Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОКАЗАНИЙ К ТЕРАПИИ ПОСЛЕОПЕРАЦИОННЫХ СТЕНОЗОВ АНАСТОМОЗА ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть применено как способ определения показаний к терапии послеоперационных стенозов желудочно-кишечного тракта мезенхимальными стволовыми клетками и/или ремикейдом,

Известен способ прогнозирования эффективности противоопухолевого лечения, включающий исследование биологической жидкости, отличающийся тем, что после эвакуации экссудата из брюшной полости и получения методом фильтрационной детоксикации белкового концентрата асцитической жидкости, используемого для экстракорпоральной инкубации с цитостатиками и проведения внутрибрюшинной химиотерапии, осуществляют предварительное определение типа структуропостроения твердотельной фации концентрата и устойчивости системных и подсистемных признаков, в результате чего устанавливают, что сохранение физиологически устойчивого радиального или частично радиального типа фации концентрата асцитической жидкости с формированием мономорфных отдельностей и конкреций является прогностическим признаком максимальной эффективности аутоасцитохимиотерапии - полной регрессии опухоли, патологически неустойчивый иррадиальный и циркулярный тип фации белкового концентрата с полиморфными структурами отдельностей и конкреций определяет прогноз эффективности лечения в виде частичной регрессии опухоли, а патологически устойчивая структура с иррадиальным циркулярным типом и типом «двойной фации» без сохранения подсистемных признаков конкреций и отдельностей указывает на соответствие эффекту стабилизации опухолевого роста (1 - патент РФ №2411913, 2009, А61В). Данный способ принят за аналог.

Известен способ определения показаний к терапии послеоперационных стенозов коронарных артерий бета-блокаторами (2 - патент РФ №2246258, 2004, А61В 6/03). Согласно способу-прототипу проводят многослойную спиральную компьютерную томографию с последующей реконструкцией и анализом изображений, полученных в диастолическую фазу сердечного цикла, с переносом триггера на 5%, а при частоте сердечных сокращений более 70 уд./мин предварительно вводят бета-блокаторы, при этом для анализа используют изображения, полученные в интервале 45-65% длительности сердечного цикла. Данный способ принят за прототип.

Однако с помощью способа-прототипа невозможно определить показания к терапии послеоперационных стенозов желудочно-кишечного тракта мезенхимальными стволовыми клетками и ремикейдом.

Целью изобретения является повышение точности определения показаний к терапии послеоперационных стенозов желудочно-кишечного тракта мезенхимальными стволовыми клетками и/или ремикейдом.

Технический результат достигается тем, что способ определения показаний к терапии послеоперационных стенозов анастомоза желудочно-кишечного тракта мезенхимальными стволовыми клетками и/или ремикейдом в эксперименте включает предварительное формирование анастомоза у крыс и спустя 5 дней после операции проводят сравнительную электромиографию вышележащего и нижележащего отдела желудочно-кишечного тракта на расстоянии соответственно 0,7-2,5 см выше и ниже анастомоза, при этом при повышении частоты медленных волн электромиографии на 10-20% и амплитуды - на 10-25% у вышележащего отдела по сравнению с нормой и при снижении частоты медленных волн ЭМА на 10-15% и амплитуды - на 20-30% у нижележащего отдела по сравнению с нормой считают терапию мезенхимальными стволовыми клетками и/или ремикейдом путем обкалывания области анастомоза показанной.

Способ реализуется следующим образом.

