ЗАМЕЩЕННЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ 3-БЕНЗОФУРАНИЛ-ИНДОЛ-2-ОН-3-АЦЕТАМИДОПИПЕРАЗИНОВ, ИХ ПОЛУЧЕНИЕ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ТЕРАПИИ

Объектом настоящего изобретения являются замещенные производные 3-бензофуранил-индол-2-он-3-ацетамидопиперазинов, их получение и их применение в терапии.

Грелин является пептидным гормоном из 28 аминокислот, продуцируемый главным образом в желудке в посттрансляционном процессе после отщепления пре-прогрелина (Kojima M. et al., Nature 1999; 402:656-60). Грелин является эндогенным лигандом гипофизарного рецептора стимуляторов секреции гормона роста (GHSR1a).

GHS-R кодируется двумя экзонами: экзон 1 кодирует трансмембранные домены (TM) 1-5, а экзон 2 кодирует TM6 и TM7 рецептора, сопряженного с белком G (GPCR).

Оба транскрипта были идентифицированы в гипофизе и мозге: один, кодирующий GPCR полной длины (GHS-R1a), и другой, кодирующий обрезанный рецептор (GHS-R1b), у которого не хватает TM6 и TM7. Только подтип GHS-R1a активируется грелином и миметиками грелина. GHS-R1b присутствует в печени и других периферических тканях, но его функция неизвестна (Smith R.G. et al., Trends in Endocrinology and Metabolism, 2005, 16, № 9).

Это рецептор типа родопсина, с семью трансмембранными доменами, из семейства A, сопряженный с Gq/фосфолипазой C. Рецептор грелина может быть связан посредством Gs/протеинкиназы A в определенных тканях (Ueno, N. et al. Endocrinology, 2004, 145, 4176-4184; Kim, M.S. et al., Int. J. Obes. Relat. Metab. Disord., 2004, 28:1264-1271). Интересно, что рецептор грелина имеет необычную характеристику - он обладает существенной конститутивной активностью, независимой от лиганда (Barazzoni, R. et al., Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab., 2004, 288:E228-E235).

Низкие уровни экспрессии грелина были подтверждены на различных тканях, таких как кишечник, поджелудочная железа, почки, иммунная система, плацента, яички, слизистые ткани, гипоталамус (Horm. Res. 2003; 59 (3):109-17).

Было продемонстрировано, что грелин ведет к чувству голода во время еды и в начале приема пищи. Циркулирующие уровни снижаются с приемом пищи и повышаются перед едой, достигая достаточных концентраций для стимуляции чувства голода и приема пищи. Введение грелина быстро стимулирует прием пищи, причем нестационарным образом, в основном повышая стремление к пище и число приемов пищи. Грелин более эффективно стимулирует прием пищи за короткое время, чем любая другая молекула, за исключением нейропептида Y, с которым он приблизительно равномощен (Wren A.M. et al., J. Clin. Endocrinol. Metab., 2001; 86:5992-5). Однако грелин является уникальным в своей способности проявлять этот эффект независимо от того, введен ли он периферийно или центрально.

Это также единственная субстанция у млекопитающих, которая продемонстрировала свою способность повышать аппетит и прием пищи, когда ее вводят человеку (Druce M.R. et al., Int. J. Obes., 2005; 29:1 130-6; Wynne K. et al., J. Am. Soc. Nephrol., 2005; 16:2111-8).

Помимо своей роли в инициировании приема пищи, грелин отвечает также критериям, установленным гормоном, связанным с ожирением, вовлеченным в долговременную регуляцию массы тела. Уровень грелина циркулирует в зависимости от запасов энергии и проявляет компенсирующие изменения в ответ на изменение массы тела.

Грелин переходит через гематоэнцефалический барьер и стимулирует прием пищи, действуя на определенные классические центры, регулирующие массу тела, такие как гипоталамус, ромбовидный мозг и компенсаторная мезолимбическая система.

Хронический прием грелина повышает массу тела в результате различных согласованных эффектов на прием пищи, расход энергии и использование ресурсов. Врожденная абляция грелина или гена рецептора грелина провоцирует стойкость к ожирению, вызванному питанием, а фармакологическая блокада грелина снижает прием пищи и массу тела.

Имеющиеся доказательства показывают роль грелина одновременно в побуждении к приему пищи в ближайшей перспективе и в энергетическом гомеостазе в длительной перспективе, становясь, таким образом, привлекательной целью в качестве лекарственного средства для лечения ожирения и/или расстройств, вызывающих похудение.

Грелин одновременно проявляет также физиологические и фармакологические действия на эндокринную часть поджелудочной железы. Биоактивный ацилированный грелин продуцируется в ε-клетке, недавно описанной в панкреатических островках (Prado, C.L. et al., 2004, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101:2924-2929), потенциально предоставляя локальный источник грелина, который действует на β-клетки островков. Блокада этой функции эндогенного грелина, используя антагонист этих рецепторов, резко уменьшала концентрации глюкозы на голодный желудок, смягчала гликемическую циркуляцию и повышала реакцию на инсулин в испытаниях на толерантность к глюкозе, что предполагает ингибирующую роль грелина в контроле секреции инсулина (Dezaki, K. et al. 2004, Diabetes, 53:3142-3151).

