Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ АПЛАСТИЧЕСКОЙ АНЕМИИ ПОСЛЕ СПЛЕНЭКТОМИИ

Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и может быть использовано для определения прогноза течения заболевания у больных апластической анемией после спленэктомии путем морфометрического исследования гистологических срезов селезенки при окраске гематоксилином и эозином.

Апластическая анемия (АА) - заболевание системы крови, характеризующееся глубокой панцитопенией, которая развивается в результате угнетения костномозгового кроветворения с замещением клеточного костного мозга - жировым, разной степени выраженности. Одним из ведущих механизмов поражения кроветворения при АА считается иммунная агрессия, направленная на клетки-предшественники гемопоэза.

Причиной данного заболевания могут быть лекарственные препараты, контакт с некоторыми химическими веществами, вирусные и бактериальные инфекции. Определенное значение имеет генетическая предрасположенность [Neal S. Young et al. Current concepts in the pathophisiology and treatment of aplastic anemia / Blood. - 2006. - Vol.108. - P.2509-2519].

Применяют два основных метода лечения больных - аллогенную трансплантацию костного мозга и комбинированную иммуносупрессивную терапию. В определенных случаях (отсутствие эффекта, рецидивы, высокая зависимость от гемотрансфузий, непереносимость препаратов) - выполняют спленэктомию.

Протокол комбинированной иммуносупрессивной терапии больных приобретенной апластической анемией, в которой в качестве основного иммунодепрессанта используется циклофосфамид, предусматривает обязательное проведение спленэктомии на ранних этапах лечения [Патент на изобретение N 2412708 от 27.11.2008. Российская Федерация. (51) МПК A61K 31/675, A61P 35/02. Способ индукции ремиссии у больных приобретенной апластической анемией / Югов Ю.И., Федоровская Н.А.]. Согласно этому методу лечения, операцию удаления селезенки проводят как можно раньше от начала терапии глюкокортикоидами. После спленэктомии больным назначают курсы циклоспорина-А и циклофосфамида. Компоненты крови и сопроводительное лечение применяют по общепринятым протоколам.

Оценка результатов лечения проводится по следующим критериям [Программное лечение заболеваний системы крови: Сборник алгоритмов диагностики и протоколов лечения заболеваний системы крови / Под ред. В.Г. Савченко. - М.: Практика, 201.2. - С.137-150]: 1. ремиссия (полная или частичная) - полная или частичная нормализация показателей гемограммы (гемоглобин >100,0 г/л, гранулоциты >1,5x10⁹/л, тромбоциты >100,0x10⁹) и отсутствие потребности в заместительной терапии компонентами крови; 2. клинико-гематологическое улучшение - улучшение показателей гемограммы (гемоглобин >80,0 г/л, гранулоциты >1,0x10⁹ /л, тромбоциты >20,0x10 /л), исчезновение или значительное уменьшение зависимости от трансфузий компонентов крови.

Целью изобретения является разработка способа морфометрической оценки прогноза течения АА после спленэктомии путем вычисления массы белой пульпы селезенки по гистологическим срезам при окраске гематоксилином и эозином.

Близким техническим решением к предлагаемому изобретению является известный способ оценки функционального состояния составляющих белой пульпы селезенки с применением антител, экспрессирующихся только на лимфоцитах CD20 и CD3 при портальной гипертензии [Li Z., Zhang S., Lv G. et al. / Changes in count and function of splenic lymphocytes from patients with portal hypertension // World J. Gastroenterol. - 2008. - Vol.14 (15). - P. 2377-2382]. Основными недостатками используемого метода являются, во-первых, что подсчет массы проводился нефункциональной зоны (белой пульпы), а относительного и абсолютного количества лимфоцитов. Во-вторых, вычисления основывались не на морфометрическом анализе гистологического материала, а на иммунофенотипической оценке клеток суспензии селезенки. Следовательно, данный метод не позволяет количественно точно оценить состояние белой пульпы селезенки и ее составляющих, трудоемкий и требует дорогостоящих расходных материалов.

Способа прогнозирования течения апластической анемии после спленэктомии не существует.

В процессе проведения патентно-информационного поиска не выявлено источников, порочащих новизну предлагаемого изобретения.

Заявляемое изобретение разработано в лаборатории патоморфологии крови ФГБУН КНИИГиПК ФМБА России в соответствии с планом НИР.

Способ осуществляется следующим образом.

Определяют массу удаленной селезенки, выполняют гистологическую проводку образцов послеоперационного материала общепринятым способом. Морфометрический анализ гистологических срезов с окраской гематоксилином и эозином осуществляют в световом микроскопе (с окуляром x10, при объективе x20) с помощью компьютерной программы ImageScope Color, версии M, подсчитывают среднюю площадь белой пульпы селезенки. Для этого проводят ее измерения в 50 полях зрения для каждого образца, начиная расчеты по направлению от капсулы вглубь лимфоидного органа.

