Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ ПЕПЕРОМИИ in vitro

Изобретение относится к области цветоводства и может быть использовано для микроразмножения растений пеперомии in vitro.

Известен способ размножения пеперомии in vitro (см.: Ahmadabadi Μ., Bock R. Development of a highly responsive leaf-based regeneration system for Peperomia species // Turkish Journal of Botany. - 2010. - V. 34. - P. 329-334). В качестве первичного экспланта использовали верхушки побегов длиной 1-2 см, которые стерилизовали в 70%-ном этаноле в течение 30 сек, затем промывали стерильной дистиллированной водой. После этого их высаживали на среду Мурасиге и Скуга. У сформировавшихся молодых стерильных растений отделяли листья, разрезали их на сегменты размером 3×3 мм и культивировали на среде Мурасиге и Скуга, дополненной 20 г/л сахарозы и регуляторами роста 3 мг/л бензиламинопурина, 0,15 мг/л индолилуксусной кислоты и 0,014 мг/л гибберелловой кислоты. Для формирования корней стерильные побеги переносили на безгормональную среду с половинной концентрацией солей МС. Индукцию органогенеза осуществляли в световой комнате при 16/8 часовом фотопериоде с освещением белыми люминесцентными лампами с интенсивностью 2500 лк при температуре 25°C и 20°C соответственно.

Недостатком данного способа является отсутствие корней у получаемых побегов непосредственно на этапе микроразмножения, что усложняет и удлиняет процесс клонального микроразмножения за счет необходимости использования этапа укоренения растений in vitro.

Технический результат заключается в упрощении способа микроразмножения за счет образования корневой системы у формирующихся in vitro побегов уже на этапе микроразмножения при положительном влиянии оптимальной концентрации глюкозы и регулятора роста.

Технический результат достигается тем, что способ включает отделение эксплантов, стерилизацию, посадку на питательную среду Мурасиге-Скуга, микроразмножение путем отделения побегов от эксплантов, их укоренение на питательной среде Мурасиге-Скуга и дальнейшее укоренение в грунте. При микроразмножении экспланты высаживают на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, дополненную 10 г/л глюкозы и 0,1 мг/л Рибав-Экстра, затем сформировавшиеся растения-регенеранты с корнями замачивают в растворе индолилуксусной кислоты 3 мг/л в течение 15 минут и укореняют в условиях ex vitro в грунте, состоящем из смеси торфа и песка 1:1.

Способ осуществляют следующим образом. Верхушки побегов длиной 1-2 см стерилизуют в 70%-ном этаноле в течение 30 сек, затем промывают стерильной дистиллированной водой. После этого их высаживают на среду Мурасиге и Скуга. От полученных стерильных растений пеперомии в асептических условиях отделяют побеги, делят их на сегменты (часть побега, содержащая лист и пазушную почку) и высаживают в пробирки на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, включающую 10 г/л глюкозы и регулятор роста - 0,1 мг/л Рибав-Экстра. Состав среды, использованный при культивировании микропобегов, является стандартным для микроразмножения растений в культуре in vitro, за исключением подобранной в предварительных опытах концентрации глюкозы (фиг. 1) и регулятора роста (табл. 1). Культивирование осуществляют при постоянном освещении люминесцентными лампами с интенсивностью около 2500 лк и при температуре 25°C (физические условия выращивания близки к оптимальным для культивирования эксплантов растений). При выращивании микропобегов на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга с добавлением 10 г/л глюкозы и 0,1 мг/л Рибав-Экстра в течение 4 недель культивирования формируются 100% укорененные побеги (табл. 1). Во всех вариантах сред с Рибав-Экстра наблюдался интенсивный ризогенез, что имеет важно значение для дальнейшей адаптации растений к условиям ex vitro. В дальнейшем сформировавшиеся растения с корнями замачивают в растворе 3 мг/л индолилуксусной кислоты в течение 15 минут (фиг. 2) и переносят для укоренения в условия ex vitro в грунт, состоящий из смеси торфа и песка 1:1. После укоренения размноженные растения выращивают обычным способом.

В результате использования предлагаемого способа процесс микроразмножения сокращается на один этап, кроме того, формируются 100% укорененные побеги независимо от сезонности взятия растения-донора, которые на 100% приживались в условиях ex vitro.

Таким образом, по сравнению с известным решением предлагаемое позволяет упростить микроразмножение пеперомии за счет образования корневой системы у формирующихся in vitro побегов уже на этапе микроразмножения при положительном влиянии оптимальной концентрации глюкозы и регулятора роста - Рибав-Экстра. А также увеличивается приживаемость растений-регенерантов ex vitro за счет предпосадочной обработки (замачивания) их корневой системы раствором индолилуксусной кислоты (ИУК).