×
10.10.2014
216.012.fcf3

ИНГИБИТОР ОБРАЗОВАНИЯ ЦИНК-ЗАВИСИМЫХ ДИМЕРОВ БЕТА-АМИЛОИДА

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Настоящее изобретение относится к использованию эналаприлата, водорастворимого вещества на основе дипептида [L-аланил]-[L-пролин], в области медицины. Предложно применение эналаприлата в качестве средства для ингибирования образования цинк-зависимых димеров бета-амилоида. Технический результат заключается в ингибировании образования цинк-зависимых димеров бета-амилоида. 3 ил., 1 табл.
Основные результаты: Применение эналаприлата в качестве средства для ингибирования образования водорастворимых цинк-зависимых димеров бета-амилоида.
Реферат Свернуть Развернуть

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к использованию эналаприлата для ингибирования цинк-индуцированных димеров бета-амилоида.

Уровень техники

Избыточное накопление бета-амилоида в тканях организма человека в виде внеклеточных надмолекулярных ансамблей - амилоидных бляшек - является одним из главных нейроморфологических признаков ряда нейродегенеративных патологий, включающих, например, болезнь Пика, синдром Дауна [1]. Одним из признанных путей поиска средств лечения таких заболеваний является поиск ингибиторов образования водорастворимых олигомеров бета-амилоида [2]. Необходимым условием образования агрегатов является димеризация мономеров бета-амилоида [3, 4, 5]. Ионы цинка играют критическую роль при агрегировании бета-амилоида in vivo [6]. В настоящее время для моделирования олигомеризации бета-амилоида в отсутствии ионов двухвалентных металлов широко используются оптические биосенсоры [7]. Однако в условиях экспериментов с использованием оптических биосенсоров ионы цинка вызывают необратимую полимеризацию бета-амилоида на поверхности оптического чипа, что приводит этот чип в негодность и, соответственно, не позволяет проводить исследования по скринингу потенциальных ингибиторов цинк-зависимой олигомеризации бета-амилоида.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к использованию эналаприлата для ингибирования цинк-индуцированных димеров бета-амилоида. Недавно нами было установлено, что домен 1-16 бета-амилоида является молекулярной детерминантой цинк-зависимой димеризации бета-амилоида [[8, 9]. Эти данные позволили разработать модельную систему цинк-зависимой димеризации бета-амилоида на основе использования биосенсорной системы, в которой иммобилизованный на поверхности оптического чипа фрагмент 1-16 бета-амилоида образует устойчивые цинк-связанные димеры с синтетическим аналогом участка 1-16 бета-амилоида, присутствующим наряду с ионами цинка в качестве водорастворимого аналита в проточной буферной системе при физиологических значениях pH. Таким образом, данная система является моделью цинк-зависимой димеризации бета-амилоида и предоставляет возможность в режиме реального времени оценить способность различных водорастворимых веществ препятствовать образованию цинк-связанных димеров участка 1-16 бета-амилоида. В настоящем изобретении с помощью этой системы было найдено, что эналаприлат является ингибитором цинк-зависимой димеризации бета-амилоида.

Технический результат

Технический результат, достигаемый при использовании патентуемого изобретения, заключается в ингибировании цинк-зависимой димеризации бета-амилоида.