Крысам линии Вистар весом 200-215 г в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза проводят срединный лапаротомный разрез, осуществляют резекцию отдела желудочно-кишечного тракта. Разрез ушивают, животных выхаживают. Первые пять дней после операции состояние животных удовлетворительное, аппетит снижен и объем съедаемой за сутки пищи прогрессивно уменьшается. Спустя 5 дней после операции проводят релапаротомию, накладывают контактные электроды на вышележащий и нижележащий отдел резецированного желудочно-кишечного тракта на расстоянии соответственно 0,7-2,5 см от анастомоза. Проводят измерения амплитудно-частотных характеристик медленных волн электромоторной активности, проводят сравнительную электромиографию вышележащего и нижележащего отдела желудочно-кишечного тракта на расстоянии соответственно 0,7-2,5 см от анастомоза. При повышении частоты медленных волн электромиографии на 10-20% и амплитуды - на 10-25% у вышележащего отдела по сравнению с нормой и при снижении частоты медленных волн ЭМА на 10-15% и амплитуды - на 20-30% у нижележащего отдела по сравнению с нормой считают терапию послеоперационных стенозов желудочно-кишечного тракта мезенхимальными стволовыми клетками и/или ремикейдом путем обкалывания области анастомоза показанной.

С десятого дня состояние животных ухудшается, объем съедаемой в сутки пищи уменьшается до 5-7 г, животные худеют, шерсть теряет блеск, выпадает. На передней брюшной стенке - видимая перистальтика желудка. На 15-й день от начала моделирования в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза вскрывают брюшную полость, рассекают спайки вокруг анастомоза. Осуществляют забор материала для морфологического исследования.

Морфологическое исследование области выше анастомоза проводили путем фиксации образцов ткани в 9% формалине, обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации, заключали в парафин с последующим изготовлением гистологических срезов и окрашиванием гематоксилином и эозином. Морфологическое исследование области анастомоза показало, что нежные соединительнотканные волокна проникают в мышечный слой. Отдельные гладкомышечные клетки области выше анастомоза в состоянии вакуольной дистрофии. Некоторые гладкомышечные клетки веретенообразно вытянуты. Гладкомышечные клетки области ниже анастомоза практически не изменены. В отдельных нейронах ганглиев межмышечного нервного сплетения отмечается вакуольная дистрофия. Данные морфологические изменения свидетельствуют о возможности прогрессирования развития соединительной ткани с формированием стеноза в области анастомоза.

Группе крыс проводят параллельное исследование, включающее формирование послеоперационного стеноза в течение 15 дней от начала моделирования. Крысам линии Вистар весом 200-215 г в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза проводят срединный лапаротомный разрез, осуществляют резекцию отдела желудочно-кишечного тракта. Разрез ушивают, животных выхаживают. Первые пять дней после операции состояние животных удовлетворительное, аппетит снижен и объем съедаемой за сутки пищи прогрессивно уменьшается. Спустя 5 дней после операции проводят релапаротомию, накладывают контактные электроды на вышележащий и нижележащий отдел резецированного желудочно-кишечного тракта на расстоянии соответственно 0,7-2,5 см от анастомоза. Проводят измерения амплитудно-частотных характеристик медленных волн электромоторной активности, проводят сравнительную электромиографию вышележащего и нижележащего отдела желудочно-кишечного тракта на расстоянии соответственно 0,7-2,5 см от анастомоза. При повышении частоты медленных волн электромиографии на 10-20% и амплитуды - на 10-25% у вышележащего отдела по сравнению с нормой и при снижении частоты медленных волн ЭМА на 10-15% и амплитуды - на 20-30% у нижележащего отдела по сравнению с нормой считают терапию мезенхимальными стволовыми клетками и/или ремикейдом послеоперационных стенозов желудочно-кишечного тракта показанной.

С десятого дня состояние животных ухудшается, объем съедаемой в сутки пищи уменьшается до 5-7 г, животные худеют, шерсть теряет блеск, выпадает. На передней брюшной стенке - видимая перистальтика желудка. На 15-й день от начала моделирования в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза вскрывают брюшную полость, рассекают спайки вокруг анастомоза. Осуществляют обкалывание области анастомоза мезенхимальными стволовыми клетками в дозе 1-1,5 млн клеток 5 животным; 5 животным на расстоянии 0,7-2,5 см в обе стороны от анастомоза вводят в слизистую оболочку измененных участков кишки лекарственный препарат ремикейд в объеме 0,1 до 0,2 мл раствора.

