×
27.07.2015
216.013.6853

ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЕМФИГУСА, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К Fas-ЛИГАНДУ

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть

Авторы

Правообладатели

№ охранного документа
0002558260
Дата охранного документа
27.07.2015
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено применение моноклонального антитела против белка лиганда Fas человека (CD95L, или Apo1L, или FasL) или его антиген-связывающего фрагмента для изготовления лекарственного средства для профилактики и/или лечения кожных заболеваний, связанных с акантолизом кератиноцитов, в особенности для профилактики и/или лечения пузырчатки (пемфигуса), где антитело содержит аминокислотные последовательности CDR антитела NOK-2, F919-7-3, F918-9-4 или F919-9-18 или продуцируется гибридомой ATCC PTA-5045, ATCC PTA-5533, ATCC PTA-5534 или ATCC PTA-5535. Применение антител по изобретению или их антиген-связывающих фрагментов обеспечивает эффективное блокирование механизмов, приводящих к пемфигусным поражениям. 4 н. и 3 з.п. ф-лы, 14 ил.
Реферат Свернуть Развернуть

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к применению антагонистов Fas-лиганда человека (также называемого CD95L или Apo1L и обозначенного в этом документе как FasL), в частности, к применению гуманизированных антител к FasL для профилактики и/или лечения заболеваний кожи, ассоциированных с акантолизом кератиноцитов, в частности, для профилактики и/или лечения пемфигуса.

Уровень техники

Пемфигус представляет собой аутоиммунное буллезное состояние кожи, которое характеризуется потерей адгезии между кератиноцитами, вызванной аутоантителами, направленными против десмосомальных белков (десмоглеинов, dsg). Пемфигус широко распространен в мире с частотой возникновения заболевания, составляющей 1-5 случаев на 100000 в год, и преимущественно поражает женщин.

Пемфигус характеризуется потерей адгезии между супрабазальными кератиноцитами, которые становятся округлыми в процессе, известном как акантолиз. Патогенез пемфигуса подвергается значительному пересмотру, в основном из-за того, что помимо антител к десмоглеинам акантолиз способна вызывать новая группа антител к холинэргическим рецепторам (Kalish, 2000). Кроме того, было показано, что стерическими препятствиями, возникающими при связывании антиген-антитело, самими по себе нельзя объяснить образование пузырей (Kitajima, 2002). Кроме того, было показано, что образование десмосом не подавляется связыванием пемфигусных аутоантител (PVIgG) при заболевании пемфигусом, притом что десмосомальные связи распадаются через 24-36 часов после обработки аутоантителами PvIgG. В это время происходит последовательная передача сигналов, запускаемых PVIgG.

Эти наблюдения предполагают роль апоптоза при пемфигусе. Действительно, пемфигус представляет собой заболевание, возникающее в результате утраты клеточной адгезии (Payne AS et al., 1978), а апоптоз может возникать в связи с разъединением клеток (Marconi et al, 2004). Эти идеи полностью подтверждаются обнаружением апоптоза в коже, поврежденной пемфигусом. В частности, акантолитические клетки экспрессируют основные маркеры апоптоза (Wang X. et al., 2004). Более интересно, было обнаружено, что ядра, меченные с помощью TUNEL, также связаны со сводом пузыря, что свидетельствует о присутствии апоптотических клеток в коже, окружающей повреждения, перед разъединением. Кроме того, апоптотические клетки, экспрессирующие Ig и активированную каспазу-8, обнаружены на краях поражения, на поверхностях, где не видно разрушения межклеточных контактов (Wang X et I, 2004). Эти результаты показывают, что при пемфигусе в кератиноцитах перед акантолизом происходит апоптоз.

Апоптоз играет фундаментальную роль в регулировании клеточного гомеостаза и вовлечен во многие патофизиологические процессы. Апоптоз может сопровождать как разъединение клеток друг от друга (Rezgui et al., 2000; Bergin et al., 2000), так и утрату взаимодействия клеток и матрикса (Giancotti and Ruoslahti, 1999).

Fas (или FasR) является членом суперсемейства TNF-рецепторов, который после связывания с Fas-лигандом (FasL), запускает апоптоз во многих клеточных системах (Sharma et al., 2000). Внутриклеточный сигнал апоптоза, вызываемого Fas-FasL, осуществляется посредством привлечения целого ряда адапторных молекул, таких как FADD (Fas-ассоциированный домен смерти) и FLICE (FADD-подобная ICE, каспаза 8), которая в свою очередь ингибируется FLIP (белком, ингибирующим FLICE) (Juo et al, 1998). Взаимодействие Fas-FasL вовлечено в патологические механизмы некоторых иммунновоспалительных и инфекционных состояний, таких как AIDS (Bahr et al., 1997) и системная красная волчанка (Kovacs et al., 1997). Заболевания кожи, характеризующиеся вовлечением метаболического пути Fas-FasL, включают острую реакцию «трансплантант против хозяина», токсичный эпидермальный некролиз и меланому (Wehrii et al., 2000). Кроме того, сообщалось, что поражения, сходные с акантолитическими, обнаруживают в культуре кератиноцитов, обработанной и PVIgG, и антителами к FasR, притом что PvIgG индуцирует кластеризацию FasR, FasL и каспазы-8 на клеточной мембране за несколько часов до возникновения поражений (Wang X. et al., 2004). Кроме того, сообщалось, что ингибитор каспаза-1-подобной протеазы в значительной степени блокирует образование пузырей в модели пемфигуса на мышах (Li et al., 2006). Вместе эти результаты показывают, что FasL и внешний апоптотический путь играют решающую роль в механизмах, лежащих в основе акантолиза.

Независимо от природы пемфигусных аутоантител, воздействие PVIgG активирует экспрессию нескольких проапоптотических генов, включающих FasL, за много часов до акантолиза. Кроме того, внутривенное применение IgG (IVIgG) предотвращает индуцируемую PvIgG активацию FasL и апоптоз в кератиноцитах. IVIgG также предотвращает акантолиз и апоптоз in vivo (Arredondo J. et al., 2005).