Пример осуществления изобретения

Для определения ингибирующего эффекта эналаприлата на образование цинк-связанных димеров бета-амилоида была задействована экспериментальная модель in vitro цинк-зависимой димеризации бета-амилоида на основе оптического биосенсора поверхностного плазмонного резонанса «BIAcore Т100» (GE Healthcare, США). В качестве оптического чипа, на поверхности которого впоследствии должен находиться иммобилизованный синтетический аналог участка 1-16 бета-амилоида, был использован оптический четырехканальный чип «СМ5» с гидрофильной карбоксиметилированной декстрановой матрицей. Все анализы на этом термостатированном чипе проводились при температуре 25°C. Иммобилизация синтетического пептида Acetyl-DAEFRHDSGYEVHHQKGGGGC-Amide («Aβ1-16-G4-C»), содержащего на своем N-конце фрагмент 1-16 бета-амилоида, на поверхность чипа «СМ5» проводилась в соответствии с протоколом формирования тиольной связи, описанном в «Sensor surface handbook)) (GE Healthcare, США). Пептид был иммобилизован посредством образования тиольной связи в 10 мМ растворе ацетата натрия (pH 4.5). Для регенерации был использован буфер «HBS», содержащий 10 мМ HEPES, 3 мМ EDTA, 0.005% Р20 и 150 мМ NaCl (pH 7.4). Рабочий буфер содержал 50 мМ HEPES (pH 6.8) и 100 мкМ ионов цинка. Перед использованием все буферные растворы фильтровались (0.45 мкм, nylon). Скорость потока при иммобилизации составляла 5 мкл/мин. Карбоксиметилированная декстрановая матрица была активирована инъекцией смеси (1:1) растворов 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimide (EDC) и N-hydroxysuccinimide (NHS): 30 мкл, 400 мМ EDC, 100 мМ NHS, а затем инъекцией раствора 80 мМ 2-(2-pyridinyldithio)-ethaneamine (PDEA) в 0.1 М борате натрия (pH 8.5). Далее раствор пептида «Aβ1-16-G4-C» (0.05 мг/мл в 0.1 М натрий-ацетатном буфере, pH 4.0, содержащем 1 М NaCl был введен в активированный канал чипа. Непрореагировавшие дисульфидные группы на поверхности чипа «СМ5>> были нейтрализованы с помощью раствора 50 мМ цистеина в 0.1 М натрий-ацетатном буфере (pH 4.0). Уровень сигнала иммобилизованного лиганда «Aβ1-16-G4-C)) составил 1023 RU. В контрольном канале чипа процедура иммобилизации была проведена аналогично за исключением этапа активации поверхности. Сенсограмма процесса иммобилизации приведена на рис. 1.

Для проведения экспериментов по оценке ингибирующего эффекта различных соединений на образование цинк-связанных димеров домена 1-16 бета-амилоида было приготовлено несколько рабочих буферов (таблица 1). С учетом тестируемых соединений образцы водорастворимого аналита «Аβ1-16» были приготовлены в соответствующем рабочем буфере. Каждый аналит (общий объем 25 мкл) затем был пропущен над поверхностью чипа при скорости 5 мкл/мин в течение 300 секунд. Далее поверхность чипа подвергалась прохождению рабочего буфера в отсутствии аналита в течение 300 секунд и чип был регенерирован регенерационным буфером (20 мкл). Сигнал из контрольного канала чипа (без иммобилизованного лиганда) вычитался из сигнала, соответствующего каналу с иммобилизованным лигандом.

В качестве контроля образцы водорастворимого аналита «Аβ1-16» были приготовлены в рабочих буферах №1 и №2 (см. табл.1). Ранее уже было показано, что в отсутствие ионов цинка взаимодействие аналита «Аβ1-16» с иммобилизованным «Аβ1-16-G4-C» не наблюдается, тогда как в присутствии ионов цинка на поверхности оптического чипа регистрируется димеризация с участием иммобилизованного «Aβ1-16-G4-C» и аналита «Аβ1-16» [10]. Исходя из данной предпосылки в качестве рабочего буфера, содержащего тестируемые соединения, был использован буфер №2.

На рис. 2 приведены сенсограммы связывания водорастворимого синтетического аналога участка 1-16 бета-амилоида, Acetyl-DAEFRHDSGYEVHHQK-Amide («Аβ1-16»), с иммобилизованным пептидом «Aβ1-16-G4-C» в присутствии эналаприлата, лизиноприла и каптоприла, а также в их отсутствие. На рис. 3 показана гистограмма (на основании вышеуказанных сенсограмм) уровней сигналов оптического биосенсора, на чипе которого иммобилизован пептид «Aβ1-16-G4-C», а в качестве водорастворимого аналита использовался пептид «Аβ1-16» в присутствии ионов цинка (100 мкМ) при pH pH 6.8 в зависимости от наличия в пробе аналита эналаприлата, каптоприла или лизиноприла. В отсутствие этих веществ уровень сигнала (76 RU) максимальный и соответствует образованию цинк-связанного димера пептидов «Aβ1-16» и «Aβ1-16-G4-C». Наличие эналаприлата в пробе аналита резко снижает количество димеров, что отражается на уменьшении сигнала оптического биосенсора до 10 RU, что по техническим рекомендациям производителя данного прибора находится за порогом достоверности измерений и указывает на отсутствие образования димеров. В то же время остальные протестированные соединения, лизиноприл и каптоприл, которые по своей химической структуре и физико-химическим свойствам являются аналогами эналаприлата [11], показали отсутствие значимого влияния на ингибирование образования димеров бета-амилоида. Полученные данные свидетельствуют, что эналаприлат является специфическим ингибитором образования цинк-зависимых димеров бета-амилоида.

