканоил″) означает группу формулы -C(=O)R, где R представляет собой водород или низший алкил, как он определен в данном описании. Используемый здесь термин ″алкилкарбонил″ означает группу формулы C(=O)R, где R представляет собой алкил, как он определен в данном описании. Термин ″C_1-6 ацил″ или ″алканоил″ относится к группе -C(=O)R, содержащей от 1 до 6 атомов углерода. C₁ ацильной группой является формильная группа, где R=Н, и С₆ ацильная группа относится к гексаноилу, если алкильная цепь является неразветвленной. Используемый здесь термин ″арилкарбонил″ или ″ароил″ означает группу формулы C(=O)R, где R представляет собой арильную группу. Используемый здесь термин ″бензоил″ представляет собой ″арилкарбонильную″ или ″ароильную″ группу, где R представляет собой фенил.

Используемый здесь термин ″гетероарил″ без дополнительного определения или ограничения относится к ″пиридинильному″, ″пиразинильному″ и ″пиридазинильному″ кольцам. Термин ″пиридин″ (″пиридинил″) относится к шестичленному гетероароматическому кольцу с одним атомом азота. Термины ″пиримидин″ (пиримидинил″), ″пиразин″ (″пиразинил″) и ″пиридазин″ (″пиридазинил″) относятся к шестичленному неконденсированному гетероароматическому кольцу с двумя атомами азота в положениях 1,3; 1,4 и 1,2 соответственно. Соответствующие названия указаны в скобках.

Используемый здесь термин ″сульфамоил″ относится к радикалу -S(O)₂NH₂. Используемые здесь термины ″N-алкилсульфамоил″ и ″N,N-диалкилсульфамоил″ относятся к радикалу -S(O)₂NR′R″, где R′ и R″ представляют собой водород и низший алкил, и R′ и R″ независимо представляют собой низший алкил соответственно. Примеры N-алкилсульфамоильных заместителей включают, но не ограничены ими, метиламиносульфонил, изопропиламиносульфонил. Примеры N,N-диалкилсульфамоильных заместителей включают, но не ограничены ими, диметиламиносульфонил, изопропил-метиламиносульфонил.

Используемый здесь термин ″карбамоил″ означает радикал -CONH₂. Префиксы ″N-алкилкарбамоил″ и ″N,N-диалкилкарбамоил″ означают радикал CONHR′ или CONR′R″ соответственно, где группы R′ и R″ независимо представляют собой алкил, как он определен в данном описании. Префикс N-арилкарбамоил″ означает радикал CONHR′, где R представляет собой арильный радикал, как он определен в данном описании.

Используемые здесь термины ″алкилсульфинил″ и ″арилсульфинил″ означают группу формулы -S(=O)R, где R представляет собой алкил или арил соответственно, и алкил и арил такие, как определено в данном описании.

Используемые здесь термины ″алкилсульфонил″ и ″арилсульфонил″ означают группу формулы -S(=O)₂R, где R представляет собой алкил или арил соответственно, и алкил и арил такие, как определено в данном описании.

Используемый здесь термин ″бензил″ относится к радикалу С₆Н₅СН₂, где фенильное кольцо, которое возможно может быть замещено одним или более, предпочтительно одним или тремя заместителями, независимо выбранными из гидрокси, тио, циано, алкила, алкокси, низшего галогеноалкокси, алкилтио, галогена, галогеноалкила, гидроксиалкила, нитро, алкоксикарбонила, амино, алкиламино, диалкиламино, аминоалкила, алкиламиноалкила и диалкиламиноалкила, алкилсульфонила, арилсульфинила, алкиламиносульфонила, ариламиносульфонила, алкилсульфониламино, арилсульфониламино, карбамоила, алкилкарбамоила и диалкилкарбамоила, арилкарбамоила, алкилкарбониламино, арилкарбониламино, если не указано иное.

Используемый здесь термин ″гетероарил″ без дополнительного определения или ограничения относится к ″пиридинильному″, ″пиразинильному″ и ″пиридазинильному″ кольцам. Термин ″пиридин″ (″пиридинил″) относится к шестичленному гетероароматическому кольцу с одним атомом азота. Термины ″пиримидин″ (пиримидинил″), ″пиразин″ (″пиразинил″) и ″пиридазин″ (″пиридазинил″) относятся к шестичленному неконденсированному гетероароматическому кольцу с двумя атомами азота в положениях 1,3, 1,4 и 1,2 соответственно. Соответствующие названия радикалов приведены в скобках.

Термины ″оксетан″ (″оксетанил″), ″тетрагидрофуран″ (″тетрагидрофуранил″) и ″тетрагидропиран″ (″тетрагидропиранил″) относятся к четырех-, пяти- и шестичленному неконденсированному гетероциклическому кольцу соответственно, каждое из которых содержит один атом кислорода.

Используемый здесь термин ″арил″ относится к фенилу.

Термин ″циклический амин″ означает насыщенное углеродное кольцо, содержащее от 3 до 6 атомов углерода, как определено выше, и где по меньшей мере один из атомов углерода заменен гетероатомом, выбранным из группы, состоящей из N, О или S, например пиперидин, пиперазин, морфолин, тиоморфолин, ди-оксо-тиоморфолин, пирролидин, пиразолин, имидазолидин, азетидин, где циклические атомы углерода возможно замещены одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидрокси, фенила, низшего алкила, низшего алкокси, или 2 атома водорода на атоме углерода оба заменены оксо (=O). Когда циклический амин представляет собой пиперазин, тогда один атом азота возможно может быть замещен C_1-6 алкилом, C_1-6 ацилом, C_1-6 алкилсульфонилом.