Без лечения смертность от вульгарного пемфигуса достигает 100%. Ранняя системная терапия необходима для сдерживания пемфигуса, но побочные эффекты системной терапии являются главным осложнением. Лечение включает введение кортикостероидов, лекарственных средств, содержащих золото, противовоспалительного средства дапсона или лекарственных средств, которые подавляют иммунную систему (таких как азатиоприн, метотрексат, циклоспорин, циклофосфамид или микофенолата мофетил). Наиболее традиционным в настоящее время лечением пемфигуса является применение стероидов, которые необходимо вводить в течение всей жизни и которые могут вызывать тяжелые побочные эффекты. Большая часть пациентов, страдающих пемфигусом, умирают от этих побочных эффектов. Также эффективны некоторые антибиотики, в частности, миноциклин и доксициклин. Временами применяют внутривенное введение иммуноглобулина (IVIg). Плазмаферез представляет собой процесс, с помощью которого плазму, содержащую антитела, удаляют из крови и заменяют ее жидкостями, вводимыми внутривенно, или плазмой донора. Плазмаферез можно применять в дополнение к системным лекарственным средствам, чтобы снизить количество антител в кровотоке. Также в разработке находятся несколько новых молекул: микофенолата мофетил, PI-0824, PRTX-100 и антитела к CD20 являются лекарственными средствами, подавляющими иммунитет, которые воздействуют на Т- и В-клетки.

В настоящее время уровень смертности все еще колеблется в диапазоне от 5 до 25%; наиболее часто смерть вызвана инфекцией, а долгосрочная терапия, подавляющая иммунитет (в основном кортикостероидами), является одним из важнейших факторов, по-прежнему вызывающим высокий уровень смертности. Иммуноглобулин может вызывать некоторое краткосрочное улучшение, но, как оказалось, не приводит к длительным ремиссиям, а его цена делает его долгосрочное применение нецелесообразным.

Также существует несколько возражений против применения плазмафереза. Пациенты, ослабленные применением преднизона или других средств, подавляющих иммунитет, и подвергающиеся плазмаферезу, находятся в группе повышенного риска внезапной смерти от сепсиса. Кроме того, лечение очень дорогое, а для получения терапии необходим 2-недельный срок госпитализации. Таким образом, из-за риска внезапной смерти от сепсиса и высокой стоимости Плазмаферез показан только в самых трудных, не поддающихся лечению случаях, когда у пациента есть несомненный риск умереть от самого заболевания.

Раскрытие изобретения

Целью настоящего изобретения является обеспечение терапевтического средства для лечения пемфигуса. Усовершенствование нового лекарственного средства, которое блокирует FasL, позволит полностью предотвратить разъединение клеток и возникновение поражений кожи.

В основном настоящее изобретение относится к лечению заболевания кожи, ассоциированного с акантолизом кератиноцитов, с помощью введения антагониста FasL. Антагонисты FasL могут быть выбраны из антител к FasL, в частности из гуманизированных или человеческих антител к FasL, из эффекторных молекул, являющихся нуклеиновыми кислотами, которые воздействуют на экспрессию Fas, таких как антисмысловые молекулы или молекулы, способные к RNA-интерференции, например, молекулы siRNA; из молекул растворимого рецептора Fas, мутеинов, являющихся антагонистами FasL, и низкомолекулярных химических соединений, ингибирующих взаимодействие Fas-FasL. Антагонисты FasL предотвращают апоптоз кератиноцитов и последующее межклеточное разъединение (акантолиз). Таким образом, антагонисты FasL, в частности, подходят для профилактики и/или лечения пемфигуса, например, для профилактики и/или лечения кожно-слизистого пемфигуса.

Настоящее изобретение относится к лекарственному средству, содержащему, по меньшей мере, одно соединение, подавляющее биологические эффекты FasL. Выражение «соединение, подавляющее биологические эффекты FasL», используемое в этом документе, относится ко всем соединениям, которые способны полностью или, по меньшей мере, по существу блокировать или нейтрализовать биологические эффекты FasL. Например, подавляющий или нейтрализующий эффект может быть основан на подавлении связывания FasL с его природным рецептором и, следовательно, на подавлении вызываемой таким образом передачи сигнала. Этого можно достигнуть, например, путем использования связывания антител с FasL самим по себе или с растворимыми рецепторами, имитирующими Fas, или с мутеинами, являющимися антагонистами FasL, блокируя, таким образом, связывание FasL с клеточными рецепторами. siRNA, препятствуя экспрессии Fas или FasL, будут блокировать систему Fas/FasL.

Терапия с использованием антагонистов FasL является или монотерапией, или комбинированной терапией с применением других лекарственных средств, пригодных для лечения пемфигуса или других заболеваний кожи, в частности, заболеваний, описанных выше. Например, комбинированная терапия антагонистами FasL и стероидами может обеспечить радикальное снижение доз стероидов.

В предпочтительном воплощении настоящего изобретения обеспечивают терапевтическое средство для лечения пемфигуса, включающее антитело к Fas-лиганду человека или его активный фрагмент в качестве активного ингредиента. Антитело предпочтительно является химерным, гуманизированным или человеческим антителом к FasL или антиген-связывающим фрагментом, или производным, например, рекомбинантным одноцепочечным антителом. При необходимости антитело может быть конъюгировано с эффекторными молекулами, например, цитостатическими, цитотоксическими и/или радиоактивными соединениями.