Список использованной литературы

[1] С.И. Гаврилова. Фармакотерапия болезни Альцгеймера. Пульс, Москва, 2007.

[2] Е. Karran, М. Mercken, В.De Strooper, The amyloid cascade hypothesis for Alzheimer's disease: an appraisal for the development of therapeutics, Nat Rev Drug Discov 10 (2011) 698-712.

[3] M.T. Fodero-Tavoletti, V.L. Villemagne, C.C. Rowe, C.L. Masters, K.J. Barnham, R. Cappai, Amyloid-β: The seeds of darkness, The International Journal of Biochemistry & amp; Cell Biology 43 (2011) 1247-1251.

[4] M.E. Larson, S.E. Lesne, Soluble Abeta oligomer production and toxicity, J Neurochem 120 Suppl 1 (2012) 125-139.

[5] G. Shankar, S. Li, T. Mehta, A. Garcia-Munoz, N. Shepardson, I. Smith, F. Brett, M. Farrell, M. Rowan, C. Lemere, C. Regan, D. Walsh, B. Sabatini, D. Selkoe, Amyloid-beta protein dimers isolated directly from Alzheimer's brains impair synaptic plasticity and memory, Nat Med 14 (2008) 837-842.

[6] A.I. Bush, The Metal Theory of Alzheimer's Disease, Journal of Alzheimer's Disease (2012).

[7] X.R. Cheng, V.W. Sze Hung, S. Scarano, M. Mascini, M. Minunni, K. Kerman, Label-free methods for probing the interaction of clioquinol with amyloid-[small beta], Analytical Methods 4 (2012) 2228-2232.

[8] Y. Miller, B. Ma, R. Nussinov, Zinc ions promote Alzheimer Abeta aggregation via population shift of polymorphic states, Proc Natl Acad Sci U S A 107 (2010) 9490-9495.

[9] P.O. Tsvetkov, A.A. Kulikova, A.V. Golovin, Y.V. Tkachev, A.I. Archakov, S.A. Kozin, A.A. Makarov, Minimal Zn(2+) binding site of amyloid-beta, Biophys J 99 (2010) L84-86.

[10] S.A. Kozin, Y.V. Mezentsev, A.A. Kulikova, M.I. Indeykina, A.V. Golovin, A.S. Ivanov, P.O. Tsvetkov, A.A. Makarov, Zinc-induced dimerization of the amyloid-beta metal-binding domain 1-16 is mediated by residues 11-14, Mol Biosyst 7 (2011) 1053-1055.

[11] P.A. Todd, R.C. Heel, Enalapril. A review of its pharmacodynamic and pharmacokinetic properties, and therapeutic use in hypertension and congestive heart failure, Drugs 31 (1986) 198-248.

Состав рабочих буферов
1 50 мМ HEPES, pH 6.8
2 50 мМ HEPES, 100 мкМ ZnCl2, pH 6.8
3 50 мМ HEPES, 100 мкМ ZnCl2, 100 мкМ эналаприлат, pH 6.8
4 50 мМ HEPES, 100 мкМ ZnCl2, 100 мкМ каптоприл. pH 6.8
5 50 мМ HEPES, 100 мкМ ZnCl2, 100 мкМ лизиноприл, pH 6.8

Применение эналаприлата в качестве средства для ингибирования образования водорастворимых цинк-зависимых димеров бета-амилоида.
ИНГИБИТОР ОБРАЗОВАНИЯ ЦИНК-ЗАВИСИМЫХ ДИМЕРОВ БЕТА-АМИЛОИДА
ИНГИБИТОР ОБРАЗОВАНИЯ ЦИНК-ЗАВИСИМЫХ ДИМЕРОВ БЕТА-АМИЛОИДА
ИНГИБИТОР ОБРАЗОВАНИЯ ЦИНК-ЗАВИСИМЫХ ДИМЕРОВ БЕТА-АМИЛОИДА
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-10 из 95.
27.04.2013
№216.012.395b

Устройство очистки воздуха

Изобретение относится к области очистки и стерилизации воздуха бытовых, хозяйственных и производственных помещений, а именно к устройствам для стерилизации, дезодорации и очистке воздуха от вирусов, бактерий, паров и аэрозолей органических и неорганических соединений, в том числе диоксинов,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002480244
Дата охранного документа: 27.04.2013
27.09.2013
№216.012.6e7b