Термины (i) 2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-пиримидин-5-ил (когда R⁵ представляет собой Н), (ii) 2,4-диоксо-3,4-дигидро-2Н-пиримидин-1-ил, (iii) 2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-2Н-пиримидин-1-ил или (iv) 3-метил-5-оксо-1,5-дигидро-[1,2,4]триазол-4-ил относятся к следующим группировкам:

(i) 3-оксо-3,4-дигидро-пиразин-2-ил, (ii) 3-оксо-2,3-дигидро-пиридазин-4-ил, (iii) 2-оксо-1,2-дигидро-пиримидин-4-он-5-ил, (iv) 2-оксо-1,2-дигидро-пиридин-3-ил, (v) 6-оксо-1,6-дигидро-[1,2,4]триазин-5-ил и (vi).

Использованы следующие общепринятые сокращения: ацетил (Ас), водный (водн.), атмосферы (атм), 2,2'-бис(дифенилфосфино)-1,1'-бинафтил (BINAP), трет-бутоксикарбонил (Boc), ди-трет-бутилпирокарбонат или boc-ангидрид (BOC₂O), бензил (Bn), бутил (Bu), регистрационный номер в реферативном журнале ″Chemical Abstracts″ (CASRN), бензилоксикарбонил (CBZ или Z), карбонилдиимидазол (CDI), 1,5-диазабицикло[4.3.0]нон-5-ен (DBN), 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен (DBU), N,N'-дициклогексилкарбодиимид (DCC), 1,2-дихлорэтан (DCE), дихлорметан (DCM), диэтилазодикарбоксилат (DEAD), ди-изопропилазодикарбоксилат (DIAD), ди-изобутилалюминийгидрид (DIBAL или DIBAL-H), ди-изопропилэтиламин (DIPEA), N,N-диметилацетамид (DMA), 4-N,N-диметиламинопиридин (DMAP), N,N-диметилформамид (DMF), диметилсульфоксид (DMSO), гидрохлорид 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (EDCI), этил (Et), этилацетат (EtOAc), этанол (EtOH), этиловый эфир 2-этокси-2Н-хинолин-1-карбоновой кислоты (EEDQ), диэтиловый эфир (Et₂O), гексафторфосфат O-(7-азабензотриазол-1-ил)-N,N,N'N'-тетраметилурония уксусная кислота (HATU), уксусная кислота (НОАс), 1-N-гидроксибензотриазол (HOBt), жидкостная хроматография высокого давления (HPLC), изопропанол (IPA), метанол (МеОН), точка плавления (mp), MeSO₂- (мезил или Ms), метил (Me), ацетонитрил (MeCN), м-хлорпербензойная кислота (МСРВА), масс-спектр (ms), метил-трет-бутиловый эфир (МТВЕ), N-метилморфолин (NMM), N-метилпирролидин (NMP), фенил (Ph), пропил (Pr), изопропил (i-Pr), фунты на квадратный дюйм (psi), пиридин (pyr), комнатная температура (кт или КТ), насыщ. (насыщенный), трет-бутилдиметилсилил или t-BuMe₂Si (TBDMS), триэтиламин (TEA или Et₃N), трифлат или CF₃SO₂- (Tf), трифторуксусная кислота (TFA), тетрафторборат O-бензотриазол-1-ил-N,N,N',N'-тетраметилурония (TBTU), тонкослойная хроматография (TLC), тетрагидрофуран (THF), тетраметилэтилендиамин (TMEDA), триметилсилил или Me₃Si (TMS), п-толуолсульфоновой кислоты моногидрат (TsOH или pTsOH), 4-Me-C₆H4SO₂- или тозил (Ts), N-уретан-N-карбоксиангидрид (UNCA). Согласно стандартной номенклатуре префиксы ″нормальный″ (н-), ″изо″ (i-), ″вторичный″ (втор), ″третичный″ (трет-) и нео- имеют их общепринятое значение при использовании с алкильной группировкой (J. Rigaudy and D.P. Klesney, Nomenclature in Organic Chemistry, IUPAC 1979 Pergamon Press, Oxford.).

Соединения настоящего изобретения приведены в нижеследующей Таблице (I):

Таблица I Соед. Прим. Структура IC50 (мкмоль)1 МР MS 1 0,0006   478 2 0,0004   492

3 0,0002 275,0-278,0 495 1. Анализ активности полимеразы HCV (Пример 5)

Активность соединений по изобретению в качестве ингибиторов активности HCV может быть измерена любыми подходящими методами, известными специалистам в данной области, включая анализы in vivo и in vitro. Например, HCV NS5B ингибиторная активность соединений формулы I может быть определена с использованием стандартных методик анализа, описанных в Behrens et al., EMBO J. 1996 15:12-22, Lohmann et al., Virology 1998 249:108-118 и Ranjith-Kumar et al., J. Virology 2001 75:8615-8623. Если не указано иное, в таких анализах соединения по изобретению продемонстрировали in vitro HCV NS5B ингибиторную активность. Условия анализа активности полимеразы HCV, использованные для соединений по настоящему изобретению, описаны в Примере 4. Разработаны клеточные системы репликации для HCV, в которых неструктурные белки стабильно реплицируют субгеномную вирусную РНК в клетках Huh7 (V. Lohmann et al., Science 1999 285:110, и К.J. Blight et al., Science 2000 290:1972). Условия клеточного анализа репликации, использованные для соединений по настоящему изобретению, описаны в Примере 5. В отсутствие очищенной, функциональной репликазы HCV, состоящей из вирусных неструктурных белков и белков-хозяев, наше понимание синтеза РНК Flaviviridae базируется на исследованиях с использованием активных рекомбинантных РНК-зависимых РНК-полимераз и проверке достоверности этих исследований в системе репликона HCV. Ингибирование рекомбинантной очищенной HCV-полимеразы соединениями в биохимических анализах in vitro может быть подтверждено с использованием системы репликона, в которой полимераза существует в комплексе репликазы, ассоциированной с другими вирусными и клеточными полипептидами в соответствующей стехиометрии. Демонстрация клеточного ингибирования репликации HCV может более точно прогнозировать функцию in vivo, чем демонстрация HCV NS5B ингибиторной активности в биохимических анализах in vitro.