Спустя 10 дней проводят морфологическое исследование области обкалывания путем фиксации образцов ткани в 9% формалине, обезвоживания в спиртах возрастающей концентрации, заключения в парафин с последующим изготовлением гистологических срезов и окрашивания гематоксилином и эозином. Морфологическое исследование области обкалывания показало, что нежные соединительнотканные волокна расположены только в подслизистом слое. Вакуольной дистрофии гладкомышечных клеток не обнаружено. Гладкомышечные клетки области обкалывания практически не изменены. В нейронах ганглиев межмышечного нервного сплетения вакуольная дистрофия не обнаружена. Данные морфологического исследования свидетельствуют об отсутствии стенозирования области анастомоза.

Способ далее поясняют примеры его реализации.

Пример 1

Крысе линии Вистар весом 200 г в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза проводят срединный лапаротомный разрез. Измеряют электромоторную активность пилорического отдела желудка и двенадцатиперстной кишки. Частота медленных волн пилорического отдела желудка в норме составляет 7,0 в мин, амплитуда - 0,1 мВ; частота медленных волн бульбарного отдела двенадцатиперстной кишки составляет в норме 20 в мин, амплитуда - 0,1 мВ. Осуществляют резекцию пилорического сфинктера с наложением анастомоза конец в конец. Разрез ушивают, животное выхаживают. Первые пять дней после операции состояние животного удовлетворительное, аппетит снижен и объем съедаемой за сутки пищи прогрессивно уменьшается. Спустя 5 дней после операции проводят релапаротомию, накладывают контактные электроды на пилорический отдел желудка и бульбарный отдел двенадцатиперстной кишки на расстоянии соответственно на 0,70 см выше анастомоза на пилорическом отделе желудка и на 2,5 см ниже анастомоза на бульбарном отделе двенадцатиперстной кишки.

Проводят измерения амплитудно-частотных характеристик медленных волн электромоторной активности пилорического отдела желудка: частота составляет 7,75 в мин, амплитуда - 0,125 мВ. Проводят измерения амплитудно-частотных характеристик медленных волн электромоторной активности бульбарного отдела двенадцатиперстной кишки: частота составляет 18,0 в мин, амплитуда - 0,08 мВ. Данные изменения величин амплитудно-частотных характеристик электромоторной активности позволяют сделать вывод о формировании послеоперационного стеноза на доклинической стадии.

С десятого дня состояние животного ухудшается, объем съедаемой в сутки пищи уменьшается до 5 г, животное худеет, шерсть выпадает. На передней брюшной стенке - видимая перистальтика желудка. На 15-й день от начала моделирования в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза вскрывают брюшную полость, рассекают спайки вокруг анастомоза. Осуществляют забор материала для морфологического исследования.

Морфологическое исследование области выше анастомоза на 5-е сутки (образец площадью 0,5 см²) проводили путем фиксации образцов ткани в 9% формалине, обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации, заключали в парафин с последующим изготовлением гистологических срезов и окрашиванием гематоксилином и эозином. Морфологическое исследование области анастомоза показало, что нежные соединительнотканные волокна проникают в мышечный слой. Отдельные гладкомышечные клетки области выше анастомоза в состоянии вакуольной дистрофии. Некоторые гладкомышечные клетки веретенообразно вытянуты. В отдельных нейронах ганглиев межмышечного нервного сплетения области выше анастомоза отмечается вакуольная дистрофия. Гладкомышечные клетки области ниже анастомоза практически не изменены. Данные морфологические изменения свидетельствуют о возможности прогрессирования развития соединительной ткани с формированием стеноза в области анастомоза.

На 15-й день от начала моделирования в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза вскрывают брюшную полость, рассекают спайки вокруг желудка и двенадцатиперстной кишки, обнаруживают уплотнение области анастомоза до хрящевой плотности, область пилорического отдела дилатирована, стенка дистрофически истончена. Бульбарный отдел двенадцатиперстной кишки визуально не изменен.