Предпочтительные гуманизированные антитела, пригодные для лечения заболевания кожи, ассоциированного с акантолизом кератиноцитов, в частности, пемфигуса, в соответствии с настоящим изобретением, описаны в патенте WO 1997/002290А1 («Anti-Fas ligand antibodies and assay method using the same antibody») или в патенте WO1998/010070 A1 («Humanized immunoglobulin reacting specifically with Fas Ligand or active fragments thereof and region inducing apoptosis originating in Fas Ligand humanized antibodies»), содержание которых включено в этот документ путем отсылки. Дополнительные предпочтительные гуманизированные антитела, пригодные для лечения заболевания кожи, ассоциированного с акантолизом кератиноцитов, в частности, пемфигуса, в соответствии с настоящим изобретением, описаны в патенте US 7,262,277 («Antagonistic Anti-hFas ligand human antibodies and fragments thereof»), содержание которого также включено в этот документ путем отсылки.

Человеческие или гуманизированные антитела имеют, по меньшей мере, три возможных преимущества для применения при лечении человека по сравнению с мышиными, а в некоторых случаях, с химерными антителами: 1) так как эффекторная часть происходит из антитела человека, она может лучше взаимодействовать с другими частями системы человека; 2) иммунная система человека не способна распознавать каркасный участок или С-участок гуманизированного антитела как чужеродный объект, и, поэтому, образование антител в ответ на такое инъецируемое антитело должно быть более слабым, чем в ответ на полностью чужеродное мышиное антитело или частично чужеродное химерное антитело; 3) инъецируемые гуманизированные антитела предположительно будут обладать большим периодом полувыведения по сравнению с природными человеческими антителами, что позволяет применять меньшие и менее частые дозы.

Другие предпочтительные антагонисты FasL являются молекулами растворимого FasR, включающими внеклеточную растворимую часть Fas-рецептора или модифицированной молекулы, являющейся антагонистом FasL, которая обладает конкурентной или неконкурентной антагонистической активностью. Такие молекулы ингибируют взаимодействия FasL/FasR, в которых FasL связывается с растворимым аналогом рецептора или молекула-антагонист FasL связывается с природным рецептором, ослабляя, таким образом, или полностью устраняя связывание биологически активного FasL с природным рецептором. При лечении с помощью siRNA для определения типа лечения и курса терапии субъекта можно использовать анализ уровней Fas и/или белка FasL, или RNA. Мониторинг уровней Fas и/или белка FasL, или RNA можно применять для предсказания результата лечения и для того, чтобы определить эффективность соединений и композиций, которые модулируют уровень и/или активность некоторых белков Fas и/или FasL ассоциированных с признаком, состоянием или заболеванием. В особо предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению

(i) моноклонального антитела или его антиген-связывающего фрагмента, специфичного к белку Fas-лиганда человека (FasL), где указанное моноклональное антитело включает, по меньшей мере, один вариабельный участок тяжелой цепи и, по меньшей мере, один вариабельный участок легкой цепи, где аминокислотные последовательности участка, определяющего комплементарность (CDRs), тяжелой цепи представляют собой:

(a1) CDR H1: Asn Tyr Trp Ile Glee (SEQ ID NO:1),

(b1) CDR H2: Tyr Leo Tyr Pro Glee Gly Leu Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly (SEQ ID NO:2),

(c1) CDR H3: Tyr Arg Asp Tyr Asp Tyr Ala Met Asp Tyr (SEQ ID NO:3) или

(d1) последовательность, полученную путем замещения 1, 2 или 3 аминокислот в SEQ ID NOs: 1,2 и/или 3

и/или аминокислотные последовательности участков, определяющих комплементарность (CDRs), легкой цепи представляют собой

2) CDR L1: Lys Ser Thr Lys Ser Leu Leu Asn Ser Asp Gly Phe Thr Thy Leu Gly (SEQ ID NO:4),

(b2) CDR L2: Leu Val Ser Asn Arg Phe Ser (SEQ ID NO:5),

(c2) CDR L3: Phe Gln Ser Asn Tyr Leu Pro Leu Thr (SEQ ID NO:6)

или

(d2) последовательность, полученную путем замещения 1, 2 или 3 аминокислот в SEQ ID NOs: 4, 5 и/или 6

или

(ii) антитела или его антиген-связывающего фрагмента, который распознает тот же самый эпитоп FasL человека, что и антитело (i), для изготовления лекарственного средства для профилактики и/или лечения заболевания кожи, ассоциированного с акантолизом кератиноцитов, в частности, пемфигуса.

Во втором особенно предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению

(i) моноклонального антитела или его фрагмента, связывающего антитело, специфичного к белку Fas-лиганда человека (FasL), где указанное моноклональное антитело продуцируют с помощью гибридомной клетки, имеющей No. доступа FERM ВР-5045, или антитела или фрагмента антитела, полученного из нее, или

(ii) моноклонального антитела или его антиген-связывающего фрагмента, который распознает тот же самый эпитоп FasL человека, что и антитело (i), для изготовления лекарственного средства для профилактики и/или лечения заболевания кожи, ассоциированного с акантолизом кератиноцитов, в частности, пемфигуса.

В третьем особенно предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению

(i) моноклонального антитела или его антиген-связывающего фрагмента, специфичного к белку Fas-лиганда человека (FasL), где указанное моноклональное антитело включает, по меньшей мере, один вариабельный участок тяжелой цепи и, по меньшей мере, один вариабельный участок легкой цепи, где аминокислотные последовательности участка, определяющего комплементарность (CDRs), тяжелой цепи представляют собой:

(a1) CDR H1: Glu Tyr Pro Met His (SEQ ID NO:7),

(b1) CDR H2: Met Ile Tyr Thr Asp Thr Gly Glu Pro Ser Tyr Ala Glu Glu Phe Lys Gly (SEQ ID NO:8),

(c1) CDR H3: Phe Tyr Trp Asp Tyr Phe Asp Tyr (SEQ ID NO:9) или

(d1) последовательность, полученную путем замещения 1, 2 или 3 аминокислот в SEQ ID NOs: 7, 8 и/или 9,

и/или аминокислотные последовательности участков, определяющих комплементарность (CDRs), легкой цепи представляют собой

2) CDR L1: Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn (SEQ ID NO:10),

(b2) CDR L2: Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser (SEQ ID NO:11),

(c2) CDR L3: Gln Gln Gly Ser Thr Leu Pro Trp Thr (SEQ ID NO:12)

или

(d2) последовательность, полученную путем замещения 1, 2 или 3 аминокислот в SEQ ID NOs: 10, 11 и/или 12 или

(ii) антитела или его антиген-связывающего фрагмента, который распознает тот же самый эпитоп FasL человека, что и антитело (i), для изготовления лекарственного средства для профилактики и/или лечения заболевания кожи, ассоциированного с акантолизом кератиноцитов, в частности, пемфигуса.