Удаление грелина у мышей (мышь грелин -/-) повышает глюкозозависимую секрецию инсулина β-клетками поджелудочной железы в результате снижения экспрессии Ucp2 и улучшает чувствительность к инсулину в периферических тканях (Sun Y. et al., 2006, Cell Metabolism, 3:379-386).

Таким образом, антагонисты рецептора грелина могли бы регулировать чувство голода, приемы пищи и их частоту, а также, в долгосрочной перспективе, вес, в частности повышение веса вследствие диетического или терапевтического режима. Кроме того, в рамках лечения от диабета антагонисты грелина могли бы быть полезными для удержания равновесия между инсулином и глюкозой и для контроля диабетической гиперфагии. Антагонисты грелина могли бы также использоваться как агенты, снижающие аппетит, и/или как средства от ожирения, или же в лечении диабета и его последствий.

Объектом настоящего изобретения являются соединения, соответствующие формуле (I):

в которой:

R1 означает атом водорода или (C_1-6)алкильную, -C(=O)(C_1-6)алкильную, -C(=O)арильную группу;

R2, R3, R4, одинаковые или различные, находящиеся в любом доступном положении фенильного ядра, независимо означают атом водорода, атом галогена, CN, OH, (C_1-6)алкильную группу, необязательно замещенную атомом галогена или OH; пергалоген(C_1-3)алкил, (C_1-6)алкокси, пергалоген(C_1-3)алкокси, аминокарбонил, (C_1-6)алкиламинокарбонил, ди(C_1-6)алкиламинокарбонил, арил, арилокси, гетероарил; причем арильная, арилокси или гетероарильная группа может быть необязательно замещена атомом галогена, CN, OH или (C_1-6)алкильной, пергалоген(C_1-3)алкильной или (C_1-6)алкоксигруппой; причем ожидается, что по меньшей мере один из R2, R3, R4 отличен от H и что арильная, арилокси или гетероарильная группа может быть необязательно замещена атомом галогена, CN, OH или (C_1-6)алкильной, пергалоген(C_1-3)алкильной, (C_1-6)алкоксигруппой;

R5 и R6, одинаковые или различные, означают атом водорода, (C_1-6)алкильную группу, или R5 и R6 вместе образуют цикл C₃-C₆;

R7 означает (C_1-6)алкильную группу или (C_2-6)алкенильную группу;

R8 и R9, находясь в любой из доступных позиций пиперазинового ядра, означают атом водорода, (C_1-6)алкильную группу или (C_2-6)алкенильную группу, причем по меньшей мере один из R8 и R9 отличается от H;

или два из R7, R8 и R9 вместе образуют цикл C₃-C₆;

причем R8 и R9 могут находиться в парной позиции на одном и том же атоме углерода;

n означает 1 или 2.

Соединения формулы (I) содержат один или несколько несимметричных атомов углерода. Таким образом, они могут существовать в виде энантиомеров или диастереоизомеров. Эти энантиомеры, диастереоизомеры, а также их смеси, в том числе рацемические смеси, составляют часть изобретения.

Соединения формулы (I) могут существовать в состоянии оснований или кислотно-аддитивных солей. Такие соли присоединения составляют часть изобретения.

Эти соли могут быть получены с фармацевтически приемлемыми кислотами, но и соли других кислот, полезные, например, для очистки или выделения соединений формулы (I), также составляют часть изобретения.

В рамках настоящего изобретения:

- под атомом галогена понимают фтор, хлор, бром или йод;

- под алкильной группой понимают линейную или разветвленную насыщенную алифатическую группу. В качестве примеров можно назвать (C_1-6)алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, в частности, (C_1-4)алкил, который может означать метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, трет-бутил;

- под алкенильной группой понимают алифатическую моно- или полиненасыщенную группу, линейную или разветвленную, содержащую, например, одну или две ненасыщенности и имеющую от 2 до 6 атомов углерода;

- под галогеналкильной группой понимают алкильную группу, у которой один или несколько атомов водорода были замещены атомом галогена; например, фторалкил представляет собой алкильную группу, у которой один или несколько атомов водорода замещены атомом фтора;

- под пергалогеналкильной группой понимают алкильную группу, у которой все атомы водорода были замещены атомом галогена, например, перфторалкил представляет собой алкильную группу, у которой все атомы водорода замещены атомом фтора;

- под алкоксигруппой понимают -O-алкильный радикал, где алкильная группа такая, как определено выше;

- под пергалогеналкоксигруппой понимают -O-пергалогеналкильный радикал, где пергалогеналкильная группа такая, как определено выше, в качестве примера можно назвать трифторметокси;

- под арильной группой понимают циклическую ароматическую группу, содержащую от 6 до 10 атомов углерода. В качестве примеров арильных групп можно назвать фенил или нафтил;

- под гетероарильной группой понимают циклическую ароматическую группу, содержащую от 2 до 10 атомов углерода и включающую от 1 до 3 гетероатомов, таких, как азот, кислород или сера. В качестве примеров гетероарильных групп можно назвать фуранильную, пирролильную, имидазолильную, пиразолильную, тиенильную, оксадиазолильную, оксазолильную, изоксазолильную, фуразанильную, тиадиазолильную, тиазолильную, изотиазолильную, пиридильную, пиразинильную, пиримидинильную, пиридазинильную группы, а также группы, соответствующие продуктам слияния с фенильной группой, такие, например, как бензотиофен, бензофуран, бензотиазол и т.п.