Соединения по настоящему изобретению могут быть приготовлены в самых разнообразных лекарственных формах и носителях для перорального введения. Пероральное введение можно выполнять в форме таблеток, таблеток в оболочке, драже, твердых и мягких желатиновых капсул, растворов, эмульсий, сиропов или суспензий. Соединения по настоящему изобретению эффективны при введении другими путями введения, включая непрерывный (внутривенный капельный) местный парентеральный, внутримышечный, внутривенный, подкожный, трансдермальный (при котором может быть использован агент усиления проницаемости), трансбуккальный, назальный, ингаляционный и с использованием суппозитория, помимо прочих путей введения. Предпочтительным способом введения обычно является пероральное введение с использованием удобного режима ежесуточного введения доз, который можно корректировать в соответствии со степенью болезни и ответной реакции пациента на активный ингредиент.

Соединение или соединения по настоящему изобретению, а также их фармацевтически приемлемые соли вместе с одним или более традиционными эксципиентами, носителями или разбавителями могут быть приготовлены в форме фармацевтических композиций и в стандартных лекарственных формах. Фармацевтические композиции и стандартные лекарственные формы могут содержать традиционные ингредиенты в стандартных пропорциях, с или без дополнительных активных соединений или начал, и стандартные лекарственные формы могут содержать любое подходящее эффективное количество активного ингредиента, соответствующее назначенному ежесуточному диапазону дозировки, который следует использовать. Фармацевтические композиции можно использовать в виде твердых веществ, например в форме таблеток или заполненных капсул, полутвердых веществ, порошков, препаратов длительного высвобождения, или в виде жидкостей, таких как растворы, суспензии, эмульсии, эликсиры или заполненные капсулы для перорального применения, или в форме суппозиториев для ректального или вагинального введения, или в форме стерильных инъекционных растворов для парентерального применения. Типичный препарат будет содержать от примерно 5% до примерно 95% активного соединения или соединений (масс./масс.). Термин ″препарат″ или ″лекарственная форма″ охватывает как твердые, так и жидкие композиции активного соединения, и специалисту в данной области известно, что активный ингредиент может находиться в разных препаратах в зависимости от органа или ткани, являющихся мишенью, и в зависимости от желаемых дозовых и фармакокинетических параметров.

Используемый в данном описании термин ″эксципиент″ относится к соединению, используемому в приготовлении фармацевтической композиции, которое обычно является безопасным, нетоксичным и не является нежелательным ни биологически, ни иным образом, и охватывает эксципиенты, которые приемлемы для применения в ветеринарии, а также для фармацевтического применения у людей. Соединения по изобретению можно вводить сами по себе, но, как правило, их будут вводить в смеси с одним или более подходящими фармацевтическими эксципиентами, разбавителями или носителями, выбранными с учетом назначенного пути введения и стандартной фармацевтической практики.

″Фармацевтически приемлемый″ означает тот, который полезен в приготовлении фармацевтической композиции, то есть обычно безопасный, нетоксичный и не являющийся нежелательным ни биологически, ни иным образом, и который является приемлемым для фармацевтического применения у людей.

Форма ″фармацевтически приемлемая соль″ активного ингредиента также может в начальной стадии придавать желаемое фармакокинетическое свойство активному ингредиенту, которое отсутствует у несолевой формы, и даже может положительным образом влиять на фармакодинамику активного ингредиента, что касается его терапевтической активности в организме. Фраза ″фармацевтически приемлемая соль″ соединения означает соль, которая является фармацевтически приемлемой и которая обладает желаемой фармакологической активностью родительского соединения. Такие соли включают: (1) соли присоединения кислоты, образуемые с неорганическими кислотами, такими как соляная кислота, бромоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и т.п.; или образуемые с органическими кислотами, такими как уксусная кислота, пропионовая кислота, гексановая кислота, циклопентанпропионовая кислота, гликолевая кислота, пировиноградная кислота, молочная кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, яблочная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, 3-(4-гидроксибензоил)бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, 1,2-этан-дисульфоновая кислота, 2-гидроксиэтансульфоновая кислота, бензолсульфоновая кислота, 4-хлорбензолсульфоновая кислота, 2-нафталинсульфоновая кислота, 4-толуолсульфоновая кислота, камфорсульфоновая кислота, 4-метилбицикло[2.2.2]-окт-2-ен-1-карбоновая кислота, глюкогептоновая кислота, 3-фенилпропионовая кислота, триметилуксусная кислота, трет-бутилуксусная кислота, лаурилсерная кислота, глюконовая кислота, глутаминовая кислота, гидроксинафтойная кислота, салициловая кислота, стеариновая кислота, слизевая кислота и т.п.; или (2) соли, образующиеся, когда кислотный протон, присутствующий в родительском соединении, либо заменятся ионом металла, например ионом щелочного металла, ионом щелочно-земельного металла или ионом алюминия, либо координируется с органическим основанием, таким как этаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, трометамин, N-метилглюкамин и т.п.