В четвертом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению

(i) моноклонального антитела или его антиген-связывающего фрагмента, специфичного к белку Fas-лиганда человека (FasL), где указанное моноклональное антитело продуцируют с помощью гибридомной клетки, имеющей No. доступа FERM ВР-5533, FERM ВР-5534 и/или FERM BP-5535, или антитела или фрагмента антитела, полученного из нее, или

(ii) моноклонального антитела или его антиген-связывающего фрагмента, который распознает тот же самый эпитоп FasL человека, что и антитело (i), для изготовления лекарственного средства для профилактики и/или лечения заболевания кожи, ассоциированного с акантолизом кератиноцитов, в частности, пемфигуса.

В особенно предпочтительном воплощении настоящее изобретение направлено на применение человеческих антител к FasL, или их антиген-связывающих частей, включающих вариабельный участок легкой цепи и/или вариабельный участок тяжелой цепи, как описано в патенте US 7,262,277, содержание которого включено в этот документ путем отсылки. В частности, предпочтительные человеческие антитела к FasL пригодные для лечения заболевания кожи, ассоциированного с акантолизом кератиноцитов, в соответствии с настоящим изобретением включают вариабельный участок легкой цепи, включающий полипептид с последовательностью, показанной в SEQ ID NO 2 патента US 7,262,277 (включенного в этот документ путем отсылки), и дополнительно включает вариабельный участок тяжелой цепи, включающий полипептид с последовательностью, показанной в SEQ ID NO 10 или 18 патента US 7,262,277 (включенного в этот документ путем отсылки). В частности, изобретение относится к применению человеческого антитела 3Е1 и/или 4G11 к hFas, как описано в патенте US 7,262,277 (включенном в этот документ путем отсылки) для изготовления лекарственного средства для профилактики и/или лечения заболевания кожи, ассоциированного с акантолизом кератиноцитов, в частности, пемфигуса.

В еще одном предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению

(i) моноклонального человеческого антитела или его антиген-связывающего фрагмента, специфичного к белку Fas-лиганда человека (FasL), где указанное моноклональное антитело включает, по меньшей мере, один вариабельный участок тяжелой цепи и, по меньшей мере, один вариабельный участок легкой цепи, где аминокислотные последовательности участков, определяющих комплементарность (CDRs), тяжелой цепи представляют собой:

(a1) CDR H1: Arg His Gly Ile Thr (SEQ ID NO:13) или

(a2) CDR H1: Ser His Gly Ile Ser (SEQ ID NO:14),

(b1) CDR H2: Trp Ile Asn Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Val Gln Gly (SEQ ID NO:15) или

(b2) CDR H2: Trp Ile Asn Ala Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu Gln Gly (SEQ ID NO:16),

(c1) CDR H3: Glu Thr Met Val Arg Gly Val Pro Leu Asp Tyr (SEQ ID NO:17) или

(c2) CDR H3: Glu Thr Met Val Arg Gly Val Pro Cys Asp Tyr (SEQ ID NO:18), или

(d1) последовательность, полученную путем замещения 1, 2 или 3 аминокислот в SEQ ID NOs 13, 14, 15, 16, 17 и/или 18,

и/или аминокислотные последовательности участков, определяющих комплементарность (CDRs), легкой цепи представляют собой

3) CDR L1: Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala (SEQ ID NO:19),

(b3) CDR L2: Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr (SEQ ID NO:20),

3) CDR L3: Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr (SEQ ID NO:21)

или

(d3) последовательность, полученную путем замещения 1, 2 или 3 аминокислот в SEQ ID NOs: 19, 20 и/или 21

или

(ii) антитела или его антиген-связывающего фрагмента, который распознает тот же самый эпитоп FasL человека, что и антитело (i), для изготовления лекарственного средства для профилактики и/или лечения заболевания кожи, ассоциированного с акантолизом кератиноцитов, в частности, пемфигуса.

В завершающем предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению

(i) моноклонального антитела или его антиген-связывающего фрагмента, специфичного к белку Fas-лиганда человека (FasL), где указанное моноклональное антитело продуцируют с помощью гибридомной клетки, имеющей № доступа АТСС РТА-4017 и/или АТСС РТА-4018, или антитела или фрагмента антитела, полученного из нее, или

(ii) моноклонального антитела или его антиген-связывающего фрагмента, который распознает тот же самый эпитоп FasL человека, что и антитело (i), для изготовления лекарственного средства для профилактики и/или лечения заболевания кожи, ассоциированного с акантолизом кератиноцитов, в частности пемфигуса.

Лекарственное средство настоящего изобретения может быть предоставлено в виде фармацевтической композиции вместе с фармацевтически приемлемым носителем. Предпочтительно фармацевтическую композицию вводят с помощью инъекции или инфузии, например, внутривенно, внутриартериально, подкожно, внутрибрюшинно, или с помощью других подходящих способов. Композицию можно вводить местно или системно. Предпочтительно композицию вводят системно.

