Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ СВИНЕЙ, ИНФИЦИРОВАННЫХ ВОЗБУДИТЕЛЕМ Actinobacillus pleuropneumoniae

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для выявления свиней, инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniaea.

Актинобациллезная (гемофилезная) плевропневмония - высококонтагиозная болезнь свиней, характеризующаяся при остром течении геморрагическим воспалением легких и фибринозным плевритом, а при подостром и хроническом - развитием очаговой гнойной некротизирующей плевропневмонии и серозно-фибринозным плевритом. Болезнь наносит существенный экономический ущерб свиноводческим хозяйствам за счет большого падежа свиней, затрат на лечение больных и проведения ветеринарно-санитарных мероприятий.

Диагностика данного заболевания трудно дифференцируема, поскольку клинические признаки сравнимы с другими легочными заболеваниями, с такими как микоплазмоз, пневмония, репродуктивно-респираторный синдром.

Известен способ диагностики гемофилезной плевропневмонии свиней (см. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Лаврентьев Н.И., Мицаев Ш.Ш., Романова Л.Я., Юдин А.И. Диагностика гемофилезной плевропневмонии свиней / Ж. Ветеринария, - 1981. - 12. - С.66-68), заключающийся в проведении клинических, патологоанатомических и бактериологических исследований.

Однако данная диагностика является длительной и трудоемкой, поскольку требуют посева на специальные питательные среды, проведения микроскопических исследований. Кроме этого, для определения патогенных свойств культуры необходима постановка биопробы.

Известен также способ диагностики актинобациллезной плевропневмонии свиней с использованием серологических исследований, в частности путем постановки реакции агглютинации, реакции непрямой гемагглютинации, реакции коагглютинации (см. Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук Скородумова Д.И. «Актинобациллезная (гемофилезная) плевропневмония и гемофилезный полисерозит свиней (этиология, лабораторная диагностика, основы специфической профилактики актинобациллезной плевропневмонии»/ http://uchit.net: или http://www.refstar.ru).

Однако точность идентификации возбудителя с помощью реакций агглютинации, непрямой агглютинации невелика, поскольку не все группы штаммов культуры Actinobacillus pleuropneumoniae удается идентифицировать с помощью этих реакций, что приводит к неправильной или неточной постановке диагноза. В частности, актинобациллезную плевропневмонию необходимо точно отдифференцировать от пастереллеза, пневмоний, вызванных микоплазмами, хламидиями, стрептококками (диплококковая пневмония).

Наиболее близким к заявляемому является способ выявления инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniae свиней (см. http://www.alekris.ru или http://www.dpri.ru/index), заключающийся в серологических исследованиях животных методом иммуноферментного анализа. Способ позволяет производить дифференциацию между инфицированными и вакцинированными животными и дает возможность выявлять инфицированных особей в популяциях вакцинированных и невакцинированных животных.

Однако процент выявляемости больных животных невысок.

Изобретение направлено на решение задачи создания эффективного способа выявления свиней, инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniae, за счет усиления специфических и неспецифических иммунных реакций на возбудитель в организме животного, а также за счет изменений некоторых биохимических показателей крови, позволяющих повысить процент выявляемости животных в отношении актинобациллезной плевромневмонии.

Для решения поставленной задачи в способе выявления свиней, инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniae, заключающемся в проведении серологических исследований и определении положительно реагирующих животных, согласно изобретению дополнительно после проведения серологических исследований свиньям всех возрастных групп вводят препарат в виде смеси медицинского раствора формальдегида с изотоническим раствором хлорида натрия при соотношении их весовых частей 2-6:994-998 двукратно внутримышечно в дозе 5-6 мл на голову с интервалом между инъекциями 7-8 дней, после чего спустя 10-12 дней после введения препарата проводят дополнительные серологические исследования и выявляют инфицированных животных.

В известных авторам источниках патентной и научно-технической информации не описано способа выявления свиней, инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniae, путем введения препарата в виде смеси медицинского раствора формальдегида с изотоническим раствором хлорида натрия, которое приводит одновременно к усилению специфических и неспецифических факторов иммунитета. При этом усиление специфических факторов происходит за счет увеличения уровня антител к возбудителю актинобациллезной плевропневмонии, а неспецифических - за счет повышения уровня интерлейкинов.

Кроме этого, обработка животных этим препаратом приводит к достоверному изменению биохимических показателей, в частности - повышению концентрации неорганического фосфора, глюкозы, каротина.

Таком образом, эффект выявляемости животных основан одновременно на изменении специфических, неспецифических факторов иммунитета и изменении биохимических показателей, что в комплексе позволяет эффективнее дифференцировать инфицированных животных от здоровых среди невакцинированного поголовья.

Сказанное позволяет сделать вывод о наличии в заявляемом решении «изобретательского уровня».

Способ осуществляется следующим образом.

Выявляют инфицированных животных, например, с помощью реакции иммуноферментного анализа и определяют положительно реагирующих животных.

