СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ КОЭФФИЦИЕНТА РАЗМНОЖЕНИЯ КАПУСТЫ БЕЛОКОЧАННОЙ В УСЛОВИЯХ IN VITRO

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к селекции растений, и может найти применение при размножении регенерантов с высокими иммунными показателями и продуктивностью.

Известен способ размножения растений in vitro, где используют незрелые зародыши, регуляторы роста в составе бензиламинопурина и дихлорфеноксуксусной кислоты, с дальнейшим развитием каллуса на модифицированной среде (патент №2478282 от 27.10.2012 г. МПК A01H 1/04).

Однако способ усложнен рядом элементов для получения регенерантов, устойчивых к болезням. Кроме того, для достижения результатов используют селективную среду (MS) с фильтратами грибов и регуляторов, значительно усложняющими способ.

Наиболее близким техническим решением является способ, в котором в качестве эксплантов используют трубки околоцветника и цветоножки, которые культивируют на питательной среде Мурасиге-Скуга, куда вносят питательную среду, дополненную стимуляторами роста (патент №2479992 от 27.04.2013 г. МПК A01H 4/00).

Недостатком способа-прототипа является то, что при получении растений таким методом могут произойти изменения генетического плана, которые способствуют получению неоднородного потомства. Особенно это важно при использовании с цитоплазматической мужской стерильностью (ЦМС), поскольку у таких растений не формируется полноценная пыльца и, соответственно, невозможно самоопыление. Следовательно, для упрощения семеноводства ЦМС-линий необходима регенерация растений в условиях in vitro.

Технический результат - упрощение способа регенерации растений с признаками ЦМС.

Техническое решение заявленного объекта достигается тем, что выращивание эксплантов, культивирование их на питательной среде Мурасиге-Скуга, внесение в нее регуляторов роста тидиазурон в концентрации 1 мг/л в сочетании с индолил-3-уксусной кислотой - 0,5 мг/л при использовании цветолож размером 0,2-0,3 мм, изолированных из бутонов длиной 0,5-0,7 мм. При этом цветоложе используют за 1-2 дня до распускания цветков и после выращивания их на питательных средах культивируют до образования почек в течение 14-21 суток.

Способ осуществляется следующим образом.

За 1-2 суток до цветения отбирали бутоны линий капусты белокочанной с цитоплазматической мужской стерильностью и самонесовместимостью. Параметры 1-2 суток обоснованы хорошо развитым цветоложем. После 3 суток при раскрытии бутонов и кастрации цветоложе in vitro слабо развивается и погибает. Использование 6-бензиладенина в такой концентрации (БАП) является необходимым элементом, так как в таких дозах (4 мг/л) регулятор роста способствует усилению метаболизма и делению клеток. Индолил-3-уксусная кислота и нафтилуксусная кислота в предлагаемых концентрациях принимают участие в корнеобразовании (при рН 5,6).

Культивирование эксплантов более 21 суток приводит к изменению генотипа. Ниже этого предела замедляется процесс регенерации.

Пример. Отбирали бутоны 5-ти линий капусты белокочанной, характеризующихся ЦМС: ФК 121, БР 2124, ТС 2567, К 5289, ЛИ 2351 в возрасте 1-2 суток, когда хорошо развито цветоложе, размер которого составлял 0,2-0,3 мм, изолированных из бутонов длиной 0,5-0,7 мм. Извлеченные цветоложа стерилизовали и помещали на питательную среду двух видов, один из которых содержал тидиазурон (ТДА) в количестве 1 мг/л в сочетании с индолил-3-уксусной кислотой (ИУК) - 0,5 мг/л, а во втором субстрате содержалось 6-бензиладенин (БА) - 4 мг/л с а-нафтилуксусной кислотой (НУК) - 0,5 мг/л. В питательных растворах содержание сахарозы - 3% и агара - 0,6%. На следующем этапе для образования побегов и их размножения использовали среду MS - Б, содержащую БА в концентрации 1 мг/л и НУК 0,1 мг/л.

Дальнейшие жизнеспособные побеги укореняли на среде MS, без регуляторов роста, а также с НУК, используемой в концентрации 0,1 мг/л, и ИУК - 0,1 мг/л, концентрация сахарозы - 1%. Укоренившиеся растения-регенеранты высаживали in vitro для их последующей адаптации к обычным условиям среды.

Результаты опытов сведены в таблицах 1, 2 и 3.

Следовательно, предлагаемый способ позволяет получить большее количество растений-регенерантов с признаками ЦМС и получить генетически стабильный урожай селекционных образцов.