Фармацевтические композиции, пригодные для применения в изобретении, включают активное средство в количестве, эффективном для достижения намеченной цели. Эффективная доза лекарственного средства настоящего изобретения может быть в диапазоне, составляющем от 0,1 мкг до 100 мг, вплоть до общей дозы, примерно составляющей 1 г в зависимости от способа введения. Фармацевтические композиции можно вводить ежедневно, например, один раз или несколько раз, или каждые 2-4 дня, каждую неделю или один раз в две недели. Лекарственное средство можно вводить в одном единственном цикле лечения, состоящем из введений одного или нескольких лекарственных средств, или в нескольких циклах лечения, каждый из которых состоит из введений одного или нескольких лекарственных средств. Каждый цикл лечения может иметь продолжительность от одного дня до нескольких дней, месяцев или даже лет.

Поэтому в соответствии с настоящим изобретением лекарственное средство также можно применять в комбинированной терапии, по меньшей мере, вместе с одной дополнительной терапией, эффективной против заболевания кожи, ассоциированного с акантолизом кератиноцитов и, в частности, против пемфигуса. Лекарственное средство будут применять или само по себе, или в комбинации с другими лекарственными средствами, подавляющими иммунитет, в частности, со стероидами, чтобы снизить их дозу и/или свести к минимуму их хронические побочные эффекты. При использовании в комбинации лекарственное средство будут предпочтительно вводить на ежемесячной основе. При использовании лекарственного средства самого по себе его предпочтительно будут вводить постоянно в течение временного промежутка, зависящего от каждого индивидуального случая.

Кроме того, настоящее изобретение будет разъяснено более детально с помощью приведенных ниже примеров.

Осуществление изобретения

Примеры

Вначале с помощью окрашивания TUNEL мы оценили наличие апоптоза в эпидермисе кожи, окружающей очаги поражения, в замороженных срезах образцов от пациентов, страдающих пемфигусом и не принимавших лечение. Флуоресцентные образцы анализировали с помощью конфокальной сканирующей лазерной микроскопии. В супрабазальных слоях эпидермиса, окружающего очаги поражения, большая часть кератиноцитов имела признаки апоптоза в сравнении с нормальной кожей (фиг.1).

Чтобы подтвердить наличие апоптоза в пемфигусных поражениях, мы использовали фиксированные формалином и помещенные в парафин биопсии и обнаружили активную форму каспазы-3. Протокол окрашивания осуществляли с помощью системы UltraVision LP Detection System АР Polymer и Fast Red Chromogen (Lab Vision Corporation, CA, USA) в соответствии с инструкцией фирмы-производителя. Визуализацию проводили с помощью таблеток Fast Red в нафтол-фосфатном субстрате. В пемфигусных образцах мы обнаружили, что фрагмент каспазы-3 локализован и в своде, и в основании пузыря, а некоторые клетки были позитивными в эпидермисе, окружающем очаги поражения (фиг.2). По-видимому, этот результат указывает на то, что клеточная гибель кератиноцитов происходит до разъединения кератиноцитов, приводящего к акантолизу.

Так как апоптотические кератиноциты широко представлены при пемфигусе, мы решили исследовать, способна ли сыворотка крови больных пемфигусом вызывать индукцию апоптоза в нормальных кератиноцитах человека. С этой целью кератиноциты высевали на предметных стеклах в камере и выращивали в среде, не содержавшей сыворотку (KGM), до состояния преконфлюэнтности. Клетки затем выращивали в минимальной среде для кератиноцитов и обрабатывали в течение 48 часов, добавляя 25% сыворотки как от пациентов, не принимавших лечение, так и пациентов, которых лечили системными кортикостероидами. В качестве контролей использовали сыворотку крови здоровых субъектов. Апоптоз оценивали с помощью TUNEL-окрашивания in situ. Оценивали примерно 100 клеток, в областях, выбранных случайным образом, и подсчитывали процент TUNEL-позитивных клеток. Сыворотка крови больных пемфигусом, но не сыворотка крови здоровых субъектов или пациентов, подвергнутых лечению стероидами, вызывала апоптоз в кератиноцитах человека (фиг.3 А-В).

Так как система Fas/FasL вовлечена во многие апоптотические процессы также и на уровне кожи (Wehrli et al, 2000), мы измерили уровни FasL в сыворотке крови у пациентов, страдающих пемфигусом, с помощью двухцентрового ферментативного иммуноанализа (ELISA). Сывороточную концентрацию определяли с помощью поглощения при 450 нм против стандартного рекомбинантного белка FasL человека. Уровни FasL были очень высокими в сыворотке пациентов, не принимавших лечение, и находились ниже предела обнаружения в сыворотке крови пациентов, которых лечили кортикостероидами или в сыворотке крови здоровых субъектов. В качестве позитивного контроля применяли сыворотку пациентов с HBV (фиг.4А). У одного пациента уровни FasL прогрессивно снижались при системной терапии стероидами (фиг.4В).

Так как FasL содержался в высоких количествах в сыворотке крови больных пемфигусом, мы следили за экспрессией его родственного рецептора FasR. С этой целью мы применяли фиксированные формалином и помещенные в парафин биопсии и обнаружили активную форму каспазы-3. Протокол окрашивания осуществляли с помощью системы UltraVision LP Detection System АР Polymer и Fast Red Chromogen (Lab Vision Corporation, CA, USA) в соответствии с инструкцией фирмы-производителя. Визуализацию проводили с помощью таблеток Fast Red в нафтол-фосфатном субстрате. В то время как в нормальной коже FasR экспрессировался только в базальных кератиноцитах, в очагах поражения при активном пемфигусе FasR детектировали как в базальных, так и в супрабазальных клетках. Больший интерес вызывало то, что при кожно-слизистом пемфигусе (РМС) FasR, по-видимому, экспрессируется по всей толще слоев эпидермиса и даже до образования пузырей (фиг.5).

