×
10.08.2015
216.013.6d7c

Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ РЕГЕНЕРАЦИИ РЕЗЕЦИРОВАННОЙ ПЕЧЕНИ ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНОМ

Вид РИД

Изобретение

Аннотация: Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и экспериментальной хирургии, и может быть использовано для стимуляции регенерации резецированной печени. Для этого лабораторному животному на вторые сутки эксперимента осуществляют резекцию печени в объеме 70%. Для стимуляции регенерации печени животному вводят внутрижелудочно дигидрокверцитин в суточной дозе 5,5 мг/кг каждые 46 часов первые 7 суток эксперимента. Способ обеспечивает восстановление объема, структуры и функции резецированного органа до 28 суток после резекции. 1 пр., 2 табл.
Основные результаты: Способ стимуляции регенерации резецированной печени, отличающийся тем, что резекцию печени осуществляют лабораторному животному на вторые сутки эксперимента в объеме 70%, дигидрокверцитин вводят внутрижелудочно в суточной дозе 5,5 мг/кг каждые 46 часов первые 7 суток эксперимента.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и экспериментальной хирургии, и может быть использовано для стимуляции регенерации резецированной печени.

Наиболее близким к заявленному решению является «Способ пострезекционной регенерации печени в эксперименте» авт. С.П. Чикотеева и др. RU 2232550. В данном решении проводят предварительную ксенотрансплантацию криоконсервированными изолированными гепатоцитами свиньи подкожно в переднюю брюшную стенку. Процедуру осуществляют за 48 часов до операции. Затем интраоперационно непосредственно после резекции 90% печени выполняют трансплантацию таких же клеток под капсулу селезенки.

Недостатками данного метода являются: сложность технического выполнения и высокая вероятность развития осложнений при ксенотрансплантации. Кроме того, 100% летальность крыс контрольной группы затрудняет проведение эксперимента из-за невозможности сравнения показателей в опытной и контрольной группах животных. По данным большинства исследователей наиболее оптимальной для изучения регенерации печени у крыс является резекция 70% органа.

В каждом живом организме заложены сложные механизмы самосохранения и восстановления. Задача современной медицины изучить и найти способы их активации. В этой связи феномен ишемического прекондиционирования заслуживает самого детального изучения. Эффекты прекондиционирования - цитопротекция и неоангиогенез, лежащие в основе восстановительных процессов, важны в хирургии. Внедрение в практику фармакологических средств, способствующих активации и продлению этого естественного защитного механизма, позволит значительно улучшить результаты лечения. Многочисленные исследователи склонны рассматривать гуморальным агентом прекондиционирования эритропоэтин. Однако это гормональный белковый препарат и существует ряд противопоказаний для его применения, а именно артериальная гипертензия, онкологические заболевания. Кроме того, известны методы активации процесса прекондиционирования непосредственной стимуляцией основного эффекторного звена АТФ зависимых калиевых каналов. Несомненно актуальным является исследование лекарственных препаратов, способных активировать различные этапы процесса прекондиционирования.

Дигидрокверцетин относится к классу флавоноидов. Известно, что при предварительном пероральном применении препарат в условиях тяжелой гипобарической гипоксии оказывал как антиоксидантный, так и антигипоксический эффект на организм. Подобные свойства препарата, вероятно, связаны с тем, что дигидрокверцетин, благодаря гидрофобному характеру строения, способен проникать в гидрофобную область мембран и тем самым значительно снижать подвижность липидов. Таким образом, данный препарат стабилизирует мембраны в условиях окислительного стресса и выступает в качестве структурного антиоксиданта. Кроме того, известно, что флавоноиды способны шунтировать работу НАДН-дегидрогеназы, принимая электроны с НАДН и передавая их на следующий - третий комплекс цепи митохондрий, нормализуя процессы окислительного фосфорилирования (Лукьянова Л.Д., 2011). Исходя из полученных результатов, можно предположить, что дигидрокверцетин способен активировать процесс прекондиционирования. Препарат вводится каждые 46 часов, учитывая то, что к этому времени эффект прекондиционировния ослабевает, первые 7 суток эксперимента, так как именно на данном этапе наиболее эффективна активация репаративных процессов.