Из соединений формулы (I) - объектов изобретения - одну группу соединений образуют соединения, для которых:

R1 означает атом водорода или (C_1-6)алкильную, -C(=O)(C_1-6)алкильную, -C(=O)арильную группу;

R2, R3, R4, одинаковые или различные, находящиеся в любом доступном положении фенильного ядра, независимо означают атом водорода, атом галогена, CN, OH, (C_1-6)алкильную, пергалоген(C_1-3)алкильную, (C_1-6)алкокси, пергалоген(C_1-3)алкокси, аминокарбонильную, (C_1-6)алкиламинокарбонильную, ди(C_1-6)алкиламинокарбонильную, арильную, арилокси, гетероарильную группу, причем по меньшей мере один из R2, R3, R4 отличен от H;

R5 и R6, одинаковые или различные, означают атом водорода, (C_1-6)алкильную группу или R5 и R6 вместе образуют цикл C₃-C₆;

R7 означает (C_1-6)алкильную группу;

R8 и R9, находясь в любой из доступных позиций пиперазинового ядра, означают атом водорода или (C_1-6)алкильную группу, причем по меньшей мере один из R8 и R9 отличен от H;

или два из R7, R8 и R9 вместе образуют цикл C₃-C₆;

n означает 1 или 2;

в виде основания или кислотно-аддитивной соли.

Из соединений формулы (I) - объектов изобретения - одну группу соединений образуют соединения, для которых:

R1 означает атом водорода или -C(=O)(C_1-6)алкильную, -C(=O)арильную, (C_1-6)алкильную группу; и/или

R2, R3, R4, одинаковые или различные, находящиеся в любом доступном положении фенильного ядра, независимо означают атом водорода, атом галогена, в частности, хлор или бром, или (C_1-6)алкильную или трифторметильную группу, причем по меньшей мере один из R2, R3, R4 отличен от H; и/или

R5 и R6, одинаковые или различные, означают атом водорода или (C_1-6)алкильную группу; и/или

R7 означает (C_1-6)алкильную группу; и/или

R8 и R9, находясь в положениях 2 и 6 пиперазинового ядра, означают атом водорода или (C_1-6)алкильную группу, причем по меньшей мере один из R8 и R9 отличен от H; и/или

два из R7, R8 и R9 вместе образуют цикл C₃-C₆; и/или

n означает 1 или 2;

в виде основания или кислотно-аддитивной соли.

Из соединений формулы (I) - объектов изобретения - другую группу соединений образуют соединения, для которых:

R1 означает атом водорода или -C(=O)метильную, -C(=O)фенильную, метильную группу; и/или

R2, R3, R4, одинаковые или различные, находящиеся в любом доступном положении фенильного ядра, независимо означают атом водорода, атом галогена, в частности хлор или бром, или метильную, или трифторметильную группу, причем по меньшей мере один из R2, R3, R4 отличен от H; и/или

R5 и R6, одинаковые или различные, означают атом водорода или (C_1-6)алкильную группу; и/или

R7 означает метильную или этильную группу; и/или

R8 и R9, находясь в положениях 2 и 6 пиперазинового ядра, означают атом водорода или метильную группу, этильную группу, причем по меньшей мере один из R8 и R9 отличен от H; и/или

два из R7, R8 и R9 вместе образуют цикл C₃-C₆; и/или

n означает 1 или 2;

в виде основания или кислотно-аддитивной соли.

Из соединений формулы (I) - объектов изобретения - можно назвать, в частности, следующие соединения:

соединение 1: (+)N-[4,6-дихлор-3-(бензофуран-5-ил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-индол-3-ил]-2-(4-этил-3,5-диметилпиперазин-1-ил)ацетамид;

соединение 2: (+)N-[4,6-дихлор-3-(бензофуран-5-ил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-индол-3-ил]-2-(4-этилпиперазин-1-ил)пропионамид;

в виде основания или кислотно-аддитивной соли.

В дальнейшем под защитной группой Pg понимают группу, которая позволяет, с одной стороны, защитить реакционноспособную группу, такую как гидрокси или аминогруппа, во время получения, а с другой стороны, позволяет восстановить реакционноспособную группу целой в конце получения. Примеры защитных групп, а также способы защиты и удаления защиты приведены в "Protective Groups in Organic Synthesis", Green et al., 2nd Edition (John Wiley & Sons, Inc., New York).

Под уходящей группой далее понимают группу, которая легко может быть отщеплена от молекулы в результате разрыва гетеролитической связи, с уходом электронной пары. Таким образом, эта группа легко может быть заменена другой группой, например, во время реакции замещения. Такими уходящими группами являются, например, галогены или активированная гидроксигруппа, такая как метансульфонат, бензосульфонат, п-толуолсульфонат, трифлат, ацетат и т.д. Примеры уходящих групп, а также ссылки на их получение приведены в "Advances in Organic Chemistry", J. March, 3d Edition, Wiley Interscience, 1985, p.310-316.

