Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ МОНИТОРИРОВАНИЯ МИКРОСОСУДОВ БРЫЖЕЙКИ У ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ С ПОМОЩЬЮ БИОМИКРОСКОПИИ

Изобретение относится к экспериментальной медицине и биологии и может быть использовано при прижизненном исследовании микроциркуляции микрососудов в брюшной полости лабораторных животных.

Одним из основных способов изучения микроциркуляции, т.е. микрососудистого звена кровообращения, является биомикроскопия. Любой вид биомикроскопии требует выполнения следующих основных условий: обездвиживания животного (анестезия), надежной иммобилизации микроскопируемой области, содержания ее в максимально возможных физиологических условиях и регистрацию наблюдаемых явлений.

Для исследования микроциркуляции микрососудов брыжейки лабораторных животных используют методику, включающую в себя выделение кишечной петли, например, через небольшой парамедиальный разрез справа на уровне нижней трети живота, с последующим размещением брыжеечного сегмента в камерах для кишечной петли различной конструкции или на световоде термостатируемых столиков. Предупреждение высыхания исследуемого участка осуществляется путем орошения физиологическими растворами (A.M. Чернух, П.Н. Александров, О.В. Алексеев. Микроциркуляция / под общей редакцией A.M. Чернуха. - М.: Медицина, с.12-13, 1975).

Известен способ для исследования состояния брыжейки мелких и средних животных (мышь, крыса), заключающийся в том, что занаркотизированное подопытное животное располагают на столике, температура которого поддерживается на физиологическом уровне. Затем производят срединную лапаротомию, извлекают часть тонкой кишки с брыжейкой, которые расправляются на столике и орошаются теплым раствором с помощью специальных систем подачи и подогрева орошаемого раствора. Далее используется методика исследования микроциркуляции с определением скорости лимфатического дренажа. С помощью системы мониторинга, представляющей собой установленный на штативе микроскоп с видеокамерой, в режиме реального времени наблюдают за развитием процесса и сохраняют эти сведения в памяти компьютера (RU 2465833, А61В 10/00, 2012).

Известен способ биомикроскопии капилляров брыжейки мелких лабораторных животных (SU 1391638, A61D 3/00, 1988). Способ заключается в том, что животное фиксируют на столике и вскрывают брюшную полость. Петлю кишки проводят через отверстие в камере и фиксируют на кольце с шипами, герметично соединяют брюшную полость с камерой, в которую наливают необходимый раствор. Устройство устанавливают на предметный столик микроскопа и выполняют биомикроскопию как обычно.

Известен способ прижизненного микроскопирования брыжейки, для реализации которого используют термостатическую камеру, столик и ванночку для физиологического раствора, в дно которой встроен световод из кварцевого стекла прямоугольной формы, и накрытую полусферой из прозрачного полиэтилена или резины, образующих камеру. Устройство монтируют на предметном столике микроскопа (SU 745498, А61В 1/06, 1980). Способ заключается в том, что на подставку помещают находящееся под наркозом животное. Через разрез в передней брюшной стенке выводят исследуемый внутренний орган (например, брыжейку тонкой кишки), который располагают на специальной площадке прозрачной эластичной камеры, заполненной теплой циркулирующей жидкостью. Для предупреждения высыхания исследуемого органа его дополнительно орошают физиологическим раствором или смазывают вазелиновым маслом.

В другом варианте этого способа исследуемый орган размещают на световоде, состоящем из стержня с резьбой и набором усеченных конусов, выполненных из оптически прозрачного материала, большие основания которых образуют площадку для размещения микроскопируемого органа (SU 980687, А61В 1/06, 1982).

Данные методики имеют ряд ограничений, которые связаны с необходимостью извлечения кишечной петли из брюшной полости и помещения ее в специальную камеру, в которой необходимо поддержание постоянной температуры и влажности путем орошения физиологическими растворами, что резко сокращает время наблюдения и повышает риск инфицирования кишечной петли. Кроме того, не исключено механическое повреждение исследуемого участка при манипуляциях из-за возможности прилипания к поверхности камеры и световода объекта исследования, а также перегиба сосудов. Эти факторы могут способствовать искажению результатов исследования.

Наиболее близким (прототипом) является способ, изложенный в патенте (RU 2465833, А61В 10/00, 2012).

Задачей изобретения является усовершенствование данной методики с целью проведения исследования в более физиологических условиях.

Технический результат заключается в предотвращении нарушений микроциркуляции в кишечной петле и близлежащих сегментах брыжейки, а также повышении чистоты эксперимента и приближении условий к физиологическим.