Основным преимуществом предлагаемого способа является простота исполнения, а также применение препарата с минимальным количеством побочных эффектов.

Техническим результатом изобретения является разработка способа стимуляции регенерации резецированной печени с помощью дигидрокверцетина. Технический результат достигается тем, что при резекции 70% печени на вторые сутки эксперимента, лабораторному животному вводят дигидрокверцетин внутрижелудочно в суточной дозе 5,5 мг/кг каждые 46 часов первые 7 суток эксперимента.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проводят на белых крысах линии Wistar массой 210-220 г.

Резекция печени производится на вторые сутки в объеме 70%.

Состояние печени оценивается по показателю летальности животных, уровню микроциркуляции, выраженности цитолиза, показателям синтетической функции печени и результатам морфологического исследования в группах интактных животных, ложнооперированных, с резекцией печени и в группе животных с резекцией печени, которым вводился дигидрокверцетин.

Показатель летальности оценивается в экспериментальных группах животных в первые 10 суток после операции.

Уровень микроциркуляции в печени определяется при помощи оборудования производства компании Biopac systems: полиграфа MP 100 с модулем лазерной допплеровской флоуметрии LDF100C и поверхностного датчика TSD 140. Регистрация и обработка результатов лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) производится с помощью программы AcqKnowledge версии 4.2., значения микроциркуляции выражают в перфузионных единицах (ПЕ). Запись уровня микроциркуляции осуществляют последовательно по поверхности печени, затем рассчитывают среднее значение. Регистрацию уровня микроциркуляции проводят на 2-е, 7-е, 14-е, 21-е и 28 сутки после операции.

Выраженность цитолиза оценивают по уровню показателей АлАТ, АсАТ и ЛДГ в крови экспериментальных животных на 2-е, 7-е, 14-е, 21-е и 28-е сутки после операции. Показатели определяют УФ кинетическим методом на автоматизированной системе AU5800 (Beckman Coulter, США).

Синтетичесую функцию печени оценивают по показателям коагулограммы (АЧТВ, MHO, фибриноген) на 7-е, 14-е, 21-е и 28 сутки после операции на анализаторе CS-2000i (Sysmex, Япония).

Морфологическое исследование выполняется на материале стандартных участков печени, взятых после выведения животных из эксперимента. Обработка материала производится по стандартной методике с фиксацией в формалине, заливкой в парафин, окраской гематоксилином и эозином. Общеморфологическое и морфометрическое исследования выполняются с применением системы для сканирования и архивирования изображений MiraxDesk.

Дигидрокверцитин вводят внутрижелудочно в суточной дозе 5,5 мг/кг каждые 46 часов первые 7 суток эксперимента.

При статистической обработке данных рассчитывают среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считают достоверными при р<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Экспериментальные животные были разделены на следующие группы:

1. Интактные животные (n=20);

2. Ложнооперированные животные (n=20);

3. Резекция печени (n=50);

4. Резекция печени + дигидрокверцетин (n=50).

Резекцию печени производили лабораторным животным на вторые сутки эксперимента в объеме 70%. Крыс наркотизировали внутрибрюшинным введением комбинации хлоралгидрата и золетила. После наркотизации крысу фиксировали в положении на спине. Шерсть на брюшке тщательно выстригали, кожу обрабатывали 70% раствором этилового спирта. Срединную лапаротомию выполняли от мечевидного отростка длиной 4 см. Печень мобилизовывали посредством пересечения связок. Удаляли левую и медиальную доли после предварительного лигирования сосудов. Лапаротомное отверстие ушивали после санации брюшной полости и контроля гемостаза послойно, узловым швом.

Стимуляцию регенерации печени проводили у животных 4-й группы внутрижелудочным введением дигидрокверцитина в суточной дозе 5,5 мг/кг каждые 46 часов первые 7 суток эксперимента.

Показатель летальности оценивали в экспериментальных группах животных в первые 10 суток после операции. В группе животных с резекцией печени он составил 40%, в группе животных с резекцией печени и введением дигидрокверцетина летальных исходов не было.