Согласно изобретению получить соединения общей формулы (I) можно следующим способом.

Схема 1

Соединение формулы (I), в которой R1 отличен от H, а R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 и n такие, как определено в общей формуле (I), могут быть получены реакцией соединения формулы (I), в которой R1 означает H, с соединением формулы (II):

R1-Hal (II)

в которой R1, отличный от H, определен как в общей формуле (I), и Hal означает атом галогена, например хлор, способами, известными специалисту, например, в присутствии основания такого, как K₂CO₃, NaH, t-BuO^-K⁺, в растворителе таком, как диметилформамид (ДМФА), тетрагидрофуран (ТГФ), диметоксиэтан, диметилсульфоксид (ДМСО).

Соединение общей формулы (I) может быть получено по одному из следующих вариантов.

Соединение общей формулы (I), в которой R1 означает H, может быть получено следующим способом, исходя из соединения общей формулы (V):

и соединения общей формулы (VII):

в которых R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 и n такие, как определено в общей формуле (I). Эта реакция обычно проводится с помощью агента галогенирования, такого как агент хлорирования, например, хлориды фосфора, в частности, PCl₅ или же PCl₃ или POCl₃. Реакция обычно осуществляется в присутствии пиридина или 4-диметиламинопиридина, в растворителе, таком как дихлорметан или ДМФА.

Соединение общей формулы (I), в котором R1, R5 и R6 означают H, может быть получено следующим способом, по реакции соединения общей формулы (III):

с соединением общей формулы (IV):

в которых R2, R3, R4, R7, R8, R9 и n такие, как определено в общей формуле (I), и Hal" означает атом галогена, предпочтительно хлор. Эта реакция обычно проводится с помощью основания, органического или неорганического, такого как K₂CO₃, Na₂CO₃, пиридин или 4-диметиламинопиридин, в присутствии NaI или KI, в инертном растворителе, таком как ДМФА, дихлорметан, ТГФ, диметоксиэтан или толуол.

Соединение общей формулы (III) может быть получено, исходя из соединения общей формулы (V):

и соединения общей формулы (VI):

в которых R2, R3, R4 такие, как определено в общей формуле (I), и Hal' и Hal", одинаковые или различные, независимо означают атом галогена, предпочтительно хлор.

Эта реакция обычно проводится с помощью пиридина или 4-диметиламинопиридина в растворителе, таком как толуол, бензол или дихлорметан, предпочтительно при температуре в интервале от температуры окружающей среды и до температуры кипения растворителя.

Под температурой окружающей среды понимают температуру, составляющую от 5 до 25°C.

Промежуточные соединения общей формулы (V) известны и могут быть получены способами, проиллюстрированными следующей схемой:

Схема 2

в которой R2, R3 и R4 такие, как определено в общей формуле (I), и Hal означает атом галогена, например хлор.

На этапе c в схеме 2 получают соединение формулы (V), исходя из соединения формулы (VIII), путем барботирования газообразного аммиака, в соответствии со способом, описанным в заявке FR 2714378.

Это же соединение можно получить восстановлением соединения формулы (X) согласно способам, известным специалисту, например, с помощью цинка в растворителе, таком как метанол. Получение соединения формулы (X) на этом этапе описано в заявке FR 2714378.

Оптически чистое соединение формулы (V) можно получать согласно этапам d и e на схеме 2, как описано в заявке WO 03/008407.

Промежуточные соединения общей формулы (VIII) могут быть получены способом, описанным в заявке WO 03/008407 и проиллюстрированным схемой 3.

Схема 3

в которой R2, R3 и R4 такие, как определено в общей формуле (I), и Hal означает атом галогена, например, хлор.

Соединение общей формулы (VII) может быть получено следующими способами, показанными на схемах 4 и 5.

Схема 4

Соединение общей формулы (XIII) может быть получено конденсацией соединения общей формулы (IV):

в которой R7, R8, R9 и n определены, как в общей формула (I), с соответствующим галогеновым соединением, таким как Hal”'CH₂COOAlk, где Hal”' означает атом галогена, такой как хлор, и Alk означает алкильную группу, например этил.

Эта реакция предпочтительно проводится в растворителе, таком как толуол, бензол или диоксан.

Схема 5

Соединение общей формулы (XIII) может быть получено конденсацией соединения общей формулы (XIV):

в которой R5, R6, R8, R9 и n определены как в общей формуле (I), и Alk означает алкильную группу, с соединением R7-Hal”', где Hal”' означает атом галогена, например хлор, и R7 определен как в общей формуле (I). Эта реакция предпочтительно проводится в растворителе, таком как толуол, бензол, диоксан или ДМФА, в присутствии основания, такого как триэтиламин или карбонат калия.

Согласно другому варианту осуществления соединения общей формулы (I), в которой R1 означает алкильную группу, а R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 и n такие, как определено в общей формуле (I), могут также быть получены согласно следующей схеме 6.

Схема 6

Согласно этой схеме соединение формулы (V) приводят в реакцию с защитной группой PG, получая соединение формулы (XV). В качестве защитной группы PG амина можно использовать, например, бензимин или трет-бутилкарбамат. Эти последние вводят способами, известными специалисту, например, в присутствии основания, такого как K₂CO₃, NaOH, триэтиламин, в растворителе, таком, как диоксан, ТГФ или ДМСО.