Препараты в твердой форме включают порошки, таблетки, пилюли, капсулы, облатки, суппозитории и диспергируемые гранулы. Твердый носитель может представлять собой одно или более веществ, которые могут также действовать в качестве разбавителей, корригентов, солюбилизаторов, смазывающих веществ, суспендирующих агентов, связывающих веществ, консервантов, разрыхлителей таблеток или инкапсулирующего вещества. В порошках носитель обычно является тонкодисперсным твердым веществом, которое представляет собой смесь с тонкодисперсным активным компонентом. В таблетках активный компонент обычно смешан с носителем, обладающим необходимой связывающей способностью, в подходящих пропорциях и спрессован в желаемую форму желаемого размера. Подходящие носители включают, но не ограничены ими, карбонат магния, стеарат магния, тальк, сахар, лактоза, пектин, декстрин, крахмал, желатин, трагакант, метилцеллюлозу, натрий-карбоксиметилцеллюлозу, низкоплавкий воск, масло какао и т.п. Препараты в твердой форме могут содержать, помимо активного компонента, красители, корригенты, стабилизаторы, буферные агенты, искусственные и натуральные подсластители, диспергирующие вещества, загустители, солюбилизирующие агенты и т.п.

Жидкие композиции, также пригодные для перорального введения, включают эмульсии, сиропы, эликсиры, водные растворы, водные суспензии. Они также включают препараты в твердой форме, которые предназначены для превращения в препараты в жидкой форме непосредственно перед применением. Эмульсии могут быть приготовлены в растворах, например в водных-пропиленгликолевых растворах, или могут содержать эмульгаторы, такие как лецитин, моноолеат сорбитана или аравийскую камедь. Водные растворы могут быть приготовлены путем растворения активного компонента в воде и добавления подходящих красителей, корригентов, стабилизаторов и загустителей. Водные суспензии могут быть приготовлены путем диспергирования тонкодисперсного активного компонента в воде с вязким веществом, таким как натуральные или синтетические камеди, смолы, метилцеллюлоза, натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы и другие общеизвестные суспендирующие агенты.

Соединения по настоящему изобретению могут быть приготовлены для парентерального введения (например, посредством инъекции, например болюсной инъекции или непрерывной инфузии) и могут быть представлены в стандартной лекарственной форме в ампулах, предварительно заполненных шприцах, в контейнерах для инфузии небольшого объема или в многодозовых контейнерах с добавлением консерванта. Композиции могут принимать такие формы, как суспензии, растворы или эмульсии в масляных или водных разбавителях, например растворы в водном полиэтиленгликоле. Примеры масляных или неводных носителей, разбавителей, растворителей или наполнителей включают пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла (например, оливковое масло) и инъекционные органические эфиры (например, этилолеат) и могут содержать технологические агенты, такие как консерванты, смачивающие, эмульгирующие или суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. Альтернативно, активный ингредиент может быть в форме порошка, полученного асептическим выделением стерильного твердого вещества или лиофилизацией из раствора, для разведения перед использованием подходящим разбавителем, например стерильной, апирогенной водой.

Соединения по настоящему изобретению могут быть приготовлены для местного введения в эпидермис в виде мазей, кремов, или лосьонов, или в виде трансдермального пластыря. Мази и кремы могут быть приготовлены, например, с использованием водной или масляной основы с добавлением подходящих загущающих и/или гелеобразующих агентов. Лосьоны могут быть приготовлены с использованием водной или масляной основы и будут, как правило, содержать один или более эмульгаторов, стабилизаторов, диспергирующих агентов, суспендирующих агентов, загустителей или красителей. Композиции, подходящие для местного введения в ротовую полость, включают облатки, содержащие активные агенты в корригированной основе, обычно в сахарозе и аравийской камеди или трагаканте; пастилки, содержащие активный ингредиент в инертной основе, такой как желатин и глицерин или сахароза и аравийская камедь; и полоскания для рта, содержащие активный ингредиент в подходящем жидком носителе.

Соединения по настоящему изобретению могут быть приготовлены для введения в виде суппозиториев. Низкоплавкий воск, такой как смесь глицеридов жирных кислот или масло какао, сначала расплавляют, и активный компонент диспергируют в этом расплаве до гомогенного состояния, например путем перемешивания. Расплавленную смесь затем вливают в формы удобного размера и оставляют охлаждаться и затвердевать.

Соединения по настоящему изобретению могут быть приготовлены для вагинального введения. Пессарии, тампоны, кремы, гели, пасты, пенки или спреи, содержащие в дополнение к активному ингредиенту такие носители, которые известны в данной области как подходящие. Соединения по настоящему изобретению могут быть приготовлены для назального введения. Растворы или суспензии наносят прямо в носовую пазуху с помощью стандартных средств, например с использованием капельницы, пипетки или распылителя. Композиции могут быть предоставлены в однодозовой или многодозовой форме. В случае капельницы или пипетки этого можно достичь при введении пациентом подходящего, предопределенного объема раствора или суспензии. В случае распылителя это достигается, например, с помощью дозирующего, распыляющего спрей насоса.

Соединения по настоящему изобретению могут быть приготовлены для аэрозольного введения, в частности в дыхательные пути, включая интраназальное введение. Соединение, как правило, будет иметь небольшой размер частиц, например порядка пяти (5) микрон или менее. Такой размер частиц может быть достигнут способами, известными в данной области, например в результате микронизации. Активный ингредиент предоставляют в упаковке под давлением с подходящим пропеллентом, таким как хлорфторуглерод (CFC), например дихлордифторметан, трихлорфторметан или дихлортетрафторэтан, или диоксид углерода, или другой подходящий газ. Аэрозоль для удобства может содержать поверхностно-активное вещество, такое как лецитин. Дозу лекарственного средства можно контролировать с помощью дозирующего клапана. Альтернативно, активные ингредиенты могут быть предоставлены в форме сухого порошка, например порошковой смеси соединения в подходящей порошковой основе, такой как лактоза, крахмал, производные крахмала, такие как гидроксипропилметилцеллюлоза и поливинилпирролидин (PVP). Порошковый носитель будет образовывать гель в носовой полости. Порошковая композиция может быть представлена в стандартной лекарственной форме, например в капсулах или картриджах из, например, желатина или в блистерных упаковках, из которых порошок можно вводить с помощью ингалятора.