Исходя из полученных результатов, вычисляют массу белой пульпы селезенки по формуле:

m=m_сел x D%/100%,

где m - масса белой пульпы (г),

m_сел - общая масса селезенки (г),

D - средняя площадь белой пульпы, %.

Масса белой пульпы ≤8,4 г отражает благоприятный прогноз течения АА, а >8,4 г указывает на неблагоприятное течение заболевания. Способ позволяет более дифференцировано подходить к лечению пациентов после спленэктомии.

Примеры конкретного выполнения

Пример 1.

Больной Ш., 21 год, поступил в гематологическое отделение 19.07.1999 г. Анализ крови при поступлении: гемоглобин 79 г/л, гранулоциты 0,3x10%, тромбоциты 15,0x10%. Диагноз: апластическая анемия, тяжелая форма. Больному назначено лечение по отработанному в клинике способу [Югов Ю.И. и др. Способ индукции ремиссии у больных приобретенной апластической анемией/ патент на изобретение №2412708 от 27.11.2008]. Выполнена операция (03.08.99 г.): срединная лапаротомия, спленэктомия - без осложнений. Масса селезенки составила 100 г. Проведено морфометрическое исследование гистологических срезов селезенки, окрашенных гематоксилином и эозином. Средняя площадь белой пульпы составила 9,3%. В ходе следующего расчета (100 г x 9,3% / 100%, где 100 г - масса селезенки больного; 9,3% - средняя площадь белой пульпы) определена масса белой пульпы селезенки - 9,3 г.

Заключение: с помощью полученных данных установлено, что у больного неблагоприятный прогноз.

Общая доза циклофосфамида после спленэктомии составила 9,0 грамм. Состояние клинико-гематологического улучшения наступило (20.09.2000) через 13,5 мес.: гемоглобин 93 г/л, гранулоциты 1,06x10%, тромбоциты 90x10%. Зависимость от гемотрансфузий сохранялась. Состояние ремиссии было достигнуто (19.02.2001) через 18,5 мес.: гемоглобин 138 г/л, гранулоциты 3,0x10%, тромбоциты 150x10%.

Пример 2.

Больная Е., 39 лет. поступила в гематологическую клинику 06.04.1995. Анализ крови при поступлении: гемоглобин 36 г/л, гранулоциты 0,37x10 /л, тромбоциты 15,0x10%. Диагноз: апластическая анемия, тяжелая форма. Больной назначено лечение по отработанному в клинике способу [Югов Ю.И. и др. Способ индукции ремиссии у больных приобретенной апластической анемией / патент на изобретение №2412708 от 27.11.2008]. Выполнена операция (11.05.95) срединная лапаротомия, спленэктомия - без осложнений. Масса селезенки составила 170 г. Проведено морфометрическое исследование гистологических образцов селезенки, окрашенных гематоксилином и эозином. Средняя площадь белой пульпы составила 3,6%. В ходе следующего расчета: m=170 г x 3,6% / 100%, где 170 г - масса селезенки больной, 3,6% - средняя площадь белой пульпы, определена масса белой пульпы - 6,1 г.

Заключение: с помощью полученных гистологических данных установлено, что у больной благоприятный прогноз.

Общая доза циклофосфамида после спленэктомии 3,0 г. Состояние клинико-гематологического улучшения наступило (20.06.1995) через 2,5 месяца: гемоглобин 83 г/л, гранулоциты 1,06x10⁹/л, тромбоциты 45x10⁹/л. Зависимости от гемотрансфузий нет. Состояние ремиссии было достигнуто (31.03.1996) через 12 месяцев: гемоглобин 123 г/л, гранулоциты 3,5х10%, тромбоциты 200x10⁹/л.

Согласно морфометрическому исследованию прогноз течения АА был определен у 31 больных от 18 до 65 лет (21 - лица мужского пола и 10 - женского). Нетяжелая форма заболевания установлена у 12 пациентов, тяжелая у 19. Больных с благоприятным течением заболевания 11 (8 - с нетяжелой формой; 3 с - тяжелой). У 20 определен неблагоприятный прогноз (у 4 - при нетяжелой форме, у 16 - при тяжелой).

Заявляемое изобретение обладает новизной, заключающейся в возможности с помощью массы селезенки и морфометрического исследования площади белой пульпы прогнозировать течение АА после спленэктомии.

Приведенные данные свидетельствуют о том, что предлагаемый способ определения прогноза течения заболевания может давать различные значения, независимо от установленной тяжести болезни. Способ может быть использован в практической гематологии, лабораториях патоморфологии в качестве дополнительного критерия для дифференцированного подхода при назначении терапии.