Соединение общей формулы (XVI) может быть получено реакцией соединения формулы (XV) с соединением ALK-Hal, где ALK означает насыщенную алифатическую группу, линейную или разветвленную, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, и Hal означает атом галогена, например хлор.

Соединение общей формулы (XVII) получают, исходя из соединения формулы (XVI), путем удаления защитной группы согласно хорошо известным способам, например, в кислой среде действием HCl или трифторуксусной кислоты.

Затем полученное соединение формулы (XVII) приводят в реакцию с соединением общей формулы (VII):

в которой R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 и n такие, как определено в общей формуле (I). Эта реакция обычно проводится с помощью агента галогенирования, такого как агент хлорирования, например хлориды фосфора, в частности PCl₅ или же PCl₃ или POCl₃. Реакция обычно осуществляется в присутствии пиридина или 4-диметиламинопиридина, в растворителе, таком, как дихлорметан или ДМФА.

Соединение формулы (I) необязательно превращают в одну из его кислотно-аддитивных солей.

Способ согласно изобретению при необходимости может содержать этап выделения желаемого продукта общей формулы (I).

В схемах 1, 2, 3, 4, 5 и 6 исходные соединения и реагенты, когда способ их получения не описан, могут быть приобретены в продаже или описаны в литературе, или же могут быть получены способами, описанными в литературе или известными специалисту.

Следующие примеры описывают получение некоторых соединений согласно изобретению. Эти примеры не являются ограничительными и всего лишь иллюстрируют настоящее изобретение.

Физико-химические измерения проводились следующим образом:

Температуры плавления измеряли на устройстве BUCHI B-540.

Спектры протонного магнитного резонанса (¹H-ЯМР) снимали с использованием частоты 500 МГц на приборе Bruker, оборудованном консолью Avance III. Химические сдвиги указаны в м.д. относительно частоты TMS.

Все спектры записаны при температуре 40°C.

Сокращения, используемые для характеристики сигналов, следующие: с - синглет, шир.с - широкий синглет, м - мультиплет, шир.м - широкий мультиплет, д - дублет, шир.д - широкий дублет, т - триплет, кв - квадруплет.

^* - не интегрируется из-за наложения с широким пиком от воды

^** - не интегрируется из-за наложения с пиком от растворителя в ЯМР

^*** - снят по первому порядку

^**** - наиболее распространенный диастереоизомер

^***** - наименее распространенный диастереоизомер

Условия жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией (ЖХ/УФ/МС) следующие:

Что касается жидкостной хроматографии:

колонка XTerra MS C18 3,5 мкм

- хроматографическая система

- элюент A - H₂O+0,01% TFA

- элюент B - CH₃CN.

- градиент от 98% A до 95% B за 10 минут, затем элюирование 95% B в течение 5 минут.

- скорость течения 0,5 мл/мин

- инжекция 2 мкл раствора концентрацией 0,1 мг/мл в смесь CH₃CN:H₂O = 9:1.

Продукты детектировали посредством УФ на 220 нм.

Что касается масс-спектрометрии:

- режим ионизации: катионный электроспрей (API-ES полярность+)

- сканирование в диапазоне от 100 до 1200 аем

Тонкослойная хроматография (ТСХ) проводилась на ТСХ-пластинках из силикагеля от Merck. Силикагель для колонок флэш-хроматографии выпускается фирмой Biotage.

Все используемые растворители имеют чистоту "чистый для анализа" или "чистый для ВЭЖХ".

Измерения альфа D проводились на поляриметре Perkin Elmer, модель PE341, используя ячейку с длиной оптического пути 1 дм.

В примерах и получениях:

AcOH и AcOEt означают соответственно уксусную кислоту и этилацетат.

MeOH, EtOH, tBuOH означают соответственно метанол, этанол и трет-бутанол.

ТГФ означает тетрагидрофуран

Т.пл. означает температуру плавления.

Получение 1

2-(4-этилпиперазин-1-ил)пропионовая кислота

(i) этил 2-(4-этилпиперазин-1-ил)пропионат

В колбу помещают 9,7 г этил 2-пиперазин-1-илпропионата в 150 мл ДМФА и 21,6 г карбоната калия. По каплям добавляют раствор 3,9 мл бромэтана. Оставляют реакционную смесь при 130°C в течение трех часов, карбонат отфильтровывают и концентрируют досуха. Извлекают этилацетатом. Фильтруют. Твердую фазу удаляют, жидкую фазу выпаривают в вакууме. Получают твердый продукт, кристаллизованный с этилацетатом. Фильтруют и получают 8,46 г указанного в заголовке продукта.

ТСХ: MeOH 100%, Rf=0,55.

(ii) 2-(4-этилпиперазин-1-ил)пропионовая кислота

8,45 г продукта, полученного на предыдущем этапе, добавляют к 180 мл 6 н. HCl и оставляют реакционную смесь на 4 часа при кипячении с обратным холодильником. Выпаривают досуха, промывают смесью AcOEt/EtOH 1/1 и сушат полученный твердый продукт белого цвета. Получают 5,4 г ожидаемого продукта.

