Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЦИДОФИЛЬНОГО ПРОДУКТА С ИММУНОКОМПЛЕКСОМ

Способ получения ацидофильного продукта с иммунокомплексом

Изобретение относится к биотехнологии и медицинской микробиологии и направлено на улучшение свойств пробиотического продукта, применяемого для повышения иммунологической резистентности организма.

Дисбаланс микрофлоры кишечника стал частым явлением у детей и взрослых, что в целом создает общие социальные проблемы. В последнее время меняется характер этого явления, все труднее удается справляться с дисбиотическими нарушениями при помощи имеющихся лекарственных средств. В связи с этим коррекция микробиологических нарушений кишечника с помощью пробиотических продуктов является весьма актуальной и своевременной.

Препараты и продукты, содержащие в своем составе лактобактерии, широко используются для нормализации микрофлоры кишечника людей, перенесших стрессовые воздействия, антибиотико- и химиотерапию.

За рубежом широко используют препараты-пробиотики и продукты питания на основе штаммов лактобактерий вида Lactobacillusacidophilus (патент США №3639666; патент Франции №2622452; патент Швейцарии №637297; патент ФРГ 2421066; патент Японии №05227946; Международная заявка (WO) №93/09793).

Однако препараты зарубежных фирм-разработчиков ориентированы на создание, преимущественно, БАД в сухой форме (таблетки, капсулы). Указанные препараты имеют существенные недостатки, связанные с низкой эффективностью.

Известны подходы лечения дисбиоза с помощью пробиотиков (см. Батуро А.Л., Абрамов Н.А., Романенко З.Е. Характеристика биологической активности разных штаммов-пробиотиковбифидо - и лактобактерий // Мат. Всеросс. конференции с международным участием «Пробиотики и пробиотические продукты в профилактике и лечении наиболее распространенных заболеваний человека», - Москва, 1999, - С. 6), которые

дают положительный эффект, однако требуется их доработка, в т.ч. с учетом региональных особенностей условий проживания населения.

Вместе с тем известно, что, что у населения Республики Саха (Якутия) установлен значительный дефицит лактобактерий в кишечнике (в среднем 10⁴-10⁵ КОЕ/г против нормального содержания 10⁷-10⁸ КОЕ/г даже в группе практически здоровых людей), причем дефицит лактобактерий встречается чаще, чем дефицит бифидофлоры, что, возможно, и создает предпосылки к развитию некоторых патологических состояний, а также нарушению функций иммунной системы (см. Ахременко Я.А., Красноженов Е.П. Показатели колонизационной резистентности здоровых школьников г. Якутска // Сибирский медицинский журнал. 2007. Т. 22, Приложение к №2. С. 16-18; Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том 3 // Москва, 2001. - 288 с).

Известен бактериально-ферментный препарат, включающий биомассу бифидобактерий 10⁶-10⁸ КОЕ и ферментный компонент лизоцим в количестве 5-20 мг в одной дозе (см. RU №2071339, А61К 35/74, А61К 38/43, опубл. 10.01.1997).

Известен также способ приготовления пробиотика, включающий внесение в молоко закваски лактобактерий, перемешивание и культивирование при 37-38°C и pH 4,4-4,8 (см. RU №2435423, А23С 9/12, А61К 35/74, опубл. 10.12.2011).

С учетом сказанного, недостатки прототипа можно сформулировать следующим образом: недостаточно выраженный пробиотический эффект и эффект профилактики дисбактериоза.

Задача, на решение которой направлено заявленное изобретение, выражается в повышении пробиотической эффективности получаемого продукта и повышении иммунологической резистентности организма.

Технический эффект, получаемый при решении поставленной задачи, выражается в получении молочнокислого питьевого пробиотического продукта, отвечающего требованиям, предъявляемым к соответствующим

бактерийным препаратам и продуктам, пригодного для систематического употребления широким кругом потребителей всех возрастов. При этом, одновременное присутствие лактобактерий и иммунокомплекса в продукте оказывает положительное влияние, как на состояние кишечной микрофлоры, так и на функции иммунной системы. Присутствие ацидофильных лактобактерий и экстракта пантов северного оленя усиливает секреторный иммунитет, оказывает положительное влияние на работоспособность кишечника, улучшает обменные процессы в организме.