Если нужно, могут быть приготовлены композиции с энтеросолюбильными покрытиями, обеспечивающими длительное или контролируемое высвобождение активного ингредиента. Например, соединения по настоящему изобретению могут быть приготовлены в устройствах для трансдермальной или подкожной доставки лекарственного средства. Эти системы доставки предпочтительны, когда требуется длительное высвобождение соединения и когда соблюдение пациентами схемы и режима лечения имеет решающее значение. Соединения с системами для трансдермальной доставки часто прикрепляют к приклеиваемой на кожу твердой подложке. Интересующее соединение может быть также объединено с усилителем проницаемости, например Azone (1-додецилаза-циклогептан-2-он). Системы доставки длительного высвобождения вводят подкожно в субдермальный слой хирургическим методом или инъекцией. В субдермальных имплантатах соединение инкапсулировано в липид-растворимой мембране, например в силиконовой резине, или в биоразлагаемом полимере, например в полимолочной кислоте.

Подходящие композиции наряду с фармацевтическими носителями, разбавителями и эксципиентами описаны в Remington: The Science and Practice of Pharmacy 1995, edited by E.W. Martin, Mack Publishing Company, 19th edition, Easton, Pennsylvania. Специалист-ученый в области технологии приготовления лекарственных средств может модифицировать композиции с учетом информации, представленной в материалах заявки, с получением многочисленных композиций для конкретного пути введения, не допуская получения композиций по настоящему изобретению, которые нестабильны или имеют риск лишиться их терапевтической активности.

Модификация настоящих соединений с целью повышения их растворимости в воде или в другом растворителе, например, легко может быть осуществлена посредством небольших модификаций (образование соли, этерификация и т.д.), которые известны специалисту в данной области. Специалист в данной области также хорошо знает, как модифицировать путь введения и режим введения доз конкретного соединения, чтобы управлять фармакокинетикой настоящих соединений, чтобы обеспечить достижение максимально полезного эффекта у пациентов.

Используемый здесь термин ″терапевтически эффективное количество″ означает количество, которое требуется для снижения симптомов заболевания у индивидуума. Дозу будут корректировать в соответствии с индивидуальными требованиями в каждом конкретном случае. Дозировка может варьировать в широких пределах в зависимости от многих факторов, таких как тяжесть заболевания, которое лечат, возраст и общее состояние здоровья пациента, другие лекарственные средства, которыми лечат пациента, путь и форма введения и предпочтения и опыт практикующего врача. Для перорального введения суточная дозировка от примерно 0,01 до примерно 1000 мг/кг массы тела в сутки должна быть целесообразной при монотерапии и/или при комбинированной терапии. Предпочтительная суточная дозировка составляет от примерно 0,1 до примерно 500 мг/кг массы тела, более предпочтительно от 0,1 до примерно 100 мг/кг массы тела и наиболее предпочтительно от 1,0 до примерно 10 мг/кг массы тела в сутки. Таким образом, для введения лицу с массой тела 70 кг диапазон дозировки будет составлять от примерно 7 мг до 0,7 г в сутки. Суточную дозировку можно вводить как однократную дозировку или разделенными дозировками, обычно от 1 до 5 дозировок в сутки. Как правило, лечение начинают с меньших дозировок, которые меньше, чем оптимальная доза соединения. После этого дозировку увеличивают с небольшим шагом до достижения оптимального эффекта для индивидуального пациента. Специалист в области лечения заболеваний, описанных здесь, способен, без излишнего экспериментирования и основываясь на личных знаниях, опыте и описании данной заявки установить терапевтически эффективное количество соединений по настоящему изобретению для данного заболевания и пациента.

В воплощениях изобретения активное соединение или соль можно вводить в комбинации с другим противовирусным агентом, таким как рибавирин, нуклеозидный ингибитор полимеразы HCV, другой ненуклеозидный ингибитор полимеразы HCV или ингибитор протеазы HCV. Когда активное соединение, или его производное, или соль вводят в комбинации с другим противовирусным агентом, активность может быть повышена по сравнению с родительским соединением. Когда лечение представляет собой комбинированную терапию, введение может быть параллельным или последовательным относительно введения нуклеозидных производных. ″Параллельное введение″ в данном описании охватывает введение агентов в одно и то же время или в разное время. Введение двух или более агентов в одно и то же время может быть осуществлено путем введения единой композиции, содержащей два или более активных ингредиентов, или путем по существу одновременного введения двух или более лекарственных форм с единственным активным агентом.

Следует иметь в виду, что в данном описании ссылки на лечение распространяются на профилактику, а также на лечение существующих состояний. Кроме того, используемый здесь термин ″лечение″ HCV-инфекции также охватывает лечение или профилактику заболевания или состояния, связанного с или опосредованного HCV-инфекцией, или его клинических симптомов.

Используемый здесь термин ″терапевтически эффективное количество″ означает количество, необходимое для снижения симптомов заболевания у индивидуума. Дозу будут корректировать в соответствии с индивидуальными требованиями в каждом конкретном случае. Дозировка может варьировать в широких пределах в зависимости от многих факторов, таких как тяжесть заболевания, которое лечат, возраст и общее состояние здоровья пациента, другие лекарственные средства, которыми лечат пациента, путь и форма введения и предпочтения и опыт практикующего врача. Для перорального введения суточная дозировка от примерно 0,01 до примерно 1000 мг/кг массы тела в сутки будет целесообразной при монотерапии и/или при комбинированной терапии. Предпочтительная суточная дозировка составляет от примерно 0,1 до примерно 500 мг/кг массы тела, более предпочтительно от 0,1 до примерно 100 мг/кг массы тела и наиболее предпочтительно от 1,0 до примерно 10 мг/кг массы тела в сутки. Таким образом, для введения лицу с массой тела 70 кг диапазон дозировки будет составлять от примерно 7 мг до 0,7 г в сутки. Суточную дозировку можно вводить как однократную дозировку или разделенными дозировками, обычно от 1 до 5 дозировок в сутки. Как правило, лечение начинают с меньших дозировок, которые меньше, чем оптимальная доза соединения. После этого дозировку увеличивают с небольшим шагом до достижения оптимального эффекта у индивидуального пациента. Специалист в области лечения заболеваний, описанных здесь, способен, без излишнего экспериментирования и основываясь на личных знаниях, опыте и описании данной заявки, установить терапевтически эффективное количество соединений по настоящему изобретению для данного заболевания и пациента.