Cпособ получения жаростойкого высокопористого проницаемого сплава

Изобретение относится к порошковой металлургии, в частности к получению жаростойких высокопористых проницаемых ячеистых сплавов. Может использоваться для получения блочных высокотемпературных носителей катализаторов, высокотемпературных фильтров газов и расплавов. Поверхность заготовки из...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002493934
Дата охранного документа: 27.09.2013
27.02.2014
№216.012.a645

Способ и установка переработки птичьего помета

Группа изобретений может быть использована в области утилизации отходов животноводства и сельского хозяйства, а также в энергетике. Птичий помет обезвоживают в устройстве механического обезвоживания (1), которое соединено сборником отогнанной жидкости (2) посредством последовательно...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002508280
Дата охранного документа: 27.02.2014
27.02.2014
№216.012.a6b1

Способ и установка для получения древесного угля

Изобретение относится к области получения угля из древесины и ее отходов методом пиролиза. Способ включает стадии загрузки сырья в выемные реторты, сушки сырья, пиролиза, прокаливания, охлаждения и стабилизации угля, при этом сушку проводят при температуре от 160 до 200°С, пиролиз - при...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002508388
Дата охранного документа: 27.02.2014
10.03.2014
№216.012.a9ae

Способ анализа транслокаций eml4-alk, ассоциированных с чувствительностью рака легкого к противоопухолевой таргетной терапии

Изобретение относится к молекулярной генетике. Способ включает: получение кДНК EML4-ALK с помощью полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) на матрице РНК гена EML4-ALK с использованием специфичных праймеров; амплификацию фрагментов гена EML4-ALK методом мультиплексной ПЦР...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002509153
Дата охранного документа: 10.03.2014
27.05.2014
№216.012.c8cf

Новые 5-модифицированные пиримидиновые нуклеозиды - ингибиторы роста mycobacterium tuberculosis

Изобретение относится к новым 5-[(4-алкил)-1,2,3-триазол-1-ил]метильным производным 2'-дезоксиуридина и 2'-дезоксицитидина, подавляющим рост Mycobacterium tuberculosis, включая лекарственно устойчивые штаммы, имеющим формулы 1 и 2, соответственно 1 табл., 12 пр.
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002517173
Дата охранного документа: 27.05.2014
20.06.2014
№216.012.d381

Устройство микроволнового химического синтеза

Изобретение относится к области технических устройств, обеспечивающих нагрев электромагнитным полем СВЧ реакционной среды при проведении химического синтеза. Изобретение предназначено для химического синтеза наноматериалов для промышленности и науки и позволяет проводить исследования кинетики...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002519916
Дата охранного документа: 20.06.2014
27.07.2014
№216.012.e518

Способ восстановления чувствительного слоя биосенсора

Изобретение относится к биотехнологии. Способ предусматривает обработку чувствительного слоя биосенсора раствором общей фракции протеаз гепатопанкреаса камчатского краба в буфере состава трис-НСl 50 мМ, СаСl 3 мМ, NaCl 100 мМ, рН 8,0 при температуре раствора в диапазоне 35-40°С. Процесс ведут в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002524438
Дата охранного документа: 27.07.2014
20.08.2014
№216.012.eadf

Способ получения кассетных генетических конструкций, экспрессирующих несколько рнк-шпилек

Изобретение относится к области молекулярной биологии и генотерапии. Способ предусматривает проведение следующих операций: дизайн кассетной конструкции, синтез олигонуклеотидов; попарный отжиг и достройка частично комплементарных олигонуклеотидов; осаждение и рестрикция фрагментов кассеты...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002525935
Дата охранного документа: 20.08.2014
27.08.2014
№216.012.f0c6

Ингибиторы поли(адф-рибозо)полимеразы-1 человека на основе производных урацила

Изобретение относится к новым ингибиторам поли(АДФ-рибозо)полимеразы-1 человека на основе производных урацила общей формулы (I), (II), (III) и (IV). Ингибиторы поли(АDР-рибозо)полимераз-ферментов участвуют в репарации ДНК. В общей формуле (I), (II), (III) и (IV) R=Н, Cl, Br, I, метил, этил,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002527457
Дата охранного документа: 27.08.2014
Показаны записи 1-10 из 86.
27.04.2013
№216.012.395b

