Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КИСЛОТНОЙ УСТОЙЧИВОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ ХЛАДНОКРОВНЫХ ЖИВОТНЫХ

Изобретение относится к биологии и медицине, может применяться в экологической физиологии животных, ветеринарной и клинической экспресс-диагностике.

Известен способ определения функционального состояния организма по степени резистентности крови к кислотному гемолизу, патент №2179315 от 17.08.2000. Способ включает разведение пробы крови в 2001 раз изотоническим раствором хлорида натрия с рН 7,4, взятие двух равных частей разведенной пробы, одну инкубируют с добавкой пропранола, а другую фотометрируют, до и после добавления 0,1 н. раствора соляной кислоты в соотношении 1:20 к исходному объему части пробы, после чего аналогично дважды фотометрируют вторую часть пробы, регистрируя кинетику гемолиза по убыли оптической плотности, автоматически, с дискретностью 1/с, полученную информацию обрабатывают в компьютере с помощью программного обеспечения.

Наиболее близким по технической сущности является способ определения кислотной устойчивости эритроцитов, патент №2242760 от 27.01.2003, для оценки кислотности стойкости эритроцитов взвесь эритроцитов стандартизируют разведением эритроцитарной массы физиологическим раствором в отношении 1:3 и центрифугированием в течение 15 мин с последующим разведением 0,01 мл эритроцитарного осадка в 0,4 мл физиологического раствора. Добавляют кислотный гемолитик, в качестве которого используют 1% раствор уксусной кислоты. Определяют величину светопропускания, осуществляя параллельную запись изменения среднего размера эритроцитов и величины светопропускания с построением графиков, по которым определяют время регистрации максимального среднего размера эритроцитов и среднюю скорость гемолиза. Рассчитывают индекс кислотной стойкости эритроцитов.

Недостатками вышеуказанного способа являются трудоемкость, длительность и дороговизна.

Задача предлагаемого изобретения повышение эффективности, надежности и информативности анализа.

Поставленная задача достигается тем, что на основе метода кислотной устойчивости эритроцитов определяют динамику гемолитической стойкости эритроцитов.

Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что в пробирку с кровью добавляют антикоагулянт (трилон Б) из расчета 10 мкл на 2 мл крови, проводят измерения при длине волны 0,450 нм, используют физиологический раствор 0,65% NaCl, а затем после гемолиза рассчитывают эритрограмму резистентности и определяют процентное распределение эритроцитарных мембран по стойкости.

Пример

Авторами было проведено исследование кислотной устойчивости мембран эритроцитов. Анализ проводится на приборах КФК или СФ. Кровь брали из хвостовой артерии. Шприц для забора крови предварительно обработали антикоагулянтом (трилон Б). В пробирку, в которую собирается кровь, добавляется антикоагулянт из расчета 10 мкл на 2 мл крови. Для достоверного анализа необходимо 4-5 мл крови. Светофильтр настраивают на длину волны 0,450 нм. В 2 кварцевые кюветы толщиной стекла 10 наливают 4,5 мл 0,65% физиологического раствора NaCl (одна - контрольная, вторая - опытная). Затем в опытную кювету понемногу приливают кровь, пока оптическая плотность не достигнет 0,700. После этого из кюветы отбирают 2,3 мл физиологического раствора с эритроцитами, остальное сливают и тщательно просушивают кювету. 2,3 мл отобранного физиологического раствора с эритроцитами возвращают в кювету и к ней приливают 2,3 мл 0,004N HCl, который служит гемолитиком. После этого с интервалом каждые 15 секунд проводят измерения кинетики гемолиза до двух-трех повторяющихся значений. По завершении гемолиза рассчитывают в процентах популяций эритроцитов различных стойкостей и строят график зависимости популяций эритроцитов от времени гемолиза.

На рис. 1 представлен график кислотной эритрограммы сегоклеток карпа.

Заявленный способ имеет следующие преимущества.

1. Менее трудоемок, нет необходимости проводить стандартизацию взвеси эритроцитов путем разведения с физиологическим раствором, центрифугированием, отмыванием и повторным центрифугированием.

2. Занимает меньше времени.

3. Прост и доступен в применении, нет необходимости в применении дорогостоящих реактивов и приборов.

4. Нет необходимости поддерживать постоянство температуры в термостате.