FasL является одним из спусковых механизмов внешнего активируемого каспазой-8 апоптотического пути. Поэтому мы решили оценить, имеет ли этот путь значение в апоптозе при пемфигусе. С этой целью сыворотку крови пациентов предварительно обрабатывали нейтрализующим антителом к FasL или ингибитором каспазы-8, и добавляли к культурам кератиноцитов. Кератиноциты выращивали в KGM и обрабатывали сывороткой крови больных пемфигусом, или сывороткой крови пациентов, не принимавших лечение. Сыворотку предварительно обрабатывали нейтрализующим антителом к FasL (2,5 мг на мл в течение 30 минут) или ингибитором каспазы-8 Z-IETD-FMK (100 мкМ в течение 30 минут). Апоптоз оценивали по TUNEL-окрашиванию. Добавление нейтрализующего антитела к FasL или ингибитора каспазы-8 частично предотвращало апоптоз кератиноцитов, вызываемый сывороткой крови больных пемфигусом (фиг.6).

Кроме того, кератиноциты обрабатывали как на фиг.6 и добавляли или антитело к FasL, или иммуноглобулины, не имеющими отношение к FasL. Клетки затем гомогенизировали в буфере RIPA для вестерн-блоттинга. Мембраны инкубировали с человеческими антителами к каспазе-8 или к β-актину. Относительную интенсивность полос на авторадиограммах количественно анализировали с помощью сканирующей лазерной денситометрии. Результаты, показали, что каспаза-8 была в значительной степени активирована в кератиноцитах, обработанных сывороткой крови больных пемфигусом, по сравнению с необработанными клетками, тогда как гидролиз каспазами частично ингибировался в результате предварительной обработки антителом к FasL (фиг. 7).

Вместе эти результаты свидетельствуют о том, что сыворотка крови больных пемфигусом вызывает апоптоз кератиноцитов с помощью внешнего апоптотического пути, запускаемого системой Fas/FasL.

Недавние исследования показали, что компоненты адгезивного комплекса кадгерин-катенин в эпителиальных адгезионных контактах являются мишенями для каспаз в процессе апоптоза (Weiske et al., 2001). Чтобы оценить, способен ли апоптотический путь, индуцируемый Fas/FasL, вызывать разделение десмосом, мы обрабатывали в течение 72 часов конфлюэнтные кератиноциты, культивируемые в KGM в присутствии 1,8 мМ CaCl2, сывороткой крови больных пемфигусом, подвергавшихся или не подвергавшихся терапии. Экстракты белков из культур анализировали с помощью вестерн-блоттинга, используя антитела к Dsg1 и Dsg3. В качестве внутреннего контроля применяли β-актин. Мы обнаружили, что сыворотка крови больных пемфигусом способна расщеплять Dsg1 и Dsg3. В частности, сыворотки крови пациентов, не принимавших лечение, но не пациентов после терапии стероидами, в значительной степени расщепляли Dsg1 и Dsg3. (фиг.8).

Что наиболее важно, обработка кератиноцитов увеличивающимися количествами FasL (0,1, 10, 100 нг/мл) в течение 72 часов, приводила к расщеплению dsgs дозо-зависимым способом. Экстракты белков из культуры анализировали с помощью вестерн-блоттинга, используя антитела к Dsg1 и Dsg3, В качестве внутреннего контроля применяли β-актин. Такие дозы соответствуют дозам, обнаруживаемым в сыворотке крови больных пемфигусом (фиг.9)

Принимая во внимание, что FasL играет важную роль в патогенезе пемфигуса, мы анализировали антитело к FasL (NOK2, антитело, продуцируемое клеточной линией гибридомы NOK2, код доступа № FERM ВР-5045). Конфлюэнтные кератиноциты, культивируемые в KGM с 1,8 мМ CaCl2, обрабатывали в течение 72 часов: 1. только KGM; 2. антителом к FasL (NOK2, 15 мкг/мл), 3. FasL (500 нг/мл); 4. FasL + антителом к FasL. Мы предоставляем доказательство того, что антитело к FasL (NOK2) предотвращает расщепление dsg, вызываемое FasL. Мы также показываем, что антитело к FasL (NOK2) ингибирует апоптоз, вызываемый каспазой-8 (фиг.10А). Фиг.10В показывает, что антитело к FasL (NOK2) предотвращает межклеточное разъединение, вызываемое FasL, т.е. акантолиз.

Чтобы дополнительно подтвердить центральную роль FasL, мы применили другие антитела к FasL (F918-7-3, антитело, продуцируемое клеточной линией гибридомы с кодом доступа № FERM BP-5533; F918-7-4, антитело, продуцируемое клеточной линией гибридомы с кодом доступа No. FERM BP-5534; F919-9-18, антитело, продуцируемое клеточной линией гибридомы с кодом доступа № PERM BP-5535). Конфлюэнтные кератиноциты, культивируемые в KGM с 1,8 мМ CaCl2, обрабатывали в течение 72 часов: только KGM; рекомбинантным FasL (50 нг/мл); гибридомной средой, разведенной 1:1 в KGM; FasL + гибридомной средой в различных разведениях в KGM. Мы предоставляем доказательство того, что антитела к FasL предотвращают расщепление dsg3, вызываемое FasL, дозо-зависимым способом (фиг.11А и фиг.11В), ингибирование активации апоптоза, вызываемого каспазой-8 (фиг.11А). Фиг.11С показывает, что антитело к FasL, содержащееся в среде из клеточной линии гибридомы FERM BP-5535, предотвращает межклеточное разъединение, вызываемое FasL, т.е. акантолиз.

Чтобы исследовать, вызывает ли внешний апоптотический путь расщепление dsg, мы предварительно обрабатывали конфлюэнтные кератиноциты ингибитором каспазы-8 Z-IETD-FMK (100 мкМ в течение 30 минут) или антителом к FasL (NOK2, 15 мкг/мл). Затем клетки инкубировали в течение 72 часов с сывороткой крови здоровых субъектов или пациентов, страдающих пемфигусом и не принимавших лечение. Экстракты белков из культур анализировали с помощью вестерн-блоттинга, используя антитела к Dsg3 и антитело к каспазе-8. Винкулин применяли в качестве внутреннего контроля (фиг.12А). Фиг.12В показывает, что разъединение клеток (т.е. акантолиз) предотвращается антителом к FasL или ингибитором каспазы-8. Эти результаты указывают на то, что подавление апоптотического пути, активируемого FasL или каспазой-8, предотвращает как активацию каспазы-8, так и расщепление dsg, и блокирует, таким образом, акантолиз.

