СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ ГВОЗДИКИ IN VITRO

Изобретение относится к области садоводства и может быть использовано для микроразмножения растений гвоздики in vitro.

Известен способ размножения гвоздики in vitro (См.: Mahdiyeh Kharrazi, Hossein Nemati, AH Tehranifar, Abdolreza Bagheri, Ahmad Sharifi In Vitro Culture of Carnation (Dianthus caryophyllus L.) Focusing on the Problem of Vitrification // J. Biol. Environ. Sci. - 2011. - 5(13). - P. 1-6), в котором в качестве первичного экспланта использовали побеги длиной 5-6 см, стерилизовали их в 2%-ном растворе гипохлорита натрия, содержащего Tween 20 (2 капли на 100 мл раствора), в течение 15 мин, затем трижды промывали стерильной дистиллированной водой, после чего отделяли пазушные почки размером 3-5 мм и высаживали их на среду Мурасиге и Скуга, дополненную сахарозой 30 г/л и регуляторами роста 1 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,2 мг/л нафтилуксусной кислоты. Культивировали в световой комнате при температуре 25±2°C и 16-часовом фотопериоде с освещением белыми люминесцентными лампами с интенсивностью 2500-3000 лк.

Недостатком данного способа является небольшой размер получаемых побегов, что усложняет процедуру микроразмножения гвоздики за счет сильной сближенности междоузлий.

Технический результат заключается в упрощении процесса микроразмножения за счет удлинения образующихся побегов при положительном влиянии оптимальной концентрации регулятора роста - Рибав-Экстра.

Технический результат достигается тем, что способ размножения гвоздики in vitro включает отделение эксплантов, стерилизацию, посадку на питательную среду Мурасиге-Скуга, микроразмножение путем отделения побегов от эксплантов, их укоренение на питательной среде Мурасиге-Скуга и дальнейшее укоренение в грунте. При микроразмножении экспланты укореняют на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, дополненную Рибав-Экстра 0,01-0,1 мг/л, и укореняют в условиях ex vitro в грунте, состоящем из смеси дерновой земли - 50%, торфа низинного с перегноем - 30% и песка 20%.

Способ осуществляют следующим образом. Побеги длиной 5-6 см, которые используют в качестве эксплантов, стерилизуют в 2%-ном растворе гипохлорита натрия, содержащего Tween 20 (2 капли на 100 мл раствора), в течение 15 мин, затем трижды промывают стерильной дистиллированной водой, после чего отделяют пазушные почки размером 3-5 мм и высаживают их на среду Мурасиге и Скуга, дополненную сахарозой 30 г/л и регуляторами роста 1 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,2 мг/л нафтилуксусной кислоты. От эксплантов отделяют побеги, делят их на сегменты (часть побега, содержащая лист и пазушную почку) и высаживают в пробирки на питательную среду Мурасиге-Скуга, с добавлением Рибав-Экстра 0,01-0,1 мг/л. Состав среды, использованный при культивировании микропобегов, является стандартным для микроразмножения растений в культуре in vitro, за исключением подобранной в предварительных опытах концентрации Рибав-Экстра (табл.1). Культивирование осуществляют при постоянном освещении люминесцентными лампами с интенсивностью около 3000 лк и при температуре 25°C (физические условия выращивания близки к оптимальным для культивирования эксплантов растений). При укоренении микропобегов на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга с добавлением Рибав-Экстра 0,01-0,1 мг/л в течение 4 недель культивирования формируются побеги максимальной длины - 8,5 см (табл.1). В дальнейшем сформировавшиеся побеги с корнями переносят для укоренения в условия ex vitro в грунт, состоящий из смеси дерновой земли - 50%, торфа низинного с перегноем - 30% и песка 20%. После укоренения размноженные растения выращивают обычным способом. В результате использования данного способа клонального микроразмножения гвоздики формировались побеги высотой 8,5 см независимо от сезонности взятия растения-донора.

Таким образом, по сравнению с известным решением предлагаемое позволяет упростить микроразмножение гвоздики за счет удлинения образующихся побегов при положительном влиянии оптимальной концентрации регулятора роста.