Морфологическое исследование пилорического отдела показало, что соединительная ткань из межпучковых прослоек проникает внутрь мышечных пучков, отделяя от общей массы клеток группы миоцитов, в которых нарастает атрофический процесс. В отдельных областях наблюдаются скопления клеток гиалинового хряща. Гладкомышечные клетки веретенообразно вытянуты, ядро и околоядерная область выбухают, а околоклеточное пространство замещается грубоволокнистой соединительной тканью. Таким образом, на основании данных электромиографии можно заключить о стенозировании области анастомоза на предклинической стадии.

Пример 2

Крысе линии Вистар весом 215 г в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза проводят срединный лапаротомный разрез. Измеряют электромоторную активность подвздошной кишки и восходящего отдела толстой кишки. Частота медленных волн подвздошной кишки в норме составляет 14,0 в мин, амплитуда - 0,1 мВ; частота медленных волн восходящего отдела толстой кишки составляет в норме 10 в мин, амплитуда - 0,11 мВ. Осуществляют резекцию слепой кишки, накладывают тонко-толстокишечный анастомоз. Разрез ушивают, животное выхаживают. Первые пять дней после операции состояние животного удовлетворительное, аппетит снижен, и объем съедаемой за сутки пищи уменьшается до 7 г. Спустя 5 дней после операции проводят релапаротомию, накладывают контактные электроды на подвздошную и восходящий отдел толстой кишки на расстоянии соответственно на 1,0 см выше анастомоза на подвздошной кишке и на 2,2 см ниже анастомоза на восходящем отделе толстой кишки. Проводят измерения амплитудно-частотных характеристик медленных волн электромоторной активности. Отмечается повышение частоты медленных волн электромоторной активности подвздошной кишки до 16,8 в мин и амплитуды - до 0,11 мВ по сравнению с нормой; выявляется снижение частоты медленных волн ЭМА восходящего отдела толстой кишки до 9 в мин и амплитуды - до 0,09 мВ по сравнению с нормой. Полученные данные свидетельствуют о формировании послеоперационного стеноза на доклинической стадии. Морфологическое исследование области выше анастомоза на 5-е сутки показало, что нежные соединительнотканные волокна проникают в мышечный слой. Часть гладкомышечных клеток области выше анастомоза в состоянии вакуольной дистрофии. Отдельные гладкомышечные клетки веретенообразно вытянуты. В отдельных нейронах ганглиев межмышечного нервного сплетения отмечается вакуольная дистрофия. Гладкомышечные клетки области ниже анастомоза практически не изменены. Данные морфологические изменения свидетельствуют о возможности прогрессирования развития соединительной ткани с формированием стеноза в области анастомоза.

С 10-го дня состояние животного ухудшается, объем съедаемой в сутки пищи уменьшается до 4 г, животное худеет, шерсть выпадает, наблюдается гнездная аллопеция. На передней брюшной стенке - видимая перистальтика желудка. На 15-й день от начала моделирования в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза вскрывают брюшную полость, рассекают спайки вокруг анастомоза.

На 15-й день от начала моделирования в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза вскрывают брюшную полость, рассекают спайки вокруг терминального отдела тонкой кишки и восходящего отдела толстой кишки, обнаруживают уплотнение области анастомоза до хрящевой плотности, подвздошная кишка дилатирована, стенка дистрофически истончена. Восходящий отдел толстой кишки визуально не изменен.

Осуществляют обкалывание области анастомоза на расстоянии 2,5 см выше анастомоза и 0,7 см ниже анастомоза мезенхимальными стволовыми клетками в дозе 1,5 млн клеток животному. Спустя 10 дней проводят морфологическое исследование области обкалывания путем фиксации образцов ткани в 9% формалине, обезвоживания в спиртах возрастающей концентрации, заключения в парафин с последующим изготовлением гистологических срезов и окрашивания гематоксилином и эозином. Морфологическое исследование области обкалывания показало, что нежные соединительнотканные волокна расположены только в подслизистом слое. Вакуольной дистрофии гладкомышечных клеток не обнаружено. Гладкомышечные клетки области обкалывания практически не изменены. В нейронах ганглиев межмышечного нервного сплетения вакуольная дистрофия не обнаружена. Данные морфологического исследования свидетельствуют об отсутствии стенозирования области анастомоза.