Уровень микроциркуляции в печени определяли при помощи оборудования производства компании Biopac systems: полиграфа MP 100 с модулем лазерной допплеровской флоуметрии LDF100C и поверхностного датчика TSD 140 на 2-е, 7-е, 14-е, 21-е и 28 сутки после операции. Регистрацию и обработку результатов лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) производили с помощью программы AcqKnowledge версии 4.2., значения микроциркуляции выражали в перфузионных единицах (ПЕ). Запись кривой уровня микроциркуляции осуществляли по всей поверхности печени в течение 30 секунд в каждой точке. Из полученных значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за уровень микроциркуляции в печени у данного животного. Из полученных значений рассчитывали среднее, которое принимали за уровень микроциркуляции в данной группе животных на данном сроке исследования.

В группе интактных животных уровень микроциркуляции в печени составил 877±17 ПЕ. Результаты оценки уровня микроциркуляции у животных опытных групп представлены в таблице 1.

Среднее значение уровня микроциркуляции в печени ложнооперированных животных на всех сроках не имеет достоверных отличий от такового у интактных крыс.

После резекции печени показатель снижается на 50% и остается на прежнем уровне первые 14 суток. К 21 суткам показатель начинает расти, однако на 28-е сутки среднее значение уровня микроциркуляции в резецированной печени крыс достоверно ниже такового у интактных животных.

Введение дигидрокверцетина способствовало сохранению кровотока в резецированной печени на довольно высоком уровне (показатель снижается на 15%) и восстановлению его на сроке до 28-х суток после резекции.

Выраженность цитолиза оценивали по уровню показателей АлАТ, AcAT и ЛДГ в крови экспериментальных животных на 2-е, 7-е, 14-е 21-е 28-е сутки после операции. Показатели определяли УФ кинетическим методом на автоматизированной системе AU5800 (Beckman Coulter, США).

АлАТ в контрольной группе на 2-е сутки 108±4 МЕ/л - снижается до нормальных показателей к 21 суткам - 38±2 МЕ/л, в группе с дигидрокверцетином на 2-е сутки - 58±2 МЕ/л - нормализуется на 7-е сутки и остается в пределах нормальных значений на всех остальных сроках эксперимента.

АсАТ в контрольной группе на 2-е сутки 184±7 МЕ/л - снижается до нормальных показателей к 21 суткам, в группе с дигидрокверцетином на 2-е сутки - 77±2 МЕ/л - нормализуется на 14-е сутки и остается в пределах нормальных значений на всех остальных сроках эксперимента.

ЛДГ в контрольной группе на 2-е сутки 564±3 МЕ/л - снижается до нормальных показателей к 28 суткам - 250±6 ЕД/л, в группе с дигидрокверцетином на 2-е сутки - 299±8 МЕ/л - нормализуется на 7-е сутки и остается в пределах нормальных значений на всех остальных сроках эксперимента.

Синтетичесую функцию печени оценивали по показателям коагулограммы (АЧТВ, MHO, фибриноген) на 7-е, 14-е, 21-е и 28 сутки после операции на анализаторе CS-2000i (Sysmex, Япония).

На 7-е сутки после резекции печени отмечено снижение синтетической функции, проявляющееся удлинением АЧТВ до 60±1 сек, увеличением MHO до 4±0,2, снижением уровня фибриногена до 1,7±0,002 г/л. Наибольшие изменения показателей выявлены на 21-е сутки (АЧТВ - 75±1 сек, MHO - 6±0,1, фибриноген 0,9±0,003 г/л). На 28-е сутки отмечается их некоторое восстановление (АЧТВ - 55±1 сек, MHO - 4±0,1, фибриноген 1,2±0,002 г/л). Коррекция дигидрокверцетином способствовала менее выраженному снижению синтетической функции печени после ее резекции. Наиболее выраженные изменения показателей были зарегистрированы на 7-е сутки (АЧТВ -42±1 сек, MHO - 2,8±0,02, фибриноген 1,0±0,01 г/л). Показатели восстановились лишь к 28 суткам.

