Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РАЗВИТИЯ АТОПИЧЕСКОГО ДЕРМАТИТА У ДЕТЕЙ ГРУДНОГО ВОЗРАСТА

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и аллергологии, и может быть использовано для раннего прогнозирования атопических заболеваний у детей.

Общей проблемой внедрения программ первичной профилактики аллергических заболеваний у детей является отсутствие надежных лабораторных маркеров оценки риска формирования атопии в момент рождения ребенка, в то время как очевидно, что максимальная эффективность превентивных мероприятий может быть реализована в группах максимального риска и в наиболее ранний период жизни.

Исследование пуповинной крови для выделения группы детей с высоким риском формирования атопии используется в последнее время достаточно широко. В большей части таких работ в качестве маркерного предиктора использован уровень IgE (Lopez et al., 2002; Van Bever, 2002) и уровень плазменных цитокинов (Lohmann et al., 2002; Ohshima et al., 2002).

Известен способ прогнозирования развития атопического аллергического заболевания у новорожденного, основанный на определении количественного содержания общего иммуноглобулина E в сыворотке пуповинной или периферической крови новорожденного с помощью иммуноферментного анализа [RU 2108749 C1, опубл. 20.04.1998]. Известный способ недостаточно информативен, так как не отражает клеточный механизм расположенности к атопии.

Наиболее близким к заявленному способу является способ выявления риска формирования атопического дерматита у детей грудного возраста путем определения в пуповинной крови новорожденных содержания IL-18, IL-13 и гамма-линоленовой кислоты [Терещенко С.Ю., Прахин Е.И., Новицкий И.А. и др. Концентрации витамина D, общего IgE, цитокинов и спектр жирных кислот в пуповинной крови у новорожденных от матерей с наличием в анамнезе клинических проявлений атопического дерматита // Ж-л СФУ. Серия: биология. Т.4, №3, 2010, С.407-417]. В известном способе установлено, что у новорожденных с наследственной отягощенностью по атопическому дерматиту снижено относительное содержание гамма-линоленовой кислоты в мембранах эритроцитов, однако не предложен четкий алгоритм прогнозирования развития АД на первом году жизни.

Задачей изобретения является разработка нового информативного способа прогнозирования развития атопического дерматита у детей грудного возраста.

Поставленную задачу решают за счет того, что в мембранах эритроцитов пуповинной крови новорожденного с помощью газовой хроматографии определяют уровень гамма-линоленовой кислоты. При уровне в пределах от 0,01 до 4,63 мг/л прогнозируют развитие атопического заболевания у детей грудного возраста.

Гамма-линоленовая кислота является полиненасыщенной жирной кислотой ряда омега-6 и имеет структуру: CH₃-(CH₂)₄-(CH=CH-CH₂)₃-(CH₂)₃-COOH.

Способ осуществляется следующим образом.

Производят забор пуповинной крови. Проводят экстракцию липидов по методу Фолча [Folch J., Lees М., Sloane G.H. A simple metod for the isolation and purification of total lipids from animals tissues // Biol. Chem. - 1957. - №226. - P.497-509]. Для этого к эритроцитарной массе пуповинной крови добавляют 15-кратный объем смеси хлороформ-метанол-0.9% водный раствор NaCl (2:1:0.8 по объему), экстрагируют в течение 3 мин при постоянном встряхивании с последующим отстаиванием, сливают нижний слой, к оставшемуся водному слою добавляют 2-кратный объем смеси хлороформа-метанола (2:1) и экстрагируют повторно. Объединенные и отфильтрованные экстракты осушают пропусканием через слой безводного Na₂SO₄, выпаривают на роторном вакуумном испарителе. Проводят метанолиз жирных кислот (ЖК) в смеси метанола и серной кислоты (50:1 по объему) в присутствии бензола при температуре 90°C в течение двух часов. По окончании метанолиза в колбу добавляют двойной объем воды и метиловые эфиры ЖК трижды экстрагируют из реакционной смеси гексаном. Гексановый экстракт дважды промывают дистиллированной водой и осушают пропусканием через слой безводного Na₂SO₄. Затем гексан отгоняют на роторном вакуумном испарителе. Анализ метиловых эфиров ЖК проводят на газовом хроматографе с масс-спектрометрическим детектором (GCD Plus, "Hewlett-Packard", США) на капиллярной колонке HP-FFAP длиной 30 м и внутренним диаметром 0.32 мм. Идентификацию пика γ-линоленовой кислоты осуществляют, сравнивая полученные масс-спектры ЖК с имеющимися в базе данных, а также по времени удерживания с использованием стандартов "Sigma", США.

Новорожденных, в пуповинной крови которых содержится гамма-линоленовая кислота в пределах от 0,01 до 4,63 мг/л, относят к группе риска по развитию атопического дерматита.

Пороговое значение 4,63 мг/л получено опытным путем на основании сопоставления данных по количественному содержанию гамма-линоленовой кислоты в мембранах эритроцитов пуповинной крови новорожденных с данными наблюдений за детьми грудного возраста, отражающими процесс развития у них атопического дерматита.

По предложенному способу обследовано 44 ребенка грудного возраста. У 22 детей выявлено низкое содержание γ-линоленовой кислоты в мембранах эритроцитов крови (≤4,63 мг/л), что дало основание отнести их в группу риска развития атопического дерматита. При дальнейшем наблюдении этих детей в возрасте 12 месяцев у 16 из них (73%) наблюдались признаки атопического дерматита. В то же время у детей с содержанием γ-линоленовой кислоты в мембранах эритроцитов крови >4,63 мг/л атопический дерматит развился только у 9 детей (41%), p=0,05.

Пример 1. Новорожденный женского пола. Исследована пуповинная кровь по предложенному способу. Содержание γ-линоленовой кислоты в мембранах эритроцитов крови - 2,01 мг/л (меньше 4,63 мг/л). Новорожденный ребенок согласно изобретению относится к группе высокого риска. При повторном обследовании в 12 месяцев установлено, что у ребенка с 6 месяцев были выраженные признаки атопического дерматита.

Пример 2. Новорожденный мужского пола. Исследована пуповинная кровь по предложенному способу. Содержание γ-линоленовой кислоты в мембранах эритроцитов крови - 6,26 мг/л (больше 4,63 мг/л). Новорожденный ребенок согласно изобретению относится к группе низкого риска. При повторном обследовании в 12 месяцев выявлено, что у ребенка на первом году жизни отсутствовали какие-либо признаки аллергических заболеваний.

Технический результат, получаемый при реализации предлагаемого изобретения:

- расширение арсенала диагностических средств, обеспечивающих возможность прогнозирования развития атопического дерматита у детей грудного возраста;

- раннее прогнозирование развития атопических заболеваний у детей;

- информативность, надежность и безопасность метода;

- четкий алгоритм прогнозирования развития АД на первом году жизни.

Способ позволяет своевременно определить риск развития атопического дерматита у детей грудного возраста и проводить ранние профилактические мероприятия, направленные на предотвращение его развития.