Устройство очистки воздуха

Изобретение относится к области очистки и стерилизации воздуха бытовых, хозяйственных и производственных помещений, а именно к устройствам для стерилизации, дезодорации и очистке воздуха от вирусов, бактерий, паров и аэрозолей органических и неорганических соединений, в том числе диоксинов,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002480244
Дата охранного документа: 27.04.2013
20.09.2013
№216.012.6d0d

Способ прогнозирования гематогенного метастазирования при диффузном типе рака желудка

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования гематогенного метастазирования при диффузном типе рака желудка путем иммуногистохимического исследования препаратов первичной опухоли. Для проведения исследования используют антитела Cyclophilin A Antibody (CypA) клон...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002493568
Дата охранного документа: 20.09.2013
27.09.2013
№216.012.6e7b

Cпособ получения жаростойкого высокопористого проницаемого сплава

Изобретение относится к порошковой металлургии, в частности к получению жаростойких высокопористых проницаемых ячеистых сплавов. Может использоваться для получения блочных высокотемпературных носителей катализаторов, высокотемпературных фильтров газов и расплавов. Поверхность заготовки из...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002493934
Дата охранного документа: 27.09.2013
27.02.2014
№216.012.a645

Способ и установка переработки птичьего помета

Группа изобретений может быть использована в области утилизации отходов животноводства и сельского хозяйства, а также в энергетике. Птичий помет обезвоживают в устройстве механического обезвоживания (1), которое соединено сборником отогнанной жидкости (2) посредством последовательно...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002508280
Дата охранного документа: 27.02.2014
27.02.2014
№216.012.a6b1

Способ и установка для получения древесного угля

Изобретение относится к области получения угля из древесины и ее отходов методом пиролиза. Способ включает стадии загрузки сырья в выемные реторты, сушки сырья, пиролиза, прокаливания, охлаждения и стабилизации угля, при этом сушку проводят при температуре от 160 до 200°С, пиролиз - при...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002508388
Дата охранного документа: 27.02.2014
10.03.2014
№216.012.a9ae

Способ анализа транслокаций eml4-alk, ассоциированных с чувствительностью рака легкого к противоопухолевой таргетной терапии

Изобретение относится к молекулярной генетике. Способ включает: получение кДНК EML4-ALK с помощью полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) на матрице РНК гена EML4-ALK с использованием специфичных праймеров; амплификацию фрагментов гена EML4-ALK методом мультиплексной ПЦР...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002509153
Дата охранного документа: 10.03.2014
27.05.2014
№216.012.c8cf

Новые 5-модифицированные пиримидиновые нуклеозиды - ингибиторы роста mycobacterium tuberculosis

Изобретение относится к новым 5-[(4-алкил)-1,2,3-триазол-1-ил]метильным производным 2'-дезоксиуридина и 2'-дезоксицитидина, подавляющим рост Mycobacterium tuberculosis, включая лекарственно устойчивые штаммы, имеющим формулы 1 и 2, соответственно 1 табл., 12 пр.
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002517173
Дата охранного документа: 27.05.2014
20.06.2014
№216.012.d381

Устройство микроволнового химического синтеза

Изобретение относится к области технических устройств, обеспечивающих нагрев электромагнитным полем СВЧ реакционной среды при проведении химического синтеза. Изобретение предназначено для химического синтеза наноматериалов для промышленности и науки и позволяет проводить исследования кинетики...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002519916
Дата охранного документа: 20.06.2014
27.07.2014
№216.012.e518

Способ восстановления чувствительного слоя биосенсора

Изобретение относится к биотехнологии. Способ предусматривает обработку чувствительного слоя биосенсора раствором общей фракции протеаз гепатопанкреаса камчатского краба в буфере состава трис-НСl 50 мМ, СаСl 3 мМ, NaCl 100 мМ, рН 8,0 при температуре раствора в диапазоне 35-40°С. Процесс ведут в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002524438
Дата охранного документа: 27.07.2014
20.08.2014
№216.012.eadf

Способ получения кассетных генетических конструкций, экспрессирующих несколько рнк-шпилек

Изобретение относится к области молекулярной биологии и генотерапии. Способ предусматривает проведение следующих операций: дизайн кассетной конструкции, синтез олигонуклеотидов; попарный отжиг и достройка частично комплементарных олигонуклеотидов; осаждение и рестрикция фрагментов кассеты...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002525935
Дата охранного документа: 20.08.2014
+ добавить свой РИД