В заключении мы показали, что FasL проявляет двойную активность, активируя как внешний апоптотический путь, опосредованный каспазой-8, так и расщепление Dsg. В соответствии с нашей работой Wang и соавторы (Wang et al., 2004) предположили, что апоптоз может быть причиной явления акантолиза. Они показали, что PV-IgO и антитело к Fas-рецептору (anti-FasR) вызывают поражения in vitro сходным путем, приводящим к: (1) секреции растворимого FasL; (2) повышенным количествам FasR, FasL (растворимого и мембранного), белков Вах и р53; (3) снижению уровня клеточного Вс1-2; (4) обогащению каспазой-8 и активации каспаз 1 и 3; (5) совместной агрегации FasL и FasR с каспазой-8 в мембранном сигнальном комплексе, индуцирующем клеточную гибель (DISC). Поэтому сигнальный путь клеточной гибели, опосредованный Fas, по-видимому, вовлечен в образование очагов поражений.

Для изучения пемфигуса долго и широко применялась хорошо обоснованная модель на животных. Пассивная доставка PVIgG в неонатальных мышей вызывала разъединение клеток и образование пузыря. Эту модель применяли, чтобы оценить вовлечение апоптоза и FasL в патогенез пемфигуса. Мы подкожно инъецировали PVIgG (5 мг/г/раз в две недели), очищенные из сыворотки крови пациентов, новорожденным мышам C57BL/6N CrI. В качестве контролей использовали нормальных новорожденных мышей, обработанных IgG, очищенными из сыворотки крови здоровых субъектов (NIgG). Животных умерщвляли через 20 часов после инъекции.

Окрашивание гематоксилином и эозином показывает, что пузырь развивается только у мышей, обработанных PVIgG, но не у мышей, обработанных нормальными человеческими IgG (фиг.13А). Апоптоз обнаруживали или с помощью TUNEL, или по активации каспазы-3 только у мышей, обработанных PVIgG (фиг.13В).

Чтобы оценить роль FasL in vivo, мышей обрабатывали с помощью PVIgG или PVIgG вместе с антителом к FasL (клон MFL3, антитело, специфичное для мыши). Антитело к FasL (40 мкг/мышь) вводили за 3 часа до инъекции PVIgG, и оно предотвращало образование пузыря у мышей, как было показано с помощью окрашивания Н & Е. Кроме того, протяженность щелей у мышей, обработанных антителом к FasL, была значительно снижена (фиг.14).

В заключении мы показали, что FasL проявляет двойную активность, активируя как внешний апоптотический путь, опосредованный каспазой-8, так и расщепление Dsg. Что наиболее важно, блокирование FasL защищает от акантолиза in vitro и in vivo.

Список литературы

Aoudjit F and Vuori K: Matrix attachment regulates FAS-induced apoptosis in endothelial cells: a role for c-FLIP and implications for anoikis. J Cell Biol 152: 633-643, 2001

Arredondo J et al Am J Pathol 167:1531-1544, 2005

Bahr GM, Capron A, Dewulf J, Nagata S, Tanaka M, Bourez JM, Mouton Y. Elevated serum level of Fas ligand correlates with the asymptomatic stage of human immunodeficiency virus infection. Blood 90:896-898, 1997

Bergin E, Levine JS, Koh JS, Lieberthal W: Mouse proximal tubular cell-cell adhesion inhibits apoptosis by a cadherin-dependent mechanism. Am J Physiol Renal Physiol 278:F758-F768, 2000

Du, Z., et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 1996 226, 595-600

Frisch SM; Evidence for a function of death-receptor-related, death-domain-containing proteins in anoikis. Current Biol 9:1047-1049, 1999

Frisch SM, Francis H: Disruption of epithelial cell-matrix interactions induces apoptosis. J Cell Biol 124:619-626, 1994

Frisch SM, Screaton RA: Anoikis mechanisms. Curr Opin Cell Biol 13:555-562, 2001

Giancotti FG1 Ruoslahti E: Integrin signaling. Science 285: 1028-1032, 1999

Gniadecki R, Jemec GBE, Thomsen BM, Hansen M: Relationship between keratinocyte adhesion and death: anoikis in acantholytic diseases. Arch Dermatol Res 290:528-532, 1998

Grossman J, Walther K, Artinger M, Kiessling S, Scholmerich J: Apoptotic signaling during initiation of detachment-induced apoptosis ("anoikis") of primary human intestinal epithelial cells. Cell Growth & Diff 12:147-155, 2001

Jolles S, Hughes J, Whittaker S: Dermatological uses of high-dose intravenous immunoglobulin. Arch Dermatol 134:80-86, 1998

Juo P, Kuo CJ, Yuan J, Blenis J: Essential requirement for caspase-8/FLICE in the initiation of the Fas-induced apoptotic cascade. Curr Biol 8: 1001-1008, 1998

Kalish RS: pemphigus vulgaris: the other half of the story. J Clin Invest 106: 1433-1435, 2000

Kitajima Y: Mechanisms of desmosome assembly and disassembly. Clin Exp Dermatol. 27:684-90, 2002

Kovacs В, Liossis SN, Dennis GJ, Tsokos GC: Increased expression of functional Fas ligand in activated T-cells from patients with systemic lupus erythematosus. Autoimmunity 25:213-221, 1997

Lee, J., et al. Endocrinology, 1997, 138, 2081-2088

Li N, Zhao M, Liu Z, Diaz LA: Pathogenic role of apoptosis in experimental pemphigus. J Invest Dermatol 126: 173 Abstract, 2006