Для решения поставленной задачи способ приготовления пробиотика, включающий внесение в молоко закваски лактобактерий, перемешивание и культивирование при 37-38°C и pH 4,4-4,8, отличается тем, что используют закваску смешанной бактериальной культуры ALC

(Lactobacillusacidophilus+Lactococcus lactis) при концентрации в конечном продукте не менее 1•10⁸-4•10⁸ КОЕ/мл, при этом в состав продукта в качестве иммунокомплекса используют экстракт пантов северного оленя в сахарном сиропе (на основе биологически-активной добавки «Эпсорин»), вводимого в пропорции 1:100, что составляет 10 мл на 1000 мл продукта, и гомогенизируют, затем, подготовленное таким образом молоко охлаждают до 37-38°C, добавляют в него закваску из лактобактерий в количестве 0,10-0,12% от объема подготовленного молока, после чего полученную смесь тщательно перемешивают и культивируют при температуре 37-38°C до образования сгустка. Кроме того, период культивирования смеси при температуре 37-38°C составляет 2-3 ч с последующим быстрым охлаждением до 4-6°C.

Сопоставительный анализ признаков заявленного решения с признаками прототипа и аналогов свидетельствует о соответствии заявленного решения критерию «новизна».

Признаки отличительной части формулы изобретения обеспечивают решение следующих функциональных задач.

Признаки «используют закваску смешанной бактериальной культуры ALC (Lactobacillusacidophilus+Lactococcus lactis)» позволяет одновременно получить пробиотический продукт, усиливающий иммунный ответ организма, повышающий работоспособность кишечника, улучшающий обменные процессы в организме и, при этом, приятный на вкус и запах.

Признаки указывающие, что концентрация микроорганизмов «в конечном продукте не менее 1•10⁸-4•10⁸ КОЕ/мл» позволяют компенсировать дефицит микрофлоры (лактобактерий) в желудке потребителей, что особенно важно для коренных народов Севера.

Признаки указывающие, что «в состав продукта в качестве иммунокомплекса дополнительно вводят экстракт пантов северного оленя в сахарном сиропе» обеспечивают усиление иммунологической резистентности организма, что является «сверхэффектом» получаемого технического результата в рамках решаемой технической задачи.

Признаки, указывающие, что экстракт пантов северного оленя в сахарном сиропе вводят «в пропорции 1:100 и гомогенизируют» обеспечивают оптимальную концентрацию иммунокомплекса и эффективное его распределение по молочной компоненте.

Признаки «подготовленное таким образом молоко охлаждают до 37-38°C, добавляют в него закваску из лактобактерий» исключают гибель закваски от перегрева.

Признаки, указывающие, что в охлажденное молоко добавляют закваску из лактобактерий «в количестве 0,10-0,12% от объема подготовленного молока» обеспечивают возможность получения пробиотического продукта после ферментации сформированной смеси. При этом, установлено, что иммунокомплекс может вноситься в молоко после ферментации, поскольку их ввод не оказывает отрицательного влияния на культуры микроорганизмов, используемых для ферментации, кроме того, как показано ниже, является полезным для культивирования микробной компоненты. Внесенные добавки также не оказывают негативного влияния на свойства готовой продукции по органолептическим, микробиологическим, химическим, биохимическим и физическим показателям.

Признаки указывающие, что смесь «культивируют при температуре 37-38°C до образования сгустка» позволяют получить готовый (полноценный) ацидофильный продукт.

Признаки второго пункта формулы задают продолжительность процесса ферментации исходной смеси.

Известно, что использование закваски L. Acidophilus способствует снижению непереносимости лактозы, уменьшению выраженности синдрома избыточного бактериального роста. Пробиотики на основе L. Acidophilus используются при лечении и профилактике урогенитальных инфекций у женщин, лечении инфекций дыхательных путей у детей, лечения диареи у детей и эррадикации Н. pylori.

В заявляемом техническом решении для приготовления ацидофильного продукта используется закваска смешанной бактериальной культуры ALC (Lactobacillusacidophilus+Lactococcus lactis) для ацидофилина, например, ацидофильной простокваши производства ЗАО «Вектор-Биальгам».

В качестве иммунокомплекса используется экстракт пантов северного оленя в сахарном сиропе (БАД «Эпсорин»).

Биологически активная добавка «Эпсорин» была разработана в Институте биологических проблем криолитозоны СО РАН и в 1995 году зарегистрирована как фармацевтический препарат («Эпсорин» // ВФС №42-2467-95), в 2008 году - как биологически активная добавка (регистрационное удостоверение Роспотребнадзора РФ №77.99.23.3.У.462.1.08 от 28.01.2008; санитарно-эпидемиологическое заключение №77.99.03.003.Т.000276.02.08 от 23.08.2008).