Технический результат достигается тем, что в способе мониторирования микрососудов брыжейки у лабораторных животных, предусматривающем наркоз, срединную лапаротомию, биомикроскопию и мониторирование с помощью видеокамеры, установленной на микроскопе и соединенной с вычислительным блоком, согласно изобретению перед лапаротомией размещают животное на подвижный термостатируемый препарационный столик, присоединенный к микроскопу вместо предметного столика, кровотечение останавливают с помощью термокоагуляции, фиксируют края раны с использованием лигатур, делают парамедиальный разрез справа на уровне нижней трети живота, биомикроскопию микрососудов брыжейки осуществляют с помощью съемного полого световода цилиндрической формы, вводимого непосредственно в брюшную полость через парамедиальный разрез с правой стороны с последующим набрасыванием брыжейки конечной петли подвздошной кишки на предварительно заполненный индифферентными маслами или физиологическими растворами полый верхний торец световода, нижний глухой торец которого пропущен через отверстие в препарационном столике за его пределы, операционное поле закрывается тампонами, смоченными физиологическим раствором натрия хлорида, столик, с таким образом подготовленным животным, перемещают до соосного совмещения световода и объектива микроскопа с выходом пучка проходящего света от конденсатора. Включается источник света и с помощью фиксированной видеокамеры для микроскопа, соединенной с персональным компьютером, производят фиксацию результатов на различных стадиях исследования с последующей обработкой полученных данных с использованием компьютерной программы, предназначенной для сохранения, просмотра и обработки видеозаписей.

На фиг.1 представлена схема биомикроскопии наркотизированных лабораторных животных в брюшной полости; на фиг.2 представлено поэтапное исполнение способа (фиксирование краев раны и введение световода в брюшную полость наркотизированных лабораторных животных); на фиг.3 представлена конструкция используемого световода.

Обозначения на фиг.1, 2 и 3: 1 - полый цилиндрический световод, 2 - брыжейка, 3 - термостатируемый препарационный столик, 4 - объектив, 5 - окуляр, 6 - конденсор, 7 - срединная лапаратомия, 8 - лигатуры, 9 - парамедиальный разрез справа, 10 - нижний торец световода, 11 - верхний полый торец световода, 12 - ограничитель световода, 13 - марлевые тампоны, 14 - источник света.

Описание способа

Анестезия достигается внутрибрюшинным введением раствора хлоралозы (40 мг/кг) и уретана (6 мг/кг). Перед проведением исследования с целью исключения загрязнения в области брюшной полости, а также нижней трети живота с правой стороны туловища удаляется шерстяной покров. После наступления состояния глубокого наркоза лабораторное животное помещается на подвижный термостатируемый (37-37,5°C) препарационный столик 3 в положении на спине с раскинутыми в стороны передними и задними лапами. В зависимости от высоты передней брюшной стенки подбирается стеклянный световод 1. Выполняется срединная лапаротомия 7. Кровотечение из мелких сосудов кожи и передней стенки брюшины останавливается с помощью термокоагуляции. Края раны фиксируются с использованием лигатур 8 (фиг.2а). Справа на уровне нижней трети живота делают небольшой парамедиальный разрез 9, через который вводится верхний открытый торец 11 съемного стеклянного полого световода 1, нижний торец 10 (фиг.1а, б) выводится через отверстие в пластине препарационного столика 3 за его пределы и фиксируется с помощью ограничителя 12 световода. Через верхний торец 11 световода проводят заполнение полости световода до верхней границы вазелиновым маслом, являющимся индифферентным, что исключает возможность прилипания объекта исследования к стенкам световода 1, проваливания внутрь световода и перегиба сосудов. Брыжейку 2 с кишечной петлей располагают на верхнем торце 11 световода. Операционное поле закрывается тампонами 13, смоченными физиологическим раствором натрия хлорида (t=37-37,5°C) (фиг.2г). По мере необходимости производится орошение исследуемого участка изотоническим раствором натрия хлорида. Столик 3, с таким образом подготовленным животным, перемещают до соосного совмещения световода 1 и объектива 4 микроскопа с выходом пучка проходящего света от конденсатора 6. Включается источник света 14. С помощью фиксированной камеры для микроскопа (на фигурах не показана), соединенной с вычислительным блоком, а именно персональным компьютером (на фигурах не показан), производится запись результатов исследований на различных стадиях с последующей обработкой полученных данных с использованием компьютерной программы, например программы ToupView, предназначенной для сохранения, просмотра и обработки видеозаписей, полученных с видеокамер для микроскопа фирмы Levenhuk.

Таким образом, применение предложенного нами способа мониторирования микрососудов в брюшной полости повышает чистоту эксперимента, исключает высыхание и прилипание исследуемого участка, а также проваливание и перегиб сосудов, что позволяет выполнять длительные исследования. Наличие видеокамеры позволяет в реальном времени фиксировать с последующим детальным изучением изменения микрососудов и скорости кровотока.