Терапевтически эффективное количество соединения по настоящему изобретению и возможно одного или более дополнительных противовирусных агентов представляет собой количество, эффективное для снижения вирусной нагрузки или для достижения устойчивого вирусного ответа на терапию. Полезные показатели устойчивого ответа, помимо вирусной нагрузки, включают, но не ограничены ими, фиброз печени, повышение уровня трансаминазы в сыворотке крови и некровоспалительная активность в печени. Одним общим иллюстративным, но не ограничивающим, примером маркера является уровень аланинтрансаминазы в сыворотке крови (ALT), который измеряют стандартными клиническими анализами. В некоторых воплощениях изобретения эффективным режимом лечения является режим, обеспечивающий снижение уровней ALT до значения менее примерно 45 м.е./мл сыворотки.

Модификация настоящих соединений с целью улучшения их растворимости в воде или другом растворителе, например, легко может быть осуществлена посредством минимальных модификаций (образование соли, этерификация и т.д.), которые известны специалисту в данной области. Специалисту в данной области также известно, как модифицировать путь введения и режим дозировки конкретного соединения, чтобы управлять фармакокинетикой настоящих соединений для достижения максимального полезного эффекта у пациентов.

Примеры

Пример 1

N-{4-[7-трет-Бутил-8-метокси-5-(2-оксо-1,2-дигидро-пиридин-3-ил)-хинолин-2-ил]-фенил}-метансульфонамид

Ссылка: V.V. Kouznetsov, et al. Molecular Diversity 2006, 10, 29-37.

Стадия 1: Смесь соединения 20 (2,0 г, 7,75 ммоль) и соединения 22 (1,40 г, 11,62 ммоль) в MeCN (10 мл) перемешивали при KT в течение 45 мин. К этой смеси добавляли BiCl₃ (0,49 г, 1,55 ммоль) и раствор N-винилпирролидинона (24, 1,72 г, 15,50 ммоль) в MeCN (10 мл) по каплям. Полученную смесь перемешивали в течение 16 ч, затем разбавляли EtOAc и H₂O (приблизительно 20 мл). Белое твердое вещество фильтровали и промывали H₂O. Органический слой в фильтрате сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали хроматографией на SiO₂, элюируя градиентно смесью EtOAc/гексан (от 15 до 75% EtOAc), с получением 312 мг соединения 26 и 978 мг соединения 28.

Стадия 2: К раствору аддукта 28 (705 мг, 1,40 ммоль) в MeCN (10 мл), охлажденному до 0°С, по каплям добавляли раствор CAN (1,92 г, 3,51 ммоль) в MeCN (10 мл). Реакционную смесь затем перемешивали при 0°С до тех пор, пока все исходное вещество не было израсходовано. Реакционную смесь разбавляли EtOAc и H₂O. Органический слой отделяли, промывали рассолом, сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали хроматографией на SiO₂, элюируя градиентно смесью EtOAc/гексан (от 1 до 15% EtOAc), с получением 302 мг соединения 26 в виде светло-желтого твердого вещества.

Стадия 3: Смесь соединения 26 (300 мг, 0,72 ммоль), порошка железа (121 мг, 2,17 ммоль) и NH₄Cl (116 мг, 2,17 ммоль) в смеси МеОН (30 мл) и H₂O (10 мл) нагревали при температуре дефлегмации в течение 1,5 ч. Реакционную смесь охлаждали до КТ и фильтровали через слой CELITE. Фильтрат концентрировали, и остаток распределяли между EtOAc и H₂O. Органический слой сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали в вакууме с получением 202 мг соединения 30а, которое использовали без дополнительной очистки.

Стадия 4: К раствору соединения 30а (200 мг, 0,52 ммоль) в DCM (5 мл), охлажденному до 0°С, добавляли пиридин (92 мкл, 1,14 ммоль), затем MsCl (42 мкл, 0,55 ммоль). Реакционную смесь затем перемешивали при 0°С в течение 45 мин, после чего гасили H₂O и разбавляли EtOAc. Органический слой отделяли, промывали рассолом, сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали хроматографией на SiO₂, элюируя градиентно смесью EtOAc/гексан (от 20 до 70% EtOAc), с получением 208 мг соединения 30b.

Стадия 5: В герметично закрываемую пробирку загружали соединение 30b (50 мг, 0,11 ммоль), 2-гидрокси-пиридин-3-илбороновую кислоту (18 мг, 0,16 ммоль), Pd(dppf)Cl₂(CH₂Cl₂) (4 мг, 0,01 ммоль) и Na₂CO₃ (17 мг, 0,16 ммоль), МеОН (3 мл) и DCM (1 мл). Пробирку герметично закрывали и подвергали воздействию излучения в микроволновом реакторе при 115°С в течение 25 мин. Реакционную смесь концентрировали, и неочищенный продукт очищали хроматографией на SiO₂, элюируя EtOAc, с получением соединения 32 мг соединения 32 в виде твердого вещества.