Морфологическое исследование выполняли на материале стандартных участков печени, взятых после выведения животных из эксперимента. Обработку материала производили по стандартной методике с фиксацией в формалине, заливкой в парафин, окраской гематоксилином и эозином. Общеморфологическое и морфометрическое исследования выполняли с применением системы для сканирования и архивирования изображений MiraxDesk.

Масса печени у интактных животных составила 9,2±0,002 г. В группе ложнооперированных животных показатель не имеет достоверных отличий от такового у интактных животных. Масса печени непосредственно после резекции 2,8±0,003 г. Средняя масса печени животных опытных групп на различных сроках эксперимента представлена в таблице 2.

В группе животных с резекцией печени масса печени на 2-е сутки увеличивается в сравнении с массой непосредственно после резекции почти в 2 раза, к 7-м суткам несколько уменьшается, затем начинает увеличиваться, однако на 28-е сутки после резекции достоверно меньше массы печени у интактных крыс. В группе животных с резекцией печени и введением дигидрокверцетина масса печени на 2-е сутки увеличивается ровно в 2 раза, продолжая расти и достигая массы у интактных животных к 21 суткам.

При микроскопии на отдаленных сроках в контрольной группе сохранялось неравномерное кровенаполнение сосудов всех типов, наблюдались очаги зернистой дистрофии гепатоцитов, очаги склерозирования и воспалительной инфильтрации портальных трактов. Восстановление печеночной ткани происходило за счет гипертрофии одноядерных гепатоцитов, полиплоидии и амитотического деления двуядерных гепатоцитов. В группе с введением эритропоэтина на отдаленных сроках нарушений микроциркуляции и признаков повреждения гепатоцитов не выявлено, определяется равномерно выраженная гипертрофия цитоплазмы и ядер гепатоцитов. Восстановление печеночной ткани происходило за счет полиплоидии, амитотического деления двуядерных гепатоцитов и митотического деления одноядерных гепатоцитов, то есть были задействованы все виды регенерации печени. Основная нагрузка приходилась на одноядерные гепатоциты с размером ядра 9 мкм на 2-е и 7-е сутки, что свидетельствовало о стимуляции генетического аппарата клетки.

Полученные результаты позволяют констатировать возможность стимуляции регенерации резецированной печени у крыс дигидрокверцетином.

Способ стимуляции регенерации резецированной печени, отличающийся тем, что резекцию печени осуществляют лабораторному животному на вторые сутки эксперимента в объеме 70%, дигидрокверцитин вводят внутрижелудочно в суточной дозе 5,5 мг/кг каждые 46 часов первые 7 суток эксперимента.
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 121-123 из 123.
17.02.2018
№218.016.2cae

Способ профилактики ишемической нейропатии зрительного нерва карбамилированным дарбэпоэтином в эксперименте

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и офтальмологии, и может быть использовано для профилактики ишемической нейропатии зрительного нерва. Способ включает моделирование ишемической нейропатии зрительного нерва путём ежедневного внутрибрюшинного введения...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002643579
Дата охранного документа: 02.02.2018
17.02.2018
№218.016.2d67

Способ профилактики ретинальной ишемии-реперфузии миноксидилом в эксперименте

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии и офтальмологии, и может быть использовано для профилактики ишемических состояний сетчатки в эксперименте. Способ включает предварительное прекондиционирование лекарственным средством путем однократного внутрижелудочного введения его...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002643671
Дата охранного документа: 05.02.2018
04.04.2018
№218.016.324d

3-(1н-бензимидазол-2-ил)-1,2,2-триметилциклопентанкарбоновая кислота, обладающая кардиопротекторной активностью

Изобретение относится к применению 3-(1Н-бензимидазол-2-ил)-1,2,2-триметилциклопентанкарбоновой кислоты в качестве средства, обладающего кардиопротекторной активностью. Технический результат: выявлены новые свойства известной 3-(1Н-бензимидазол-2-ил)-1,2,2-триметилциклопентанкарбоновой кислоты,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002645356
Дата охранного документа: 21.02.2018
Показаны записи 151-160 из 169.
27.01.2020
№220.017.fa8a