Препарат «Эпсорин» получен из пантов северного оленя, рекомендован к использованию в качестве добавки в пище - дополнительного источника органических веществ, жиров (фосфатиды, холестерин) и минеральных веществ. Является тонизирующим, биостимулирующим, профилактически оздоровительным средством. Применяется при физической и умственной усталости, вегетососудистой дистонии, повышает сопротивляемость организма при бактериальных и вирусных инфекциях, способствует повышению иммунитета.

В БАД «Эпсорин» содержатся: фосфолипиды, сбалансированный набор свободных аминокислот, микроэлементов, водо- и жирорастворимых витаминов, эфиры ненасыщенных жирных кислот, оказывающих антиоксидантное воздействие, эфиры органических кислот, наборы простагландинов и пептидов и др.

Уникальная технология получения пантового экстракта позволяет сохранять более 90% биологически активных веществ, содержащихся в пантах (см. RU №2099067, А61К 35/32, опубл. 20.12.1997).

Эффективность препаратов из пантов оленей показана в геронтологической и фтизиатрической практике. На здоровых людях установлено, что препараты из пантов северного оленя нормализуют функциональное состояние организма человека в условиях Севера, устраняя дисбаланс клеточных популяций иммунной системы (см. Ахременко А.К., Ядрихинский В.Ф., Находкин Н.А., Данилова Л.С., Кузьмина В.Ф. Лекарственные препараты из тканей северного оленя и других животных. Практические рекомендации // Якутск, 2003, - 126 с.).

Пробиотический эффект препарата был исследован в условиях invitro и invivo. При этом показано, что активная часть экстракта избирательно стимулирует рост лактобактерий.

В условиях приема указанной биодобавки наблюдалось увеличение содержания в толстом кишечнике молочнокислой флоры. Особенно заметный прирост лактобактерий выявлен в группе детей с гастроэнтерологическими нарушениями, где их количество возросло на порядок и составило 6,0±0,4 lg КОЕ/г при исходном уровне - 4,6±0,7 lg КОЕ/г (р≤0,05). Стоит отметить, что произошло повышение уровня именно той части индигенной микрофлоры, которая была особенно снижена.

Исследованиями invitro показано, что экстракт, взятый из пантов северного оленя, в большей степени стимулирует рост лактобактерий (см. фиг.).

На фоне приема указанной биодобавки заметно возрос уровень IgG, особенно в группах детей с нормальным состоянием кишечной микрофлоры и с дисбиотическими изменениями 2 степени, что показывает оптимизирующее действие препарата на местный секреторный иммунитет.

Содержание этого фактора в данных группах составило соответственно 0,58±0,001 и 0,37±0,01 г/л (при исходных 0,39±0,07 и 0,28±0,04 г/л, соответственно, р≤0,05), что может служить косвенным отражением повышения общей резистентности организма ребенка. В общем же у всех обследованных детей этот показатель составил 0,38±0,02 г/л (при 0,32±0,01 г/л до применения БАД), при этом в группе детей с 1-ой степенью дисбактериоза кишечника уровень IgG остался прежним. У всех детей, принимавших БАД «Эпсорин», возрос уровень молекул адгезии ICAM-I, что говорит об увеличении числа рецепторов для нарастающего количества индигенной микрофлоры (см. Ахременко Я.А., Красноженов Е.П. Показатели колонизационной резистентности здоровых школьников г. Якутска // Сибирский медицинский журнал. 2007. Т.22, Приложение к №2. С.16-18).

Пример конкретного исполнения.

В 1 литр молока 2,5% жирности, подогретого до 40°C, вносят 2 ст.л. готовой закваски (закваска готовится путем внесения 10 мл концентрата бактерий в 0,5 л теплого молока и культивировании при температуре 37-38°C в течение 12 часов с последующим хранением при 4°C в течение 2-3 недель) и 2 ч.л. БАД «Эпсорин» в сахарном сиропе и тщательно перемешивают. Смесь культивируют при температуре 37-38°C в течение 12 часов с последующим дозреванием при 4-6°C в течение 2 часов. Получаемый готовый продукт с иммунокомплексом имеет приятный кисломолочный вкус и нежно-сладкий привкус без признаков синерезиса.

Продукт полезен для коррекции и профилактики нарушений микрофлоры толстого кишечника и противоинфекционной резистентности организма. Хорошие органолептические свойства продукта позволят предложить его для систематического употребления широкому кругу потребителей всех возрастов, в первую очередь детям старше 1-го года.