Marconi A, Atzei P, Panza C, Fila C, Tiberio R, Truzzi F, Wachter T, Leverkus M, Pincelli C: FLICE/caspase-8 activation triggers anoikis induced by βi integrin blockade in human keratinocytes. J Cell Sci 117: 5815-5823, 2004

Marconi A, Vaschieri C, Zanoli S, Giannetti A, Pincelli C Nerve growth factor protects human keratinocytes from ultraviolet-B-induced apoptosis. J Invest Dermatol 113:920-927, 1999

Nishimura S, Adachi M, Ishida T, Matsunaga T, Uchida H, Hamada H, Imai K: Adenovirus-mediated transfection of caspase-8 augments anoikis and inhibits peritoneal dissemination of human gastric carcinoma cells. Cancer Res 61:7009-7014, 2001

O'Connell, J., et al. J. Exp. Med., 184, 1075-1082, 1996

Payne AS Curr Opin Cell Biol 16: 536-543, 2004

Pincelli C, Haake AR, Benassi L, Grassilli E, Magnoni C, Ottani D, Polakowska R, Franceschi C, Giannetti A Autocrine nerve growth factor protects human keratinocytes from apoptosis through its high affinity receptor (trk): a role for bcl-2. J Invest Dermatol 109: 757-764, 1997

Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 (1989), 10029, and Verhoeyan et al., Science 239 (1988), 1534

Reed JC: Mechanisms ofapoptosis. Am J Pathol 157:1415-1430

Rezgui SS, Honore S, Rognoni J-B, Martin P-M, Penel C: Up-regulation of α2β1 integrin cell-surface expression protects A431 cells from epidermal growth factor-induced apoptosis. Int J Cancer 87: 360-367, 2000

Rytomaa M, Martins LM, Downward J: Involvement of FADD and caspase-8 signalling in detachment-induced apoptosis. Current Biol 9:1043-1046, 1999

Sharma K, Wang RX, Zhang LY, Yin DL, Luo XY, Solomon JC, Jiang RF, Markos K, Davidson W, Scott DW, Shi YF: Death the Fas way: regulation and pathophysiology of Fas and its ligand. Pharmacol Ther. 88:333-347, 2000

Tiberio R, Marconi A, Fila C, Fumelli C, Pignatti M, Krajewski S, Giannetti A, Reed JC, Pincelli C: Keratinocytes enriched for stem cells are protected from anoikis via an integrin signaling pathway, in a Bcl-2 dependent manner. FEBS Letters 26318:1-6, 2002

Turley, J. M., et al. Cancer Res., 1997, 57, 881-890

Viard I, Wehrli P, Bullani R, Schneider P, Holler N, Salomon D, Hunzinker T, Saurat J-H, Tschopp J, French L: Inhibition of toxic epidermal necrolysis by blockade of Fas with human intravenous immunoglobulin. Science 282:490-493, 1998

Wang X. et al: Possible apoptotic mechanism in epidermal cell acantholysis induced by pemphigus vulgaris autoimmunoglobulins Apoptosis 2004; 9: 131-143

Wehrii P, Viard I, Bullani R, Tschopp J, French LE. Death receptors in cutaneous biology and disease. J Invest Dermatol 115:141-148, 2000

Weiske J, Schoneberg T, Schroder W, Hatzfeld M, Tauber R, Huber O: The fate of desmosomal proteins in apoptotic cells. J Biol Chem 276:41175-41181, 2001

Yang, Y, et al., J. Exp. Med., 1995, 181, 1673-1682

Yu, W. et al. Cancer Res., 1999, 59, 953-961.


ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЕМФИГУСА, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К Fas-ЛИГАНДУ
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЕМФИГУСА, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К Fas-ЛИГАНДУ
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЕМФИГУСА, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К Fas-ЛИГАНДУ
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЕМФИГУСА, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К Fas-ЛИГАНДУ
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЕМФИГУСА, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К Fas-ЛИГАНДУ
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЕМФИГУСА, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К Fas-ЛИГАНДУ
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЕМФИГУСА, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К Fas-ЛИГАНДУ
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЕМФИГУСА, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К Fas-ЛИГАНДУ
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЕМФИГУСА, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К Fas-ЛИГАНДУ
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЕМФИГУСА, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К Fas-ЛИГАНДУ
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЕМФИГУСА, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К Fas-ЛИГАНДУ
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЕМФИГУСА, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К Fas-ЛИГАНДУ
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЕМФИГУСА, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К Fas-ЛИГАНДУ
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЕМФИГУСА, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К Fas-ЛИГАНДУ
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЕМФИГУСА, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К Fas-ЛИГАНДУ
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЕМФИГУСА, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К Fas-ЛИГАНДУ
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЕМФИГУСА, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К Fas-ЛИГАНДУ
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЕМФИГУСА, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К Fas-ЛИГАНДУ
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЕМФИГУСА, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К Fas-ЛИГАНДУ
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-1 из 1.
20.07.2015
№216.013.62b7

Средства для лечения пузырчатки, содержащие антитела против лиганда fas

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено применение моноклонального антитела против белка лиганда Fas человека (CD95L, или Apo1L, или FasL) или его антигенсвязывающего фрагмента для изготовления лекарственного средства для профилактики и/или лечения кожных заболеваний,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002556818
Дата охранного документа: 20.07.2015
Показаны записи 1-1 из 1.
20.07.2015
№216.013.62b7

Средства для лечения пузырчатки, содержащие антитела против лиганда fas

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено применение моноклонального антитела против белка лиганда Fas человека (CD95L, или Apo1L, или FasL) или его антигенсвязывающего фрагмента для изготовления лекарственного средства для профилактики и/или лечения кожных заболеваний,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002556818
Дата охранного документа: 20.07.2015
+ добавить свой РИД