ТСХ: 100% MeOH, Rf=0,2.

Получение 2

(+)3-амино-4,6-дихлор-1,3-дигидро-3-(бензофуран-5-ил)индол-2-он

(i) 3-гидрокси-4,6-дихлор-1,3-дигидро-3-(бензофуран-5-ил)индол-2-он

В колбу, снабженную механической мешалкой, в потоке азота вводят 2,25 г магния для реактива Гриньяра в 15 мл безводного ТГФ. Затем добавляют смесь 13,6 г 5-бромбензофурана в 35 мл безводного ТГФ. Продолжают перемешивать в течение одного часа, затем добавляют раствор 5 г 4,6-дихлор-1H-индол-2,3-диона в 50 мл безводного ТГФ. Оставляют перемешиваться при температуре окружающей среды на четыре с половиной часа. Добавляют воду и экстрагируют этилацетатом. Выделяют органическую фазу, которую сушат над Na₂SO₄, фильтруют и выпаривают в вакууме. Извлекают этилацетатом и промывают 1 н. раствором соды. Органическую фазу сушат над Na₂SO₄, фильтруют и выпаривают в вакууме. Твердую фазу вводят в этиловый эфир и фильтруют. Получают 4,2 г ожидаемого продукта.

(ii) 3,4,6-трихлор-1,3-дигидро-3-(бензофуран-5-ил)индол-2-он

В колбу, снабженную магнитной мешалкой, в потоке азота вводят 4,1 г продукта с предыдущего этапа в 40 мл дихлорметана. При 0°C добавляют 1,7 мл пиридина и смесь 1,4 мл SOCl₂ в 30 мл дихлорметана. Оставляют реакционную смесь при температуре окружающей среды, затем выливают в насыщенный водный раствор NH₄Cl. Выделяют органическую фазу, которую сушат над Na₂SO₄, фильтруют и выпаривают в вакууме.

ТСХ: гексан/AcOEt 7/3, Rf=0,65.

(iii) 4,6-дихлор-[[(1S)-2-гидрокси-1-фенилэтил]амино]-1,3-дигидро-3-(бензофуран-5-ил)индол-2-он, изомер A и изомер B

В потоке азота смешивают 4,1 г соединения предыдущего этапа в 50 мл дихлорметана и 3,1 г S-фенилглицинола. Оставляют смесь на ночь при температуре окружающей среды. Образованную твердую фазу фильтруют, фильтрационный раствор выпаривают досуха и очищают на колонке, используя как элюент смесь гексан/AcOEt 8:2.

Получено 0,64 г менее полярного продукта (изомер A, Т.пл.=135°C) и 1,23 г более полярного изомера B.

(iv) (+)-3-амино-5,6-дихлор-1,3-дигидро-3-(4-дихлорфенил)индол-2-он

Растворяют 1,21 г продукта, полученного на предыдущем этапе, в смеси 20 мл дихлорметана и 15 мл метанола. Добавляют 1,26 г Pb(OAc)₄ и оставляют реакционную смесь при температуре окружающей среды на 1 час. Выпаривают досуха и извлекают этилацетатом, затем промывают насыщенным водным раствором NaHCO₃. Органическую фазу сушат, фильтруют и концентрируют. Извлекают смесью 36 мл 3 н. соляной кислоты и 3,7 мл метанола и оставляют перемешиваться на ночь. Концентрируют и разбавляют смесью воды и дихлорметана. Органическую фазу промывают раствором 1 н. соляной кислоты. Водные фазы объединяют, доводят до основного значения pH водным раствором NH₃ и экстрагируют дихлорметаном. Органическую фазу сушат, фильтруют и концентрируют, чтобы получить 870 мг белого твердого продукта.

Т.пл.: 215-216°C.

ЖХ/МС: (M+H)⁺ - m/z 333 аем; rt=5,3 минуты.

Пример 1

(+)N-[4,6-дихлор-3-(бензофуран-5-ил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-индол-3-ил]-2-(4-этил-3,5-диметилпиперазин-1-ил)ацетамид

(i) 2-хлор-N-[4,6-дихлор-3-(бензофуран-5-ил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-индол-3-ил]ацетамид

В колбу, снабженную магнитной мешалкой, в потоке азота вводят 0,43 г продукта, полученного в получении 2, 15 мл толуола, 0,11 мл пиридина и 0,11 мл хлорацетилхлорида. Оставляют реакционную смесь при 110°C в течение 4 часов, затем ее выливают в воду и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу сушат над Na₂SO₄, фильтруют и выпаривают в вакууме. Получают 500 мг твердого продукта бежевого цвета, очищают на колонке методом флэш-хроматографии смесью циклогексан/этилацетат 8:2, чтобы получить 330 мг ожидаемого продукта.

ТСХ: гексан/AcOEt 1/1, Rf=0,5.

(ii) (+)N-[4,6-дихлор-3-(бензофуран-2-ил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-индол-3-ил]-2-(3,5-диметил-4-этилпиперазин-1-ил)ацетамид

В колбу, снабженную магнитной мешалкой, вводят 0,31 г продукта предыдущего этапа, 0,08 мл 2,6-диметил-N-этилпиперазина (d 0,899), 0,1 г карбоната калия, 0,05 г йодида натрия в 5 мл ДМФА. Оставляют реакционную смесь при 60°C в течение 4 часов, затем выливают ее в воду и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу сушат над Na₂SO₄, фильтруют и выпаривают в вакууме. Получают указанный в заголовке продукт.