Осуществляют обработку этих животных препаратом в виде смеси медицинского раствора формальдегида с раствором хлорида натрия 0,85-0,95%-ной концентрации при соотношении их весовых частей 2-6:994-998. При этом препарат вводят внутримышечно однократно в дозе 4-6 мл на голову.

Через 7-10 дней после обработки препаратом проводят повторный иммуноферментный анализ, по результатам которого повторно выявляют инфицированных животных.

Пример 1

Доказательство повышения неспецифических факторов иммунитета за счет введения препарата

Эксперимент проводился на лабораторных животных: на 7 морских свинках и 10 белых крысах. Животных каждого вида делили на 2 группы: контрольную (которым препарат не вводили) и опытную (которых обрабатывали препаратом).

Животным опытных групп препарат вводили в количестве 0,5 мл на голову и через 7-10 дней после инъекции определяли содержание интерлейкинов (ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8), а животным контрольных групп инъецировали в той же дозе физиологический раствор.

Результаты представлены в таблице 1.

Результаты исследований показали наличие тенденции к повышению содержания интерлейкинов ИЛ-4, ИЛ-6 и ИЛ-8 в крови лабораторных животных после введения препарата, обеспечивающего активизацию неспецифических факторов иммунитета и, как следствие, повышение сопротивляемости организма к возбудителю.

Пример 2

Доказательство повышения процента выявляемости инфицированных животных и, как следствие, эффективности заявляемого способа

Эксперимент проводился на базе хозяйства, неблагополучного по актинобациллезной плевропневмонии.

С помощью иммуноферментного анализа была исследована сыворотка крови 22 поросят 6-месячного возраста на наличие возбудителя Actinobacillus pleuropneumoniae. Полученные результаты показали, что из 22 сывороток наличие специфических антител к возбудителю, свидетельствующих об инфицированности животных, было обнаружено только у 1 (4,5%) поросенка.

Всем поросятам был введен препарат в виде смеси медицинского раствора формальдегида с раствором хлорида натрия 0,85-0,95%-ной концентрации при соотношении их весовых частей 2-6:994-998 двукратно внутримышечно в дозе 5-6 мл на голову с интервалом между инъекциями 7-8 дней.

Спустя 10 дней после обработки препаратом был снова проведен иммуноферментный анализ на наличие антител к возбудителю Actinobacillus pleuropneumoniae. Результаты эксперимента представлены в таблице 2.

Из таблицы 2 следует, что после обработки препаратом было выявлено дополнительно 9 (42,8%) инфицированных животных из 21 головы, ранее считавшихся неинфицированными.

Эффективность выявляемое™ инфицированных животных увеличилась в 9,5 раз.

Пример 3

Спустя 6 месяцев после обработки животных препаратом, как описано в примере 2, были проведены исследования по определению биохимических показателей крови у свиней, подвергавшихся и не подвергавшихся обработке препаратом.

Определяли такие показатели, как концентрация общего белка, общего кальция, неорганического фосфора, глюкозы, каротина по общепринятым методикам. Результаты исследований представлены в таблице 3.

Установлено, что у обработанных животных достоверно повышалась концентрация неорганического фосфора (на 24,2%), глюкозы (на 45,7%) и каротина (на 22,0%). Причем концентрация всех этих параметров у обработанных животных находилась в пределах физиологической нормы, а у необработанных - концентрация глюкозы и каротина была ниже нормы.

Биологическое значение каротина для сельскохозяйственных животных определяется, во-первых, тем, что он служит предшественником витамина А. Кроме того, каротин защищает гемоглобин от разрушительного действия нитратов, стимулирует неспецифические факторы иммунитета, защищает организм от канцерогенного воздействия агрессивных прооксидантов - активных форм кислорода и свободных радикалов, образующихся в клетках в процессе клеточного дыхания.

Каротин также повышает стрессоустойчивость, клеточный иммунитет и оказывает большое влияние на репродуктивную функцию, увеличивает скорость гликолиза в мышцах, обеспечивая митохондрии субстратами.

Повышение концентрации неорганического фосфора указывает на увеличенную активность щелочной фосфатазы, что подтверждается тенденцией к снижению концентрации кальция, который направляется на формирование костной ткани.

В то же время витамин А, синтезирующийся из каротина, необходим для нормального формирования костной ткани. Данные по фосфору и кальцию позволяют говорить об усилении анаболических обменных процессов в костной ткани. Увеличение массы костной ткани сопровождается возрастанием массы костного мозга и, как следствие, повышением иммунного статуса и оксигенации организма.

В совокупности с повышением концентрации каротина создаются условия для увеличения роли аэробного энергетического обмена, реализация которого подтверждается достоверно более высокой, чем в контроле, концентрацией глюкозы.

Все вышесказанное (одновременное увеличение неспецифических факторов иммунитета - интерлейкинов, специфических - титров антител к возбудителю Actinobacillus pleuropneumoniae, а также изменения биохимических параметров крови свиней - повышение количества неорганического фосфора, глюкозы и каротина) позволяет сделать вывод об увеличении выявляемости свиней, инфицированных возбудителем Actinobacillus pleuropneumoniae, и повышении способа выявления инфицированных животных более чем в 9 раз.