На основании полученных данных считаем терапию мезенхимальными стволовыми клетками показанной.

Пример 3

Крысе линии Вистар весом 210 г в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза проводят срединный лапаротомный разрез. Измеряют электромоторную активность подвздошной кишки и восходящего отдела толстой кишки. Частота медленных волн подвздошной кишки в норме составляет 12,0 в мин, амплитуда - 0,12 мВ; частота медленных волн восходящего отдела толстой кишки в норме составляет 13 в мин, амплитуда - 0,12 мВ. Осуществляют резекцию слепой кишки, накладывают тонко-толстокишечный анастомоз. Разрез ушивают, животное выхаживают. Первые пять дней после операции состояние животного удовлетворительное, аппетит снижен и объем съедаемой за сутки пищи уменьшается до 7 г. Спустя 5 дней после операции проводят релапаротомию, накладывают контактные электроды на подвздошную и восходящий отдел толстой кишки на расстоянии соответственно на 1,1 см выше анастомоза на подвздошной кишке и на 2,3 см ниже анастомоза на восходящем отделе толстой кишки. Проводят измерения амплитудно-частотных характеристик медленных волн электромоторной активности. Отмечается повышение частоты медленных волн электромоторной активности подвздошной кишки до 14,4 в мин и амплитуды - до 0,13 мВ по сравнению с нормой; выявляется снижение частоты медленных волн ЭМА восходящего отдела толстой кишки до 11 в мин и амплитуды - до 0,094 мВ по сравнению с нормой. Полученные данные свидетельствуют о формировании послеоперационного стеноза на доклинической стадии.

Морфологическое исследование области выше анастомоза на 5-е сутки показало, что нежные соединительнотканные волокна проникают в мышечный слой. Часть гладкомышечных клеток области выше анастомоза в состоянии вакуольной дистрофии. Отдельные гладкомышечные клетки веретенообразно вытянуты. В отдельных нейронах ганглиев межмышечного нервного сплетения отмечается вакуольная дистрофия. Гладкомышечные клетки области ниже анастомоза практически не изменены. Данные морфологические изменения свидетельствуют о возможности прогрессирования развития соединительной ткани с формированием стеноза в области анастомоза.

С 10-го дня состояние животного ухудшается, объем съедаемой в сутки пищи уменьшается до 4 г, животное худеет, шерсть выпадает, наблюдается гнездная аллопеция. На передней брюшной стенке - видимая перистальтика желудка. На 15-й день от начала моделирования в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза вскрывают брюшную полость, рассекают спайки вокруг анастомоза.

На 15-й день от начала моделирования в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза вскрывают брюшную полость, рассекают спайки вокруг терминального отдела тонкой кишки и восходящего отдела толстой кишки, обнаруживают уплотнение области анастомоза до хрящевой плотности, подвздошная кишка дилатирована, стенка дистрофически истончена. Восходящий отдел толстой кишки визуально не изменен.

Осуществляют введение в слизистую оболочку измененных участков кишки на расстоянии 2,5 см выше анастомоза и 0,7 см ниже анастомоза лекарственного препарата ремикейд в объеме 0,2 мл раствора.

Спустя 10 дней проводят морфологическое исследование области обкалывания путем фиксации образцов ткани в 9% формалине, обезвоживания в спиртах возрастающей концентрации, заключения в парафин с последующим изготовлением гистологических срезов и окрашивания гематоксилином и эозином. Морфологическое исследование области обкалывания показало, что нежные соединительнотканные волокна расположены в подслизистом слое. Вакуольной дистрофии гладкомышечных клеток не обнаружено. Гладкомышечные клетки области обкалывания практически не изменены. В нейронах ганглиев межмышечного нервного сплетения вакуольная дистрофия не обнаружена. Данные морфологического исследования свидетельствуют об отсутствии стенозирования области анастомоза.