Т.пл.=157-160°C; [α_D]=+191°, c=0,946 вес.% в MeOH;

ЖХ/МС: (M+H)⁺ - m/z 515 аем; rt=4,9 минуты

Пример 2

(+)N-[4,6-дихлор-3-(бензофуран-5-ил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-индол-3-ил]-2-(4-этилпиперазин-1-ил)пропионамид

1) В потоке азота в 12 мл безводного дихлорметана, охлажденного на ледяной бане, добавляют 520 мг PCl₅, затем медленно добавляют 430 мг кислоты получения 1. Реакционную смесь перемешивают при 0°C 10 минут, затем 3 часа при температуре окружающей среды.

2) С другой стороны, в потоке азота суспендируют 300 мг продукта получения 2 в 12 мл дихлорметана, затем добавляют 0,3 мл пиридина. Охлаждают на ледяной бане. По каплям добавляют раствор, полученный на этапе 1), и перемешивают при температуре окружающей среды в течение одного часа.

Реакционную смесь выливают в воду и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают насыщенным раствором NaHCO₃, сушат над Na₂SO₄, фильтруют и выпаривают в вакууме. Получают 500 мг твердого продукта оранжевого цвета, очищают на флэш-хроматографической колонке, используя как элюент смесь этилацетат/метанол 1:1, чтобы получить указанный в заголовке продукт.

Т.пл.=137-138°C; [α_D]=+217°, c=0,1064 вес.% в MeOH.

ЯМР: δ (м.д., ДМСО-d₆): 0,99 (м, 3H), 1,08 (м, 3H), 2,24-2,45 (м, 6H), 2,47-2,68 (м, ^**), 3,18-3,33 (м, ^*), 6,92 (м, 1H), 7,01 (с, 1H), 7,19 (м, 1H), 7,21-7,28 (м, 1H), 7,50 (шир.с, 1H), 7,65 (д, J=8,8 Гц, 1H), 8,02 (с, 1H), 8,61 (с, 0,4H^*****), 8,73 (с, 0,6H^****), 10,64 (с, 0,6H^****), 10,71 (с, 0,4H^*****).

ЖХ/МС: (M+H)⁺ = m/z 501 аем; rt=4,9 минуты

Пример 3

(+)N-[4,6-дихлор-3-(бензофуран-5-ил)-2-оксо-2,3-дигидро-1H-индол-3-ил]-2-(4-этил-3-метилпиперазин-1-ил)ацетамид

Действуют, как описано для примера 1, но используя 2-метил-N-этилпиперазин вместо 2,6-диметил-N-этилпиперазина, получают указанное в заголовке соединение.

Соединения согласно изобретению были объектом исследования in vivo.

Опыт in vivo

Самцы крыс Crl CD BR (Charles River, Италия) весом 150-175 г находились в камере при контролируемых температуре (22±1°C), влажности (55±10%) и с циклом свет-темнота 12 часов в течение по меньшей мере 7 дней перед их использованием. Пища и вода были доступны ad libitum. Питание прекращали за 18 часов до умерщвления животных. Крыс умерщвляли путем цервикальной дислокации, желудок удаляли хирургическим путем, разрезая вдоль наименьшей кривизны, и помещали в раствор Кребса (состав (мМ): NaCl 118,4; KCl 4,7; CaCl₂ 2,5; NaH₂PO₄ 3,7; MgSO₄ 1,2; NaHCO₃ 25; глюкоза 5,6). Уход за животными и их умерщвление проводили согласно международному этическому кодексу Sanofi-Aventis и международным принципам, регулирующим уход и обработку животных в лаборатории (E.E.C. Directive 86/609, DJL358, 1, 12 декабря 1987 года). Полоски примерно 1 см (шириной 5 мм) свода желудка разрезали по продольной оси и суспендировали в 20 мл ванны, наполненной раствором Кребса, при 37°C и продували смесью газов 95% O₂ + 5% CO₂. Полоски поддерживали под остаточной нагрузкой 1 г и после промывки холином (предшественник ацетилхолина) в среду добавляли 10 мкМ и 10 мкМ индометацина (ингибитор простагландин-синтетазы), чтобы уменьшить спонтанные фазовые сокращения (Depoortere et al., Eur. J. Pharmacol. 515, 1-3, 160-168, 2003; Dass et al. Neurosciences 120, 443-453, 2003). Изотонические сокращения возбуждали путем стимуляции электрическим полем. Два электрода из платиновой проволоки помещали у поверхности и дна ванны устройства, и стимуляция электрическим полем была реализована стимулятором Power Lab (AD Instruments Pty Ltd. Castle Hill, Австралия), соединенным с генератором мультиплексных импульсов (Ugo Basile, Varese, Италия) (Fukuda et al., Scand. J. Gastroenterol. 12, 1209-1214, 2004). Прикладывалась супрамаксимальная стимуляция, чтобы создать максимальные сокращения (20 Гц, ширина импульса: 2 миллисекунды; 5 вольт; I/O последовательности каждые 2 минуты, 150 мА). Затем ток снижали, чтобы получить субмаксимальную стимуляцию (50% снижения от максимальной сокращательной реакции). Сокращения регистрировались компьютером с системой записи и анализа данных (Power Lab, Chart 5), соединенной с изотоническими трансдукторами (Ugo Basile, Varese, Италия) через предусилители (Octal Bridge Amp). После стабилизации были начерчены интегральные кривые концентрация-отклик грелина (0,1 нМ - 1 мкМ), с и без инкубации (время контакта: 30 мин) молекул-антагонистов. Супрамаксимальная стимуляция электрическим полем использовалась для каждой полоски как эталон (100%), чтобы классифицировать отклики по испытуемому веществу. Концентрация агониста, производящая эффект 50% от максимума (EC₅₀), была рассчитана, используя математическую модель с четырьмя параметрами, согласно Ratkovsky и Reedy (Biometrics, 42, 575-582, 1986), с подгонкой методом нелинейной регрессии, используя алгоритм Levenberg-Marquard в программе Everstat. Значения pKB для антагонистов были рассчитаны по уравнению Cheng-Prusoff (Kenakin et al., Competitive Antagonism, Pharmacologie Analysis of Drug-Receptor Interaction, 3d edition, 331-373, Philadelphie, New York; Raven: Lippincott, 1997).