Пример 2

N-{4-[7-трет-Бутил-8-метокси-5-(6-метил-2-оксо-1,2-дигидро-пиридин-3-ил)-хинолин-2-ил]-фенил}-метансульфонамид

N-{4-[7-трет-Бутил-8-метокси-5-(2-метокси-6-метил-пиридин-3-ил)-хинолин-2-ил]-фенил}-метансульфонамид (34) получали, как описано в Примере 1, стадии 1-5, за исключением того, что на стадии 5 2-гидрокси-пиридин-3-илбороновая кислота была заменена 2-метокси-6-метил-пиридин-3-илбороновой кислотой.

Стадия 6: Смесь пиридина 34 (80 мг), 48%-ного HBr (200 мкл) в АсОН (3 мл) в герметично закрытой пробирке нагревали при 65°С в течение 6,5 ч. Реакционную смесь охлаждали до KT, вливали в смесь EtOAc и воды со льдом. Эту смесь нейтрализовали насыщенным водным раствором NaHCO₃. Органический слой отделяли, промывали H₂O и рассолом, сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали с получением 61 мг соединения 36 в виде твердого вещества.

Пример 3

N-{4-[7-трет-Бутил-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидро-2Н-пиримидин-1-ил)-8-метокси-хинолин-2-ил]-фенил}-метансульфонамид (38)

В пробирку загружали соединение 30b (60 мг), урацил (73 мг), (2-циано-фенил)-амид пиридин-2-карбоновой кислоты (14 мг) и Cul (6 мг) и K₃PO₄ (137 мг) в DMSO (5 мл). Пробирку герметично закрывали и подвергали воздействию излучения в микроволновом реакторе при 150°С в течение 5 ч. Реакционную смесь охлаждали до KT, и рН доводили до значения приблизительно 2 добавлением водного HCl. Смесь экстрагировали EtOAc. Органический экстракт промывали последовательно H₂O и рассолом, сушили (MgSO₄) и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали хроматографией на SiO₂, элюируя градиентно смесью EtOAc/гексан. Неочищенный остаток очищали хроматографией на SiO₂, элюируя смесью 5% MeOH/DCM, с получением 9,3 мг соединения 38.

Пример 4

Активность РНК-полимеразы HCV NS5B

Ферментативную активность полимеразы HCV (NS5B570n-Con1) измеряли как включение радиомеченых нуклеотидных монофосфатов в нерастворимые в кислоте РНК-продукты. Не включенный радиомеченый субстрат удаляли фильтрованием, и сцинтилляционное вещество добавляли в промытый и высушенный фильтровальный планшет, содержащий радиомеченый РНК-продукт. Количество РНК-продукта, образованного полимеразой NS5B570-Con1 по окончании реакции, было прямо пропорционально количеству света, испускаемого сцинтилляционным веществом.

Полимераза HCV с N-концевой 6-гистидиновой меткой, полученная из штамма HCV Con1, генотип 1b (NS5B570n-Con1), содержит делецию 21 аминокислоты на С-конце относительно полноразмерной полимеразой HCV и очищена из штамма E.coli BL21(DE) pLysS. Эту конструкцию, содержащую кодирующую последовательность HCV NS5B Con1 (GenBank, номер доступа AJ242654), встраивали в плазмидную конструкцию pET17b ниже кассеты экспрессии промотора Т7 и трансформировали в Е.coli. Единичную колонию выращивали в течение ночи как стартовую культуру и позже использовали инокулят 10 л среды LB, дополненной 100 мкг/мл ампициллина при 37°С. Экспрессию белка индуцировали добавлением 0,25 мМ изопропил-β-О-тиогалактопиранозида (IPTG), когда оптическая плотность при 600 нМ культуры составляла от 0,6 до 0,8, и клетки собирали через 16-18 ч при 30°С. NS5B570n-Con1 очищали до гомогенности с использованием трехстадийного протокола, включающего колоночную хроматографию последовательно на смолах Ni-NTA, SP-Sepharose HP и Superdex 75.

Каждые 50 мкл ферментативной реакционной смеси содержали 20 нМ матричной РНК из комплементарной последовательности участка внутренней посадки рибосомы (cIRES), 20 нМ фермента NS5B570n-Con1, 0,5 мкКи тритиированного UTP (Perkin Elmer каталожный №TRK-412; удельная активность: от 30 до 60 Ки/ммоль; концентрация исходного раствора от 7,5×10^-5 М до 20,6×10^-6 М), по 1 мкМ каждого АТР, СТР и GTP, 40 мМ Tris-HCl рН 8,0, 40 мМ NaCl, 4 мМ DTT (дитиотрейтол), 4 мМ MgCl₂ и 5 мкл соединения, последовательно разведенного в DMSO. Реакционные смеси собирали в 96-луночных фильтровальных планшетах (каталожный №MADVN0B, Millipore Co.) и инкубировали в течение 2 ч при 30°С. Реакции останавливали добавлением 10% (об./об.) трихлоруксусной кислоты и инкубировали в течение 40 мин при 4°С. Реакционные смеси фильтровали, промывали 8 реакционными объемами 10% (об./об.) трихлоруксусной кислоты, 4 реакционными объемами 70% (об./об.) этанола, сушили на воздухе и в каждую реакционную лунку добавляли 25 мкл сцинтилляционного вещества (Microscint 20, Perkin-Elmer).

Количество света, испускаемого из сцинтилляционного вещества, преобразовывали в импульсы в минуту (СРМ) на планшет-ридере Topcount® (Perkin-Elmer, энергетический диапазон: низкий, эффективный режим: нормальный, время счета: 1 мин, вычитаемое фоновое значение: отсутствует, снижение перекрестных помех: выключено).

