Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ НОРМАЛИЗАЦИИ ВЫРАБОТКИ АНТИТРОМБИНА III В СОСУДИСТОЙ СТЕНКЕ У НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ С ЖЕЛЕЗОДЕФИЦИТНОЙ АНЕМИЕЙ

Изобретение относится к биологии и ветеринарии.

Ближайшим аналогом предлагаемого способа нормализации выработки антитромбина III сосудистой стенкой (ВАСС) у новорожденных телят с железодефицитной анемией является способ RU 2402901, в котором наряду с двоекратным с интервалом в 10 суток введением ферроглюкина применяются по сложной схеме инъекции фоспренила и крезацина, что позволяет нормализовать ВАСС лишь через 13 дней от начала лечения. Необходимость длительного применения прототипа по сложной схеме дозирования метаболически значимых его компонентов существенно затрудняет его практическое использование по сравнению с более простым в применении заявленным способом, позволяющим быстро нормализовать ВАСС у новорожденных телят с железодефицитной анемией уже через 3 суток после окончания 4-дневного лечения.

Есть сведения, что в качестве эффективных стимуляторов жизнедеятельности растущего организма в современной ветеринарии применяются гамавит - комплексный препарат, содержащий нуклеинат натрия и кислый гидролизат плаценты с добавлением среды 199 (Деева А.В., Салахова З.А., Лобова Т.П. и др. Повышение сохранности и продуктивности поросят при использовании фоспренила и гамавита. // Ветеринария. - 2006. - №4. - С.13-15) и крезацин - производное ароксиалкилкарбоновых кислот, оказывающих эффективное стимулирующее воздействие на живые организмы, повышая выживаемость животных в неблагоприятных и экстремальных условиях, стимулируя или нормализуя жизненные процессы (Байматов В.П., Латыпов М.М. Влияние крезацина на состояние птицы. Ветеринария, 2006, №11, с.49-51).

Однако никогда ранее лечебный комплекс, состоящий из ферроглюкина, гамавита и крезацина, не применялся у новорожденных телят с железодефицитной анемией для нормализации у них ВАСС.

Целью изобретения является нормализация ВАСС у новорожденных телят с железодефицитной анемией.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что для нормализации ВАСС новорожденным телятам с железодефицитной анемией назначается ферроглюкин по 150 (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 4 дня, крезацин 5 мг/кг в сутки, включенный в схему выпаивания утром на четверо суток, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина, и гамавит 0,05 мл/кг внутримышечно один раз в день, утром, в течение четырех суток, начиная одновременно с началом применения ферроглюкина и крезацина.

Способ позволяет нормализовать ВАСС у новорожденных телят с железодефицитной анемией через 3 суток после окончания лечения. В последующем у данных телят ВАСС стабильно находится на нормальном уровне, что позволяет существенно оздоровить поголовье телят, нормализовать привесы, уменьшить их патологическую отягощенность, сократить падеж и добиться высокого качества получаемой от них в последующем мясной и молочной продукции.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

Определение способности сосудистой стенки выделять антитромбин III основывается на оценке его уровня в крови до и после временной дозированной ишемии стенки вены манжеткой сфигмоманометра, в котором на 3 минуты нагнетается давление на 10 мм рт.ст. выше систолического (Баркаган З.С., Момот А.П. Основы диагностики нарушений гемостаза. М.: 1999-214 с.).

Принцип метода основан на выявлении снижения активности (в отсутствии гепарина) в плазме антитромбина III (AT III), которую определяют по способности исследуемой плазмы инактивировать тромбин, для чего ее предварительно обрабатывают сорбентом гепарина, затем подвергают тепловой дефибринации и смешивают со стандартным количеством тромбина. После инкубации смеси в ней определяют остаточную коагуляционную активность тромбина. По уровню снижения активности тромбина в процентах от нормы оценивают активность AT III в исследуемой плазме.

Используются следующие реактивы. 1. Трис-HCl буфер 0,05 М, рН 7,4. 2. Раствор тромбина в буфере: 0,2 мл раствора должны свертывать 0,3 мл 0,4% раствора фибриногена за 15-16 секунд. Рабочий раствор тромбина готовят в пластиковой или силиконированной пробирке, хранят при комнатной температуре и используют в тесте в день исследования. 3. Сорбент гепарина Гепасорб-1 (фирма "Технология-Стандарт"). 4. Свежеприготовленный раствор фибриногена в концентрации 3,5-4,0 г/л, который применяют для тестирования остаточной активности тромбина. Допускается замена раствора фибриногена нормальной бедной тромбоцитами цитратной плазмой, разведенной буфером в 2 раза. 5. Свежая нитратная бедная тромбоцитами плазма, полученная от 6-8 здоровых телят, соответственно, или лиофилизированная фирменная, с известной активностью AT III, которую используют для построения калибровочного графика.

Материалом для исследования служит цитратная бедная тромбоцитами плазма.

Для приготовления сорбированной и дефибринированной плазмы в пробирке смешивают 10 мг сорбента гепарина с 1,0 мл исследуемой плазмы. Постоянно встряхивая пробирку, перемешивают ее содержимое при комнатной температуре в течение 8 мин, исключая образование пены и осадка на ее дне. После этого, смесь центрифугируют в течение 2 мин при 1000-1500 об/мин. Плазму в надосадке переносят в чистую пробирку и дефибринируют на водяной бане при +56°C в течение 6 минут, после чего вновь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 минут, снимают надосадочную часть и исследуют в течение первых 2 ч.