Соединения формулы (I) имеют антагонистическую активность к рецептору грелина с CI₅₀, варьирующейся от 5·10^-8 М до 1·10^-9 M.

Например, соединение примера 2 показало CI₅₀ 1,2·10^-8 M.

Соединения формулы (I) продемонстрировали интересные фармакологические свойства для разработки лекарственного средства, в частности лекарственных средств, предназначенных для профилактики или лечения любой патологии, в которую вовлечен рецептор грелина.

Так, согласно одному из других его аспектов объектом изобретения являются лекарственные средства, которые содержат соединение формулы (I) или соль присоединения к этому последнему фармацевтически приемлемой кислоты.

Таким образом, соединения согласно изобретению могут вводиться людям или животным для лечения или профилактики различных заболеваний, зависимых от грелина. Так, соединения согласно изобретению могут применяться в качестве анорексических средств, для регуляции аппетита, приема пищи и частоты приема пищи, а также, в долговременной перспективе, для регуляции веса, в частности, прибавки в весе, происходящей после отмены диеты или после терапевтического режима. Таким образом, соединения согласно изобретению особенно полезны для профилактики или лечения ожирения, расстройств аппетита, диабета, избыточного веса и/или их последствий.

Согласно другому его аспекту настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим в качестве действующего вещества соединение по изобретению. Эти фармацевтические композиции содержат эффективную дозу по меньшей мере одного соединения согласно изобретению или фармацевтически приемлемую соль, а также по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.

Указанные эксципиенты выбирают в соответствии с фармацевтической формой и желаемым способом введения из обычных эксципиентов, которые известны специалисту.

В фармацевтических композициях по настоящему изобретению для перорального, сублингвального, подкожного, внутримышечного, внутривенного, топического, местного, внутритрахеального, интраназального, трансдермального или ректального введения действующее вещество формулы (I) выше или его соль могут вводиться в дозированной лекарственной форме, в смеси с классическими фармацевтическими эксципиентами, животным и человеку для профилактики или лечения упомянутых выше расстройств или заболеваний.

Подходящие единичные формы введения содержат формы для перорального введения, такие как таблетки, мягкие или твердые капсулы, порошки, гранулы и пероральные растворы или суспензии, формы для сублингвального, буккального, внутритрахеального, внутриглазного, интраназального введения, для введения ингаляцией, формы топического, чрескожного, подкожного, внутримышечного или внутривенного введения, формы для ректального введения и импланты. Для топического введения соединения по изобретению можно использовать в кремах, гелях, мазях или лосьонах.

Например, одна разовая форма введения соединения по изобретению в виде таблетки может содержать следующие компоненты, мг:

Для перорального приема доза действующего вещества, вводимая за сутки, может достигать от 0,1 до 100 мг/кг, за один или несколько приемов. При парентеральном введении она может достигать от 0,01 до 10 мг/кг в сутки.

Могут быть особые случаи, когда подходят более высокие или более низкие дозировки; такие дозировки не выходят за рамки изобретения. Согласно обычной практике дозировка, подходящая для каждого пациента, определяется врачом в зависимости от способа введения, веса и реакции указанного пациента.

Возможные сочетания

Настоящее изобретение относится также к комбинациям одного или нескольких соединений согласно изобретению общей формулы (I) с одним или несколькими активными ингредиентами.

В качестве активных ингредиентов, подходящих для указанных комбинаций, можно назвать, в частности, средства от ожирения и от диабета, а также римонабант, метформин или сульфонилмочевину.

Настоящее изобретение, согласно другому его аспекту, относится также к способу лечения указанных выше патологий, который включает введение пациенту эффективной дозы соединения по изобретению или одной из его фармацевтически приемлемых солей.

Настоящее изобретение, согласно другому его аспекту, относится также к соединению формулы (I) или одной из его фармацевтически приемлемых солей для лечения указанных выше патологий.