Данные анализировали в Excel® (Microsoft®) и ActivityBase® (idbs®). Реакцию в отсутствие фермента использовали для определения фонового сигнала, который вычитали из сигналов ферментативных реакций. Реакции с положительным контролем осуществляли в отсутствие соединения, и полученную активность, скорректированную с учетом фона, принимали за 100% полимеразную активность. Все данные выражали в процентах от положительного контроля. Концентрацию соединения, при которой катализируемая ферментом скорость синтеза РНК снижается на 50% (IC₅₀), вычисляли по эмпирическому уравнению (i)

где ″Y″ соответствует относительной активности фермента (в %), ″%Min″ означает остаточную относительную активность при насыщающей концентрации соединения, ″%Мах″ означает относительную максимальную ферментативную активность, ″X″ соответствует концентрации соединения, и ″S″ означает коэффициент Хилла (или тангенс угла наклона прямой).

Пример 5

Анализ в системе репликона HCV

Этот анализ дает возможность измерять способность соединений формулы I ингибировать репликацию РНК HCV и, следовательно, их потенциальную пригодность для лечения HCV-инфекций. В анализе используется репортер в качестве простого считывателя данных по внутриклеточному уровню РНК репликона HCV. Ген люциферазы Renilla luciferase встраивали в первую открытую рамку считывания конструкции NK5.1 репликона генотипа 1b (N. Krieger et al., J. Virol. 2001 75(10):4614) сразу после последовательности участка внутренней посадки рибосомы (IRES) и производили слияние с геном неомицинфосфотрансферазы (NPTII) через саморасщепляющийся пептид 2А вируса, вызывающего заболевание стоп и ротовой полости (M.D. Ryan & J. Drew, EMBO 1994 13(4):928-933). После in vitro транскрипции РНК электропорировали в клетки гепатомы человека Huh7, и С418-устойчивые колонии изолировали и размножали. Стабильно селектированная клеточная линия 2209-23 содержит репликативную субгеномную РНК HCV, и активность люциферазы Renilla luciferase, экспрессированной репликоном, отражает уровень его РНК в клетках. Анализ проводили в двух планшетах-дубликатах, один из которых был непрозрачным белым, а второй был прозрачным для того, чтобы измерять противовирусную активность и цитотоксичность химического соединения параллельно, гарантируя, что наблюдаемая активность не является следствием пониженной клеточной пролиферации или гибели клеток.

Клетки с репликоном HCV (2209-23), которые экспрессируют ген-репортер люциферазы Renilla luciferase, культивировали в среде MEM, модифицированной по Дульбекко (Invitrogen, каталожный №10569-010) с 5% сывороткой плода коровы (FBS, Invitrogen, каталожный №10082-147), вносили в 96-луночный планшет в количестве 5000 клеток на лунку и инкубировали в течение ночи. Через двадцать четыре часа к клеткам добавляли разные разведения химических соединений в ростовой среде, и их затем дополнительно инкубировали при 37°С в течение трех суток. По окончании инкубирования клетки, находящиеся в белых планшетах, собирали, и активность люциферазы измеряли, используя систему для анализа R. luciferase (Promega, каталожный №Е2820). Все реагенты, описанные в следующей части текста описания, входили в набор от производителя, и для приготовления реагентов использовали инструкции производителя. Клетки промывали однократно 100 мкл забуференного фосфатами физиологического раствора (рН 7,0) (PBS) на лунку и подвергали лизису с использованием 20 мкл 1 × буфера для лизиса для анализа R. luciferase, а затем инкубировали при комнатной температуре в течение 20 мин. Планшет затем вставляли в прибор для регистрации люминесценции Centre LB 960 для микропланшетов (Berthold Technologies), 100 мкл буфера для анализа R. luciferase впрыскивали в каждую лунку, и сигнал измеряли с 2-секундной задержкой, используя 2-секундную программу измерений. IC₅₀, концентрация лекарственного средства, необходимая для снижения уровня репликона на 50% относительно контрольного значения, полученного с необработанными клетками, может быть вычислена из графика зависимости процента снижения активности люциферазы от концентрации лекарственного средства, как описано выше.

Реагент WST-1 от Roche Diagnostic (номер по каталогу 1644807) использовали для анализа цитотоксичности. Десять мкл реагента WST-1 добавляли в каждую лунку прозрачных планшетов, включая лунки, которые содержат только среду в качестве пустого контроля. Клетки затем инкубировали в течение 2 ч при 37°С, и значение OD измеряли с использованием микротитрационного планшет-ридера MRX Revelation (Lab System) при 450 нм (эталонный фильтр 650 нм). И снова CC₅₀, концентрация лекарственного средства, необходимая для снижения клеточной пролиферации на 50% относительно контрольного значения, полученного с необработанными клетками, может быть вычислена из графика зависимости процентного снижения значения WST-1 от концентрации лекарственного средства, как описано выше.

Пример 6

Фармацевтические композиции на основе соединений по изобретению для введения несколькими путями были приготовлены, как описано в этом Примере.

Композиция для перорального введения (А)

Ингредиенты смешивают и распределяют по капсулам в количестве примерно 100 мг на каждую капсулу. Одна капсула может содержать приблизительно суммарную суточную дозировку.

Композиция для перорального введения (В)

Ингредиенты объединяют и гранулируют с использованием растворителя, такого как метанол. Композицию затем сушат и формуют в таблетки (содержащие примерно 20 мг активного соединения) на подходящей таблеточной машине.

Композиция для перорального введения (С)

Ингредиенты смешивают до образования суспензии для перорального введения.

Парентеральная композиция (D)

Активный ингредиент растворяют в порции воды для инъекций. Затем при перемешивании добавляют достаточное количество хлорида натрия, чтобы сделать раствор изотоническим. Раствор доводят до определенного объема остатком воды для инъекций, фильтруют через 0,2-микронный мембранный фильтр и упаковывают в стерильных условиях.