Ход определения. В пробирку вносят 0,4 мл рабочего раствора тромбина и прогревают его на водяной бане при +37°C в течение 2 минут. Затем добавляют 0,1 мл исследуемой адсорбированной и дефибринированной плазмы, включают секундомер. Через 2 минуты (точно!) 0,2 мл смеси переносят в пробирку с 0,3 мл раствора фибриногена (или разведенной нормальной плазмы), предварительно подогретой до +37°C. Немедленно включают секундомер и регистрируют время свертывания.

По калибровочной кривой находят активность AT III в процентах.

Построение калибровочной кривой проводят следующим образом. Плазму здоровых телят подвергают дефибринированию, как указано выше. Затем из нее готовят разведения для построения калибровочной кривой в соответствии с табл.1.

С каждым из разведений определяют время свертывания по указанной выше методике. Все измерения проводят трижды, рассчитывают средний результат. При построении калибровочной кривой по логарифмической оси ординат откладывают время свертывания в секундах, по оси абсцисс - активность AT III в % в соответствии с указанными выше разведениями. Примерная калибровочная кривая приведена на рисунке.

Калибровочную кривую для одного типа и одной серии тромбина и буфера строят однократно. Периодически контролируют лишь активность рабочего раствора тромбина.

В норме без венозной окклюзии активность AT III составляет 85-115%. При взятии крови после временной венозной окклюзии, как описано в методе и определении в ней AT III, возможно косвенно оценить уровень синтеза в стенке сосуда AT III. На фоне временной венозной окклюзии активность AT III повышается и обычно находится в границах 120-143%. Рассчитывается индекс синтеза AT III в сосудах (ИСАС) путем деления величины активности AT III на фоне венозной окклюзии на величину AT III без нее. В норме он равен 1,20-1,40.

В случае нарушения ВАСС больным животным необходимо проводить лечение согласно заявленного способа, включающего ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 4 дня, крезацин 5 мг/кг в сутки в схеме выпаивания на 4 суток, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина, и гамавит 0,05 мл/кг внутримышечно один раз в день в течение четырех суток, начиная одновременно с ферроглюкином и крезацином.

Применение заявленного комплекса нормализует ВАСС у новорожденных телят с железодефицитной анемией через 3 суток после окончания лечения. Это является основой оздоровления стада, снижения падежа и залогом высокого качества получаемой мясной и молочной продукции от пролеченных с его помощью телят.

Пример 1. У новорожденного теленка №12 с анемией было выявлено нарушение эритропоэза с признаками снижения уровня содержания железа в его организме (сывороточное железо 12,3 мкмоль/л, сидероциты 0,9%, при количестве гемоглобина 81,5 г/л, эритроцитов 4,00×10¹²/л).

У теленка была взята кровь и исследована по изложенной выше схеме с оценкой ИСАС.

У животного были выявлены выраженные признаки угнетения выработки в сосудистой стенке антитромбина III - ИСАС 1,11.

Теленку было назначено лечение: ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 4 суток, крезацин 5 мг/кг в сутки, включив его в схему выпаивания на 4 суток, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина, и гамавит внутримышечно, один раз в день утром 0,05 мл/кг, начиная одновременно с ферроглюкином и крезацином.

Через 3 суток после завершения лечения признаки анемии купировались - сывороточное железо 22,9 мкмоль/л, сидероциты 7,1%, при количестве гемоглобина у него 121,3 г/л, эритроцитов 4,96×10¹²/л, ИСАС 1,30. Дальнейшее наблюдение за данным теленком не выявило отклонений от нормы в последующем, а выработка антитромбина III в его сосудах оставались в нормальных границах.

Пример 2. У новорожденного теленка №29 с анемией было выявлено нарушение эритропоэза и признаками снижения содержания железа в его организме (сывороточное железо 11,5 мкмоль/л, сидероциты 0,8%, при количестве гемоглобина у него 80,2 г/л, эритроцитов 3,98×10¹²/л).

У теленка была взята кровь и исследована по изложенной выше схеме с оценкой ИСАС.

У животного были выявлены выраженные признаки угнетения выработки в сосудистой стенке антитромбина III - ИСАС 1,08.

Теленку было назначено лечение: ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 4 суток, крезацин 5 мг/кг в сутки, включив его в схему выпаивания на 4 суток, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина, и гамавит внутримышечно, один раз в день утром 0,05 мл/кг, начиная одновременно с ферроглюкином и крезацином.

Через 3 суток после завершения лечения признаки анемии купировались - сывороточное железо 23,0 мкмоль/л, сидероциты 7,0%, при количестве гемоглобина у него 120,6 г/л, эритроцитов 4,97×10¹²/л, ИСАС 1,39. Дальнейшее наблюдение за данным теленком не выявило отклонений от нормы в последующем, а выработка антитромбина III в его сосудах оставались в нормальных границах.

Применение заявленного способа успешно апробировано на 45 новорожденных телятах с железодефицитной анемией с достижением полной нормализации ВАСС во всех случаях.