Способ моделирования остеопороза на фоне стрептозотоцин-индуцированного сахарного диабета у крыс

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для изучения патофизиологии остеопороза на фоне сахарного диабета и поиска инновационных препаратов для лечения осложнений сахарного диабета. Способ моделирования остеопороза на фоне...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002712153
Дата охранного документа: 24.01.2020
27.01.2020
№220.017.fade

Способ коррекции ишемии головного мозга субстанцией рапиталама в эксперименте

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и неврологии, и может быть использовано для лечения ишемии головного мозга. Способ включает воспроизведение четырехсосудистой модели ишемии головного мозга путем коагуляции двух вертебральных артерий и временной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002711906
Дата охранного документа: 24.01.2020
26.04.2020
№220.018.1a02

Способ коррекции нарушений микроциркуляции в плаценте карбамилированным дарбэпоэтином при adma-подобной модели преэклампсии

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции нарушений микроциркуляции в плаценте карбамилированным дарбэпоэтином при ADMA-подобной модели преэклампсии. Для этого воспроизводят модель преэклампсии у крыс линии Wistar путём...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002720103
Дата охранного документа: 24.04.2020
21.05.2020
№220.018.1f3d

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции при adma-подобной модели преэклампсии с использованием ацетилсалициловой кислоты

Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной фармакологии Способ коррекции эндотелиальной дисфункции при ADMA-подобной модели преэклампсии, включающий воспроизведение модели преэклампсии у крыс линии Wistar ежедневным с 14 по 20 день беременности внутрибрюшинным...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002721290
Дата охранного документа: 18.05.2020
21.05.2020
№220.018.1f41

Способ моделирования геморрагического инсульта у крыс

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной неврологии. Выполняют отверстие в черепе лабораторного животного в области внутренней капсулы любого из полушарий. Вводят пункционную иглу согласно стереотаксическим координатам на глубину 3 мм. Выполняют деструкцию сосудов и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002721289
Дата охранного документа: 18.05.2020
21.05.2020
№220.018.1f51

Способ коррекции тромбообразования никорандилом при adma-подобной модели преэклампсии

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции тромбообразования при ADMA-подобной модели преэклампсии. Для этого осуществляют воспроизведение модели экспериментальной ADMA-подобной преэклампсии у крыс линии Wistar. При этом...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002721291
Дата охранного документа: 18.05.2020
22.05.2020
№220.018.1fa3

Способ коррекции нарушений микроциркуляции в плаценте производными 2-гидроксифенилтиоацетамидов

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции нарушений микроциркуляции в плаценте. Для этого у лабораторных беременных крыс линии Wistar при моделировании преэклампсии ежедневным с 14 по 20 сутки беременности...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002721554
Дата охранного документа: 20.05.2020
30.05.2020
№220.018.227b

Способ коррекции тромбообразования резвератролом при adma-подобной модели преэклампсии

Изобретение относится к медицине, а именно к способу коррекции тромбообразования при ADMA-подобной модели преэклампсии, который включает воспроизведение ADMA-подобной модели преэклампсии у крыс линии Wistar ежедневным с 14 по 20 день беременности внутрибрюшинным введением...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002722273
Дата охранного документа: 28.05.2020
17.06.2020
№220.018.271b

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции при adma-подобной модели преэклампсии с использованием детралекса

Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной фармакологии. Для коррекции эндотелиальной дисфункции при ADMA-подобной модели преэклампсии воспроизводят модель преэклампсии у крыс линии Wistar ежедневным с 14 по 20 день беременности внутрибрюшинным введением...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002723453
Дата охранного документа: 11.06.2020
25.06.2020
№220.018.2b53

Способ коррекции структурных повреждений в плаценте пептидом, имитирующим альфа-спираль b эритропоэтина при adma-подобной модели преэклампсии

Изобретение относится к области медицины, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции структурных повреждений плацентарных тканей. Для этого осуществляют воспроизведение модели преэклампсии у крыс линии Wistar ежедневным с 14 по 20 сутки беременности...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002724402
Дата охранного документа: 23.06.2020
+ добавить свой РИД