Полученные данные позволяют заключить, что терапия ремикейдом показана.

Пример 4

Крысе линии Вистар весом 205 г в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза проводят срединный лапаротомный разрез. Измеряют электромоторную активность пилорического отдела желудка и двенадцатиперстной кишки. Частота медленных волн пилорического отдела желудка в норме составляет 8,0 в мин, амплитуда - 0,13 мВ; частота медленных волн бульбарного отдела двенадцатиперстной кишки составляет в норме 22 в мин, амплитуда - 0,12 мВ. Осуществляют резекцию пилорического сфинктера с наложением анастомоза конец в конец. Разрез ушивают, животное выхаживают. Первые пять дней после операции состояние животного удовлетворительное, аппетит снижен и объем съедаемой за сутки пищи прогрессивно уменьшается. Спустя 5 дней после операции проводят релапаротомию, накладывают контактные электроды на пилорический отдел желудка и бульбарный отдел двенадцатиперстной кишки на расстоянии соответственно 0,7 и 2,5 см от анастомоза. Проводят измерения амплитудно-частотных характеристик медленных волн электромоторной активности пилорического отдела желудка: частота составляет 9,6 в мин, амплитуда - 0,145 мВ. Проводят измерения амплитудно-частотных характеристик медленных волн электромоторной активности бульбарного отдела двенадцатиперстной кишки: частота составляет 18,6 в мин, амплитуда - 0,084 мВ. Данные изменения величин амплитудно-частотных характеристик электромоторной активности позволяют сделать вывод о формировании послеоперационного стеноза на доклинической стадии.

С десятого дня состояние животного ухудшается, объем съедаемой в сутки пищи уменьшается до 5 г, животное худеет, шерсть выпадает. На передней брюшной стенке - видимая перистальтика желудка. На 15-й день от начала моделирования в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза вскрывают брюшную полость, рассекают спайки вокруг анастомоза. Осуществляют забор материала для морфологического исследования.

На 15-й день от начала моделирования в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза вскрывают брюшную полость, рассекают спайки вокруг желудка и двенадцатиперстной кишки, обнаруживают уплотнение области анастомоза до хрящевой плотности, область пилорического отдела дилатирована, стенка дистрофически истончена. Бульбарный отдел двенадцатиперстной кишки визуально не изменен.

Осуществляют обкалывание области анастомоза на расстоянии 2,5 см выше анастомоза и 0,7 см ниже анастомоза мезенхимальными стволовыми клетками в дозе 1,0 млн клеток животному и ремикейдом в объеме 0,1 мл раствора. Спустя 10 дней проводят морфологическое исследование области обкалывания путем фиксации образцов ткани в 9% формалине, обезвоживания в спиртах возрастающей концентрации, заключения в парафин с последующим изготовлением гистологических срезов и окрашивания гематоксилином и эозином. Морфологическое исследование области обкалывания показало, что нежные соединительнотканные волокна расположены в подслизистом слое. Вакуольной дистрофии гладкомышечных клеток не обнаружено. Гладкомышечные клетки области обкалывания практически не изменены. В нейронах ганглиев межмышечного нервного сплетения вакуольная дистрофия не обнаружена. Данные морфологического исследования свидетельствуют об отсутствии стенозирования области анастомоза.

Совместное применение мезенхимальных стволовых клеток и ремикейда считаем показанным.

Исследование проведено на 20 крысах. Модель предклинической стадии послеоперационных стенозов получена у всех животных, морфологически подтверждена, показан терапевтический эффект мезенхимальных стволовых клеток и/или препарата ремикейд.

Источники информации

1. Патент РФ №2178666, 1999, А61В 8/00.

2. Патент РФ №2246258, 2004, А61В 6/03.